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HPLC含量测定和DNA分子标记技术对不同产地金银花的鉴定
目的:通过指标成分含量测定及DNA分子标记技术对不同产地金银花样品进行鉴定,探讨DNA分子鉴定技术在中草药鉴别领域的应用前景.方法:以绿原酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙为指标成分,利用HPLC测定指标成分含量.提取金银花、山银花对照药材及河北和山东产地金银花样品DNA,检测DNA浓度和纯度,采用基于聚合酶链式反应(PCR)方法的DNA分子标记技术鉴别样品.结果:河北和山东产地金银花中绿原酸质量分数3.1％～3.3％,河北、山东产地金银花中木犀草苷质量分数分别为0.049％ ～0.050％,0.069％ ～0.078％,2个产地样品中均未检出灰毡毛忍冬皂苷乙成分.采用基于PCR方法鉴定出河北和山东产地各3批样品均为金银花.结论:DNA分子鉴定技术作为含量测定常规方法的补充,具有准确可靠、重复性高等优点,可用于金银花药材的鉴定.
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水银花中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含量测定方法
目的 建立水银花中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量测定方法.方法 对高效液相色谱法(HPLC)的色谱条件进行摸索,并采用正交设计法考察供试品溶液的制备条件.结果 HPLC色谱条件为:Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈(A)-0.4%醋酸(B)梯度洗脱,流速1.0 mL/min.样品供试液制备条件为:药材破碎度过四号筛,药材称样量为0.4 g,甲醇浓度为50%,提取时间为40 min.结论 建立的HPLC含量测定方法 准确可靠,可作为水银花中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙总量的测定方法.
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山银花(灰毡毛忍冬)适宜采收期研究
为了确定山银花(灰毡毛忍冬)的适宜采收期,测定不同发育时期的花蕾外观形态、产量和质量,比较一日内不同时段采摘花蕾的质量.结果表明,开花型和花蕾型灰毡毛忍冬不同发育阶段的花蕾外观形态具有较大的差异;随着花蕾发育,产量逐渐增加;开花型灰毡毛忍冬花蕾开放后(银花期、金花期)绿原酸含量极显著降低,开花前(幼蕾期、青色期、大白期)质量无显著差异;花蕾型灰毡毛忍冬黄白期灰毡毛忍冬皂苷乙显著降低,幼蕾期和青白期质量无显著差异.一日内不同时段采摘的灰毡毛忍冬绿原酸和3,5一二咖啡酰奎宁酸含量有显著差异.开花型灰毡毛忍冬的适宜采收期为大白期,采摘时段为10:00以前和18:00以后,花蕾型灰毡毛忍冬的适宜采收期为青白期,采摘时段为8:00以前和18:00以后.
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薄层色谱法鉴别双黄连口服液中金银花成分的改进
目的：对双黄连口服液中金银花的薄层色谱鉴别方法进行改进，并对其中是否使用山银花进行鉴别。方法采用薄层色谱法，先将供试品用乙酸乙酯和水饱和正丁醇分别提取后，制备成两份供试品溶液，再以金银花中成分木犀草苷、绿原酸以及山银花中的特征成分灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙作为对照品，分别点于高效预制硅胶G60薄层板上，利用两个展开系统，展开。一份喷以1%三氯化铝乙醇溶液，于紫外光灯（365nm）下检视并成像；另一份喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至条斑显色清晰，日光下检视并成像，进行分析。结果通过对两份薄层色谱图像分析比较，4份供试品均可检出绿原酸、木犀草苷，未检出山银花中的特征成分灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙，阴性对照样品均显示无干扰。结论该法可快速有效地对双黄连口服液中金银花成分进行鉴别和质量控制。
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薄层色谱法鉴别双黄连口服液中金银花成分的改进
目的：对双黄连口服液中金银花的薄层色谱鉴别方法进行改进，并对其中是否使用山银花进行鉴别。方法采用薄层色谱法，先将供试品用乙酸乙酯和水饱和正丁醇分别提取后，制备成两份供试品溶液，再以金银花中成分木犀草苷、绿原酸以及山银花中的特征成分灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙作为对照品，分别点于高效预制硅胶G60薄层板上，利用两个展开系统，展开。一份喷以1%三氯化铝乙醇溶液，于紫外光灯（365nm）下检视并成像；另一份喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至条斑显色清晰，日光下检视并成像，进行分析。结果通过对两份薄层色谱图像分析比较，4份供试品均可检出绿原酸、木犀草苷，未检出山银花中的特征成分灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙，阴性对照样品均显示无干扰。结论该法可快速有效地对双黄连口服液中金银花成分进行鉴别和质量控制。
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现时金银花与山银花比较鉴别分析
目的 对市售金银花与山银花真伪与种类鉴别的方法进行研究同时考察商品质量.方法 采用体视显微、薄层色谱、液-质联用、标识成分(绿原酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙)含量测定等方法对获得的27批样品进行了比较检定.结果 花表面腺毛非腺毛的有无及形态、花萼特征、是否检出灰毡毛忍冬皂苷乙可作为鉴别金银花与山银花的依据;27批样品中,16批为金银花,其中1批掺有加重粉;11批为山银花,其中7批灰毡毛忍冬、2批红腺忍冬、1批华南忍冬、1批黄褐毛忍冬.结论 体视显微特征和薄层色谱法可鉴别金银花与山银花,结合高效液相测定结果实现了对27批样品的质量考察与比较鉴别研究.
