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中药柴胡与常见混伪品的鉴别方法分析
目的 探讨中药柴胡与常见混伪品的鉴别方法 .方法运用薄层色谱鉴别、植物鉴定、DNA分子鉴定以及药材性状鉴别方法,鉴别中药柴胡与常见混伪品.结果 中药柴胡与锥叶柴胡在薄层色谱、药材性状以及植物状态方面的区别明显;经DNA分子鉴定,结果显示,与种内大K-2-P距离相比,锥叶柴胡和中药柴胡的小种间K-2-P距离较大;同时,与常见混伪品相比,中药柴胡呈现出单系性,容易区分.结论 运用DNA分子鉴定+薄层色谱鉴别+药材性状鉴别的方式有助于准确区分中药柴胡与常见混伪品.
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菊属植物DNA分子鉴定研究进展
本文对以药用植物菊和野菊为代表的菊属植物DNA分子鉴定研究现状进行了整理和归纳，对基因组原位杂交、DNA分子标记以及DNA条形码等代表性的DNA分子鉴定技术在菊属植物中的研究进行了总结、讨论和展望，为菊属植物的分类鉴定和整理交流提供了科学依据。
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HPLC含量测定和DNA分子标记技术对不同产地金银花的鉴定
目的:通过指标成分含量测定及DNA分子标记技术对不同产地金银花样品进行鉴定,探讨DNA分子鉴定技术在中草药鉴别领域的应用前景.方法:以绿原酸、木犀草苷、灰毡毛忍冬皂苷乙为指标成分,利用HPLC测定指标成分含量.提取金银花、山银花对照药材及河北和山东产地金银花样品DNA,检测DNA浓度和纯度,采用基于聚合酶链式反应(PCR)方法的DNA分子标记技术鉴别样品.结果:河北和山东产地金银花中绿原酸质量分数3.1％～3.3％,河北、山东产地金银花中木犀草苷质量分数分别为0.049％ ～0.050％,0.069％ ～0.078％,2个产地样品中均未检出灰毡毛忍冬皂苷乙成分.采用基于PCR方法鉴定出河北和山东产地各3批样品均为金银花.结论:DNA分子鉴定技术作为含量测定常规方法的补充,具有准确可靠、重复性高等优点,可用于金银花药材的鉴定.
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基于叶绿体psbA-trnH基因间区序列鉴定山东丹参为新种
为从分子水平鉴定山东丹参(Salvia shandongensis)及其近缘物种,本研究采用psb A-trnH序列对山东丹参、丹参(S.miltiorrhiza)和白花丹参(S.miltiorrhizaf.alba)共计33份材料进行了PCR扩增并测序,获得了该间隔区的完整序列.采用CodonCodeAligner进行序列拼接,应用MEGA5.0计算山东丹参及其近缘种的种内、种间的K2P距离,构建UPGMA树.结果显示,山东丹参psbA-trnH序列长度约为391 bp,丹参和白花丹参psbA-trnH序列长度约为386 bp,psbA-trnH序列在山东丹参及其近缘种种间存在丰富的变异,山东丹参种内平均K2P遗传距离为0,丹参和白花丹参种内平均K2P遗传距离分别为0.002和0.001,山东丹参与丹参种间遗传距离为0.034～0.04,与白花丹参种间遗传距离为0.005～0.008,山东丹参种内平均K2P遗传距离均远远小于丹参和白花丹参种间平均K2P遗传距离；聚类结果显示山东丹参与丹参、白花丹参(变型)可明显区分,这与形态分类特征相符.本研究首次从分子水平确立了山东丹参在植物分类学上的地位,揭示了山东丹参与近缘种之间的亲缘关系,为山东丹参药用植物新资源的开发提供DNA遗传分子鉴定的科学依据.研究结果表明psbA-trnH基因间区可作为条形码来鉴定山东丹参及其近缘种.
