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Wnt信号参与氯化锂下调低氧复氧诱导HUVEC表达趋化因子FKN
目的 研究低氧复氧诱导培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)表达趋化因子FKN与Wnt信号通路中关键信号分子β-catenin、GSK-3β的相关性.方法 HUVECs,随机分为对照组、低氧复氧组和氯化锂(LiCl,10 mmol/L)组.免疫细胞荧光FITC法检测FKN蛋白表达,免疫细胞化学技术检测GSK-3β及β-catenin的表达.RT-PCR技术检测GSK-3β和FKN mRNA表达.结果 与正常对照组比较,低氧复氧引起GSK-3β、β-catenin及FKN表达明显增加(P＜0.05),于复氧2h达表达高峰;与低氧复氧组比较,LiCl组β-catenin表达明显增加(P＜0.05),FKN与GSK-33表达明显降低(P＜0.05),但仍然高于正常对照组.LiCl组FKN mRNA表达高于正常对照组(P＜0.05)而低于低氧复氧组(P＜0.05),于复氧1h达表达高峰;GSK-33 mRNA在低氧前后及复氧各时间点无差异表达.结论 Wnt 信号通路的激活可能在转录后翻译阶段参与LiCl下调低氧诱导HUVECs表达FKN的过程.
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FKN对人外周血单个核细胞PKC-ERKl/2活化和TNF-α表达的影响
目的 探索FKN-CYdCR1 在单个核细胞中可能存在的信号传导途径及促进动脉粥样硬化形成的机制,并探讨蛋白激酶C(PKC)在其中的作用.方法 (1)用Ficoll密度梯度离心法分离抗凝人外周血单个核细胞.(2)将每份提取的单个核细胞分为4组:对照组、FKN组、Ro31-8220(PKC特异性阻断剂)和PD98059(ERK1/2特异性阻断剂)组.(3)用Western blot法检测单个核细胞中磷酸化ERKl/2表达.(4)用ELISA法检测培养液中TNF-а的表达.结果 (1)FKN组磷酸化的ERK1/2和TNF-а表达较对照组显著增多(P<0.05).(2)Ro31-8220组磷酸化的ERKl/2和TNF-а表达较FKN组显著减少(P<0.05).结论 FKN-CX3CR1可能通过PKC/ERK途径诱导单个核细胞TNF-а的表达,终促进动脉粥样硬化的形成和进展.
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Fractalkine在肝胆胰疾病中的相关研究现状
趋化因子是一类对不同靶细胞具有趋化效应的细胞因子家族,已发现50余个成员.该家族成员依据其分子N端半胱氨酸的数量及其间隔,可分为CC,CXC,C,CX3C四个亚家族,分别趋化和激活不同类型免疫细胞.Fractalkine(Fkn)作为CX3C亚家族中的唯一成员与其他趋化因子区别在于:Fkn是一种跨膜糖蛋白,其分子结构、生化特性和分布特点均不同于其他趋化因子.因而在多种疾病的发生、发展中都可能发挥着较为独特的作用,本文就其在肝胆胰疾病中的研究现状予以综述.
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趋化因子CX3CL1在野百合碱诱导大鼠肺动脉高压过程中的表达变化
肺动脉高压是以肺动脉血管阻力进行性升高为主要特征的一组疾病,发生机制复杂,肺源性心脏病是其终末阶段.趋化因子CX3CL1(fractalkine,FKN)是趋化因子CX3C亚族的惟一成员,具有可溶形式及膜结合形式,既有趋化性蛋白的功能也有细胞黏附分子的功能,还具有促进平滑肌细胞增殖的生长因子作用[1].本研究通过野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠模型观察肺动脉高压发展过程中FKN的表达变化,探讨FKN在肺动脉高压形成过程中的作用和可能的机制.
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Fractalkine/CX3CR1与动脉粥样硬化
动脉粥样硬化(artery atherosclerosis,AS)是心脑血管事件发生的共同基础,是危害人类健康的主要疾病,主要累及大中型动脉,导致缺血和损伤,是造成心脑血管疾病和死亡的重要因素.炎症、氧化应激被认为是动脉粥样硬化发生和发展的核心机制.不规则趋化因子(Fractalkine,FKN)是趋化因子CX3C亚家族的唯一成员,其受体CX3CR1主要表达在单核细胞、T细胞和NK细胞上,介导Fractalkine表达细胞对上述细胞的趋化作用.研究表明,FKN/CX3CR1系统参与了动脉粥样硬化的炎症反应过程,并起到促炎症反应的作用.
