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前列腺素E2复合骨移植后早期排斥与愈合过程的特点
目的 研究前列腺素E2复合冻干骨移植后的早期排斥反应与愈合过程的特点.方法 36只大耳白兔制作大段骨缺损模型,随机分为三组(n=12):自体骨组;同种异体冻干骨组;同种异体冻干骨复合0.1 mg/L前列腺素E2组;移植后检测各组的T细胞亚群比值和骨形成、骨吸收状况.结果 在移植后,前列腺素E2复合组的CD8+ 细胞亚群升高慢,且明显低于同种异体冻干骨组(P＜0.05).移植早期,CD4+ 细胞在前列腺素E2复合组有轻度的升高,与自体组和同种异体组相比差异有统计学意义(P＜0.05).血清骨钙素和血清Ⅰ型胶原交联C端肽检测结果提示,前列素E2复合组与自体组差异无统计学意义(P＞0.05),与同种异体冻干骨的差异有统计学意义(P＜0.05).前列腺素E2复合冻干骨可以促进骨钙素的分泌,降低Ⅰ型胶原交联C端肽的血清浓度.结论 冻干骨复合前列腺素E2后能加速移植骨与宿主骨的愈合,且能抑制冻干骨残存抗原性,促进骨形成及抑制骨吸收.
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掺锶冻干骨体内植入的生物相容性
背景:同种异体冻干骨是良好的骨移植材料,但在制备过程,其天然活性成分有所丢失或部分失活,成骨活性下降.努力改善冻干骨成骨活性,希望研制出一种能克服上述缺点的新型材料运用于临床.目的:观察掺锶冻干骨植入大鼠体内的生物学活性.方法:按照标准的冻干骨加工程序制备大鼠股骨髁冻干骨材料,采用氯化锶溶液浸泡方法制备掺锶冻干骨.将27只健康成年SD大鼠随机分为3组,每组9只.SD大鼠钝性分离肌肉,造成股部肌袋,双侧均行手术.植入掺锶冻干骨作为实验组,同法植入未掺锶的普通冻干骨作为对照组.空白对照组双侧均不植入任何材料.分别于植入后4,8,12周处死各组动物3只,行大体观察、组织学观察,并依据炎性浸润及组织纤维化程度进行组织学评分.结果与结论:采用氯化锶溶液浸泡方法制作掺锶冻干骨,锶相对钙元素掺入摩尔浓度为4.2%时在骨质内层锶元素浓度分布比较均匀.实验组和对照组植入材料周围均可见炎性细胞、肉芽组织和血管生成,并随着时间推移,炎性浸润程度明显降低,而周围纤维组织包绕增加.空白对照组炎性浸润程度轻,少量组织纤维化.实验组和对照组与空白对照组相比,炎性浸润程度及组织纤维化程度组织学评分差异有显著性意义(P < 0.05).说明通过温和的锶-钙离子交换方法可以在冻干骨中有效的掺入锶元素,获得一种掺锶冻干骨材料;该掺锶冻干骨具有良好的生物组织相容性,与普通冻干骨比较无明显差异.
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脂质体介导pcDNA3/hVEGF165转染骨髓基质干细胞复合冻干骨的体内成骨和血管化
背景:以往的研究表明血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子可以促进移植物的存活和体内生长.目的:观察脂质体介导的pcDNA3/hVEGF165转染骨髓基质干细胞后复合冻干松质骨在体内的成骨和血管化效果.方法:取同种异体新西兰大白兔的耾骨和股骨制备冻干骨,用脂质体将血管内皮生长因子转染入体外培养扩增新西兰大白兔骨髓基质干细胞中,使其附着于同种异体冻干松质骨.将新西兰大白兔分为3组,于兔竖脊肌分别植入单纯冻干骨、单纯骨髓间充质干细胞复合冻干骨组、转染有血管内皮生长因子的骨髓基质干细胞复合冻干松质骨.结果与结论:植入后8周时可见到转染血管内皮细胞生长因子的骨髓基质干细胞复合冻干松质骨标本的表面有软骨和骨质形成,有成骨和破骨细胞出现,并形成类骨质,在移植骨周围组织中有大量血管形成,其他两组仅有大量纤维包裹.说明,脂质体介导的pcDNA3/hVEGF165转染后骨髓基质干细胞复合冻干骨具有较好成骨活性,优于单纯骨髓基质干细胞复合冻干松质骨和单纯冻干骨.