关键词： sbA-trnH基因间区 山东丹参 丹参 白花丹参 DNA分子鉴定 -
南柴胡与常见混伪品的鉴别方法研究
目的 研究建立南柴胡与混伪品锥叶柴胡的鉴别方法.方法 采用植物鉴定、药材性状鉴别、薄层色谱鉴别及DNA分子鉴定方法,对南柴胡及其混伪品锥叶柴胡进行鉴别研究.结果 南柴胡与锥叶柴胡在植物形态、药材性状、薄层色谱方面有较明显的区别,DNA分子鉴定表明,南柴胡和锥叶柴胡的小种间K-2-P距离大于种内大K-2-P距离,NJ树中柴胡的不同基原样品各聚为一支,南柴胡与锥叶柴胡等其他混伪品分别表现出单系性,可明显区分开.结论 本实验在对南柴胡及锥叶柴胡原植物形态学比较研究的基础上,找出了两者主要的鉴别特征,同时采用药材性状鉴别、薄层色谱鉴别与DNA分子鉴定手段相结合的方式模式,建立了南柴胡和锥叶柴胡的鉴别要点.DNA分子鉴定技术是传统鉴别技术的重要补充,具有很大的潜力和应用前景.
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动物类中药材质量评价研究概况及分析
目的:探讨如何进行动物类药材的质量评价,提出从鉴定真伪、质量优劣及安全性等方面综合评价动物类药材质量的思路.方法:综合分析国内外近十年来动物类药材的鉴定、研究成果,找出研究方向及技术手段.结果:采用DNA分子鉴定技术,解决药材质量真假问题;采用色谱法结合生物测定法,解决药材质量优劣问题,以及关注外源性安全物质对动物类中药安全性的影响.结论:结合动物药材的特点,寻找出符合当前动物药材实际应用的品种鉴定与质量检测的方法与指标,是解决动物药材品质评价问题的关键.
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医学蛭类DNA分子鉴定研究进展
本文概述了DNA分子技术用于医学蛭类的遗传进化、物种分类、药材鉴定等方面的国内外研究成果，总结了蛭类鉴定中常用的线粒体基因组，分析DNA分子技术在中药动物类药材鉴定上的应用思路。
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植物叶绿体ycf15基因应用于药用植物鉴定的前景展望
叶绿体普遍存在于绿色植物中,ycf15基因位于叶绿体基因组IR区,长度一般为250～550 bp,高度保守,目前对该基因研究较少.就有限的研究成果来看,其独特的序列结构及其显现的丰富多样的遗传信息不仅具有一定的物种鉴定意义,而且在植物系统进化分析研究中有较大的潜力.同时,ycf15基因具有保守性高、片段长度较小、无需克隆测序等特点,在进一步构建中药材鉴定DNA条形码中具有独特优势.从ycf15基因的结构特点、物种鉴定与系统学意义几方面进行梳理并展望其在药用植物鉴定中的应用前景.
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线粒体基因在药用植物DNA分子鉴定中的应用
线粒体是植物细胞中重要细胞器之一,蕴含丰富的DNA信息,与叶绿体基因组、核基因组相结合,能客观地反映物种、居群甚至个体间的遗传特性.针对植物线粒体基因组的基本特征及其在中药DNA分子鉴定中的应用价值、研究现状与进展进行综述.
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HPLC含量测定和DNA分子标记技术对重楼属药用植物的鉴定
目的:通过指标成分含量测定与DNA分子标记技术对重楼属药用植物样品进行鉴定,探讨DNA分子鉴定技术在中草药鉴别领域的应用前景.方法:以重楼皂苷I、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ为指标成分,利用HPLC测定指标成分含量,并用单因素方差分析对其根茎中甾体皂苷活性成分的差异进行评价;采用基于聚合酶链式反应(PCR)方法的DNA分子标记技术鉴别样品.结果:重楼属10种药用植物根茎中重楼皂苷I、Ⅱ、Ⅵ、Ⅶ及总皂苷的含量具有极显著差异(P＜0.01),且其主要化学成分种类也存在较大差异;同时ITS2序列与NJ树结果能有效区分重楼属10种药用植物.结论:DNA分子鉴定技术作为含量测定常规方法的补充,具有准确可靠、重复性高等优点,可用于重楼属药用植物的鉴定.
