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白花丹参水提物对糖尿病肾病大鼠肾功能的保护作用
目的 观察白花丹参水提物对实验性糖尿病肾病大鼠肾功能的影响,明确其治疗作用.方法 以高糖高脂饮食喂养的78只雄性Wistar大鼠尾静脉注射链脲佐菌素(STZ)35 mg·kg-1建立糖尿病肾病(DN)模型,随机分为空白组、模型组、西药组、中药大、中、小剂量组,分别于给药第6周和12周后测24 h尿蛋白、尿微量白蛋白(mAlb)、空腹血糖(FPG)、血清肌酐(Scr)、血尿素氮(BUN)、甘油三脂(TG)、α1-微球蛋白(α1-MG)和尿转铁蛋白(TRF)等指标,进行统计分析.结果 与模型组相比,中药组、西药组对糖尿病肾病模型大鼠血糖和肾功能均有显著的治疗作用,FPG、Scr、BUN、TG、24 h尿蛋白、mAlb、α1-MG和TRF等指标均优于模型组(P＜0.01);中药治疗组随剂量的增加,效果显著提高,而以中药大剂量组效果好,明显优于其他各组(P＜0.01).结论 白花丹参水提物对糖尿病肾病大鼠肾功能有显著的保护作用,可以改善肾功能,延缓糖尿病肾病的发生发展.
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白花丹参不同部位的红外光谱三级鉴定
目的:对白花丹参不同部位进行红外光谱分析.方法:采用红外光谱三级鉴定法(红外光谱、二阶导数谱以及二维相关谱),对白花丹参根、茎、叶、花的粉末、脂溶性和水溶性提取物进行分析鉴定.结果:叶在有效成分特征吸收区1 800～1 200 cm-1波段峰强高于根、茎、花.一维图谱中,除花外,脂溶性提取物根、茎、叶均有邻醌C=O特征吸收1 692,1 670 cm-1峰出现;水溶性提取物叶、花的丹酚酸B芳香化合物骨架振动1 610 cm-1峰较根、茎明显.二阶导数谱中,脂溶性提取物和水溶性提取物均出现标准品谱图的特征峰,印证一维谱图结论;二维相关光谱中,白花丹参不同部位自动峰位置及强度均不相同.结论:白花丹参不同部位化学成分种类及含量有所差异,茎、叶、花是值得进一步开发利用的资源.
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白花丹参及其提取物中总丹酚酸含量测定方法研究
目的:建立并测定白花丹参及其提取物中总丹酚酸的含量.方法:采用亚硝酸钠-硝酸铝配位显色法,以供试品溶液和对照品溶液紫外-可见吸收图谱一致性为依据,比较丹酚酸B、丹参素钠和原儿茶醛作对照品的合理性;对亚硝酸钠-硝酸铝配位显色法中各显色剂加入量、加入显色剂后放置时间进行了考察,进行方法学考察.结果:丹酚酸B更适合作对照品,佳显色条件为:精密加入1％NaNO2 2.5 mL,暗处放置10 min,再精密加入20％ Al(NO3)3 0.25 mL,暗处放置10 min,再精密加入1 mol· L-1 NaOH 4 mL,暗处放置15 min.丹酚酸B在0.028 ～0.309 mg线性关系良好(r=0.999 9),白花丹参和提取物的回收率分别为96.29％,99.53％.5个批次白花丹参总丹酚酸的含量在5.65％ ～6.19％,提取物中总丹酚酸的含量在61.03％ ～61.96％.结论:建立了亚硝酸钠-硝酸铝配位显色法测定白花丹参及其提取物中总丹酚酸含量的方法.
关键词： 白花丹参 提取物 总丹酚酸 含量测定 亚硝酸钠-硝酸铝配位显色法 -
白花丹参提取工艺优选
目的:优选白花丹参提取工艺.方法:以丹酚酸B、总丹酚酸、丹参酮ⅡA及总丹参酮含量为指标,采用高效液相色谱法、紫外-可见分光法及比色法测定指标成分含量,选取乙醇体积分数、提取时间、加醇量、药材粒度和提取次数等为考察因素,采用正交试验法优选白花丹参乙醇回流提取工艺.结果:佳提取工艺为白花丹参切段后用10倍量60％乙醇提取3次,每次2h.结论:优选工艺对白花丹参药材中的脂溶性成分和水溶性成分均有较高提取率,且稳定、节能.
