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抗Ⅳ型胶原酶单链抗体对博莱霉素诱导小鼠肺纤维化的防治作用
目的 研究抗Ⅳ型胶原酶单链抗体scFv(3G11)对博莱霉素(BLM)诱导的小鼠肺纤维化的防治作用.方法 C57BL/6小鼠分为空白对照组、盐水对照组、BLM组和低、中、高剂量scFv(3G11)组.BLM组气管内注射BLM 400 ng/g;低、中、高剂量scFv(3G11)组注射BLM当天记为0 d,第1～7天每天腹腔注射scFv(3G11) 15、30、45 μg/g.第21天处死盐水对照组、BLM组和中剂量scFv(3G11)组小鼠各6只,取左肺行组织病理学观察,并测定肺泡隔面积比和有核细胞计数;另处死空白对照组、盐水对照组、BLM组和低、中、高剂量scFv(3G11)组小鼠各6只,取肺组织测定羟脯氨酸含量以衡量肺胶原沉积状况.取小鼠腹腔巨噬细胞进行原代培养,采用明胶酶谱法观察不同浓度scFv(3G11)(0、15、30、45、60 μmol/L)对巨噬细胞分泌基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9的影响.结果 组织病理学观察显示scFv(3G11)组小鼠肺纤维化程度明显轻于BLM组,肺泡隔面积比(45.3%± 3.2%)和有核细胞计数(451 ± 47)均明显低于BLM组(59.0% ± 3.0%,599 ± 42,均P<0.01).中、高剂量scFv(3G11)组小鼠肺组织羟脯氨酸含量[分别为(0.82±0.05)和(0.80±0.03)μg/mg]明显低于BLM组[(0.92±0.07)μg/mg,P<0.05,P<0.01].明胶酶谱分析显示,scFv(3G11)浓度为15 μmol/L时即可抑制巨噬细胞分泌的MMP-2和MMP-9的活性.结论 抗Ⅳ型胶原酶单链抗体scFv(3G11)能抑制BLM诱导的小鼠肺纤维化.
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醒脑静对脑出血大鼠脑水肿及血肿周围基质金属蛋白酶-9和补体C3的影响
目的 探讨醒脑静改善脑出血后脑水肿的作用机制,及其对血肿周围基质金属蛋白酶-9和补体C3的影响.方法 72只健康雄性SD大鼠,随机分为假手术组、出血组和醒脑静组.自体血注射法建立脑出血模型,Garcia法评价神经功能;于湿重法检测脑组织含水量;根据伊文蓝浓度评价血-脑屏障通透性;免疫组织化学检测血肿周围脑组织中基质金属蛋白酶-9和补体C3表达水平.结果 经醒脑静治疗后,大鼠神经功能评分逐渐增加(均P<0.05),至手术后72 h达峰值水平(P<0.05),且手术后48和72h神经功能评分均高于出血组(P<0.05).手术后72 h,出血组大鼠脑组织含水量升高,血-脑屏障通透性增加,基质金属蛋白酶-9和补体C3表达阳性细胞数目增多(均P<0.05);经醒脑静治疗后,脑组织含水量降低,血-脑屏障通透性下降,基质金属蛋白酶-9和补体C3表达阳性细胞数目减少,与出血组比较差异有统计学意义(均P<0.05).结论 醒脑静通过下调血肿周围脑组织中基质金属蛋白酶-9和补体C3表达水平而达到保护血-脑屏障、减轻血管源件腑水肿的作用.
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靶向MMP-9的siRNA抑制人类SGC7901胃腺癌细胞侵袭和迁移的研究
目的:探讨基质金属蛋白酶(MMP-9)siRNA对胃腺痛细胞系SGC7901中MMP-9表达的影响以及siRNA干扰后对SGC7901细胞侵袭和迁移的抑制作用.方法:设计合成针对MMP-9的siRNA,采用oligofectamine转染SGC7901胃腺癌细胞,分别采用实时定量聚合酶链反应(realtime PCR)和蛋白印迹法分别检测转染细胞后MMP-9mRNA及蛋白的表达.Matrgel 3D生长实验和Transwell实验检测细胞侵袭情况,Matrgel 2D生长实验和划痕实验检测细胞迁移情况.结果:realtime PCR和蛋白印迹法显示转染MMP-9 siRNA后细胞中MMP-9 mRNA和蛋白的表达较空白组和对照组明显降低.RNA干扰MMP-9基因后SGC7901细胞的侵袭和迁移能力也有明显下降.结论:靶向MMP-9的siRNA不仅能特异性的降低MMP-9 mRNA及蛋白的表达,且能抑制人SGC7901胃腺癌细胞的侵袭和迁移.
