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体外培养大鼠肺泡巨噬细胞周期性牵张模型的建立及其炎性介质的变化
目的 建立体外培养大鼠肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)周期性牵张模型,观察有关炎性介质基因和蛋白表达的变化.方法 通过Flexercell 4000TTM应力加载系统对大鼠AM施加30%牵张应变,用RT-PCR法检测炎性介质mRNA的表达;用ELISA法检测炎性介质的分泌水平.结果AM细胞受30%牵张应变作用后,巨噬细胞炎性蛋白2(MIP-2)基因表达和蛋白分泌水平均显著增加(P>005),而肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6的mRNA表达和蛋白分泌水平与对照组无差异(P>005).结论 本牵张模型能够反映呼吸机相关性肺损伤(VILI)后炎性介质水平的变化,是研究VILI的理想模型.
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压力和容量控制通气呼吸力学和相关细胞因子的关系
目的 研究压力控制通气(PCV)与容量控制通气(VCV)时呼吸力学和血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及肺表面活性物质蛋白A(SP-A)的关系,进而明确哪种通气模式可以较好的减轻呼吸机相关性肺损伤(VILI). 方法 20例需进行机械通气的呼吸衰竭患者随机分成A、B两组,A组先进行PCV 12 h后,再进行VCV 12 h.B组与此相反.实验过程中记录心率、血压、呼吸力学指标,分别在通气12 h、24 h查动脉血气,抽取静脉血测量SP-A及TNF-α浓度. 结果 A组氧合指数(235.80±31.39)mmHg相对好于B组(199.20±24.91)mmHg,但差异无统计学意义(P＞0.05).A组气道峰压(PIP)(27.90±1.35)cmH2O较B组(33.80±1.48)cmH2O有降低趋势(P＜0.05),A组肺顺应性(23.90±8.45)ml/cmH2O较B组(18.39±5.43)ml/cmH2O好(P＜0.05).与B组相比,A组血清中的SP-A(25.25±0.965)μg/ml及TNF-α(0.546±0.063)μg/ml明显偏低(P＜0.05).PIP与血清中SP-A(r=0.386,P＜0.05)、TNF-α(r=0.404,P＜0.05)之间呈正相关.血清中SP-A与肺顺应性(r=-0.339,P＜0.05)、氧合指数(r=-0.393,P＜0.05)呈负相关. 结论 与B组相比,A组降低了PIP、血清中的SP-A及TNF-α的浓度,提示可能降低肺损伤的发生.PIP可能在VILI中起着一定的作用,血清中SP-A浓度的水平,可以作为反映肺损伤程度的生化指标.
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免疫低下儿童合并急性呼吸窘迫综合征的预后
目的 探讨免疫功能低下对儿童急性呼吸窘迫综合征(PARDS)预后的影响.方法 本研究为回顾性分析,时间段共纳入56例PARDS患儿,其中免疫功能低下组20例.通过病案查询系统收集患者的临床数据,使用单因素及多因素分析方法研究免疫功能低下患儿预后.结果 免疫功能低下患儿相对于对照组,有着较高的年龄及体质量(P=0.003及P＜0.01);较低的外周血白细胞、中性粒细胞及血小板水平(P=0.060,P=0.006及P=0.023);较少使用高频振荡机械通气(HFOV)(P=0.015)以及较高的PICU住院病死率(P=0.003).危险因素分析提示非生存组中免疫功能低下比例及呼吸机相关性肺损伤的发生率均高于生存组(P=0.003;P=0.046);多因素Logistic回归分析进一步明确免疫功能低下与PARDS患者结局相关(OR=6.986,95％CI:1.812～26.930,P=0.005).生存曲线亦表明免疫功能低下患儿的28 d生存率较对照组低(P=0.022).结论 免疫功能低下合并PARDS儿童PICU住院病死率高于免疫功能正常者,是PARDS儿童预后不良的主要危险因素.
