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乌尔新不动杆菌引起的儿童菌血症二例报告并文献复习
不动杆菌属是一类广泛分布于自然环境中的细菌,由于能在无生命物体表面长期存活,因此常从医院环境中分离得到,并能在住院患者和医护人员的皮肤表面形成定植。作为重要的条件致病菌,不动杆菌导致的感染常发生在重症监护病房中免疫力低下的患者身上,世界各地不断有不动杆菌在住院患者中暴发流行的报道[1]。不动杆菌是机械通气相关性肺炎和导管相关性菌血症的主要致病菌,同时也能导致尿路感染、伤口感染、心内膜炎、脑膜炎、骨髓炎、关节炎和眼部感染等。导致人体感染的不动杆菌中,报道多的是鲍曼不动杆菌,该菌属于醋酸钙不动杆菌/鲍曼不动杆菌复合群,在实验室能很方便地根据表型对其做出鉴定,但不动杆菌属中的其他细菌则很难根据表型做出准确鉴定,此时需要采用分子生物学方法来确证,常用方法包括16 S rRNA、gyrB或rpoB 基因序列测定。乌尔新不动杆菌( Acinetobacter ursingii)是2001年 Nemec 等[2]报道的一种新的不动杆菌,该菌引起的人感染病例较少见。荆州市中心医院近发现了2例乌尔新不动杆菌引起的儿童菌血症,现将细菌形态、表型鉴定,分子鉴定和药敏结果报道如下。
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人α-肿瘤坏死因子基因在胆管癌细胞中的表达研究
我们利用阳离子脂质体、逆转录病毒载体介导人TNF-α基因转染进入胆管癌细胞,并实现了表达.1.材料和方法:(1)质粒和主要试剂:重组逆转录病毒huTNF-α质粒由宝生物大连公司提供;人胆管癌细胞按王曙光等[1]方法经胰酶消化、贴壁生长,以10%小牛血清和DMEM培养液中,在体积分数为5% CO2浓度、饱和湿度及37℃条件下培养;Lipofect AMINE reagent ,TransIT-LT1购自日本Mirus公司;G418购自美国GIBCO/BRL公司;huTNFα抗体购自中山公司;其他试剂为分析纯.PCR引物、huTNF-α基因序列测定均由大连TAKARA公司合成.
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SARS病毒知多少?--台湾大学完成的基因序列测定统计误差小
SARS病毒是新发现的一种冠状病毒,和已知的人类冠状病毒不同,SARS病毒是从病人身上分离出来的,目前尚无从每一个病人快速分离的方法,所以分离一株病毒就是一项研究成果.早分离出SARS病毒是重大创新发现,美国国立卫生研究院(NIH)下属国家生物信息中心(N CBI)网站的SARS coronavirus页面列出了已分离的60种SARS病毒株(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgi?id=227859)及基因序列的完整测定.
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生长抑素基因在大肠杆菌pThioHis表达系统中的克隆与表达
目的在大肠杆菌表达系统中高效表达生长抑素(SS)基因.方法以天然SS的氨基酸和基因序列为标准,将大肠杆菌使用频率较低的密码子分别更换成了使用频率较高的密码子,在SS基因的两端加上了合适的酶切位点,头部:KpnI和NcoI;尾部:Pst I(这一酶切位点可与Nsi I的切口互补).克隆至pThioHis A质粒的KpnI/Pst I酶切位点后,再克隆至pThioHis A质粒的Kpn I/Nsi I酶切位点,使SS基因分别位于多克隆位点的尾部和前部.结果重组质粒经酶切鉴定和基因序列测定证明,基因完全正确,在大肠杆菌TOP10中均得到较好的表达,IPTG诱导后4h表达量基本达到高(37℃);在A600 0.4~1.5之间用IPTG诱导均可获得到较好的表达,但以0.6左右为佳诱导时机;在LB、TB和2YT培养基中表达量依次为:TB>LB>2YT;表达的SS融合蛋白基本为水溶性的,具有良好的SS抗原性和免疫原性.结论为基因工程SS大肠杆菌疫苗的研制奠定了基础.
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广东籍家系HLA基因重组3例报告
目的 探讨广东籍家系人类白细胞抗原等位基因的重组及规律.方法 采用PCR-序列特异性引物(sequence specific primer,SSP)和基因序列测定(sequence-based test,SBT)两种方法对2010年1月至2012年5月间进行骨髓移植配型的3个基因重组广东籍家系进行HLA-A、Cw、B、DRB1、DQB1高分辨分型,并通过短片段串联重复序列(short tandem repeat,STR)法对各家系的亲子关系进行鉴定.结果 3个家系中2例为母源性的A/Cw位点之间的基因重组,1例为父源性的B/DRB1位点之间的基因重组.重组后均产生了新的单倍型.结论 A/C、B/DRB1间的基因重组较为多见,母源性基因重组多于父源性基因重组.此次研究发现了1例B/DRB1间的父源性基因重组.