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密脉鹅掌柴居群的ITS1和ITS2分子鉴定研究
目的 对密脉鹅掌柴3个居群内的ITS区DNA序列进行生物信息分析.方法 采用ITS区特异引物ITS4/ITS5对密脉鹅掌柴3个居群进行PCR扩增并测序.结果 密脉鹅掌柴的ITS区全序列总长为658bp,其中ITS1、5.8S和ITS2序列长度分别为223bp、164bp和223bp.在ITS1、ITS2片段上,3个居群的密脉鹅掌柴种间K2P小遗传距离均大于种内K2P大遗传距离,NJ系统发育树也显示3个居群的密脉鹅掌柴均可与Genbank数据库中鹅掌柴属17个外源种植物鉴别开,其中ITS2和ITS1序列上分别具有2个和1个有效鉴别位点.结论 ITS1和ITS2序列均适用于密脉鹅掌柴的DNA条形码,且ITS2比ITS1更适合密脉鹅掌柴的分子鉴定.
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中药检验新技术在《中华人民共和国药典》的应用
为了促进现代仪器分析技术在中药检验中的应用,进一步提高和完善中药质量标准,综述2010年版<中华人民共和国药典>一部新增检验技术:DNA分子鉴定、中药指纹图谱、液相色谱-质谱联用技术、薄层色谱-生物自显影的应用概况.
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野生与栽培密银花品质对比分析
目的:通过对野生和栽培密银花品质进行对比分析,为密银花的质量评价提供科学依据.方法:以性状鉴别法和显微鉴别法分别比较2类密银花的性状特征和显微特征;采用中国药典方法测定有效成分绿原酸、木犀草苷含量;DNA分子标记鉴定不同品种的金银花.结果:野生与栽培密银花的性状特征、显微特征、绿原酸和木犀草苷的含量存在差异;对密银花PCR反应体系和扩增程序进行了优化,并从11对引物中筛选出1对具有鉴别意义的引物.结论:实验结果可为密银花药材质量的综合评价提供科学依据.
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应用位点特异性引物鉴定白花蛇舌草
目的:建立一种简便实用的白花蛇舌草药材的DNA分子鉴定方法.方法:收集目前市场上出现的白花蛇舌草及伪品共9种,分别提取总DNA,扩增rDNA ITS-2区序列,对比所有样品的该段核苷酸序列,并设计能专一性鉴别白花蛇舌草的位点特异性引物.结果:白花蛇舌草及其混淆品在ITS-2区的序列有显著差异.用位点特异性引物对所有样品DNA进行PCR扩增,只有白花蛇舌草有明显的约392 bp扩增产物,而其它8种植物在同等条件下无阳性产物.结论:所设计的鉴别引物对白花蛇舌草有高度的特异性.
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DNA分子鉴定技术在中成药真伪性鉴别中的应用与研究进展
中成药真伪性的准确鉴定是临床用药安全有效的前提所在,DNA分子鉴定技术是分子生物学上的一种常规技术,应用于中成药真伪性的鉴别是对目前中药质量控制体系的有效补充.本文主要从中成药DNA分子鉴定常规操作流程及DNA分子鉴定在中成药的真伪性鉴别中的应用研究方面进行了综述,并对其应用过程中存在的问题和发展前景进行了总结和展望.
