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一个新的信号受体家族--Toll/IL-1R家族的研究进展
Toll受体初是在研究果蝇胚胎腹背侧体轴的形成中发现的,由于它与IL-1受体在结构、功能、信号转导通路上的诸多相似,人们将它们归入一个大的信号受体家族--Toll/IL-1R家族.许多研究均证实,除与胚胎发育有关外,这一信号受体家族的成员在机体对抗外来病原体的天然免疫中起到了重要的作用,尤其是人类Toll蛋白在介导内毒素对细胞损伤中的作用备受关注.
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RNA干扰TLR4信号通路对枯否细胞吞噬功能的影响
目的 探讨RNA干扰Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)信号通路对枯否细胞(Kupffer cells,KCs)吞噬功能的影响.方法 以RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞为研究对象,经QPCR验证得到优干扰RNA为Tlr4-mus-1567后,以正常细胞为对照组,Negative Control RNA 干扰为NC对照组,Tlr4-mus-1567 RNA干扰为实验组,倒置显微镜观察各组细胞吞噬酵母菌情况,并测定各组的吞噬细胞百分数和吞噬指数,组间进行比较.结果 实验组平均吞噬细胞百分数较正常对照组明显降低(17.67％±3.51％和32.00％±3.00％,P＜0.01),实验组平均吞噬指数较正常对照组明显降低(46.33％ ±7.51％和82.00％±6.08％,P＜0.01).结论 RNA干扰TLR4信号通路能降低KCs的吞噬功能.
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PPARγ激动剂对RSV感染的A549细胞TLR3、TNF-α表达的抑制作用
目的 探讨 A549细胞呼吸道合胞病毒(RSV)感染后Toll样受体3(TLR3)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α) mRNA和蛋白表达及PPARγ激动剂15-脱氧前列腺素J2(15d-PGJ2)和罗格列酮的干预作用.方法 建立RSV感染的细胞模型,将传代培养的细胞随机分成6组:15d-PGJ2干预组(A)、罗格列酮干预组(B)、RSV组(C)、PDTC组(D)、GW9662组(E)及对照组(F).各组在培养12、24和48 h后收获上清液和细胞,实时荧光RT-PCR检测TLR3和TNF-α mRNA表达,Western Blot检测TLR3蛋白表达,ELISA法检测上清中TNF-α蛋白水平.结果 与F组相比,各时间点C组TLR3和TNF-α mRNA及蛋白表达均明显升高(均P＜0.01);与C组相比,A组、B组和D组TLR3和TNF-α mRNA及蛋白表达均明显降低(均P＜0.01).15d-PGJ2和罗格列酮对TLR3和TNF-α mRNA和蛋白表达的抑制作用在12 h明显;同一时间点A组和B组TLR3和TNF-α mRNA和蛋白的表达量均呈剂量依赖性下降.结论 RSV感染后TLR3和TNF-α mRNA及蛋白表达升高;罗格列酮和15d-PGJ2能以剂量依赖性方式抑制TLR3和TNF-α mRNA和蛋白表达.
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糖尿病心肌病外周血单核细胞Toll样受体4、肿瘤坏死因子-α的表达及其与心肌灌注的相关性
目的 探讨糖尿病心肌病患者外周血单核细胞 Toll 样受体4(TLR4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达及其与心肌灌注的相关性,初步探讨 TLR4、TNF-α在糖尿病心肌病心肌灌注中的作用,为临床诊治糖尿病心肌病提供新的思路.方法 2型糖尿病(T2-DM)组37例(其中糖尿病心肌病组17例、单纯T2-DM组20例)健康对照组20例.采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量RT-PCR检测外周血单核细胞(PBMC)TLR4及TNF-α的mRNA表达.流式细胞仪及ELISA法分别检测单核细胞分泌TLR4、TNF-α蛋白水平.进行心肌灌注单电子发射计算机体层扫描(SPECT)图像可视化分析.结果 糖尿病心肌病组单核细胞TLR4和TNF-α的 mRNA及蛋白表达均显著高于单纯T2-DM组,单纯T2-DM组高于对照组(P均<0.05).糖尿病心肌病组心肌灌注总负荷评分(SSS评分) 和总静息评分(SRS评分)显著高于单纯T2-DM组,单纯T2-DM组高于对照组(P均<0.01).外周血单核细胞TLR4和TNF-α表达与SSS评分水平呈正相关(r=0.75,P<0.05;r=0.931,P<0.005),与SRS评分水平也呈正相关(r=0.78,P<0.05;r=0.89,P<0.005).DCM组SSS评分、SRS评分与可溶性血管细胞黏附分子呈正相关(r=0.728,P<0.005;r=0.738,P<0.005),与B型利钠肽、左心室射血分数、二尖瓣口舒张早期峰值速度/舒张晚期峰值速度、糖化血红蛋白、空腹血糖、空腹胰岛素、低密度脂蛋白胆固醇无相关性(P均>0.05).结论 研究提示TLR4、TNF-α可能在糖尿病心肌病心肌灌注中具有炎症损伤的作用,其机制可能是通过上调 TLR4、TNF-α表达介导级联反应,从而促进内皮分泌可溶性血管细胞黏附分子-1引起心肌灌注的炎症损伤.