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动态通气参数对急性呼吸窘迫综合征犬肺损伤的作用机制
目的 探讨机械通气动态通气参数对ARDS犬肺内肺炎症介质的影响及其作用途径.方法 取36条健康杂种犬,采用气管内盐酸吸入法建立ARDS模型,随机(随机数字法)分为对照组,ARDS模型组及实验犬组,实验犬组随机分成A,B,c,D四组,每组6条.A组:小潮气量(6 mL/kg),低吸气流速[6mL/kg·s)],高通气频率(30次/min);B组:大潮气量(20mL/kg),高吸气流速[20mL/(kg·s)],高通气频率(30次/min);C组:大潮气量(20 mL/kg),高吸气流速[17 mL/(kg·s)],低通气频率(15次/min);D组:大潮气量(20 mL/kg),低吸气流速[10 mL/(kg·s)],低通气频率(15次/min).机械通气4 h后处死动物,留取肺组织标本行免疫组化、Western blotting检测TNF-α,IL-8,p38 MAPK蛋白的变化,RT-PCR测定TNF-α,IL-8 mRNA的表达,流式细胞仪检测NF-κB活性.结果 B组IL-8蛋白表达明显较A,D组高,c组IL-8蛋白表达较B组有下降趋势,但B,C组之间差异无统计学意义;B组TNF-α的灰度比值明显较其他组高(P<0.01),但与C组比较差异无统计学意义(P>0.05);B组p38 MAPK表达明显较A,D组高(P<0.01);A,D组之间的p38 NAPK表达差异无统计学意义(P>0.05).B组NF-κB p65(33.56±2.85)%表达较A(10.35±0.6)%,D(7.11±0.47)%两组差异有统计学意义,B组与C组(30.87±1.16)%之间差异无统计学意义.结论 在相同的大潮气量基础上,高吸气流速和高通气频率可以激活肺组织p38 MAPK及NF-κB通道,炎症介质的释放增加,导致呼吸机相关性肺损伤,小潮气量机械通气可减轻炎症反应.
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细胞力信号转导与呼吸机相关性肺损伤
研究显示,呼吸机相关性肺损伤(ventilator-induced lung -injury,VILI)的机制之一是生物伤(biotrauma),即细胞因子介导的炎症反应[1,2].
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动态通气参数对急性呼吸窘迫综合征犬肺外炎症反应和肺外脏器功能的影响
目的 观察机械通气动态通气参数对急性呼吸窘迫综合征(ARDS)犬肺外炎症介质水平及肺外脏器功能的影响.方法 36条健康杂种犬,按照随机数字表法分为正常对照组(N组)、ARDS模型组(M组)及机械通气A-D组6组.采用气管内盐酸吸入法建立ARDS模型,按下述方案行机械通气.A组(LVLYHR):小潮气量、低吸气流速、高通气频率;B组(HVHFHR):大潮气量、高吸气流速、高通气频率;C组(HVHFLR):大潮气量、高吸气流速、低通气频率;D组(HVIYLR):大潮气量、低吸气流速、低通气频率.分组机械通气后4 h后处死动物,留取血清用放射性免疫吸附法行IL-8和TNF-α检测;留取肝肾组织行病理学检查.数据处理运用方差分析,以P<0.05为差异具有统计学意义.结果 B组、C组血中IL-8和TNF-α含量显著高于M组、A组、D组(P<0.05),A组、D组和M组差异无统计学意义(P>0.05).N组与其他相比差异具有统计学意义(P<0.05).B组肝肾组织病理学改变为严重,C组较B组稍有减轻.A组和D组的病理学改变较B、C组明显减轻,A组和M组改变接近.结论 大潮气量、高吸气流速、高通气频率机械通气可以使血清炎症介质水平升高,加重肺外器官的炎症反应;降低通气频率及吸气流速,对防治多器官功能衰竭有重要意义.
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小儿呼吸机相关肺炎相关因素分析
目的 探讨小儿呼吸机相关肺炎(VAP)危险因素.方法 选取本院PICU及NICU机械通气患儿为研究对象,回顾性分析VAP发生的相关因素.结果 278例入选研究病例发生VAP108例,VAP发牛率38.8%,其中新牛儿VAP发牛率44.9%.患儿年龄、白蛋白浓度、抗牛素使用时间、抗酸剂使用、静脉丙球蛋白、激素、鼻饲、体位、重复气管插管以及机械通气参数等因素均与VAP发生有关.病原学以G菌为主.结论 VAP发生与多种因素有关,呼吸机相关性肺损伤(VILI)在VAP发生中起一定作用.