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明胶酶在弥漫增殖型狼疮肾炎中的表达及临床意义
目的 明确明胶酶在弥漫增殖型狼疮肾炎中表达的变化及意义.方法 经过肾活检确诊的弥漫增殖型狼疮肾炎17例,分别进行基质金属蛋白酶(MMP)-2与MMP-9的免疫组织化学染色,并进行MMP-2与膜型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)、MMP-9与CD68的免疫组织化学双重染色,平均治疗2.5年后行重复肾活检.观察其表达变化与疾病活动度、临床指标以及转归的关系.结果 正常对照组可有MMP-2的表达,但是少有MMP-9的表达.弥漫增殖型狼疮肾炎肾组织中MMP-2与MMP-9的表达明显增高,其中MMP-9的表达变化更为显著.MMP-2与MT1-MMP、MMP-9与CD68的表达密切相关.重复肾活检显示10例病情改善者MMP-2与MMP-9的表达分别下降了70%和62%.7例病情未缓解者表达仅下降了27%和32%.MMP-2与MMP-9的表达水平与狼疮肾炎病理活动性指数呈正相关.结论 明胶酶的表达与狼疮肾炎病理的活动性密切相关.
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脑损伤大鼠水肿区脑组织明胶酶B基因的表达
背景:明胶酶B基因在脑血管病变中表达已有报道,但在脑损伤脑水肿形成中是否起重要作用?目的:了解大鼠脑损伤后脑组织明胶酶B基因表达情况,探讨其与脑水肿发生的关系.设计:随机对照的实验研究.地点和材料:实验地点:解放军第二五二医院动物室及中心实验室,40只Wistar大鼠,雌雄各半,体质量(410±50)g.干预:40只大鼠,于伤后不同时间取水肿区脑组织及正常脑组织:提取组织总RNA:用共扩增反转录定量PCR方法测定MMP-9基因表达水平.主要观察指标:观察MMP-9大鼠脑损伤后12,24,48 h表达水平,并与正常脑组织表达水平比较.结果:脑损伤水肿区脑组织MMP-9基因表达水平明显高于正常脑组织(0.66±0.14):伤后12 h表达强(2.63±0.14),24,48 h表达逐渐下降[(1.71±0.30)和(1.30±0.26)],但仍高于正常对照组,差异有显著性意义(t=3.43,3.90,P＜0.01).结论:明胶酶B在脑损伤脑水肿形成中可能起重要作用.