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二氮嗪预处理缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞PI3K、Akt、FKN mRNA的表达
背景:在缺氧复氧早期,促使心肌微血管内皮细胞增殖的措施,涉及一系列相关基因的改变和受多种基因调控.目的:观察二氮嗪预处理对缺氧复氧大鼠心肌微血管内皮细胞增殖和PI3K、Akt和FKN mRNA表达的影响.方法:培养SD大鼠心肌微血管内皮细胞,按照不同的干预方式将细胞随机均分为正常对照组、缺氧/复氧组、二氮嗪组、二氮嗪+阻断剂组.观察凋亡细胞形态、活力及PI3K、Akt和FKN mRNA转录水平.结果与结论:与正常对照组比较,缺氧/复氧组细胞增殖率显著降低、Akt和FKN显著升高(P < 0.01).与缺氧/复氧组比较,二氮嗪组细胞增殖率显著升高(P < 0.05);PI3K和Akt 显著升高、FKN显著降低(P < 0.01).二氮嗪+阻断剂组取消了二氮嗪的作用,与缺氧/复氧组比较差异无显著性意义.说明二氮嗪预处理通过促使细胞增殖,上调PI3K、Akt mRNA表达、下调FKN mRNA表达而实现对缺氧复氧心肌微血管内皮细胞损伤的保护.
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趋化因子FKN对外周血单核细胞NF-κB和TNF-α表达的影响及蛋白激酶C在其中的作用
[目的]对单核细胞合成核因子-κB(nuclear factor-KappaB,NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响,探讨趋化因子(fractalkine,FKN)-CX3CR1可能存在的信号转导机制及在动脉粥样硬化形成中的作用,并探讨了蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的介导作用.[方法]①Ficoll密度梯度离心法分离外周血单核细胞.②每份提取的单核细胞分为空白对照组、FKN、R031-8220(PKC特异性阻断剂)组.③免疫细胞化学法检测各组单核细胞中NF-κB的表达.④酶联免疫法检测各组培养液中TNF-α的表达水平.[结果]FKN、R031-8220与空白对照组的NF-κB的阳性细胞率分别为(34.80±2.69)%.(20.10±2.78)%与(3.80±0.95)%(三组间差异P＜0.05);TNF-α含量分别为(1506.1±69.3)pg/mL,(820.2±22.8)pg/mL,(80.5±5.5)pg/mL(三组间差异P＜0.05).[结论]FKN-CX3CR1能增加NF-κB、TNF-α单核细胞的表达:而FKN与CX3CR1结合以后,可能通过激活细胞内蛋白激酶C,进而诱导单核细胞合成NF-κB、TN-α.
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趋化因子FKN对外周血单个核细胞NF-κB和TNF-α表达的影响及卡托普利的干预作用
[目的]通过研究趋化因子(fractalkine,FKN)对单个核细胞合成核因子-κB(nuclearfactor-κappaB,NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的影响,探索了FKN-CX3CR1可能存在的信号传导机制及在动脉粥样硬化形成中的作用,并探讨了卡托普利在这其中可能的干预作用.[方法]①抗凝血用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞.②将每份提取的单个核细胞分3组分别为:空白对照组、FKN组、卡托普利组.③应用免疫细胞化学法检测各组单个核细胞中NF-κB表达情况.④应用酶联免疫法检测各组培养液中TNF-α的表达水平.[结果]①FKN诱导组NF-κB(34.80±2.69)%和TNF-α(1506.1±69.3)pg/mL较空白组NF-κB(3.80±0.95)%和TNF-α(80.5±5.5)pg/mL表达显著增多(P＜0.05).②卡托普利干预组NF-κB(27.55±1.96)%和TNF-α(1119.3±116.2)pg/mL较FKN组NF-κB(34.80±2.69)%和TNF-α(1506.1±69.3)pg/mL表达显著减少(P＜0.05).[结论]FKN-CX3CR1有增加单个核细胞表达NF-κB、TNF-α的作用;而卡托普利可通过减弱FKN-CX3CR1诱导的单个核细胞合成NF-κB、TNF-α,抑制炎症反应.