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煅烧与冻干制备去抗原异种骨支架材料的性能
背景：异种骨因其结构及生物特性与人体骨相似，经理化处理后抗原性降低，具有多孔结构，并且来源丰富、可以长期保存等特点，被认为是解决自体骨与异体骨来源不足的有效方法。
目的：比较2种不同处理方法处理后去抗原异种松质骨支架材料的各项理化特性。
方法：将经过化学方法处理的羊松质骨放入马弗炉中，在1000℃高温下煅烧2 h制备成煅烧骨，将另一组经过化学处理的羊松质骨放入-80℃冰箱中冷冻4周，然后在真空仪器中干燥制备成冻干骨，将经过超纯水冲洗干净的羊松质骨当做对照组。
结果与结论：3组样品均保留与人体骨组织类似的多孔三维结构，通过微观观察，它们的框架保存完整，有较小的孔隙(55-650μm)和较高的孔隙率(65%-80%)，煅烧后的支架材料韧性降低而脆性明显增加，冷冻干燥处理后力学性能则下降不大，经过衍射分析仪测定它们的主要成分为羟基磷灰石，但煅烧组中还含有少量的β-磷酸三钙，而能谱分析则证实3组的钙磷含量比均接近人体的钙磷比。结果提示经过这两种方法处理的松质骨与人体骨组织结构相似，其中各主要元素的含量比也与人体接近，而且具有足够小的孔隙和较高的孔隙率，但是煅烧处理对支架材料的力学性能影响比较大，而经过冷冻干燥处理力学性能下降不大但无法完全去除材料中的抗原成分，它们基本能达到骨组织工程支架材料的基本要求。 -
三种异种骨材料修复牙周骨缺损的比较
背景：目前，牙周病的治疗方法主要有自体骨移植、同种异体骨移植、异种骨移植与人工骨替代材料植入等，然而每一种方法都有自己的优缺点。目的：比较煅烧骨、冻干骨和Bio-oss骨各自单独使用修复牙周骨缺损的效果。方法：将36只新西兰大白兔随机均分为4组，制备单侧牙周骨缺损模型，其中3组于骨缺损处分别植入煅烧骨、冻干骨和Bio-oss骨，以未植入任何材料者作为空白对照。术后4，8，l2周处死动物，获取完整标本，进行大体、X射线及组织学观察。结果与结论：煅烧骨组、冻干骨组、Bio-oss骨组术后4，8，12周的骨密度、新生牙骨质高度、新生牙槽骨高度及新生牙周膜高度均高于空白对照组，且缺损处骨组织逐渐连续，牙根面可见新生牙周组织形成，随着时间的推移逐渐成熟、增多。煅烧骨组术后4周新生牙槽骨高度高于冻干骨组(P <0.05)；冻干骨组术后12周新生牙周膜高度明显高于煅烧骨组、Bio-oss骨组(P <0.05)。结果表明煅烧骨的成骨诱导能力优于Bio-oss骨与冻干骨，冻干骨促进牙周膜再生的能力优于煅烧骨、Bio-oss骨。
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冻干去抗原羊松质骨支架的生物相容性评价
背景：异种骨具有与人类骨类似的天然多孔结构，在治疗骨缺损时可引导骨组织再生，但植入过程中也会引起不同程度的免疫反应。目的：采用冻干法制备去抗原羊脊椎松质骨支架材料，并评价其生物相容性。方法：取羊脊椎松质骨，制备两组去抗原异种骨支架，化学组经H2O2、甲醇/氯仿混合液等化学试剂处理；冻干组将经化学处理的羊松质骨在-80℃冰箱中低温冷冻4周，真空干燥，60结果与结论：冻干组支架无细胞毒性、急性毒性及热源反应，皮内刺激实验阴性；化学组支架有细胞毒性及轻微急性毒性反应，有致热源作用及轻度皮肤刺激性。