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湖南地区白花丹参的引种试验研究
目的:探讨从山东莱芜引种到湖南地区的白花丹参药材的产量及质量.方法:相同条件种植白花丹参和紫花丹参,计算2种丹参根的条数、粗细、根的鲜干质量,采用高效液相色谱法测定丹参中丹参酮ⅡA和丹酚酸B的含量,并对根横切面的显微特征进行研究.结果:引种后的白花丹参有效成分含量符合药典标准,产量显著提高,二者的根横切面显微特征有明显的差异.结论:白花丹参适合在湖南种植,可作为优质的丹参资源在湖南引种并开发利用.
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泰山白花丹参提取物对人脐血内皮祖细胞增殖、黏附及分泌NO的影响
目的:观察单味中药泰山白花丹参提取物( SBE)对人脐血内皮祖细胞(EPCs)增殖、黏附及分泌—氧化氮(NO)的影响.方法:采用密度梯度离心法从脐血获得单个核细胞,将其接种在人纤维连接蛋白包被的培养板上,培养7d后收集贴壁细胞,加入不同浓度SBE继续培养24h;分别采用MTT比色法、黏附能力测定实验和硝酸还原酶法测定EPCs的增殖、黏附和分泌NO能力.结果:与对照组比较,SBE组EPCs增殖、黏附能力提高,培养上清中NO浓度增加(P＜0.05),其作用在一定范围内随SBE浓度增加而增强.结论:白花丹参显著改善EPCs功能,这可能是其内皮保护的新机制.
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白花丹参茎叶水提取物对博莱霉素致肺纤维化小鼠的保护作用
目的:探讨白花丹参茎叶水提取物对博莱霉素致肺纤维化小鼠的治疗作用.方法:建立博莱霉素致小鼠肺纤维化模型,给予白花丹参茎叶水提取物ig治疗后,比较各组肺指数、肺组织病理形态、羟脯氨酸(Hyp)及超氧化物歧化酶(SOD)水平的测定,观察白花丹参茎叶水提取物对小鼠肺纤维化形成的影响.结果:白花丹参茎叶水提取物和对照组的肺指数、肺泡炎、肺纤维化的程度、Hyp及SOD均明显低于模型组(P＜0.05或0.01),且白花丹参茎叶水提取物的高、低组接近对照组.结论:白花丹参茎叶水提取物能减轻博莱霉素致小鼠肺纤维化程度并有一定的治疗作用.
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白花丹参顺式还原酮加双氧酶基因的克隆、分子特征和表达调控分析
目的:获得白花丹参参与乙烯和多胺合成的顺式还原酮加双氧酶(acireductone dioxygenase,ARD)基因(命名为SmARD)序列,并进行生物信息学分析和初步的表达特性研究.方法:利用全长cDNA文库技术,从两年生白花丹参根中获得目的基因SmARD序列.利用BLAST进行序列比对,ORF Finder寻找该基因的开放读码框,prosite分析蛋白质的基本结构域.用半定量RT-PCR检测其在白花丹参幼苗根、茎、叶和成花中的表达情况.结果:得到688 bp的SmARD基因全长序列.具有一个591 bp的开放读码框,编码196个氨基酸,预测蛋白质相对分子质量23.27 kDa.使用预测的SmARD蛋白序列在NCBI中进行蛋白保守域分析,发现SmARD与ARD/ARD'家族具有很高的同源性.半定量RT-PCR表明,SmARD在白花丹参幼苗根、茎、叶和成花等组织中均有转录水平的表达,但是在根部表达强.水分亏缺处理3 d,150 mmol·L-1 NaCl处理1 d,4℃低温处理1 d和100 μmol·L-1 ABA处理1 d均抑制SmARD的表达,100 μmol·L-1茉莉酸甲脂(MJ)和10 μmol·L-1乙烯利(ETH)处理1 d诱导SmARD的表达.结论:首次得到白花丹参的顺式还原酮加双氧酶(ARD)基因序列,为其参与白花丹参响应逆境和次生代谢产物合成的信号调节功能研究奠定了基础.