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水忍冬藤茎化学成分的研究
目的 研究水忍冬Lonicera dasystyla藤茎的活性物质基础.方法 采用硅胶柱色谱、凝胶Sephadex LH-20柱色谱及ODS反相柱色谱等进行分离纯化,通过质谱、核磁共振波谱技术等分析手段进行结构鉴定.结果 首次从水忍冬藤茎醇提浸膏的醋酸乙酯萃取部位分离得到9个化合物,分别鉴定为二氢芝麻素-9-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(1)、异阿魏酸(2)、对甲氧基香豆酸(3)、山柰酚-7-O-(2"-E-对香豆酰基)-α-L-吡喃阿拉伯糖苷(4)、灰毡毛忍冬皂苷乙(5)、马钱子苷(6)、山奈酚(7)、合金欢素(8)、槲皮素(9).结论 化合物1为新化合物,命名为二氢芝麻素-9-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,根据文献报道,化合物5、6为该属植物的特征成分;化合物2～4及8为首次从该属植物中分离得到.这些化学成分的分离鉴定为研究水忍冬藤茎的活性物质奠定了基础,对该植物的化学分类学有一定的指导意义.
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HPLC-ELSD法测定山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙
目的 为了建立高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)检测法测定山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的方法.方法 采用ZORBAX SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm),以乙腈-0.1％甲酸为流动相梯度洗脱,以蒸发光散射检测器检测绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙.结果 绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙、川续断皂苷乙的回归曲线分别在3.00～6.40 μg,4.24～9.33 μg,0.40 ～2.00μg的质量范围内线性关系良好,r2分别为0.999、0.993、0.999.结论 该方法操作简便,结果准确,专属性强,分离效果和重复性好,可有效缩短总分析时间,为较全面控制山银花药材的质量控制提供了简便可靠的方法.
关键词： 山银花 绿原酸 灰毡毛忍冬皂苷乙 川续断皂苷乙 高效液相色谱仪-蒸发光散射检测器 -
口炎清颗粒质量标准的改进
目的 改进口炎清颗粒(天冬、玄参、山银花等)的质量标准.方法 TLC法对天冬、玄参、山银花和甘草进行定性鉴别.HPLC法定量测定山银花中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷、川续断皂苷乙含有量.结果 TLC斑点清晰,专属性强.绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙均呈良好的线性关系(r ＞0.999 9),平均加样回收率(n=6)95％ ～ 102％.结论 增加对山银花指标性成分灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙含有量的测定,可完善口炎清颗粒的质量标准.
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小儿咳喘灵颗粒中金银花的质量分析
目的 对26个厂家生产的小儿咳喘灵颗粒(麻黄、金银花、苦杏仁等)中的金银花质量进行系统的研究.方法 采用薄层色谱法对样品中的金银花进行定性鉴别;采用HPLC法测定样品中金银花的绿原酸含有量;采用HPLC-ELSD法测定样品中灰毡毛忍冬皂苷乙的含有量.结果 26批样品中有12批检出灰毡毛忍冬皂苷乙,表明存在原料中掺有山银花的现象.结论 测定小儿咳喘灵颗粒中的绿原酸和灰毡毛忍冬皂苷乙,可有助于监控其质量.
