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HPLC同时测定丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量
目的:建立用HPLC同时测定丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B4个水溶性成分的方法,并对6批丹参多酚酸进行测定.方法:采用Venusil XBP C18柱(4.6 mm×250mm,5μm),流动相0.02％磷酸水-0.02％磷酸80％乙腈水梯度洗脱；流速1 mL· min-1；检测波长280 nm;柱温30℃.结果:丹酚酸D线性回归方程为A=13 979C-1 739.2,R2=0.999 6,线性范围2.11 ～21.10 mg·L-1,平均回收率100.12％ (RSD 1.52％),迷迭香酸线性回归方程为A=42 007C-448.58R2=0.999 7,线性范围3.94 ～39.40 mg·L-1,平均回收率100.60％(RSD 1.83％)；紫草酸线性回归方程A=23 061C-6 319.2,R2=0.999 6,线性范围4.14～41.40 mg·L-1,平均回收率102.47％(RSD 1.53％)；丹酚酸B线性回归方程A=22 186C-21 435,R2=0.999 8,线性范围为53.90 ～ 539.00 mg·L-1,平均回收率104.53％(RSD 2.00％).结论:方法操作简单,且重复性好,可用于丹参多酚酸中丹酚酸D、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量测定.
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HPLC同时检测丹参提取物中5种水溶性和脂溶性成分含量
目的:建立丹参提取物中丹酚酸A、丹酚酸B、紫草酸、丹参素及丹参酮ⅡA反相HPLC同步测定新方法.方法:选用Kromasil 100-5 C18(4.6 mm × 250 mm,5μm)色谱柱,以乙腈-水(含0.1％甲酸)为流动相梯度洗脱,流速1 mL· min-1,检测波长285 nm.结果:丹酚酸A、丹酚酸B、紫草酸、丹参素及丹参酮ⅡA分别在进样量范围内与峰面积线性关系良好,r＞0.999 5,仪器精密度和稳定性RSD均＜2％,成分的回收率在97％ ～ 103％(n=3).测定了其5批丹参提取物含量.结论:该方法快速、准确、重复性好,可同时定量丹参的5种水溶性及脂溶性成分.
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丹参总酚酸在大鼠血浆中的药动学研究
目的:考察丹参总酚酸中主要成分紫草酸、丹酚酸B在大鼠体内的药代动力学过程.方法:采用血药浓度法,HPLC法测定大鼠ig(1.0 g·kg-1)丹参总酚酸后不同时间点的血药浓度,DAS3.0软件计算药动学参数.结果:紫草酸在1.0～20.0 mg·L-1线性关系良好(R2=0.993 1);回收率在97.15％ ～ 100.21％,日内、日间RSD＜ 10.23％；丹酚酸B在2.0～ 20.0mg·L-1线性关系良好(R2 =0.992 5)；回收率在94.80％ ～ 99.96％,日内、日间RSD＜ 10.06％.紫草酸的t1/2为19.4 min,Cmax为14.9 mg·L-1,AUC为418.0.μg·L-1·min-1.丹酚酸B的t1/2为27.2 min,Cmax为17.1 mg· L-1,AUC为831.3 μg·L-1·min-1.结论:HPLC选择性好,灵敏度高,适用于血浆样品成分含量的测定,为进一步的复方药代动力学的研究奠定了基础.
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复方丹酚滴丸中冰片对丹酚酸大鼠在体肠吸收特性的影响
目的:研究复方丹酚滴丸中不同质量浓度冰片配伍丹酚酸后对丹酚酸B,紫草酸,迷迭香酸3个成分在小肠的吸收速率常数(Ka)和表观吸收系数(Papp)的影响.方法:采用大鼠在体单向肠灌注试验考察吸收过程,以HPLC测定丹酚酸B,紫草酸和迷迭香酸的含量,流动相1％冰乙酸水溶液(A)-1％冰乙酸甲醇溶液(B)梯度洗脱(0 ～ 10 min,10％ ～ 20％B;10 ～ 40min,20％ ～47％ B;40 ～50 min,47％ ～ 70％ B),检测波长286 nm,流速0.8 mL· min-.结果:高、中、低质量浓度冰片配伍丹酚酸后,Ka和Papp大多有所增加,其中以100 mg·L-1冰片组的促吸收效果优,该组丹酚酸B,紫草酸,迷迭香酸的全肠段Ka分别为不加冰片的2.31,2.33,3.38倍.结论:不同浓度冰片配伍丹酚酸后,对丹酚酸B,紫草酸和迷迭香酸在大鼠各肠段的吸收具有一定促进作用,浓度对促吸收效果有一定影响;增加冰片的浓度,促吸收作用有所提高,但当冰片到一定浓度后,促吸收作用有所减弱.