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趋化因子FKN对人外周血单个核细胞IL-8表达的影响及ERK、PI3K和NF-κB在其中的作用
目的：通过研究趋化因子Fractalkine（FKN）对人外周血单个核细胞IL-8表达的影响，以及信号分子细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases，ERK）、磷脂酰肌醇-3激酶（phosphatidylinositol 3-kinase， PI3K）、核因子-κB（nuclear factor-κB，NF-κB）在其中的作用，探讨FKN促进动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）的机制。方法利用密度梯度离心法分离健康人外周血单个核细胞；将提取的单个核细胞分为：空白对照组、FKN组、PD98059（ERK阻断剂）组、LY294002（PI3K阻断剂）组、PDTC（NF-κB阻断剂）组、FKN＋PD98059组、FKN＋LY294002组、FKN＋PDTC组；分别于培养12 h和24 h后收集细胞培养上清，应用ELISA检测各组单个核细胞中IL-8的表达情况。结果（1）细胞培养12 h或24 h后，PD98059组、LY294002组和PDTC组与空白组比较，IL-8表达有减少趋势，但差异无显著性意义（P＞0．05）。（2）FKN组较空白组IL-8表达明显减少（P＜0．05），FKN＋PD98059组和FKN＋LY294002组较FKN组IL-8表达明显增加（P＜0．05），FKN＋PDTC组较FKN组、FKN＋PD98059组和FKN＋LY294002组IL-8表达均明显减少（P＜0．05）。（3）细胞培养24 h后，各组IL-8表达均较12 h明显减少（P＜0．05）。结论趋化因子FKN可能通过ERK、PI3K信号途径抑制单个核细胞IL-8的表达，而通过NF-κB途径促进IL-8的表达，FKN对单个核细胞IL-8的表达具有双向调节作用，但以抑制作用为主。
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人、黑猩猩和叶猴FKN全基因的克隆及体外表达的比较研究
目的:克隆人、黑猩猩和叶猴FKN全基因及体外表达,比较研究FKN在进化过程中基因组水平和蛋白表达水平的差异.方法:应用基因重叠延伸拼接PCR法(Gene splicing by overlapping extension PCR,SOE-PCR)将FKN的3个外显子编码序列依次进行前后拼接,然后插入pcDNA3.1/myc-His(-)A真核表达载体中,经酶切、测序鉴定后转染CHO细胞体外表达,RT-PCR、SDS-PAGE和Western blot检测其表达产物.结果:酶切、测序鉴定证实插入的基因片段为完整的FKN,RT-PCR可从转染的CHO细胞中扩增出一条与目的基因大小一致的DNA片段,其表达蛋白能分泌至胞外,SDS-PAGE显示其分子量约为95 000,抗c-myc抗体可与载体上的c-myc蛋白特异性结合.测序显示人、黑猩猩和叶猴相比,FKN基因除了有散在的点突变外,还发现有一明显的30 bp的缺失,但此缺失对FKN蛋白的表达并不影响.结论:成功克隆人、黑猩猩和叶猴FKN全基因,基因组水平和蛋白表达水平的比较研究为后续探讨FKN在高级灵长类物种进化过程中免疫学功能的演变奠定基础.
关键词： FKN 基因重叠延伸拼接PCR 基因克隆 灵长类 -
FKN对外周血单个核细胞ERK1/2活化和TNF-α表达的影响及ERK1/2的临床作用
目的 探讨趋化因子(FKN)对单个核细胞细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)1/2和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)表达的影响及ERK1/2在其中的作用.方法 抗凝血用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞.将每份提取的单个核细胞分为3组:空白对照组、FKN组、FKN+PD98059(ERK特异性阻断剂)组;分别应用Western印迹法和酶联免疫法检测各组单个核细胞中磷酸化ERK1/2及TNF-α的表达水平.结果 FKN诱导组磷酸化的ERK1/2和TNF-α表达较空白组显著增多(P<0.05);PD98059组磷酸化的ERK1/2和TNF-α表达较FKN组显著减少(P<0.05).结论 FKN-CX3CR1可能通过增加单个核细胞磷酸化ERK1/2和TNF-α的表达而促进动脉粥样硬化的进展,FKN可能是通过ERK1/2途径诱导单个核细胞TNF-α的表达.