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山银花不同物候期总皂苷的含量测定
目的 建立山银花药材中总皂苷含量测定方法.方法 采用分光光度法,以香草醛-高氯酸为显色剂,在477 nm处测定不同物候期山银花药材中总皂苷的含量.结果 灰毡毛忍冬皂苷乙在0.501～6.012 μg·mL-1内呈良好的线性关系,平均加样回收率为100.1％.山银花花蕾不同发育期样品中总皂苷含量差异明显,以灰毡毛忍冬皂苷乙计,总皂苷含量在8.00％～21.41％内均有分布.结论 山银花整个花期皂苷类成分差异明显,其中银花期含量高,米蕾期低.本实验为山银花药材的采收加工提供了数据支撑.
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灰毡毛忍冬花蕾提取物及其两种主要皂苷的溶血性研究
目的：评价灰毡毛忍冬花蕾提取物、灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙的体内外溶血作用。方法采用肉眼观察法和紫外分光光度法，观察灰毡毛忍冬花蕾提取物、灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙浓度梯度为5、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100 mg·L -1的溶液在体外对2%兔红细胞悬浮液的溶血反应；采用血液生化指标测定方法，分别检测灰毡毛忍冬花蕾提取物2．275 g·kg -1(生药)和1．137 g· kg -1(生药)组、灰毡毛忍冬皂苷乙0．110 g·kg -1和0．055 g ·kg -1组、川续断皂苷乙0．020 g·kg -1和0．010 g·kg -1组以及生理盐水组，在小鼠尾静脉给药前及连续给药7 d 后，血液中红细胞数、网织红细胞数、血红蛋白含量。结果在体外溶血试验中，各给药组溶血率均<5%，与对照组相比均未见明显的溶血现象(P >0．05)；在体内溶血试验中，各组小鼠用药前后，血液红细胞数、网织红细胞数、血红蛋白含量均处于正常范围内，且其数值在给药前后无差异( P >0．05)。结论在本试验条件下，灰毡毛忍冬花蕾提取物、灰毡毛忍冬皂苷乙与川续断皂苷乙，在体外和体内试验均未导致溶血。
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HPLC-ELSD法检查抗感颗粒中山银花皂苷类成分
目的：建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器（HPLC - ELSD）测定方法，对抗感颗粒进行山银花检查。方法以山银花中两种专属三萜皂苷—灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙作为指标成分，采用 Thermo Hypersil Gold C18色谱柱（4.6 mm ×250 mm，5μm），以水-乙腈为流动相进行梯度洗脱，柱温32℃，体积流量1.0 mL·min -1，蒸发光散射检测器检测（漂移管温度90℃，雾化器温度60℃，N2载气流速1.6 L·min -1）。结果在收集的53批样品中，49批样品检出了至少一种山银花专属三萜皂苷，存在以山银花投料的情况。结论建立的方法准确、可靠，专属性强，可用于检查抗感颗粒中山银花的使用情况。
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清热解毒口服液中山银花的检查方法研究
目的：建立薄层色谱法和高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC - ELSD），对清热解毒口服液进行山银花检查。方法清热解毒口服液样品以 D101大孔吸附树脂处理，富集山银花的特征成分灰毡毛忍冬皂苷乙。以该成分为山银花的检出指标，采用 TLC 法进行样品的初筛，并以 HPLC - ELSD 法进行限量检查。结果两个厂家提供的样品中检出山银花。结论建立的方法简便、准确，可用于判断清热解毒口服液中金银花的投料情况。
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金银花与山银花的鉴别方法研究
目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法(HPLC-ELSD)定性鉴别方法,以区分金银花与山银花及其制剂.方法 以灰毡毛忍冬皂苷乙为指标成分,十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;乙腈-0.4%醋酸为流动相,梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,用蒸发光散射检测器.结果 金银花及其制剂未检出灰毡毛忍冬皂苷乙,山银花及其制剂均检出.结论 建立的HPLC-ELSD定性鉴别方法,可用于金银花及其提取物和制剂中非法添加山银花的检查,为规范金银花药材市场提供技术支持.
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山银花提取物定性定量方法考察
目的:对山银花提取物进行定性定量研究,为其质量控制提供依据.方法:采用Acclaim 120 C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.4％磷酸溶液为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 ml·min-1,检测波长327 nm,柱温为25℃,测定绿原酸的含量;并以绿原酸为参照物,通过特征图谱鉴别6种有机酸.同时采用HPLC法对灰毡毛忍冬皂苷乙进行定性鉴别.结果:绿原酸在23.61～141.65μg·ml-1范围内线性关系良好(r=0.9998),回收率为98.8％,RSD 1.4％(n=6).灰毡毛忍冬皂苷乙为山银花提取物中的特征性成分,专属性强.结论:本法简便、可靠、准确,可用于山银花提取物的质量控制.