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高温高压下丹酚酸B,紫草酸水溶液化学变化的研究
目的:考察中药丹参中主要活性成分丹酚酸B,紫草酸在高温高压处理过程中的化学成分变化,探索其变化机理.方法:采用高温高压(120℃,0.2 MPa)条件对丹参提取物、丹酚酸B及紫草酸进行处理,研究成分的变化情况及稳定性.结果:丹酚酸B与紫草酸经高温高压处理后的主要产物为丹酚酸A;紫草酸是丹酚酸B反应的中间产物,在相同条件下比丹酚酸B更容易转化为丹酚酸A;丹酚酸A在高温高压条件下不稳定,能够继续分解为其他小分子化合物.结论:该实验为丹酚酸A的获取提供了新的制备方法.
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冠心宁注射液中酚酸类成分的质量分析
通过高效液相色谱法同时测定冠心宁注射液中丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的含量.采用Kromasil C18色谱柱(4.6 mm ×250 mm,5μm),以乙腈-3％甲酸水溶液为流动相,流速1 mL·min-1,柱温30℃,检测波长280 nm.结果显示,丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B分别在进样量0.006 00 ～ 4.00,0.006 15 ～4.10,0.006 00～4.00,0.006 06～4.04,0.006 09 ～4.06 μg与峰面积呈良好的线性关系,r分别为0.999 3,0.999 4,0.999 3,0.999 1,0.999 2;回收率(n=6)分别为98.9％ (RSD 0.75％),98.1％(RSD 1.2％),100％(RSD 0.77％),98.7％(RSD 1.7％),102％(RSD 0.68％).按所建方法对13批样品中上述5种成分的含量进行测定.该方法简便、准确,重复性好,可用于冠心宁注射液中丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的质量控制.
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HPLC法测定丹酚及其滴丸中丹酚酸的含量
目的 建立测定丹酚及其滴丸中6种主要丹酚酸含量的方法.方法 采用HPLC法,Unitary C18色谱柱,乙腈-0.05％磷酸水为流动相梯度洗脱,检测波长286 nm,流速为1.1 ml ·min-1,柱温为35℃.结果 该色谱条件下,6种酚酸类成分可完全分离.丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和丹酚酸A的线性范围分别为2.07 ～ 20.66 μg ·ml-1(r=0.9998)、2.53 ～25.30μg·rnl-1(r=0.9999)、8.12～40.60 μg·ml-1(r =0.9999)、11.24～56.20 μg·ml-1(r=0.9999)、99.60～996.00 μg·ml-1(r=0.9999)、1.00～10.02 μg ·ml-1(r=0.9998),6种成分的平均回收率为99.24％ ～ 101.55％,RSD均小于2％.结论 该测定方法准确度高,重复性好,专属性强,可同时测定丹酚及其滴丸中6种丹酚酸的含量.
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高效液相色谱法测定注射用丹参多酚酸中6种水溶性成分的含量
目的:建立分别测定注射用丹参多酚酸中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸D6种水溶性成分的HPLC方法,并对3批注射用丹参多酚酸进行含量测定.方法:色谱柱为AgilentZORBAX Eclipse Plus C18(250 mm ×4.6 mm,5μm);等度洗脱:流动相A为水-甲酸(100∶0.5),流动相B为乙腈-甲醇(100∶3),柱温为30℃;检测波长为288 nm(供迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的测定);梯度洗脱:流动相为A为水-甲酸(100∶0.2),流动相B为乙腈,柱温为25℃;检测波长为280 nm(供丹参素钠、原儿茶醛、丹酚酸D的测定).结果:6种成分在实验浓度范围内,峰面积线性关系良好(r≥0.999 3).重复性、精密度、稳定性、加样回收率结果均符合《中华人民共和国药典》的规定.6种成分的总含量约占67.4％.结论:方法简便、准确,且重复性好,可用于注射用丹参多酚酸中6种成分的含量测定.