结果表明经过化学处理羊脊椎松质骨支架的生物相容性相对较差，而化学处理配合低温冷冻、真空干燥及Co照射消毒。①细胞毒性实验：分别采用化学组材料浸提液、冻干组材料浸提液与DMEM/F12培养基培养羊骨髓间充质干细胞。②热源实验、急性毒性实验：从兔耳缘静脉分别注射化学组材料浸提液、冻干组材料浸提液与生理盐水。③皮内刺激实验：分别在兔脊柱背部皮下注射化学组材料浸提液、冻干组材料浸提液、生理盐水及乙醇。60 Co照射的羊脊椎松质骨生物相容性较好，基本能达到骨组织工程支架材料的要求。
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骨髓基质细胞复合冻干异体骨成骨的实验研究
在游离骨移植中,自体骨移植的融合效果好,但其存在供骨区的损伤如另做切口、疼痛、感染以及取骨量的限制和供骨区解剖学形态的改变等缺点.为了克服这些缺点,本实验进行复合自体红骨髓和骨髓基质细胞的冻干骨修复骨缺损的实验研究.
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冻干骨和PLGA材料表面软骨细胞增殖的形态学观察比较
目的 了解两种材料表面软骨细胞的增殖特性预测形成组织工程化关节软骨的可能性.方法 获取幼兔关节软骨细胞,种植于两种材料表面,培养观察细胞生长情况.结果 冻干骨和聚羟基乙酸聚乳酸共聚物(PLGA)材料表面细胞均有粘附增殖及基质分泌,但后者明显优于前者.结论 冻干骨表面粘合PLGA材料种植软骨细胞有可能形成组织工程化关节软骨.
关键词： 冻干骨 聚羟基乙酸聚乳酸共聚物 组织工程 软骨 -
冻干骨的骨诱导作用
目的了解冻干骨的骨诱导特性,为冻干骨的应用提供依据.方法取4例股骨头松质骨,每例分成2组.冻干照射组按骨制品制备要求处理后,与新鲜骨组一样,常规固定、脱钙,石蜡包埋切片,用免疫组织化学方法检测转化生长因子β1(TGFβ1)和碱性成纤维细胞生长因子(bFGF).另用冻干骨和羟基磷灰石提取液对人骨髓间充质干细胞进行培养,用原位杂交方法检测细胞的碱性磷酸酶(AKP)、Ⅰ型胶原mRNA表达情况.结果冻干照射组TGFβ1和bFGF检测阳性.但其阳性率和阳性信号要低于新鲜骨组.细胞经冻干骨提取液培养后,AKP、Ⅰ型胶原mRNA表达要明显高于经羟基磷灰石提取液和单纯培养液培养的细胞.结论骨组织经冻干照射后保留了一定的有生物活性的骨诱导成分,具有一定的骨诱导能力.
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人骨髓间充质干细胞复合不同载体的体内成骨
目的探讨冻干松质骨与羟基磷灰石对骨髓间充质干细胞体内成骨的影响.方法取人骨髓间充质干细胞,使其附着于冻干松质骨和羟基磷灰石,并植入裸鼠皮下.定期腹腔内注射四环素液.18只裸鼠分别在术后2、4、6周处死.取标本进行HE、甲苯胺蓝染色观察和四环素荧光观察.结果 2周时,可见到骨髓间充质干细胞贴附在细胞复合松质骨(MC)组的标本表面及较深部的骨小梁表面,而在细胞复合羟基磷灰石(MH)组,细胞仅贴附在标本的表面.4周时,MC组的贴附细胞呈规则排列的立方体形,而MH组的细胞为不规则的立方体,排列也比较紊乱.到6周时,仅MC组出现了类骨质和四环素荧光.在松质骨骨块的所有孔隙内都可见到来自宿主的纤维组织长入,而羟基磷灰石仅在邻近表面的孔隙内见到这种纤维组织.结论作为间充质干细胞载体,目前冻干松质骨要优于羟基磷灰石.