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明胶酶在脑胶质瘤大鼠中的活性
目的:通过观察脑胶质瘤大鼠动物模型中明胶酶的活性变化,为以明胶酶为靶点的脑胶质瘤治疗奠定实验基础.方法:实验于2004-10/2005-12在解放军军事医学科学院野战输血研究所干细胞生物学研究室完成.9L大鼠胶质瘤细胞购自广州南方医科大学.①选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只,24只建立大鼠脑胶质瘤模型,造模后随机数字表法分为建模后7,14,21,28 d组,6只/组,每组3只用于灌注固定做免疫组化分析,另3只用于反转录多聚酶链反应和明胶酶谱分析.剩余3只大鼠作为正常对照.②采用反转录多聚酶链反应技术、免疫组织化学和明胶酶谱等方法检测胶质瘤中明胶酶2(matrix metalloproteinase 2,MMP-2)和明胶酶9(matrix metalloproteinase 2,MMP-9)的活性变化.结果:实验选取清洁级健康成年雄性Fisher344大鼠27只,全部进入结果分析.①MMP-2和MMP-9 mRNA的表达:9L胶质瘤细胞中均可见MMP-2和MMP-9 mRNA的表达,MMP-2的表达量高于MMP-9;大鼠脑胶质瘤组织中可见两者mRNA的表达,而正常脑组织MMP-2 mRNA低表达,检测不到MMP-9 mRNA的表达;随着肿瘤的生长,MMP-9mRNA的表达量增高.②MMP-2和MMP-9免疫组织化学观察结果:9L胶质瘤细胞的免疫组化显示,MMP-2和MMP-9均呈现阳性染色,主要为胞浆和胞膜染色;肿瘤组织MMP-2和MMp-9染色阳性,为胞浆染色,在血管内皮和肿瘤侵袭边缘细胞胞阳性染色明显.随脑胶质瘤的生长,MMP-2和MMP-9染色程度加深.③MMP-2和MMP-9酶活性检测结果:9L细胞无血清培养上清中可见Pro-MMP2(Mr72000)与ProMMP9(Mr92000)及其活化形式active MMP-2(Mr66000)与activeMMP-9(Mr83 000)的表达,MMB-2的表达量较高;MMP-2酶原与活化的MMP-2在脑胶质瘤组织中明显表达,而在正常脑组织低表达.MMP-9酶原与活化的MMP-9在脑肿瘤组织中表达,正常脑组织中未检测到其表达.④MMP-2和MMP-9在肿瘤组织中的定位情况:脑胶质瘤组织冰冻切片原位明胶酶谱结果显示,肿瘤组织因表达活性的明胶酶降解载片上的明胶,致使不被染色,肿瘤部位很透亮.对侧脑组织因不表达明胶酶,不能降解明胶,被染黑.结论:脑胶质瘤模型中表达高活性的MMP-2和MMP-9,且与胶质瘤生长速度密切相关.
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抑制基质金属蛋白酶9蛋白活性的生物制剂研究进展
基质金属蛋白酶9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)被认为在肿瘤侵袭和转移中起重要作用,抑制其表达或阻断其活性对抑制恶性肿瘤的侵袭和转移有十分重要的临床意义.近年来大量研究聚焦抑制MMP-9活性的药物,研究这些药物的作用机制和疗效,将会促进恶性肿瘤转移的诊断和治疗.此文对近年来有关抑制MMP-9活性的生物制剂的相关研究进展做一综述.
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基质金属蛋白酶及活性酶在类风湿关节炎上表达研究
基质金属蛋白酶(Metalloproteinases,MMPS)属锌依赖性内肽酶家族[1],具有降解一种或几种细胞外基质(Extracellular matrix,ECM).细胞外基质(ECM)是存在于细胞间的动态网状结构,由胶原蛋白酶糖及糖蛋白等大分子组成.在细胞-细胞间及细胞-基质间的信号传递、炎性细胞浸润、肿瘤转移、细胞增殖和分化等方面起着重要作用.基质金属蛋白酶影响发育过程,并与许多疾病如关节炎、肿瘤等有关.ECM正常转换是发育所必需的,它的失调能引起病理上损伤导致关节炎.研究明胶酶类基质金属蛋白酶即MMP-2和MMP-9以及活性MMP-2、MMP-9后发现,它与胶原结缔组织反应有极其密切的关系.以胶原结缔组织为主的细胞外基质降解及促进血管翳增生,终导致软骨、韧带、骨的破坏[2],导致类风湿关节炎畸变.
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新转移相关蛋白SNC19翻译后加工及其活性形式的研究
目的:进一步从蛋白水平研究SNC19编码蛋白与肿瘤转移的关系;方法:免疫印迹法检测该蛋白在不同肿瘤细胞系及大肠癌组织中的表达;构建Psectag2A-SNC19(ORF)真核表达质粒,转染至乳腺癌细胞BCAP37中瞬时表达,产物经亲和层析纯化,用anti-His mAb进行Western blot鉴定其加工形式,并观察不同的加工产物是否具有明胶酶活性.结果:免疫印迹法显示,在所选肿瘤细胞系和组织中SNC19蛋白存在差异表达及翻译后加工;转染的BCAP37细胞产生120 kD和75 kD两种形式的SNC19蛋白,其中只有75 kD的形式被证明具有明胶酶活性.结论:SNC19蛋白在不同的肿瘤细胞系和肿瘤组织中存在差异表达及翻译后加工,其中75 kD的形式被证明具有明胶酶活性.