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紫草酸通过抑制凋亡及磷酸化P65改善脂多糖对H9c2细胞的损伤
目的 探讨紫草酸对脂多糖(lipopolysaccharides,LPS)诱导的H9C2细胞损伤的保护作用.方法 本实验分组为5组:对照组、LPS组、LPS加紫草酸组(低、中、高剂量).LPS浓度为2mg/ml,紫草酸浓度分别为5、10、201μmol/L.药物干预时间为12h.用CCK8检测药物对细胞存活率影响,用TUNEL、RT-PCR及Western blot法检测凋亡蛋白及信号通路蛋白的变化.结果 紫草酸对H9C2细胞具有低毒性,它可以降低胞内凋亡的水平,降低炎性反应,且具有浓度依赖性以及时间依赖性.结论 紫草酸可以改善LPS诱导H9C2细胞损伤.
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等基线多波长覆盖融合结合相对校正因子测定丹参中3种成分含量
目的 建立以等基线多波长覆盖融合技术结合相对校正因子计算方法同时测定丹参药材中丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸含量的方法.方法等基线三波长覆盖融合后以丹酚酸B 为内标成分,建立迷迭香酸、紫草酸与丹酚酸B 的相对校正因子,比较等基线多波长覆盖融合结合校正因子法与外标法含量测定结果之间的差异.结果 8批丹参药材中3 个指标性成分,采用等基线多波长覆盖融合结合相对校正因子法计算的含量值与外标法实测值之间差异无统计学意义.结论等基线多波长覆盖融合结合相对校正因子法可用于丹参中3 种成分含量的同时测定,为中药质量评价提供了新的方法.
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丹参多酚酸提取物化学成分的分离与鉴定
目的 研究丹参多酚酸提取物的化学成分.方法 利用各种色谱技术进行分离纯化,利用光谱技术进行化合物结构解析.结果 从丹参多酚酸提取物中分离得到7个化合物,分别鉴定为(2R)-2-[(7-羟基-2-羰基-2,3-二氢苯并呋喃基)-(4→3)-2-(2E)-烯丙酰氧基]-3-(3,4-二羟基苯基)-丙酸(1)、丹酚酸D(2)、原儿茶醛(3)、迷迭香酸(4)、紫草酸(5)、丹酚酸B(6)和丹酚酸Y(7).结论 化合物1为新化合物,命名为丹酚酸D内酯.
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复方丹参滴丸中君药丹参的质量标志物研究
目的 基于中药质量标志物(Q-marker)理念,从化学成分的角度对复方丹参滴丸中君药丹参的质量标志物进行研究.方法 采用UPLC法对丹参药材和复方丹参滴丸中主要的丹酚酸类成分进行测定,并模拟复方丹参滴丸提取工艺,对紫草酸和丹酚酸B、E、T、U这5个丹酚酸类成分的转化进行研究.结果 在丹参药材中,主要有2个丹酚酸类成分,即丹酚酸B(占总酚酸比例＞90％)和迷迭香酸(＞5％);而在复方丹参滴丸中,主要有8个丹酚酸类成分,即丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸和丹酚酸A、B、D、T、U,其中丹参素、原儿茶醛含量相对较高.在提取加工中,紫革酸和丹酚酸B、E、T、U能转化生成相对分子质量相对较小的丹酚酸类成分,而丹参素、原儿茶醛是主要的终产物.结论 丹参药材选择丹酚酸B作为水溶性丹酚酸类成分的质量标志物科学合理,而丹参药材在制备复方丹参滴丸的过程中,丹酚酸类成分发生了化学转化,产生了8个主要的丹酚酸类成分,并以其中的丹参素和原儿茶醛的含量高,又因丹参素具有种属来源特异性,故从化学成分层面上,复方丹参滴丸选择丹参素作为君药丹参的质量标志物科学合理.