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TLR4、NF-κB 和AP-1在乳腺癌中的表达及其与临床病理特征的相关性研究
目的 探讨Toll 样受体4(TLR4)、核因子κB(NF-κB)和激活因子蛋白1(AP-1)在乳腺癌组织中的表达及其与临床病理参数的关系.方法 采用免疫组织化学方法 检测106 例乳腺癌组织中TLR4、NF-κB 和AP-1 的表达.分析三者与乳腺癌临床病理因素的关系,以及TLR4与NF-κB、AP-1 的相关性.结果 随着乳腺癌患者T 分期、N 分期、M 分期和临床分期的增加,乳腺癌组织TLR4、NF-κB 及AP-1 的表达均升高(P 均< 0.05).随着乳腺癌组织分化程度的降低,NF-κB 的表达升高(P < 0.05).乳腺癌组织中TLR4 和AP-1 的表达呈正相关(P < 0.05).结论 乳腺癌组织TLR4 高表达,激活AP-1 信号通路,促进癌细胞的增殖、浸润及转移,进而影响患者的预后.
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TLR4基因多态性及细胞因子与牙周炎、COPD的相关性分析
目的 研究TLR4 rs1927907、rs11536889基因多态性与慢性牙周炎及COPD下游炎性通路中细胞因子的关系.方法 选择慢性牙周炎患者81例,COPD患者27例,慢性牙周炎伴COPD患者76例,健康对照者26例.采集所有受试对象的静脉血,分离血细胞与血清.提取白细胞基因组DNA,采用TaqMan MGB探针法对TLR4 rs1927907、rs11536889进行基因型检测.采用酶联免疫吸附法检测血清中IL-1β、IL-6、TNF-α 的水平.结果 牙周炎组,rs11536889 GG基因型患者血清中的TNF-α 水平显著低于GC+CC基因型患者(P=0.038).慢性牙周炎伴COPD组中,rs11536889 GG基因型患者血清中的IL-6水平显著高于GC+CC基因型患者(P=0.006).其余2组rs1927907、rs11536889基因型与血清中IL-1β、IL-6、TNF-α 水平无显著差异(P>0.05).结论 在慢性牙周炎组和慢性牙周炎伴COPD组中,TLR4 rs11536889基因多态性与TNF-α、IL-6的表达有关,可能增强了机体介导的炎症反应.
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连续性血液净化治疗对感染性休克猪TOLL样受体4表达的影响
目的:探讨了连续性血液净化治疗对感染性休克猪TOLL 样受体4表达水平的影响.方法:6 只幼猪分别静脉注射Lps 100 μg/kg,构建感染性休克模型.构建成功后4只感染性休克猪分别给予连续性血液净化治疗.采用流式细胞术检测治疗前和治疗后2、4、8h 的感染性休克猪模型外周血单核细胞TLR4 的表达水平,采用免疫组化检测治疗前和治疗后8h 感染性休克猪模型肾组织中TLR4 的表达水平.结果:与治疗前比较,治疗后幼猪外周血单核细胞TLR4 的表达水平呈时间依赖性的下降,具有显著统计学意义(P<0.05).与治疗前相比较,治疗后8h 幼猪肾脏组织中TLR4 的表达水平显著性下调,具有统计学意义(P<0.05).结论:连续性血液净化治疗可改善免疫系统以及肾脏组织的功能,对重建机体免疫稳定具有重要作用.