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利用组织芯片研究明胶酶及其抑制因子在乳腺癌中的表达
目的 研究明胶酶(MMP-2、MMP-9)及其抑制因子(TIMP-1、TIMP-2)在乳腺癌侵袭转移中的表达意义.方法 采用组织芯片平台,应用免疫组织化学方法结合计算机图像分析技术检测160例浸润性乳腺癌组织MMP-2、MMP-9、TIMP-1和TIMP-2蛋白表达及其相应比值大小.结果 乳腺癌组织MMP-2、MMP-9蛋白表达和MMP-9/TIMP-1、MMP-2/TIMP-2蛋白表达比值均与腋淋巴结受累、TNM分期呈正相关(P＜0.01);TIMP-2蛋白表达与腋淋巴结受累呈负相关(P＜0.05);MMP-9/TIMP-1和MMP-2/TIMP-2比值大小均与肿块大小呈正相关(P＜0.05);MMP-9表达与年龄呈负相关(P＜0.05).在乳腺癌组织MMP-2和TIMP-2蛋白表达、MMP-9和TIMP-1蛋白表达均呈显著正相关(r=0.665、0.702,P＜0.01).结论 明胶酶及其抑制因子在乳腺癌的侵袭转移中发挥了重要作用,两者表达比值可作为一个提示肿瘤侵袭转移的重要潜在标志.
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乳腺癌中Twist的表达及其与明胶酶关系的研究
目的 研究Twist和明胶酶(MMP-2和MMP-9)蛋白在乳腺癌组织中的表达及其相互关系.方法 建立组织芯片平台,应用免疫组化SP法检测159例乳腺癌组织Twist、MMP-2和MMP-9蛋白的表达情况.结果 乳腺癌中Twist的高表达率为73.8%,MMP-2和MMP-9阳性率分别为96.9%和95.0%; Twist的表达与乳腺癌腋淋巴结受累、TNM分期均呈正相关(P<0.01);Twist高表达患者总生存期和无复发生存期显著低于低表达患者(P<0.01,P<0.05);MMP-2、MMP-9蛋白表达与Twist表达均呈正相关(P<0.01).结论 乳腺癌中Twist表达与肿瘤侵袭转移、患者预后有密切关系,Twist可能在一定水平上调控明胶酶表达.
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原发性高血压患者血浆中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白和血清胱抑素的变化及临床意义
目的：检测原发性高血压（Essential hypertension，EH）患者血浆中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白（neutrophil gelatinase －associated lipocalin，NGAL）和血清胱抑素 C（CysC）的浓度并探讨其临床意义。方法选取92例 EH 患者为 EH 组，另选取88例健康体检者作为健康对照组。对所有入选对象分别检测血浆 NGAL 和血清 CysC 的浓度及各项生化指标，各组间进行比较。结果EH 组血浆 NGAL 浓度为（149．22±11．52）μg／L，血清 CysC 的浓度为（0．92±0．03）mmol／L；健康对照组血浆 NGAL 浓度为（101．4±7.71）μg／L，血清 CysC 的浓度为（0．71±0．02）mmol／L。EH 组血浆 NGAL 浓度和血清 CysC 浓度均明显高于对照组（F ＝27．491，P ＜0．01；F ＝24．646，P ＜0．01）；且血浆 NGAL 浓度在 EH 1级、2级和3级间呈逐渐增高趋势。血浆NGAL 与血清 CysC 浓度呈正相关（r ＝0．48，P ＜0．01）。结论EH 患者血浆 NGAL 和血清 CysC 的水平明显升高，且与高血压的分级及由高血压引起的肾脏损伤程度密切相关，两者均可作为早期发现 EH 引起的肾功能损害的诊断指标。
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普罗布考对不稳定型心绞痛患者血清明胶酶的影响
目的:探讨普罗布考对不稳定型心绞痛(UAP)患者血清明胶酶的影响.方法:连续入选UAP患者80例,随机分为普罗布考治疗组(40例)和常规治疗组(40例).常规治疗组采用硝酸酯类、阿司匹林、β受体阻滞剂等常规药物治疗；普罗布考组在常规治疗基础上加用普罗布考口服,观察治疗前及治疗一个月后血清明胶酶水平.结果:与治疗前比较,普罗布考治疗组治疗后基质金属蛋白酶(MMP) -2[(54.04±6.54) ng/ml比(32.43±1.81) ng/ml]、MMP-9[(56.33±7.25) ng/ml比(34±1.45) ng/ml]水平均明显下降(P均＜0.01),且明显低于常规治疗组治疗后[ MMP-2:(37.21±2.86) ng/ml、MMP-9:(39.96±1.75)ng/ml],P＜0.05.结论:普罗布考能促进不稳定型心绞痛患者血清明胶酶水平的下降,起到稳定粥样斑块的作用.