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基于体外血脑屏障模型的丹酚酸组分活性成分的筛选分析
目的 建立模拟体内血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)模型,并运用该模型对丹酚酸组分中可能作用于中枢神经系统(CNS)的活性成分进行筛选,为CNS药物的快速高通量筛选提供实验依据.方法 将人脑微血管内皮细胞(HBMEC)和人星形胶质细胞(HA)进行共培养,模拟体内BBB,建立细胞培养水平的模型,实时考察模型形成过程中细胞的跨膜电阻值(TEER)及通透性.并运用该模型对丹酚酸组分中可能作用于CNS的有效活性成分进行筛选,利用液质联用技术对筛选出的化合物进行初步鉴定.结果 HA诱导HBMEC产生较高的跨膜电阻,于第10天达300 Ω/cm2,荧光素钠检测内皮细胞形成的紧密连接,其跨体外BBB模型的渗透系数为(2.659±0.730)×10-3 cm/min.利用该模型从丹酚酸组分中筛选出至少有6个成分能够穿越BBB模型,这6个成分被确认为丹参素、原儿茶酸、咖啡酸、异阿魏酸、紫草酸、迷迭香酸.结论 建立的体外模型在跨膜电阻和通透性方面具备了在体的基本特性,为CNS药物的快速、高通量筛选提供实验依据.
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不同采收期牛至叶提取物体外抗氧化和降糖活性研究
目的 对比研究不同采收期牛至叶提取物的物质组成与体外抗氧化和降糖活性.方法 采用乙腈-水(1:1)提取制备牛至叶提取物,福林酚法测定其中总酚含量,AlCl3比色法测定其中总黄酮含量,LC-Q-TOF-MS法分析主要成分.采用ABTS自由基清除和FRAP总抗氧化实验评价不同采收期牛至叶提取物的抗氧化活性,荧光葡萄糖摄取法和对α-葡萄糖苷酶的体外抑制实验评价不同采收期牛至叶提取物体外降糖活性.结果 从牛至叶提取物中鉴定出6种主要成分,分别为牛至苷I、木犀草素7-O-葡萄糖醛酸苷、芹菜素7-O-葡萄糖醛酸苷、迷迭香酸、紫草酸、牛至苷I衍生物;提取物中总酚含量以开花期7月份采收的高,总黄酮含量以成熟期9月份采收的高.不同采收期牛至叶提取物均有较好的抗氧化和降糖作用,其中7月份采收的牛至叶提取物体外抗氧化活性强,10月份采收的牛至叶提取物体外降血糖活性强.结论 牛至叶乙腈-水(1:1)提取物具有潜在的抗氧化及降糖活性,其抗氧化及降糖活性强度受牛至叶采收时间的影响.
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HPLC法测定丹参中原儿茶醛
丹参是临床上常用的活血化瘀的要药,为唇形科植物丹参Salvia miltiorrhiza Bunge的根.丹参的活性成分主要分为脂溶性和水溶性两类.其脂溶性成分主要是丹参酮、隐丹参酮、丹参酮ⅡA等.然而中医传统用药方法是用其水煎剂,即丹参的水溶性部位.所以研究丹参的水溶性成分更有意义.丹参水溶性成分主要是丹参素、原儿茶醛、迷迭香酸、紫草酸以及丹酚酸A、B、C、D、E、F、G等.<中国药典>2000年版中对丹参仅测定丹参酮ⅡA一种成分,在<中国药典>2005年版中增加了丹酚酸B的HPLC测定,但原儿茶醛一直未做要求,该成分在制剂(丹参注射液)中作为质量控制成分之一,本实验建立了一种用HPLC测定丹参中原儿茶醛,为控制丹参药材质量又提供了一种可靠的方法.
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丹参茎叶酚酮有效部位的提取纯化工艺研究
目的 对丹参茎叶酚酮有效部位提取纯化工艺进行优选.方法 采用超高效液相色谱仪检测,以丹参茎叶中酚酸类(丹参素、原儿茶酸、原儿茶醛、咖啡酸、丹酚酸B、迷迭香酸、紫草酸)及黄酮类成分(芦丁、异槲皮苷、山柰酚-3-O-芸香糖苷、紫云英苷)二者提取量、总提取量及浸膏得率为评价指标,通过单因素及正交试验考察提取方法、提取溶剂、料液比、提取时间及提取次数对丹参茎叶提取工艺的影响;采用大孔吸附树脂纯化丹参茎叶提取物并对纯化工艺参数进行考察,确定佳纯化工艺.结果 以50％乙醇8倍量回流提取3次,每次提取1.0 h为佳提取工艺;以AB-8型大孔吸附树脂纯化,1.o g/mL药液上样,上样量为每10克干树脂上样1.5 g干燥提取物,40％乙醇洗脱,洗脱用量3 BV为佳纯化工艺,酚酸类及黄酮类成分总纯度可达到41.83％.结论 优选的提取工艺稳定可行,适用于丹参茎叶酚酮有效部位的提取纯化,可为丹参茎叶的进一步开发提供参考.
