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Fractalkine在肝胆胰疾病中的相关研究现状
趋化因子是一类对不同靶细胞具有趋化效应的细胞因子家族,已发现50余个成员.该家族成员依据其分子N端半胱氨酸的数量及其间隔,可分为CC,CXC,C,CX3C四个亚家族,分别趋化和激活不同类型免疫细胞.Fractalkine(Fkn)作为CX3C亚家族中的唯一成员与其他趋化因子区别在于:Fkn是一种跨膜糖蛋白,其分子结构、生化特性和分布特点均不同于其他趋化因子.因而在多种疾病的发生、发展中都可能发挥着较为独特的作用,本文就其在肝胆胰疾病中的研究现状予以综述.
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趋化因子CX3CL1及其受体在肝脏炎症和纤维化中的作用
趋化因子(chemokine)是使细胞发生趋化运动的小分子细胞因子,其对不同靶细胞具有一定趋化效应.近年来研究表明趋化因子在急、慢性肝病起重要作用,其通过浓度梯度趋化免疫细胞(如T细胞、NK细胞)渗入受损的肝脏.不仅如此,随着炎症及纤维化反应,趋化因子还可直接影响肝内细胞,如肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)、肝细胞.
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趋化因子XCL1的免疫调节作用与相关疾病的研究
趋化因子(chemokine)是一类对不同靶细胞具有趋化效应的的细胞因子家族,已发现50多个成员.该家族成员依据其分子氨基端半胱氨酸的数目及其间隔,可分为CC、CXC、C、CX3C四个亚家族.趋化因子能诱导白细胞及其他类型的体细胞定向迁移和活化,而且在免疫细胞和器官的发育、免疫应答、炎症反应、病原体感染、创伤修复及肿瘤形成和转移等方面发挥广泛的生理和病理作用[1].
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沉默CX3CL1基因对骨髓间充质干细胞生长及其趋化效应的影响
目的 构建大鼠趋化因子CX3C的配体1(chemokine CX3C ligand 1,CX3CL1)基因慢病毒RNA干扰(RNA interference,RNAi)载体,观测其沉默CX3CL1基因对骨髓间充质干细胞(bone marrow derived mesenchymal stem cells,bMSCs)生长及其趋化效应的影响.方法 首先分离、培养大鼠骨髓bMSCs,并予以流式细胞术检测鉴定.针对CX3CL1基因mRNA序列,筛选3个小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)靶点并予以合成.把合成的siRNA导入bMSCs,Western blot检测其对靶基因编码蛋白的抑制效应,以此明确佳siRNA.设计与合成针对佳siRNA序列的短发夹RNA(short hair RNA,shRNA),连入CD513B-1慢病毒载体,构建CD513B-1/CX3CL1 shRNA慢病毒,并行测序鉴定.测序正确者用293T细胞包装成具有高效感染力的CD513B-1/CX3CL1 shRNA重组慢病毒,该重组病毒用于感染bMSCs.分离培养大鼠脾巨噬细胞,将其与被感染的bMSCs共培养.倒置显微镜下观测被感染bMSCs的绿色荧光蛋白(GFP)的表达情况;CCK-8检测被感染bMSCs的生长变化;Real-time PCR检测被感染bMSCs的CX3CL1与核抗原PCNA基因的表达变化;Western blot检测被感染bMSCs的CX3CL1和PCNA蛋白,与被感染的bMSCs共培养的脾巨噬细胞的趋化因子M-CSF和IL-8的表达变化.结果 大鼠bMSCs得以分离、培养和鉴定.筛检得CX3CL1基因的佳干扰序列:CTCTATGAGCAArTTATTTA;测序证实,成功构建重组慢病毒载体CD513B-1/CX3CL1 shRNA.荧光观察表明,被CD513B-1/CX3CL1shRNA病毒感染的bMSCs明显表达GFP.CCK-8检测结果显示,与对照细胞比较,沉默CX3CL1的bMSCs的生长减慢,48 h开始更为明显(P<0.01);Real-time PCR、Western blot检测结果证实,CX3 CL1基因的shRNA慢病毒能有效沉默bMSCs的CX3CL1,并下调其核抗原基因PCNA及其蛋白的表达,沉默CX3 CL1的bMSCs能下调与其共培养的脾巨噬细胞的趋化因子M-CSF、IL-8的表达.结论 成功构建CX3 CL1基因RNAi重组慢病毒载体.该病毒载体能有效沉默bMSCs的CX3CL1基因,使bMSCs的生长减慢并下调其核抗原PCNA基因及其编码蛋白的表达.沉默CX3 CL1的bMSCs能下调与其共培养的脾巨噬细胞的趋化因子M-CSF、IL-8的表达.
关键词: 趋化因子CX3C的配体1基因 短发夹RNA 骨髓间充质干细胞 慢病毒 趋化效应