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姜黄素对不稳定型心绞痛患者血清明胶酶水平的影响
目的:探讨姜黄素对不稳定型心绞痛患者血清明胶酶水平的影响.方法:选择2010年1月至2010年9月住院的不稳定型心绞痛患者共80例,随机分为常规治疗对照组(n=40)和姜黄素治疗组(n=40),分别测定两组治疗前及治疗30 d后血清明胶酶 [包括基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和MMP-9]的水平.结果:与治疗前比较,姜黄素治疗组治疗后血清明胶酶水平明显下降[MMP-2:(52.64±6.77)ng/ml:(32.65±1.67)ng/ml,MMP-9:(56.75±7.37)NG/ML:(35±1.88)NG/ML],P<0.01.姜黄素治疗组治疗后血清明胶酶水平明显低于常规治疗对照组治疗后[MMP-2:(32.65±1.67)ng/ml:(37.78±2.76)ng/ml,MMP-9:(35±1.88)ng/ml:(40.23±1.95)ng/ml],P<0.05.结论:姜黄素能降低不稳定型心绞痛患者血清明胶酶水平,起到稳定粥样斑块的作用.
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丹红注射液对急性心肌梗死患者心功能和基质金属蛋白酶的影响
目的：探讨丹红注射液对急性心肌梗死（ AMI）患者心功能和基质金属蛋白酶（ MMPs）的影响。方法选择AMI患者117例，随机分为治疗组58例、对照组59例，对照组给予常规治疗，治疗组在常规治疗基础上静滴丹红注射液。检测两组治疗前及治疗后3、7、14 d的血清MMP-2、MMP-9，1个月时检测其左室射血分数（LVEF），观察心血管不良事件发生情况。结果与对照组比较，治疗2周后治疗组血清MMP-2、MMP-9降低，LVEF升高（ P均＜0．05），两组心血管不良事件发生率比较无统计学差异（P＞0．05）。结论丹红注射液能改善AMI患者的心功能，降低其血清MMPs水平，抑制AMI后的心肌重构。
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慢性阻塞性肺疾病急性加重期血清MMP-9、TIMP-1变化的临床意义
目的 探讨慢性阻塞性肺疾病(COPD)急性加重期血清基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)变化的临床意义.方法 选取COPD急性加重期患者55例(COPD组)、查体健康者20例(对照组),根据COPD组肺功能及病情程度分为轻度组l5例、中度组22例、重度组18例.采用酶联免疫吸附法检测各组血清MMP-9及TIMP-1；行肺功能通气检查,记录第1秒钟用力呼吸容积(FEV1)/用力肺活量(FVC)及FEV,占预计值的百分比(FEV1％).分析COPD组血清MMP-9、TIMP-1水平与病情严重程度的相关性.结果 COPD组血清MMP-9、TIMP-1明显高于对照组,且随病情加重逐渐升高(P＜0.01或＜0.05)；直线相关分析显示,COPD组血清MMP-9、TIMP-1水平与FEV1％呈负相关(r分别为-0.783、-0.776,p均＜0.01).结论 血清MMP-9、TIMP-1水平与COPD病情程度相关,病情越重,MMP-9、TIMP-1越高,且与FEV1％呈负相关；提示血清MMP-9、TIMP-1变化可作为判定COPD病情严重程度的指标之一.