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ABH分泌型与非分泌型分布及其基因分型研究
目的:研究ABH分泌型与非分泌型分布情况,为临床输血工作中血型鉴定及解决疑难输血提供参考.方法:采用凝集抑制试验检测唾液中可溶性ABH血型物质,同时采用直接测序技术对46例血清学定型为分泌型的献血者进行分析研究.结果:①115例献血者分泌型95例,非分泌型20例;②A型献血者中男性A物质平均效价高于女性献血者,差异有统计学意义(P<0.05);③B型献血者中男性B物质平均效价与女性比较差异无统计学意义(P>0.05);④O型献血者男性H物质的效价与女性比较差异无统计学意义(P>0.05);⑤1例经血清学检测为分泌型标本出现178C/T新的突变位点.结论:唾液中ABH血型中A物质的效价高于B物质的效价,血型基因序列测定技术可供ABH疑难血型鉴定作参考.
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从风湿热患者咽喉中分离出 A组β溶血性链球菌 1株
M蛋白是 A组链球菌 (GAS)所致的化脓和非化脓疾病的发病过程中重要的毒性物质. GAS有许多血清型.传统分型方法是血清学分型-- M分型 ,但由于 M分型血清制备困难、保存期短 ,该法一直仅限于实验室运用 ,未能在临床普及.近 10多年来 ,分子生物学技术广泛尝试应用于 GAS的分型 ,如核糖体分型、 Vir分型、随机引物 DNA多态性、多位点酶电泳、限制性片段长度多态性、脉冲场凝胶电泳、多点序列分析、编码 M蛋白的基因( emm基因)序列测定分型法. emm基因序列测定分型法因其鉴别力强、快捷等优点 ,已逐渐为人们所接受.
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两株登革2型病毒E、NS1蛋白基因序列测定及其系统发生分析
目的: 对从登革出血热(dengue hemorrhagic fever, DHF)病人血清分离到的一株登革2型病毒(dengue virus type 2, DEN-2 B株)和DEN-2 NGC株作E、NS1蛋白部分基因序列测定并进行系统发生树分析,了解其变异及分子进化特证.方法: 利用RT-PCR法扩增B株和NGC株E、NS1部分基因片段,PCR产物直接测序;利用DNAssist软件预测其氨基酸序列,以及PHYLIP软件的CLUSTAL方法绘制系统发生树.结果: B株与NGC株E蛋白基因区第1~476 nt(476 bp)碱基序列存在8个位点的差异;编码氨基酸存在4个位置的不同;NS1基因区第589~1 002 nt(413 bp)碱基序列存在7个位点的差异,编码氨基酸有2个位置的改变;B株与NGC株和DEN-2 44株E区部分片段核苷酸同源性分别为99.1%和98.7%;与NS1区部分片段核苷酸同源性分别为98.3%和98.1%.B株E基因、NS1基因序列已登录GenBank,注册号分别为AY179733和AY238471.结论: B株E、NS1基因序列和氨基酸序列与NGC株存在差异;B株与我国海南1989年流行的DEN-2 44株和NGC株系统进化关系较近.
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从贵州白纹伊蚊体内分离到一株2型登革病毒
从贵州省独山县麻尾镇白纹伊蚊标本中分离到一株病毒,用抗DEN1-4型单克隆抗体经间接免疫荧光法和RT-PCR产物酶切分型鉴定为DEN-2,并对其NS1和E基因RT-PCR产物进行部分基因序列测定,与DEN-2NGC株比较,麻尾株的NS1基因区有7个碱基发生点突变,E基因区有1个碱基的插入,两个序列被GenBank收录,编号分别为AY277402、AY278226;麻尾分离株与其他9株DEN-2型病毒进行系统发育关系的分析,结果显示与D2-43株系统进化关系近;证明贵州省存在DEN感染的自然循环.
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龈下菌斑及冠状动脉粥样硬化斑块中牙龈卟啉单胞菌的同源性检测
目的:检测牙周袋内牙周致病菌牙龈卟啉单胞菌(P.g)与冠状动脉粥样硬化斑块中牙龈卟啉单胞菌的同源性,探讨慢性牙周炎发生发展与冠心病的相关性.方法:选取15例患有冠状动脉粥样硬化型心脏病伴有慢性牙剧炎的患者,分别收集其龈下菌斑样本和冠状动脉粥样硬化斑块样本,提取细菌DNA,PCR检测样本中的P.g 16SrDNA基因,扩增产物行基凶序列的测定.结果:龈下菌斑中的P.g 16SrDNA基因与冠状动脉粥样硬化斑块巾的P.g 16SrDNA基凶具有高度同源性.结论:牙周致病菌与冠心病发生发展密切相关,慢性牙周炎是冠心病的危险因素之一,为冠心病及慢性牙周炎的防治提供了依据.