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HPLC-MS法测定大鼠注射丹红注射液后血浆中3种酚酸类成分
目的 建立定量测定大鼠注射丹红注射液后血浆中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的方法.方法 采用HPLC-MS法,Diamonsil(钻石)C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,乙腈-0.4％甲酸水溶液为流动相,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min,MS检测器选用正离子模式.结果 迷迭香酸在0.45～100.0 μg/mL(r2=0.996 5)线性关系良好,回收率在85.0％～101.4％,日内、日间精密度的RSD＜8％;紫草酸在0.45～100.0 μg/mL(r2=0.995 9),线性关系良好,回收率在84.4％～93.94％,日内、日间精密度的RSD＜9％;丹酚酸B在0.7～200.0 μg/mL(r2=0.998 9)线性关系良好,回收率在80.0％～97.4％,日内、日间精密度的RSD＜5％.结论 所建立的方法灵敏度好、准确率高,可用于丹红注射液中酚酸类成分药动学研究.
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HPLC-UV同时测定丹参多酚酸提取物中丹酚酸Y及其他3种酚酸类成分含量
目的:建立同时检测丹参多酚酸提取物中丹酚酸Y、迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B的HPLC-UV方法.方法:采用色谱柱Agilent Eclipse Plus C18(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相为0.05％磷酸水-乙腈(78∶22),等度洗脱;流速0.7 mL·min-1;检测波长288 nm;柱温25℃.结果:迷迭香酸线性回归方程为Y=30.268X-12.638,R2=0.9997,线性范围4.00～40.00μg·mL-1,平均回收率101.05％(RSD 2.74％);紫草酸线性回归方程Y=17.554X-15.392,R2=0.9996,线性范围5.28～52.80μg·mL-1,平均回收率102.08％(RSD 3.19％);丹酚酸B线性回归方程Y=16.535X-204.7,R2=0.9997,线性范围为54.40～544.00μg·mL-1,平均回收率101.76％(RSD 2.16％);丹酚酸Y线性回归方程为Y=16.53X-58.335,R2=0.9997,线性范围为11.44～114.40 μg·mL-1,平均回收率99.65％(RSD 3.90％).结论:该方法操作简单、重复性好,可用于丹参多酚酸提取物中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和丹酚酸Y的含量同时测定.
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HPLC法同时测定神康宁丸中4种成分的含量
目的 建立RP-HPLC法同时测定神康宁丸中斯皮诺素、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B4种成分的含量.方法 采用高效液相色谱法(HPLC),以Platisil ODS(250 mm ×4.6 mm,5 mm)为分析柱,乙腈-体积分数为0.1％的磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速:1.0 mL· min-1,柱温:40℃,检测波长:340 nm,进样量:20 μL.结果 斯皮诺素、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B的质量浓度分别在1.032～ 10.32、0.460 0～4.600、1.736～ 17.36和21.12～211.2mg·L-1内与峰面积呈良好的线性关系(r≥0.999 6,n=6).斯皮诺素、迷迭香酸、紫草酸和丹酚酸B平均回收率分别为100.9％、101.3％、100.4％和99.8％(RSD≤1.5％,n=9).结论 所建立的HPLC法可用于神康宁丸的质量控制.
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NMR法同时测定注射用丹参多酚酸中的迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和甘露醇
目的 建立核磁共振(NMR)法同时测定注射用丹参多酚酸中迷迭香酸、紫草酸、丹酚酸B和甘露醇的含有量.方法 采用BRUKER AVANCEⅢ600超导核磁共振波谱仪采集谱图;质子频率为600.23 MHz;3-(三甲基硅烷)丙酸-d4钠盐为内标.结果 迷迭香酸在1.685 ～0.105 mg/mL(r2=0.999 3)、紫草酸在1.235 ～0.077 mg/mL(r2=0.999 4)、丹酚酸B在16.21 ～1.013 mg/mL (r2 =0.999 7)、甘露醇在12.54 ～0.784 mg/mL (r2 =0.999 5)范围内均呈良好的线性关系,加样回收率分别为104.4％、105.6％、104.1％和102.5％,RSD值分别为1.5％、1.7％、2.3％和2.2％.结论 该方法可同时测定注射用丹参多酚酸中的主要化学成分和辅料.