关键词： 白花丹参 顺式还原酮加双氧酶(ARO)基因 序列分析 表达分析 -
泰山白花丹参提取物对H2O2诱导的人脐血内皮祖细胞损伤的保护作用及机制
目的:研究泰山白花丹参提取物对过氧化氢(H202)诱导的人脐血内皮祖细胞(EPCs)氧化应激损伤的保护作用及机制.方法:通过密度梯度离心分离人脐血单个核细胞,EBM-2完全培养基诱导分化培养EPCs.以0.001％H2O2诱导EPCs损伤,以泰山白花丹参提取物干预,以eNOS抑制剂L-NMMA定位泰山白花丹参对EPCs的作用靶位.通过光镜观察细胞形态,以四甲基偶氮噻唑蓝比色法检测细胞活力,用流式细胞仪AnnexinV/PI双染法检测细胞凋亡变化,取各实验组上清行丙二醛(MDA)含量检测.结果:EPCs受到氧化损伤后,细胞活力明显降低,细胞凋亡明显增加,上清MDA含量明显增加,加入白花丹参提取物可明显改善上述结果,而1 mmol·L-1 L-NMMA+0.6 g·L-1白花丹参制剂+H2O2处理组与H2O2组比较细胞活力和细胞凋亡率都没有显著差异.结论:泰山白花丹参提取物对H2O2损伤后内皮祖细胞有显著保护作用,eNOS抑制剂L-NMMA能抵消这种保护作用,说明泰山白花丹参可能是通过eNOS途径对EPCs氧化应激损伤起保护作用(eNOS是白花丹参的作用靶点之一).
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毛细管电泳-场强放大堆积技术测定白花丹参中的水溶性有效成分
目的:利用高效毛细管电泳-场强放大柱内堆积技术分离测定白花丹参中的水溶性有效成分原儿茶醛,原儿茶酸,丹参素,迷迭香酸和丹酚酸B.方法:采用未涂层熔融石英毛细管柱(75 μm×50.2 cm,40 cm),以含15%甲醇的20 mmol·L-1硼砂(pH 10.0)为运行缓冲液,分离电压28 kV,柱温25℃,检测波长210 nm.进样前压力进水3.4 kPa;电动进样-8kV×3 s.结果:原儿茶醛的线性范围是3.0～60.0 mg·L-1(R2=0.9996);原儿茶酸,丹参素,迷迭香酸,丹酚酸B的线性范围均为1.0～20.0 mg·L-1(R2=0.9991,0.9994,0.9989,0.9998),检测限分别为0.55,0.40,0.25,0.32,0.38μg·L-1,富集倍数高,灵敏度高;将此方法应用于实际样品测定,回收率为97.31%～99.81%.结论:该方法简单、快速、准确、灵敏度高,可用于白花丹参的质量控制.
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PMI基因作为选择标记的植物表达载体构建及转化白花丹参体系的建立
目的:构建含有大肠杆菌6-磷酸甘露糖异构酶(6-phosphomannose isomerase,PMI)基因并替换潮霉素抗性(hygromycin,hyg)基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI,同时建立以PMI/甘露糖为筛选标记的白花丹参转基因体系.方法:首先从大肠杆菌Escherichia coli DH5α中克隆PMI基因,然后以PMI基因替换植物表达载体pCAMBIA1305中的hyg基因,构建了以PMI基因为选择标记基因的植物表达载体pCAMBIA1305-PMI,并用电击转化方法导入根癌农杆菌Agrobacterium tumefaciens LBA4404中,用叶片浸染法转化白花丹参.结果:在白花丹参MS +6-BA 1.5 mg·L-1 +NAA0.1mg·L-1固体分化培养基中附加20 g·L-1-甘露糖和10g·L-1蔗糖为碳源的选择压力下,pCAMBIA1305-PMI的转化率为23.7％,对再生植株用PCR检测证实了PMI基因的导入.结论:建立了以PMI-甘露糖为选择系统的白花丹参转基因体系,可应用于后续目的基因的转化奠定了基础.
关键词： 6-磷酸甘露糖异构酶(PMI)基因 甘露糖 白花丹参 转基因筛选标记 -
植物源烟水对白花丹参生物量和有效物质积累的影响
该文采用1∶500,1∶1 000,1∶2 000浓度的烟水处理白花丹参,研究其对白花丹参生物量和有效物质积累的影响,测量指标包括地下部分鲜重、地下部分干重、分根数、大根粗、平均根粗、平均根长、脂溶性成分(二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA)和水溶性成分(迷迭香酸、丹酚酸B)含量.结果显示,1∶500和1∶1 000浓度的烟水处理显著提高白花丹参地下部分鲜重和干重,分别达到98.01％,44.32％和85.71％,28.57％.1∶500浓度的烟水处理显著提高白花丹参大根粗(58.44％)和地下部分干重(85.71％).烟水处理后白花丹参中丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA含量显著提高,二氢丹参酮、隐丹参酮以及水溶性成分的积累未表现出显著性差异.研究表明烟水处理能有效提高白花丹参生物量和有效物质的积累,为白花丹参绿色生态种植提供新的思路.