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重症急性胰腺炎大鼠肝损伤HMGB1/TLR4mRNA的表达
目的 研究重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肝损伤中高迁移率族蛋白B1(HMGB1)和Toll 样受体(TLR)4 mRNA的表达.方法 采用十二指肠闭襻法制作大鼠SAP模型.50只动物分为假手术组(S组)、胰腺炎组(P组).P组于建模后6、12、24、48 h分批剖杀,S组于术后6 h剖杀.观察血清淀粉酶、CRP、ALT和AST及肝组织IL-6和TNF-α的变化,RT-PCR方法检测各组不同时点肝组织HMGBl mRNA 和TLR4 mRNA的表达.结果 与S组比较,P组血清淀粉酶、CRP、ALT、AST、肝组织IL-6和TNF-α浓度升高(P<0.05).与S组比较,P组大鼠6 h肝组织TLR4 mRNA表达开始增高,术后12 h肝组织TLR4 mRNA表达迅速达到峰值(P<0.05);同时,P组HMGB1 mRNA于12 h快速上升,24～48 h时一直保持上升趋势(P<0.05);结论 SAP大鼠肝组织内HMGB1和TLR4的基因表达上调;其表达增高可能在SAP肝损伤的发生、发展中起重要作用.
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Toll样受体4和转化生长因子-β1在子宫内膜癌中的临床表达
目的 检测Toll样受体4(TLR4)和转化生长因子-β1(TGF-β1)在子宫内膜癌中的表达及意义.②方法 应用免疫组化法检测正常增生期子宫内膜组织标本30例、不典型增生子宫内膜组织标本30例和子宫内膜癌组织标本60例中TLR4和TGF-β1的表达情况.③结果 TLR4和TGF-β1在子宫内膜癌中的表达显著高于正常增生期子宫内膜组织和不典型增生子宫内膜组织,差异均有统计学意义(P<0.05);TLR4在子宫内膜癌中的表达与肌层浸润、淋巴结转移有关(P<0.05);TGF-β1在子宫内膜癌中的表达与病理分期、肌层浸润和淋巴结转移相关(P<0.05).TLR4和TGF-β1在子宫内膜癌中的表达呈正相关(P<0.05).④结论 TLR4和TGF-β1的阳性表达与子宫内膜癌的发生、发展及恶性程度有一定的关系.
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长春瑞滨上调小鼠尾静脉血管内皮细胞Toll样受体4的表达
背景:Toll 样受体4 除与抗感染免疫有关外,在心肌梗死、脑梗死等组织损伤和自身免疫病等非感染性炎症反应中也发挥着重要作用.目的:观察长春瑞滨对小鼠尾静脉血管内皮细胞Toll 样受体4 表达的影响.方法:取20 只BALB/c 小鼠,随机分为实验组和对照组,实验组尾静脉注射长春瑞滨,对照组注射生理盐水.结果与结论:注射后48 h,实验组小鼠尾静脉血管出现内皮细胞脱落、血栓形成和炎细胞浸润,损伤部位内皮细胞高表达Toll 样受体4;对照组小鼠尾静脉血管无明显损伤表现,血管内皮细胞Toll 样受体4 阴性或弱表达.表明长春瑞滨上调了小鼠尾静脉血管内皮细胞Toll 样受体4 表达,提示Toll 样受体4 可能参与了长春瑞滨致静脉血管内皮损伤的发生过程.
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IL-33在感染性疾病中的研究进展
IL-33初被认为是蛛网膜下出血疾病中上调大脑动脉痉挛的"DVS27"因子和在内皮细胞核中表达的高内皮小静脉核因子(NF-HEV)[1,2].2005年,Schmitz等[3]证明DSV27含有IL-1样蛋白和FGF样蛋白中的β三叶草结构,其受体ST2在结构上和其他的IL-1类受体相似具有Toll样结构域,因而作为IL-1家族中的第11种细胞因子将它重新命名为IL-33.
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天然免疫中一种新的抗原识别蛋白:Toll及Toll类受体家族
天然免疫系统是防御微生物感染的第一道防线.近年来的研究发现在天然免疫应答过程中,抗原的识别是由Toll蛋白受体家族所介导的,具有种属特异性.Toll蛋白家族的受体可识别病原性微生物的保守分子,并与信号传导途径相偶联,激活大量与免疫应答相关的编码基因,终导致一系列免疫应答的产生.