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复方鱼腥草片中山银花检查方法的建立
目的：：对复方鱼腥草片中金银花的质量进行研究。方法：建立以灰毡毛忍冬皂苷甲、灰毡毛忍冬皂苷乙及川续断皂苷乙为对照的HPLC-ELSD和LC-MS/MS法检查山银花的方法。结果：HPLC-ELSD法适用于复方鱼腥草片中山银花的检查，并采用LC-MS/MS法对结果进行验证，能鉴别出样品中所用正伪品金银花药材。结论：上述2种方法均可用于控制复方鱼腥草片中金银花的质量。
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泸州古蔺山银花指纹图谱及一测多评同时检测研究
目的:建立HPLC指纹图谱及一测多评同时检测泸州古蔺山银花中9个成分的质量分析方法.方法:以绿原酸为参照物,建立泸州古蔺山银花HPLC指纹图谱,并采用斜率校正法计算其与新绿原酸、隐绿原酸、獐牙菜苷、3,4-二咖啡酰奎宁酸、3,5-二咖啡酰奎宁酸、4,5-二咖啡酰奎宁酸、灰毡毛忍冬皂苷乙及川续断皂苷乙的相对校正因子,分别用外标法和一测多评法计算含量.结果:建立了10批古蔺山银花HPLC指纹图谱,相似度均在0.99以上,标定了11个共有峰,指认了其中9个共有峰,并分别采用外标法和一测多评检测其含量,二者无显著差异.结论:实验将一测多评和指纹图谱相结合评价泸州古蔺山银花的质量,该方法准确、简便、可行,为更全面控制山银花的质量提供参考依据.
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湖南产不同种质、采收期、加工方法的山银花质量对比研究
目的 比较湖南产不同种质、采收期和加工方法的山银花中主要有效成分含量的差异.方法 采用WatersSymmetry C18(150 mm×4.6 mm,5 μm)为色谱柱,流动相为0.4%冰醋酸-乙腈(梯度洗脱),流速为1.0 mL/min;高效液相色谱(HPLC)-紫外检测(UV) 法测定山银花中绿原酸的含量, 检测波长为330 nm;HPLC-蒸发光散射检测器(ELSD) 法测定此药材中灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量.结果 不同山银花样品中绿原酸含量为3.73%～8.23%,灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的总含量为4.16%～8.53%.其中,绿原酸含量和灰毡毛忍冬皂苷乙及川续断皂苷乙之和含量高的是采自三青期的野生山银花,为8.23%、8.53%,微波干燥加工后的山银花中上述成分含量分别为7.05%、7.08%,其他加工方法含量均有不同程度降低.结论 野生山银花的质量优于栽培山银花,三青期采摘及微波干燥得到的山银花的质量优,本试验结果可为山银花人工培育和采收加工提供实验依据.
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不同厂家口炎清产品中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的含量比较
目的 研究不同厂家口炎清的质量情况,为提高药品标准、正确评价药品质量提供理论依据.方法 采用高效液相色谱(HP LC)法对4个厂家生产的10批口炎清中的主要成分绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙的质量分数进行测定,色谱柱为Waters XBridgeTM C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温为30℃,流速为1 mL/min;流动相为乙腈-0.4％(体积分数)醋酸(梯度洗脱),绿原酸采用二极管阵列检测器(PDAD)检测,检测波长为330 nm,灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙用蒸发光散射检测器(ELSD)检测,检测条件:雾化室温度60 ℃,漂移管温度65 ℃,N2的载气流量1.6 L/min,进样量8μL.结果 不同厂家口炎清产品中绿原酸、灰毡毛忍冬皂苷乙和川续断皂苷乙质量分数差别较大.口炎清颗粒剂的质量相比胶囊剂和片剂较好;口炎清胶囊中不但灰毡毛忍冬皂苷乙质量分数非常低,而且检测不到川续断皂苷乙;口炎清片样品中灰毡毛忍冬皂苷乙的质量分数却异常高.结论 不同厂家的口炎清产品由于原材料质量、制剂工艺等不同,导致了产品中有效成分的质量分数存在较大差异.