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不同材料对人骨髓间充质干细胞增殖的影响
目的了解冻干骨和羟基磷灰石对骨髓间充质干细胞增殖的影响，为细胞移植载体的选择提供依据。方法人骨髓间充质干细胞分成3组，分别用冻干骨提取液、羟基磷灰石提取液和普通培养液进行培养对照。在培养24 h、28 h后用流式细胞仪分别对3组细胞进行细胞周期检测。结果 3组细胞均未出现DNA异常倍体。24 h时，在整个增殖期、DNA合成期、有丝分裂期，3组细胞之间差异均有显著性。其中，冻干骨主要抑制了细胞的DNA合成（冻干骨组均值为2.17%，对照组均值为18.98%）；羟基磷灰石主要抑制了细胞的有丝分裂（羟基磷灰石组均值为6.69%，对照组均值为12.02%）。但到28 h，各组在DNA合成期、有丝分裂期的细胞数量趋于接近。结论两种材料对骨髓间充质干细胞的增殖均有短暂的抑制作用，但仍可作为间充质干细胞的载体应用。
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冻干骨在骨缺损修复中的研究进展
冻干骨作为修复骨缺损的骨组织工程材料,具有来源广泛、制作工艺成熟、便于保存及运输、免疫排斥反应小、生物力学性能良好、良好的骨传导性和较好的骨诱导性等优点,因此受到各临床外科医师及学者的极大关注,目前已成为异体骨移植常用的材料之一.本文就目前对冻干骨研究的几个热点问题进行综述.
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应用解剖型骨水泥股骨假体结合冻干骨打压植骨进行髋关节翻修
[目的] 探讨结合应用解剖型骨水泥股骨假体和冷冻干燥颗粒骨打压植骨(IBG)进行股骨翻修的可行性及临床效果.[方法] 作者在2001年1月～2005年12月期间,在髋关节翻修中,有49例在股骨翻修中应用解剖型骨水泥柄结合冷冻干燥颗粒骨打压植骨技术,其中有36例(73%)存在严重的骨缺损(Paprosky分型ⅢB或Ⅳ).平均随访时间为35.3个月(26～52个月).通过Harris评分和X线片对结果进行评价.[结果] Harris评分从术前的平均44.6分提高到后评估时的平均88.3分,Harris评分优良率为89.8%.X线片未显示有明显的股骨假体下沉.1例出现术后感染,1例出现术后脱位,感染率及脱位率均为2%,3例出现了术中股骨骨折及股骨柄穿孔,其发生率为6.1%,但这些与假体及植骨材料选择无关.[结论] 使用解剖型骨水泥股骨假体结合异体冷冻干燥颗粒骨打压植骨技术,对有严重骨缺损的股骨进行翻修是可行的,并且中短期的临床效果满意,长期效果还有待观察.
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冻干骨对间充质干细胞成骨能力的影响
目的:研究人冻干骨(FDB)对间充质干细胞(MSCs)成骨能力的影响.方法:通过体外细胞培养模型,以扫描电镜观察MSCs在FDB上的附着情况:将在体外孵育不同时间(2h、1、10d)的MSCs-FDB复合物植入裸鼠体内,分别在2、4和8周,对植入物进行组织学和形态计量学检查.结果:FDB表面及内部都有MSCs附着生长,孵育了不同时间的MSCs-FDB复合物,在裸鼠体内都有明显的成骨,骨量无明显差别.结论:FDB与MSCs有良好的相容性,MSCs在冻干骨上孵育不同的时间(10d内),对其植入体内后的成骨能力没有明显影响.