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Toll 样受体4与肝脏疾病
Toll样受体早在果蝇体内被发现,对果蝇的天然免疫起重要作用.1997年Medzhitov等发现在哺乳动物体内的与果蝇TOll结构相似的受体蛋白,即TOLL样受体(TLRs).TLRs作为一种重要的模式识别受体,构成了机体抗感染的第一道防线,并对获得性免疫的发生和类型起重要作用[1].Toll样受体4(TLR4)是早发现的哺乳动物TLRs蛋白,被认为与革兰氏阴性细菌及其内毒素的识别和激活有关,并在肝脏疾病包括酒精性肝病、病毒性肝炎、肝纤维化等的发生、发展过程中发挥重要作用,成为目前的研究热点之一[2-3].本文将从TLR4的结构、信号通路及在各种肝病中的作用分别加以阐述.
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泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠Toll样受体4/核因子-κB 信号通路的影响
目的:观察泄浊解毒方对溃疡性结肠炎大鼠Toll 样受体4/核因子-κB 信号通路的影响并探讨其作用机制.方法:实验设正常组、模型组、柳氮磺胺吡啶组、泄浊解毒方小剂量组、泄浊解毒方大剂量组,除正常组外采用2,4,6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇混合溶液灌肠复制溃疡性结肠炎大鼠模型,灌服相应药物后后观察各组大鼠结肠组织Toll 样受体4 及核因子-κB 表达.结果:泄浊解毒方各剂量组大鼠Toll 样受体4 及核因子-κB 表达均明显低于模型组;泄浊解毒方大剂量组Toll 样受体4 及核因子-κB 表达明显低于柳氮磺胺吡啶组.结论:泄浊解毒方对大鼠溃疡性结肠炎有良好的治疗作用,其作用机制可能与调节Toll 样受体4/核因子-κB 信号通路有关.
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天然免疫中Toll/IL-1R的作用
天然免疫是生物基本的防御机制,可以迅速清除感染源,控制感染,天然免疫早期阶段出现的一些分子对建立获得性免疫有重要影响.通过对果蝇和大鼠进行遗传学研究,发现Toll/IL-1R家族蛋白质在天然免疫反应中起重要作用.
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呼吸道合胞病毒感染BALB/c鼠活化Toll样受体7介导的抗病毒作用研究
目的 探讨呼吸道合胞病毒(RSV) 感染BALB/c鼠后,肺内Toll样受体7(TLR7)的水平变化及其介导所产生的I型干扰素(IFN)抗病毒作用.方法 48只BALB/c鼠,随机分为正常对照组、RSV感染组、咪喹莫特干预组.以RSV活病毒滴鼻感染BALB/c鼠,诱导急性肺炎模型,并预先给予TLR7特异性激动剂咪喹莫特处理,分别于感染后4、8、12和24 h不同时间点,用半定量RT-PCR法检测鼠肺TLR7、IFN-α/β、RSV融合蛋白 (RSV F蛋白)的mRNA表达,HE染色观察肺的病理学改变.结果 ① RSV感染早期,TLR7、IFN-α/β、RSV F蛋白的mRNA表达均升高,并与RSV感染之间存在时间依赖性关系;肺的炎性细胞浸润及肺泡结构破坏程度与RSV感染时间相关;② 咪喹莫特干预组预先给予TLR7激动剂咪喹莫特处理后,再行相同RSV感染,TLR7、IFN-α/β的mRNA表达量进一步升高,但RSV F蛋白的mRNA表达下降;肺的炎性细胞浸润程度及肺泡结构破坏较RSV感染组明显减轻.结论 RSV感染可活化上调BALB/c鼠肺组织中TLR7表达,其表达量与感染之间存在时间依赖关系;其介导产生的Ⅰ型IFN起着抗病毒作用,在一定程度上可抑制病毒的增殖水平,使肺部炎症减轻.