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高频振荡通气在成人急性呼吸窘迫综合征中的应用进展
随着对急性呼吸窘迫综合征机械通气过程中呼吸机相关性肺损伤的理解加深，高频振荡通气被认为是一种理想的通气支持策略。高频振荡通气仍有多点不足，在成人急性呼吸窘迫综合征的临床应用中仍存在较大争议，尤其是近两项大型多中心随机对照研究的结果令人失望。关于高频振荡通气机制、技术、通气策略，监测体系需要进一步探索。
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不同吸气流速模式对辅助/控制通气患者呼吸力学的影响
目的 探讨预防呼吸机相关性肺损伤的新方法.方法选取180例辅助/控制通气(ACV)患者,随机分为3组,每组各60例.A组采用容量控制ACV,吸气流速波形先采用恒速波,记录呼吸力学参数后改为减速波;B组采用恒速波容量控制ACV性肺疾;C组采用压力控制ACV;各组潮气量控制在8 ml/kg.记录各组机械通气开始、2、6、12及24 h时的气道峰压(Ppeak),气道平均压(Pmean),气道平台压(Pplat),动态顺应性(Cdyn)及呼吸总频率,并记录第1个24 h内发生人机对抗例数,机械通气时间及重症监护病房停留时间.结果 与恒速波比较,减速波容量控制及压力控制时,Ppeak明显下降(P<0.05),Pmean及Pplat轻度上升(P>0.05),但上升幅度小于Ppeak下降幅度.Cdyn以减速波及压力控制优于恒速波(P<0.01).结论 减速波容量控制及压力控制ACV更有利于预防呼吸机相关性肺损伤,更有利于维持人机协调.
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急性呼吸窘迫综合征的治疗进展
急性呼吸窘迫综合征(ARDS)是重症监护病房中治疗的难题.虽然经过多年的基础和临床研究,ARDS患者的病死率仍高居不下.本文对ARDS近年来治疗方面的进展作一综述,为其临床治疗提供参考.
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急性呼吸窘迫综合征肺压力-容积曲线及其在通气设置中的应用
肺压力-容积曲线反映肺的机械力学特性,急性呼吸窘迫综合征时描记肺压力-容积曲线不仅可以监测肺机械力学受损情况,而且可以指导机械通气参数的设置,从而降低呼吸机相关性肺损伤发生的可能性.现就肺压力-容积曲线的各种描记方法、对其含义的新阐述以及利用肺压力-容积曲线来调整急性呼吸窘迫综合征通气参数等方面进行综述,为急性呼吸窘迫综合征的机械通气设置提供参考.目前文献提示应用肺压力-容积曲线的呼气支大曲率拐点来设置急性呼吸窘迫综合征通气时的呼气末正压可能更合理.尽管如此,如何便捷准确地描记、理解急性呼吸综合征时肺压力-容积曲线并指导机械通气参数的设置仍需依靠更进一步的实验、临床研究.
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机械通气对肺循环影响的研究进展
机械通气对心肺功能患者的治疗起重要作用，正压通气对于胸腔压力的改变必然对肺循环产生影响，从而对氧合及血流动力学产生变化。肺循环作为心肺相互作用的中心场所，是机械通气治疗过程中关注的重点。正压通气时呼吸运动方式的改变、平台压和呼气末正压的变化以及对肺泡毛细血管的损伤和神经－体液调节的影响均可导致肺循环的改变。临床上需根据患者心肺功能及病情变化选择呼吸模式及参数，以降低正压通气对心肺循环的负面影响。
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肺保护性通气策略治疗急性呼吸窘迫综合征的临床观察
目的:探讨肺保护性通气策略在治疗急性呼吸窘迫综合征(ARDS)的临床疗效.方法:50例ARDS病人采用肺保护性通气策略,即低潮气量(6～8 ml/kg),观察患者上机前后的氧合指数改善情况、血气分析及呼吸机肺损伤(VALI)的发生率等.结果:50例病人氧合指数有所改善,均有CO2潴留及pH值降低(即高碳酸血症)、VALI发生率降低.结论:肺保护性通气策略治疗ARDS能改善氧合,降低VALI的发生率.
