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通过抑制小窝蛋白磷酸化调控Nrf2信号通路 可以对呼吸机相关性肺损伤起保护作用
目的：探讨在体动物抑制小窝蛋白-1（Cav-1）磷酸化是否可有效调节核因子E2相关因子（Nrf2）信号通路及下游效应分子表达，以及是否对呼吸机相关性肺损伤（VILI）起保护作用。方法将90只健康雄性SD大鼠按随机数字表法分为9组，每组10只：假手术组（Sham）仅做气管切开而不通气；保护性通气（PV）1h、2h组；大潮气量（VT）通气（40mL/kg）1h、2h组；酪氨酸蛋白激酶抑制剂PP2或罗格列酮（Rsg）预处理+大VT通气1h、2h组（PP2或Rsg1h、2h组）。两个预处理组分别于通气前1h腹腔注射PP2（15mg/kg）或灌胃Rsg（5mg/kg）。制模后处死大鼠，收集支气管肺泡灌洗液（BALF），用伊文思蓝（EB）实验检测肺血管通透性；用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测BALF中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、转录激活因子蛋白1（AP-1）、核转录因子-κB（NF-κB）、白细胞介素-8（IL-8）水平。取肺组织，计算肺湿/干质量比值（W/D），光镜下观察肺组织病理学改变；用比色法测定髓过氧化物酶（MPO）活性；用反转录-聚合酶链反应（RT-PCR）检测Nrf2mRNA表达；用蛋白质免疫印迹试验（WesternBlot）检测磷酸化小窝蛋白-1酪氨酸残基14（pCav-1-Y14）、Cav-1、过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）、紧密连接蛋白闭合蛋白-5（claudin-5）蛋白表达及Nrf2在胞质和胞核中的蛋白表达；用免疫组化法检测PPARγ、claudin-5阳性表达。结果 Sham组和PV组肺组织无明显病理学改变，两组各指标均无差异。大VT组肺组织损伤严重，肺W/D比值、EB含量、MPO活性和BALF中TNF-α、AP-1、IL-8、NF-κB水平较Sham组及PV组明显升高，pCav-1-Y14、Cav-1表达均显著高于Sham组及PV组，PPARγ、claudin-5表达则显著低于Sham组及PV组，并呈时间依赖性；胞核和胞质Nrf2表达与Sham组和PV组无统计学差异。PP2或Rsg预处理后，肺W/D比值、EB含量、MPO活性和BALF中TNF-α、AP-1、IL-8、NF-κB水平均较大VT组明显降低；肺组织Nrf2mRNA表达明显增加；胞核内Nrf2蛋白表达较大VT组明显上调〔核内Nrf2蛋白（灰度值）：1h为0.61±0.06、0.56±0.06比0.31±0.02，2h为0.38±0.06、0.43±0.07比0.22±0.03，均P＜0.05〕，各组胞质内Nrf2蛋白表达无差异。PP2预处理组pCav-1-Y14表达明显低于大VT组（灰度值：1h为0.89±0.04比1.48±0.02，2h为0.86±0.02比1.31±0.01，均P＜0.05）；PP2或Rsg预处理组PPARγ、claudin-5的蛋白表达均明显高于大VT组〔PPARγ（灰度值）：1h为0.34±0.07、0.42±0.13比0.17±0.07，2h为0.38±0.09、0.33±0.07比0.16±0.03；claudin-5（灰度值）：1h为0.33±0.05、0.38±0.07比0.14±0.03，2h为0.30±0.06、0.31±0.04比0.17±0.04；均P＜0.05〕。结论抑制Cav-1-Y14磷酸化可增加Nrf2的核内表达及其效应分子PPARγ、claudin-5的表达，从而减轻肺组织炎症及降低毛细血管通透性。