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脱钙冻干骨修复种植周骨缺损的扫描电镜观察
目的比较脱钙冻干骨(DFDB)、脱钙冻干骨复合人重组骨形成蛋白-2(rhBMP-2)、脱钙冻干骨联合钛膜的骨修复能力.方法3条犬股骨种植体周形成4mm×3 mm×3 mm的骨缺损,分别植入上述3种不同材料.术后4、8、12周分期处死动物,取含种植体的骨段进行扫描电镜观察,观察新骨形成情况及其与种植体之间的缝隙.结果DFDB可单独用于修复种植体周骨缺损,但成骨作用较慢;DFDB+rhBMP-2和DFDB+钛膜能较早诱导新骨形成,加速骨整合过程.结论DFDB是一种较理想的骨修复材料,复合rhBMP-2或与钛膜联用时效果更佳.
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脱钙冻干异体骨移植对骨缺损的修复作用
目的 应用脱钙冻干异体骨(DFDBA)修复骨缺损,解决种植区的骨量不足问题.方法 在种植外科中,将脱钙冻干异体骨用于19例种植区骨缺损患者,观察种植体动度、牙齿指数(GI)及X线改变等临床指标,评价其临床应用效果.结果 19例植骨手术均获成功,无一例种植体周围炎发生,种植体初期稳定性良好.结论 脱钙冻干异体骨既有一定的力学支持能力,又有骨诱导作用,且可塑性强.
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一种新型冻干骨材料的安全性初步评价
目的:对一种新型掺锶冻干骨材料的安全性进行评价.方法:用离子交换方法制备掺锶冻干骨材料,制备浸提液,选择L929细胞通过MTT方法进行细胞毒性检验；应用小鼠进行体内植入,观察材料的异常毒性.结果:本实验制备的掺锶冻干骨材料锶元素含量为5.14％,细胞毒性评级为安全无毒级,小鼠体内实验未见异常毒性.结论:新型掺锶冻干骨材料是一种较为安全的新型骨替代材料.
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大段冻干骨插入性植骨治疗长骨缺损
临床上导致大块骨缺损的原因很多,如骨肿瘤保肢治疗行广泛切除、严重的创伤骨折发生骨丢失、骨病或骨感染、遗传性假关节等.若无有效的治疗方法,必将严重影响患者肢体的功能.虽然有多种治疗大段骨缺损的方法,但疗效不确切,且操作复杂[1～3].作者于2000年3月至2001年10月用大段同种异体冻干骨治疗骨缺损4例,获得满意疗效.
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犬冻干骨的制备及复合骨髓间充质干细胞的体外培养
目的:探讨犬冻干骨与骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)的相容性,研究其作为骨组织工程支架材料的可行性.方法:杂种犬下颌骨行骨块制备、深冻、脱脂、冷冻干燥、灭菌制成冻干骨.分离培养同种异体犬BMSCs,并与冻干骨复合培养.HE染色观察冻干骨的组织结构.MTT比色法检测冻干骨对BMSCs的活性影响.扫描电镜观察细胞在冻干骨表面的生长情况.结果:冻干骨对BMSCs的活性无影响.扫描电镜观察可见细胞紧密黏附冻干骨生长,细胞形态呈多角形.结论:所制备犬冻干骨能与BMSCs具有良好的细胞相容性.
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冻干骨与自体骨髓移植修复颌骨部分缺损
目的探讨用骨移植修复颌骨缺损的方法.方法采用异体冻干骨与自体红骨髓复合骨对18例颌骨缺损患者进行移植.结果术后随访1～12个月,受植区无红肿,无瘘道.X片显示受植区骨小梁排列清晰.结论冻干骨与自体骨髓复合骨移植是修复颌骨部分缺损的一种简便有效的方法.