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呼吸窘迫综合征呼吸机相关性肺损伤应用肺保护性通气策略的疗效分析
目的 探讨新生儿呼吸窘迫综合征(NRDS)呼吸机相关性肺损伤应用肺保护性通气策略的疗效.方法 选取右江民族医学院附属医院2010年6月～2012年6月收治的58例呼吸机相关性肺损伤(VILI)患儿,按照呼吸支持治疗方式分为观察组与对照组,每组各29例.观察组给予肺保护性通气策略支持治疗,对照组患儿采取传统机械通气策略进行治疗.对两组患儿观察指标进行比较分析.结果 观察组治疗总有效率为96.55％(28/29),对照组为75.86％ (22/29),两组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；在治疗7d后,观察组氧合指数、白细胞介素-8(IL-8)、白细胞介素-10(IL-10)以及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平分别是(264±25)mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa)、(74.3±40.6)、(142.2±14.9)、(170.4±98.8)pg/mL,均优于对照组(P＜0.05)；治疗前后两组患儿pH、静脉血氧分压均无差异(P＞0.05).结论 对NRDS呼吸机相关性肺损伤应用肺保护性通气策略疗效显著,值得临床推广应用.
关键词： 新生儿呼吸窘迫综合征 呼吸机相关性肺损伤 肺保护性通气策略 疗效分析 -
乌司他丁对机械通气相关性肺损伤模型兔肺组织中TNF-α的影响
目的：建立机械通气相关性肺损伤模型兔肺组织，观察TNF-α在机械通气相关性肺损伤模型兔肺组织中TNF-α的变化规律，探讨乌司他丁对呼吸机所致肺损伤（ventilator-induced lung injury， VILI）的治疗机制是否与抑制TNF-α的活化有关。方法：采用大潮气量通气建立呼吸机相关肺损伤兔模型，模型成立后30、60、120、180、240 min，抽取动脉血作血气分析，采用ELISA法检测血清肺组织中TNF-α的含量，采用HE染色观察肺组织病理变化，运用Real-time PCR、Western Blot检测肺组织中TNF-αRNA、蛋白的表达。结果：家兔在大潮气量机械通气后，随着时间的增加血清中、肺组织中TNF-α表达显著增加，而采呼吸机相关性肺损伤模型兔在使用乌司他丁干预后，动脉血中的PaO2较前有所回升，血清与肺组织中TNF-αmRNA与蛋白的表达同大潮气量组相比有明显著上升（P<0.05）。结论：乌司他丁对呼吸机相关性肺损伤有保护作用，其机制可能是通过下调TNF-α的表达，抑制炎症反应来实现的。
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肺泡巨噬细胞Toll样受体9-髓样分化因子88信号通路在呼吸机相关性肺损伤中的作用机制研究
目的 探讨肺泡巨噬细胞Toll样受体9(TLR9)-髓样分化因子88(MyD88)信号通路在呼吸机相关性肺损伤(VILI)中的作用.方法 清洁级SD大鼠30只,按随机数字表法将大鼠分为3组,每组10只.A组保留自主呼吸作为对照;B组给予正常潮气量(VT,7 mL/kg)机械通气4h;C组给予大VT(40 mL/kg)机械通气4h.机械通气结束时,透射电镜下观察大鼠Ⅱ型肺泡上皮细胞(AECⅡ)超微结构改变;测定肺组织湿/干质量(W/D)比值以及支气管肺泡灌洗液(BALF)中总蛋白、白细胞介素(IL-6、IL-1β)的浓度;用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测肺泡巨噬细胞TLR9、MyD88、核转录因子-κB(NF-κB)的蛋白及其mRNA表达.结果 A、B组大鼠AECⅡ细胞超微结构基本正常;C组AECⅡ胞质内板层小体、细胞膜、细胞核中的染色质及微绒毛等均有不同程度的损伤性改变.C组较A组、B组肺组织W/D比值(5.54±0.17比4.58±0.17、4.69±0.16),BALF中总蛋白(g/L:6.33±0.61比0.45±0.05、0.47±0.04)、IL-6(μg/L:1.989±0.103比1.033±0.061、1.010±0.069)、IL-1β(ng/L:2.79±0.25比1.05±0.15、1.23±0.22),肺泡巨噬细胞TLR9、MyD88、NF-κB的蛋白表达[TLR9(A值):0.770±0.042比0.300±0.027、0.310±0.037,MyD88(A值):0.950±0.091比0.560±0.082、0.580±0.084,NF-κB(A值):1.020±0.076比0.740±0.052、0.700±0.076]均明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).B组肺泡巨噬细胞TLR9、MyD88、NF-κB的mRNA表达分别是A组的(1.13±0.32)倍、(1.18±0.33)倍、(1.11±0.22)倍,差异均无统计学意义(均P＞0.05);C组肺泡巨噬细胞TLR9、MyD88、NF-κB的mRNA表达分别是A组的(8.66±0.69)倍、(6.41±0.53)倍、(5.29±0.71)倍,差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 肺泡巨噬细胞TLR9-MyD88信号通路参与并介导了机械通气所致的肺损伤.