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趋化因子FKN对单个核细胞MMP-2表达的影响及PKC在其中的作用
目的 探讨趋化因子Fractalkine(FKN)对单个核细胞基质金属蛋白酶(MMP)-2表达的影响及蛋白激酶C(PKC)在其中的作用.方法 采用聚蔗糖-泛影葡胺密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞.将提取的单个核细胞分为:空白对照组、FKN组及Ro31-8220(PKC阻断剂)组.应用明胶酶谱法检测各组单个核细胞中MMP-2表达情况.结果 MMP-2在FKN组[(619±34.77)INT·mm2]较空白组[(3 285±54.69)INT·mm 2 ]表达明显减少(P＜0.05),在Ro31-8220组[(2 478.33±64.31)INT·mm2]较FKN组表达明显增多(P＜0.05).结论 趋化因子FKN可以抑制单个核细胞MMP-2的表达,这一作用可能是通过PKC途径实现的.
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FKN影响动脉粥样硬化信号传导机制及G-蛋白在其中作用的研究
目的 探讨鸟苷酸结合蛋白(G-蛋白)对fractalkine(FKN)诱导单个核细胞合成NF-κB、TNF-α的影响及FKN-CX3CR1可能存在的一条信号传导机制,并研究G-蛋白在其中的作用.方法 抗凝血用Ficoll密度梯度离心法分离外周血单个核细胞.将每份提取的单个核细胞分为:空白对照组、FKN组及百日咳毒素(PTX)组.应用免疫组化检测各组单个核细胞中NF-κB表达情况,酶联免疫法检测各组培养液中TNF-α的表达水平.结果 (1)FKN诱导组较空白组NF-κB、TNF-α表达明显增多,G-蛋白阻断剂PTX组较FKN组NF-κB、TNF-α表达明显减少.结论 (1)FKN-CX3CR1有促进动脉粥样硬化形成的作用,CX3CR1为G-蛋白偶联受体,FKN与CX3CR1结合以后,可以通过与G-蛋白偶联,启动细胞内信号传导机制.
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进展性脑梗死患者血清 HMGB1、FKN 动态变化研究
目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)及不规则趋化因子(FKN)在进展性脑梗死中的可能作用机制.方法 用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测急性脑梗死患者不同时期血清HMGB1及FKN水平变化,根据斯堪的纳维亚脑卒中量表(scandinavian stroke scale,SSS)评分分为进展组和非进展组.根据梗死体积将180例患者分为大梗死灶组、中梗死灶组、小梗死灶组.另纳入30例健康体检者作为对照组.结果 180例急性脑梗死患者中有35例(19.44%)发展为进展性脑梗死.进展组SSS基线评分低于非进展组,差异有统计学意义(P<0.05).进展性组患者发病后1 d、7 d、14 d血清HMGB1、FKN水平高于非进展组和对照组,有统计学意义(P<0.05).梗死灶体积大则血清HMGB1、FKN水平高(P<0.05).结论 血清HMGB1、FKN增加可能通过增加炎症反应促进动脉粥样硬化形成和进展,加重脑组织损伤,导致脑梗死患者病情进展.
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RA患者血清中FKN、IL-18表达水平的测定及相关因素研究
目的:探讨类风湿性关节炎患者血清FKN、IL-18表达水平及其与RA的关系.方法:选取2013-09 ～2014-09佳木斯大学附属第一医院风湿免疫科就诊的类风湿性关节炎患者30例作为实验组,门诊体检正常者25例作为对照组.采用ELISA法测定两组受检者血清FKN、IL-18表达水平,分析两者表达水平与RA病情严重程度之间的关系.结果:RA血清中FKN、IL-18表达水平较对照组显著升高,差异有统计学意义(P＜0.01).FKN、IL-18与患者的抗环瓜氨酸肽抗体、C反应蛋白、血沉、均呈正相关(P＜0.05),两者与类风湿因子(RF)表达水平无相关性(P＞0.05).RA患者血清中FKN和IL-18的表达有相关性,两者呈正相关.结论:RA患者血清中FKN、IL-18表达水平显著升高,且与炎症指标及病情严重程度有相关性.据此可推测FKN、IL-18两者共同参与了RA的病理生理过程.
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FKN刺激人单个核细胞Akt活化及Akt活化与P13K、NF-κB的关系
Fractalkine(FKN)是新发现的一种在动脉粥样斑块中过量表达的趋化因子,与其受体CX3CR1结合,介导白细胞黏附和趋化以及血管平滑肌细胞(VSMC)的迁移,并刺激炎症因子的表达和血小板的活化,因此被认为参与介导动脉粥样硬化(AS)的炎症反应.