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全肝缺血再灌注小鼠肺泡巨噬细胞Toll样受体2/4的表达
目的:探讨小鼠肝脏缺血再灌注时肺泡巨噬细胞Toll样受体2/4的表达及意义.方法:24只BALB/c小鼠随机分为假手术组(n=6)和肝脏缺血再灌注组(n=18)2组,并于再灌注1 h、6 h、12 h后通过支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞,采用荧光定量PCR及流式细胞学检测其TLR2/4 mRNA和蛋白的表达.同时检测支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α的水平、肺组织湿干重比值及髓过氧化物酶活性,并进行肺组织学评分.结果:与假手术组比较,肝脏缺血再灌注组各时点肺泡巨噬细胞Toll样受体2/4蛋白及mRNA表达均增高(P＜0.01),TLR2表达水平持续升高(P＜0.01),TLR4在6 h达到峰值(P＜0.01).肝脏缺血再灌注时,支气管肺泡灌洗液中肿瘤坏死因子α的水平6 h高(P＜0.01,肺组织湿干重比值、髓过氧化物酶含量及肺组织学评分均从1 h开始增加,并在12 h达到峰值(P＜0.01).结论:肝脏缺血再灌注后肺泡巨噬细胞表面Toll样受体2/4被激活,并参与了肺损伤的过程.
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小鼠全肝缺血再灌注时肺泡巨噬细胞TLR2的激活与肺损伤的机制
目的 探讨肺泡巨噬细胞Toll样受体2(TLR2)的激活机制及其在肝脏缺血再灌注(HIR)中肺损伤的意义.方法 用野生型小鼠C3h/Heouj和TLR4缺失小鼠C3h/Hej建立HIR动物模型.于再灌注1,6,12h后经支气管肺泡灌洗液获取肺泡巨噬细胞,采用荧光定量PCR方法检测TLR2/4mRNA的表达.同时检测支气管肺泡灌洗液中内毒素及肿瘤坏死因子(TNF)的水平,肺组织湿干重比值,肺组织髓过氧化物酶的浓度,并进行肺组织学评分.结果 C3h/Heouj组HIR缺血再灌后各时点肺泡巨噬细胞TLR2/4mRNA表达升高,TLR2mRNA表达持续升高,TLR4mRNA6h达到高值.同时C3h/Heouj组HIR后支气管肺泡灌洗液中TNF水平明显升高,肺损伤加重,肺组织湿干重比值持续升高,肺组织髓过氧化物酶持续增加(P＜0.05).C3h/Hej组HIR后TLR2mRNA表达仅轻度升高,且支气管肺泡灌洗液中TNF水平低于C3h/Heouj组(P＜0.05),肺损伤轻于C3h/Heouj组(P＜0.05).结论 HIR可致肺泡巨噬细胞表面TLR4的激活,可上调TLR2的表达,从而可加重HIR时的肺损伤.
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Toll-样受体2,4mRNA在急性出血坏死性胰腺炎肺损伤中的表达变化
目的研究急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)肺损伤中Toll-样受体(TLR)2/4mRNA表达的变化规律.方法建立AHNP肺损伤动物模型.动物分为假手术组(S组)、胰腺炎组(P组).计算各组肺组织学评分和肺损伤指数以评价肺损伤的程度;RT-PCR方法检测不同时间点肺组织TLR2和TLR4mRNA表达的变化.结果肺组织TLR2和TLR4mRNA在S组仅有低表达,在P组3h表达开始增高,伤后6～12h该两指标表达达到峰值(P＜0.05或P＜0.01),而S组变化不明显.结论AHNP时,肺组织内该两种基因的表达上调;肺组织内TLR2和TLR4的基因表达增高可能在AHNP肺损伤的发生、发展中起作用.
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生长抑素对急性出血坏死性胰腺炎肝损伤的作用机制
目的 探讨生长抑素对大鼠急性出血坏死性胰腺炎(AHNP)时肝损伤的治疗作用及其机制.方法 逆行胰胆管注射牛磺胆酸钠(TAC)制备AHNP模型.动物分为假手术组(SO组), AHNP生理盐水处理组(AHNP组)和AHNP奥曲肽治疗组.各组动物术后3,6,12 h剖杀,检测肝组织中Toll-样受体(TLR)2,4mRNA和细胞核转录因子(NF-κB)的表达情况.结果 与SO组比较,胰腺炎组大鼠TLR2,4mRNA于3 h开始升高,于12 h达高峰(均P＜0.01);肝组织中NF-κB于3h开始表达增强,6h达高峰.奥曲肽组肝组织中的TLR2,4mRNA及NF-κB各时点表达均较AHNP组降低(P＜0.05).结论 生长抑素对AHNP有显著的保护作用.其机制可能是通过抑制胰弹性蛋白酶的分泌与激活,抑制Toll受体和NF-κB表达,降低炎症反应,从而减轻肝损伤.