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呼吸机相关性肺损伤早期生物伤的发病机制探讨
目的 分析呼吸机相关性肺损伤(VILI)中生物伤的早期发病机制.方法 8周龄雄性SD大鼠24只,按随机数字表法分为假手术组(S组)、常规机械通气组(L组)和大潮气量(VT)机械通气组(H组),每组8只.麻醉大鼠后均行气管切开术,S组大鼠不进行机械通气、自主呼吸空气;L组和H组大鼠其他呼吸机参数均一致,吸入氧浓度(FiO2)为0.21,L组VT 7 mL/kg,H组VT 28 mL/kg.4 h后处死大鼠,取肺组织测定湿/干重(W/D)比值,苏木素-伊红(HE)染色后评估肺损伤程度,用原位末端缺刻标记法(TUNEL)染色后观察肺组织细胞凋亡情况,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)测定肺组织中细胞膜半通道蛋白Pannexin-1的表达水平;提取支气管肺泡灌洗液(BALF),测定乳酸脱氢酶(LDH)、异前列醇和三磷酸腺苷(ATP)水平,并进行白细胞计数,用荧光染料Yo-pro-1/碘化丙啶(PI)双染后观察早期细胞凋亡情况.结果 S组与L组大鼠肺组织损伤情况差异无统计学意义.与S组和L组相比,H组大鼠肺组织出现明显的病理学损伤,表现为肺泡破裂、炎性细胞浸润、间质水肿、气道上皮脱落较明显,肺W/D比值明显增加(5.1±0.2比4.4±0.2、4.3±0.4,均P<0.01),病理学评分明显升高〔4.00(4.00,8.00)比1.00(0,4.00)、2.00(0,4.75),均P<0.01〕,BALF中白细胞数明显增加(×106/L:2.97±0.46比1.03±0.26、0.79±0.19,均P<0.01),LDH水平明显升高(U/L:148.6±38.2比34.4±13.5、78.6±13.9,均P<0.01),且肺组织中Pannexin-1蛋白表达水平明显升高(Pannexin-1/GAPDH:0.89±0.21比0.48±0.25、0.61±0.17,均P<0.01),BALF中ATP水平明显升高(nmol/L:456.84±148.72比19.23±13.34、113.26±57.90,均P<0.01);而3组间肺组织凋亡细胞数及BALF中细胞凋亡率、异前列醇水平差异无统计学意义〔肺组织细胞凋亡数(个/HP):4.00(3.00,5.00)比5.00(4.00,6.00)、4.00(3.25,6.00),BALF中细胞凋亡率:(0.57±0.20)％比(0.42±0.16)％、(0.58±0.19)％,BALF中异前列醇(μg/L):3.85±0.46比3.83±0.60、3.59±0.69,均P>0.05〕.结论 VILI中生物伤早期发病机制与膜通道感受压力应激开放并释放炎性介质有关,而凋亡、脂质过氧化反应不是首要致病因素.