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VEGF-A对人肝癌细胞体外形成血管生成拟态能力的影响
目的 探讨血管内皮生长因子(VEGF)对人肝癌细胞体外形成血管生成拟态(VM)能力的影响.方法 采用不同浓度的VEGF-A诱导人肝癌PLC细胞,分别用划痕实验、明胶酶谱法分析不同浓度VEGF-A对PLC细胞迁移性和侵袭性的影响；三维培养观察VEGF-A对PLC细胞形成VM能力的影响；Western blot法检测VEGF-A处理后的血管内皮钙黏附素( VE-cadherin)表达.结果 VEGF-A呈剂量依赖性增强肝癌PLC细胞的迁移率和侵袭相关蛋白MMP-9的活性,促进管道样结构形成及VE-cadherin表达(P均＜0.05).VEGF-A水平与管道数量呈正相关(r =0.929,P＜0.05).结论 VEGF-A可增强肝癌PLC细胞的迁移和侵袭能力,促进其VM形成,使肿瘤组织血供丰富,促进肿瘤浸润和转移.
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大剂量阿托伐他汀对急性脑梗死患者血清炎性因子的影响
目的 探讨大剂量阿托伐他汀对急性脑梗死(ACI)患者血清炎性因子的影响.方法 根据颈动脉超声结果,将136例ACI患者分为颈动脉斑块易损及斑块稳定各68例,两者均随机抽取34例分别给予小剂量(小剂量组)和大剂量(大剂量组)阿托伐他汀治疗.治疗前、治疗后2周检测患者的血脂、血清高敏-C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素-17(IL-17)及基质金属蛋白酶-9(MMP-9).结果 治疗后,两组LDL-C、TG、TC、hs-CRP、IL-17和MMP-9均下降,大剂量组均低于小剂量组(P＜0.05或＜0.01).结论 大剂量阿托伐他汀能迅速降低ACI患者的血清炎性因子,具有更强的抗炎作用,可提高易损斑块的稳定性.
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冠心病并慢性心衰患者血浆ADAMTs-1、MMPs变化及其临床意义
目的 探讨冠心病(CHD)并慢性心衰(CHF)患者血浆含TSP结构的去整合素金属蛋白酶1(ADAMTs-1)、基质金属蛋白酶(MMPs)变化的临床意义.方法 选取经冠脉造影确诊的CHD患者89例,其中并CHF 68例(CHF组),NYHA心功能分级Ⅱ～Ⅳ级;心功能正常21例(对照组).采用ELISA法检测其血浆N末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、ADAMTS-1、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9;行心脏彩超检查,测定其左室舒张末内径(LVEDd)和左室射血分数(LVEF);SYNTAX积分法评价两组冠脉病变程度.分析ADAMTs-1、MMP-2、MMP-9与NT-proBNP、LVEDd、LVEF和SYNTAX积分的相关性.结果 CHF组NT-proBNP、MMP-2、MMP-9明显高于对照组(P均＜0.05),且随心衰程度加重呈递增趋势(P＜0.05);其MMP-2与NT-proBNP、LVEDd、LVEF有良好的相关性,MMP-9与NT-proBNP、LVEDd、LVEF有良好的相关性(P均＜0.01).CHF组ADAMTs-1无明显升高(P＞0.05),但其与SYNTAX积分呈正相关(P＜0.01).结论 血浆MMP-2、MMP-9可能参与CHD并CHF的心室重构过程,检测CHD并CHF患者的MMP-2、MMP-9有助于其诊断和心衰程度评估;ADAMTs-1可反映CHD患者的冠脉病变程度.
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中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白与肾脏疾病
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase-associated lipocalin NGAL)是一种脂质运载蛋白,自从1993年被Kjeldsen等在中性粒细胞中发现以来,人们对NGAL的研究和认识逐步深入,已知NGAL与感染、炎症、肿瘤、肾脏疾病等都有着密切的联系.近年来的研究发现NGAL可作为肾脏损伤的早期监测生物学指标,并在肾脏疾病发展过程中发挥肾脏保护作用.本文就近年来NGAL在肾脏疾病中的研究进展作一综述.