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二氮嗪预处理对大鼠缺氧-复氧心肌微血管内皮细胞FKN、p53mRNA表达的影响
目的 观察二氮嗪预处理对大鼠缺氧-复氧(H-R)心肌微血管内皮细胞(MMECs) Fractalkine(FKN)和p53 mRNA表达的影响.方法 培养SD大鼠MMECs,分为四组:正常对照组(N组)、H-R组、二氮嗪组(DZ组)、二氮嗪+mitoKATP特异性阻断剂5-羟葵酸预处理组(DZ+5-HD组).DZ组和DZ+5-HD组分别加入二氮嗪100μmol/L、二氮嗪100μmol/L+5-羟葵酸100μmol/L预处理2 h,然后和H-R组同样进行H-R 2 h.观察凋亡细胞形态,测定细胞凋亡率和活力、RT-PCR检测FKN和p53 mRNA转录水平.结果 与N组比较,H-R组细胞凋亡率显著升高,细胞增殖率显著下降,p53 mRNA和FKN mRNA表达显著增强(P＜0.01);与H-R组比较,DZ组细胞凋亡率显著降低,细胞增殖率显著增强(P＜0.05),FKN mRNA和p53 mRNA表达显著降低(P＜0.01);DZ+5-HD组取消了DZ组的作用.结论 二氮嗪预处理通过抑制细胞凋亡,促使细胞增殖,下调FKN mRNA和p53 mRNA表达而实现对H-R MMECs损伤的保护.
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FKN、PI3K及NF-κB对单个核细胞TNF-α表达的影响
目的 探讨不规则趋化因子Fractalkine(FKN)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)、核因子κB(NF-κB)对单个核细胞(PBMC)TNF-α表达的影响,研究FKN促使TNF-α表达的信号转导机制.方法 将用Ficoll密度梯度离心法分离的人外周血PBMC分为空白对照组、FKN组、FKN+LY294002(PI3K抑制剂)组、FKN+PDTC(NF-κB抑制剂)组和FKN+卡托普利组,后三组在FKN诱导PBMC细胞前分别由LY294002、PDTC和卡托普利预处理.FKN诱导各组PBMC 24 h后,用ELISA法检测各组细胞培养液中的TNF-α表达.结果 与对照组比较,FKN组TNF-α明显升高(P＜0.05);与FKN组比较,FKN+LY294002组、FKN+PDTC组、FKN+卡托普利组TNF-α明显降低(P均＜0.05).结论 FKN可刺激人外周血PBMC表达TNF-α,PI3K和NF-κB可能参与该过程中TNF-α表达,卡托普利可抑制FKN诱导的TNF-α表达.
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芦丁联合奥沙利铂激活FKN/SYK/p38通路促进胃癌细胞凋亡
目的 探讨芦丁联合奥沙利铂对人胃癌细胞SGC-7901增殖和凋亡的影响及机制.方法 采取对数生长期的人胃癌细胞SGC-7901作为研究对象,采用MTT、流式细胞术、Western blot等方法检测细胞活力、细胞周期和相关蛋白表达的变化.结果 p38抑制剂可促进SGC-7901细胞的增殖(P＜0.05);而芦丁、奥沙利铂均可抑制SGC-7901细胞的增殖,联合组对SGC-7901细胞的抑制作用更显著;p38抑制剂组FKN、SYK、p-p38、cleaved-caspase3、7、8、9蛋白表达与阴性对照组相比明显降低(P＜0.05);芦丁与奥沙利铂联合作用后,以上蛋白均不同程度的升高.结论 芦丁与奥沙利铂均可抑制SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与FKN/SYK/p38通路的激活有关.
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辛伐他汀对缺血再灌注大鼠趋化因子FKN及其受体CX3CR1的影响
目的:探讨趋化因子FKN及受体CX3CR1与缺血再灌注的关系以及辛伐他汀对FKN及受体CX3CR1的影响.方法:建立大鼠心肌缺血再灌注模型,随机分成假手术组、缺血再灌注组、辛伐他汀干预组,用免疫组化方法观察心肌中的FKN及白细胞中的受体CX3CR1表达的变化.结果:与假手术组比较,缺血再灌注组、辛伐他汀组再灌注后1h FKN蛋白均显著上调,并于2h达高峰,CX3CR1蛋白表达于间质浸润白细胞,并与FKN表达呈现相似的动态变化特征.辛伐他汀组不同时间段FKN和CX3CR1的表达均低于缺血再灌注组.结论:趋化因子FKN及其受体CX3CR1参与了缺血再灌注损伤;辛伐他汀可有效降低FKN及其受体CX3CR1在缺血再灌注中的表达,从而减轻缺血再灌注损伤.