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线粒体DNA介导TLR9-MyD88信号通路活化在大鼠VILI中的作用机制
目的 探讨线粒体DNA(mtDNA)介导的Toll样受体9(TLR9)-髓样分化因子88(MyD88)信号通路在呼吸机相关性肺损伤(VILI)发生中的作用机制.方法 将30只健康雄性成年SD大鼠按随机数字表法分为自主呼吸组、正常潮气量(VT)组(VT为8 mL/kg)和大VT组(VT为40 mL/kg),每组10只.正常VT组和大VT组大鼠分别进行机械通气,呼气末正压(PEEP)为0,吸入氧浓度(FiO2)为0.50.通气4 h后采集心脏血并处死大鼠,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清白细胞介素(IL-6、IL-1β)和肿瘤坏死因子-α (TNF-α)含量;收集支气管肺泡灌洗液(BALF),采用BCA法测定总蛋白含量.取肺组织,测定肺湿/干重(W/D)比值;苏木素-伊红(HE)染色后,光镜下观察肺组织病理学改变;采用免疫组化法检测肺组织中mtDNA编码的细胞色素C氧化酶Ⅳ(COX-Ⅳ)、TLR9、MyD88、核转录因子-κB p65(NF-κB p65)的蛋白表达.结果 光镜下显示,自主呼吸组和正常VT组大鼠肺组织结构基本正常,而大VT组肺组织则可见明显炎性改变;大VT组病理学评分明显高于自主呼吸组和正常VT组(分:3.50±0.41比0.25±0.09、0.33±0.10,均P<0.05).与自主呼吸组和正常VT组比较,大VT组大鼠肺W/D比值明显升高(6.42±0.41比4.14±0.04、4.28±0.11,均P<0.05), BALF总蛋白含量明显升高(g/L:0.43±0.04比0.13±0.01、0.14±0.01,均P<0.05),血清IL-6、IL-1β和TNF-α含量也明显升高〔IL-6(μg/L):1.15±0.17比0.42±0.10、0.46±0.04,IL-1β(μg/L):6.73±0.38比2.08±0.90、2.19±0.18,TNF-α(μg/L):4.10±0.11比1.12±0.10、1.14±0.04,均P<0.05〕.免疫组化结果显示,大VT组大鼠肺组织COX-Ⅳ、TLR9、MyD88、NF-κB p65蛋白均呈棕褐色强阳性表达,而正常VT组和自主呼吸组则呈不着色的阴性未表达或浅黄色的弱阳性低表达;定量分析显示,大VT组COX-Ⅳ、TLR9、MyD88、NF-κB p65蛋白的免疫组化染色评分(IRS)均明显高于自主呼吸组和正常VT组〔COX-Ⅳ IRS(分):8.80±2.17比0.80±0.45、1.40±0.55,TLR9 IRS(分):8.40±2.51比1.00±0.71、1.20±0.84,MyD88 IRS(分):9.40±1.52比1.40±0.55、1.60±0.55,NF-κB p65 IRS(分):9.80±2.05比1.00±0.71、1.20±0.84,均P<0.05〕.正常VT组与自主呼吸组所有检测指标差异均无统计学意义(均P>0.05).结论 mtDNA能激活TLR9-MyD88信号转导通路,使其下游的NF-κB p65表达上调,介导炎性因子释放,诱导肺组织发生急性炎症损伤,终引发VILI.
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VILI小鼠血清内皮细胞微粒变化
目的 观察呼吸机相关性肺损伤(VILI)小鼠血清内皮细胞微粒(EMPs)的变化,并探讨其在VILI中的意义.方法 将48只SPF级雄性野生C57BL/6J小鼠按随机数字表法分为两组,每组24只:机械通气(MV)组小鼠于气管插管后进行30 mL/kg大潮气量(VT)MV 4 h;自主呼吸组小鼠气管插管后进行自主呼吸4 h.两组分别取12只小鼠心尖血,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)测定血清白细胞介素(IL-1β、IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,采用流式细胞仪检测血清EMPs水平;EMPs与IL-1β、IL-6、TNF-α的关系采用线性回归分析.另取12只小鼠肺组织,测定肺湿/干重(W/D)比值;苏木素-伊红(HE)染色后,光镜下观察肺组织形态学改变;醋酸铀-柠檬酸铅双染后,透射电镜下观察肺组织超微结构改变.结果 与自主呼吸组比较,MV组小鼠肺W/D比值明显升高(5.47±0.14比4.34±0.11),血清IL-1β、IL-6、TNF-α及EMPs水平亦明显升高〔IL-1β(ng/L):42.4±4.4比7.7±3.6,IL-6(ng/L):1239.5±66.3比21.7±4.6,TNF-α(ng/L):237.6±25.8比37.1±19.1,EMPs(个/μL):28.6±1.8比5.9±1.8,均P<0.01〕.相关分析显示,血清EMPs与IL-1β、IL-6、TNF-α均呈线性正相关(r值分别为0.968、0.932、0.945,均P=0.000);拟合线性回归分析显示, EMPs每增加1个/μL,IL-1β升高2.4 ng/L〔95%可信区间(95%CI)=1.9~2.8,P<0.001〕,IL-6升高34.5 ng/L (95%CI=25.1~44.0,P<0.001),TNF-α升高13.6 ng/L(95%CI=10.3~16.9,P<0.001).光镜下显示:自主呼吸组小鼠肺泡结构完整;而MV组肺泡萎缩或消失,肺实变,部分肺泡融合,肺泡隔增粗.电镜下显示:自主呼吸组小鼠肺泡壁完整、无渗出;而MV组肺泡壁水肿、破裂,Ⅱ型肺泡上皮细胞空泡化.结论 给予小鼠30 mL/kg VT通气4 h可导致VILI伴EMPs增加,提示EMPs水平升高与VILI的发生密切相关,可能成为VILI的标志物.