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基于ITS2条形码的玛咖药材鉴别及9种元素的测定
目的:利用DNA分子鉴别技术,从分子水平快速、准确鉴别玛咖药材及其同科混伪品植物;采用石墨炉原子吸收分光光度法(GFASS)和火焰原子吸收分光光度法(FASS)测定不同产地玛咖中镉(112Cd)、铜(63Cu)、铅(207pb)、铬(52Cr)4种有害重金属元素以及钙(40Ca)、镁(24Mg)、钠(23Na)、钾(39K)、铁(56Fe)5种元素的含量,并进行安全性评价.方法:利用DNA试剂盒提取玛咖及其混伪品(萝卜、芜根)样本共9个,PCR扩增其提出的DNA并进行双向测序,应用CodonCode Aligner V 6.0.2软件对峰图进行校对拼接,比较其内转录间隔区2(ITS2)的GC含量,结合在GenBank上下载的7条序列,采用MEGA 6.0软件计算种内、种间Kimura 2-parameter(K2P)遗传距离,后构建邻接树(NJ tree)进行系统聚类分析.采用微波消解进行前处理,使用石墨原则吸收法和火焰原子吸收法分别对不同产地玛咖中的9种元素进行测定,对比《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》,对玛咖的安全性进行评价.结果:玛咖的ITS2序列长度为190bp,其中GC含量为54.7％,同时其二级结构明显与其混伪品存在差异,可以根据NJ tree将其与其他混伪品区分开来.微量元素标准曲线线性相关度均大于0.999 0,Cd、Cu、Pb、Cr、Ca、Mg、Na、K、Fe元素的回收率分别为93.2％、96.7％、95.4％、102.7％、94.3％、95.7％、105.9％、96.4％、98.1％.参照《药用植物及制剂进出口绿色行业标准》中的重金属元素限量标准,部分产地玛咖中的Cd元素含量超标,并且不同产地玛咖中各个元素的含量有一定的差异.结论:ITS2可以作为DAN条形码对玛咖与其混伪品进行准确、快速的鉴别,为玛咖的鉴定提供准确的分子依据.GFASS法快速、准确,灵敏度高,无背景影响,成本低廉,可较好地用于中药材中重金属残留量的测定,并且通过对玛咖中元素的研究,对确保其质量和安全性有着重要的意义.
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铁皮石斛的ITS2条形码分子鉴定及5种重金属及有害元素的测定
目的:应用DNA条形码技术,从分子水平快速、准确地鉴定我国12个省区铁皮石斛栽培基地铁皮石斛(Dendrobium officinale Kimura et Migo)及其同属常见植物的基原,采用微波消解ICP-MS技术测定各地铁皮石斛中铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)、汞(Hg)、铜(Cu)5种重金属及有害元素的含量,评价栽培铁皮石斛的用药安全.方法:提取各样本总DNA,对rDNA的第二内转录间隔区(ITS2区)进行扩增,计算种内、种间Kimura 2-parameter (K2P)遗传距离,通过与中药材DNA条形码鉴定系统比对和构建N-J (Neighbor-Joining)系统树进行基原鉴定.建立微波消解方法进行样品前处理,ICP-MS法对铁皮石斛中5种重金属及有害元素进行测定,比对国内外现行标准,对铁皮石斛的安全性进行评价.结果:铁皮石斛的ITS2序列长度在246～340bp范围,种内变异较小,种内大K2P遗传距离为0.009,铁皮石斛及其混伪品的种间平均K2P遗传距离为0.206,种间小K2P遗传距离明显大于种内的大K2P遗传距离.经与中药材DNA条形码鉴定系统比对及构建N-J树进行基原鉴定.结果表明ITS2序列可区分铁皮石斛及其近缘种.5种重金属及有害元素的测定结果表明各地的含量差异较显著,但在安全的范围内.结论:ITS2片段DNA条形码可有效鉴定中药铁皮石斛及其常见同属植物的基原,建立的ICP-MS法测定铁皮石斛中5种重金属与有害元素的方法准确、可行,各元素的含量在现行相关标准的安全范围内.
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基于ITS序列分析鉴别冬虫夏草与古尼虫草
目的:冬虫夏草与古尼虫草在外观上相似度高,易混淆,本研究将从基因水平对两者进行准确鉴别.方法:通过聚合酶链式反应扩增,得到样品的内转录间隔区(ITS)序列,同时从GenBank下载2种虫草的ITS序列;利用CodonCode Aligner 和MEGA软件对ITS序列进行分析,找到2种虫草差异的酶切位点;通过聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)实验进行验证.结果:在ITS序列上,冬虫夏草存在1个SacⅡ酶切位点,而古尼虫草不具有该位点.PCR-RFLP的实验结果表明,冬虫夏草ITS序列的PCR产物可被限制性内切酶SacⅡ切割为2个片段,大小分别约为488 bp和128 bp,古尼虫草不能被SacⅡ切割,所以酶切前后其PCR产物在琼脂糖凝胶图上的位置没有变化.从子实体取样和从虫体取样得到一致的结果.结论:PCR-RFLP法可以将冬虫夏草与古尼虫草明确区分,取样部位不同对本方法的结果没有影响.