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通过抑制小窝蛋白磷酸化调控Nrf2信号通路 可以对呼吸机相关性肺损伤起保护作用
目的：探讨在体动物抑制小窝蛋白-1（Cav-1）磷酸化是否可有效调节核因子E2相关因子（Nrf2）信号通路及下游效应分子表达，以及是否对呼吸机相关性肺损伤（VILI）起保护作用。方法将90只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为9组，每组10只：假手术组（Sham）仅做气管切开而不通气；保护性通气（PV）1h、2h组；大潮气量（VT）通气（40mL/kg）1h、2h组；酪氨酸蛋白激酶抑制剂PP2或罗格列酮（Rsg）预处理+大VT通气1h、2h组（PP2或Rsg1h、2h组）。两个预处理组分别于通气前1h腹腔注射PP2（15mg/kg）或灌胃Rsg（5mg/kg）。制模后处死大鼠，收集支气管肺泡灌洗液（BALF），用伊文思蓝（EB）实验检测肺血管通透性；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测BALF中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转录激活因子蛋白1（AP-1）、核转录因子-κB（NF-κB）、白细胞介素-8（IL-8）水平。取肺组织，计算肺湿/干质量比值（W/D），光镜下观察肺组织病理学改变；用比色法测定髓过氧化物酶（MPO）活性；用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Nrf2mRNA表达；用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测磷酸化小窝蛋白-1酪氨酸残基14（pCav-1-Y14）、Cav-1、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、紧密连接蛋白闭合蛋白-5（claudin-5）蛋白表达及Nrf2在胞质和胞核中的蛋白表达；用免疫组化法检测PPARγ、claudin-5阳性表达。结果 Sham组和PV组肺组织无明显病理学改变，两组各指标均无差异。大VT组肺组织损伤严重，肺W/D比值、EB含量、MPO活性和BALF中TNF-α、AP-1、IL-8、NF-κB水平较Sham组及PV组明显升高，pCav-1-Y14、Cav-1表达均显著高于Sham组及PV组，PPARγ、claudin-5表达则显著低于Sham组及PV组，并呈时间依赖性；胞核和胞质Nrf2表达与Sham组和PV组无统计学差异。PP2或Rsg预处理后，肺W/D比值、EB含量、MPO活性和BALF中TNF-α、AP-1、IL-8、NF-κB水平均较大VT组明显降低；肺组织Nrf2mRNA表达明显增加；胞核内Nrf2蛋白表达较大VT组明显上调〔核内Nrf2蛋白（灰度值）：1h为0.61±0.06、0.56±0.06比0.31±0.02，2h为0.38±0.06、0.43±0.07比0.22±0.03，均P＜0.05〕，各组胞质内Nrf2蛋白表达无差异。PP2预处理组pCav-1-Y14表达明显低于大VT组（灰度值：1h为0.89±0.04比1.48±0.02，2h为0.86±0.02比1.31±0.01，均P＜0.05）；PP2或Rsg预处理组PPARγ、claudin-5的蛋白表达均明显高于大VT组〔PPARγ（灰度值）：1h为0.34±0.07、0.42±0.13比0.17±0.07，2h为0.38±0.09、0.33±0.07比0.16±0.03；claudin-5（灰度值）：1h为0.33±0.05、0.38±0.07比0.14±0.03，2h为0.30±0.06、0.31±0.04比0.17±0.04；均P＜0.05〕。结论抑制Cav-1-Y14磷酸化可增加Nrf2的核内表达及其效应分子PPARγ、claudin-5的表达，从而减轻肺组织炎症及降低毛细血管通透性。