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白花丹参鲨烯合酶SQS2的克隆与原核表达分析
该研究根据丹参的转录组数据提供的基因片段设计引物,采用逆转录聚合酶链式反应方法,从白花丹参中克隆鲨烯合酶SQS2的全长cDNA序列,命名为SmSQS2,GenBank注册号KM244731.序列长度为1 597 bp,包含1 245 bp的开放阅读框,推测编码414个氨基酸,含有115 bp的5'UTR和237 bp的3'UTR.利用生物信息学软件对获得的序列进行同源性分析,得出白花丹参SQS2的与紫花丹参SQS2的序列无明显差异.原核表达分析结果表明SmSQS2在大肠杆菌中能表达出与预测蛋白大小相当的目标蛋白,对影响蛋白表达的4个因素,即诱导温度、诱导时间、IPTG浓度和诱导时宿主菌的吸光度(A600)进行了优化,得出SmSQS2蛋白表达的佳条件为:IPTG终浓度0.2 mmol· L-1,宿主菌的吸光度(A600)为0.6,温度30℃,诱导时间20 h.这为进一步研究白花丹参鲨烯合酶SQS2在丹参萜类和甾醇类生物合成途径中的作用提供了理论依据.
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不同连作年限对白花丹参生长及其活性成分含量的影响
对白花丹参的生物学特性进行田间统计,采用HPLC测定不同连作年限白花丹参中脂溶性成分(二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ、丹参酮ⅡA)及水溶性成分(丹酚酸B、迷迭香酸)含量.结果表明,连作2年后白花丹参地下部鲜重下降80.47％,干重下降79.42％;正常生长条件下的白花丹参根粗为0.3～0.5 cm,而连作2年后的丹参根粗为0.2 ～0.4 em,表明根粗是造成白花丹参产量下降的主要原因;连作2年后白花丹参中二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮ⅡA、丹参新酮、丹酚酸B和迷迭香酸平均降幅分别为35.26％,32.26％,19.35％,3.39％,64.40％,66.93％.结果表明连作障碍对白花丹参生长和质量的大影响期为连作第2年.
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泰山赤灵芝复合降解酶提取白花丹参须根有效成分的研究
目的:研究泰山赤灵芝复合降解酶在白花丹参须根有效成分提取中的应用.方法:采用木质纤维素复合降解酶来提取丹参须根中的有效成分,通过正交试验法优化酶解参数.结果:利用优化酶解工艺所得到的丹参须根提取液中总丹参酮和总丹酚酸的提取率可达11.923％,12.465％,比常规非酶法提取提高了62.794％,56.086％.结论:采用木质纤维素复合降解酶酶解法可以充分提取出丹参须根中的有效成分,为中药废弃物的再次利用提供了一条新途径.
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变温干制对白花丹参有效成分的二次提升研究
该文研究了不同变温干制条件对白花丹参有效成分的影响,为优选白花丹参产业化干制工艺提供基础.为保证丹参活性成分含量,设计多种变温干制工艺,分别为低温30℃高温60℃、低温30℃高温70℃、低温30℃高温80℃、低温40℃高温60℃、低温40℃高温70℃、低温40℃高温80℃,采用鼓风干燥箱对白花丹参进行变温干制,利用HPLC测定不同干制条件下白花丹参中的有效成分含量变化;采用SPSS 17.0统计软件分析数据.结果显示当采用低温40℃-6 h-高温80℃干制3 h的工艺时,丹参中二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ和丹参酮ⅡA的含量高,质量分数分别是0.35,2.76,0.78,4.47 mg·g.-1,其中二氢丹参酮、隐丹参酮和丹参酮Ⅰ的含量分别比阴干样品增加2.9％(P>0.05),45.3％(P<0.05),34.5％(P<0.05),丹参酮ⅡA的含量减少44.1％(P<0.05).其相应水溶性成分迷迭香酸及丹酚酸B的含量当采用低温30℃-6 h-高温70℃干制3 h的工艺时达到高,分别是3.83,55.44 mg·g.-1,分别比阴干时增加62.3％(P<0.05),109.1％(P<0.05).变温干制显著影响白花丹参有效成分含量的变化,相对于传统的阴干工艺,低温干制增加白花丹参中水溶性成分的含量,对二氢丹参酮、隐丹参酮、丹参酮Ⅰ等脂溶性成分含量也有明显促进作用,变温干制可以有效缩短干燥过程,为丹参产业化加工提供一定的理论基础.
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基于叶绿体psbA-trnH基因间区序列鉴定山东丹参为新种
为从分子水平鉴定山东丹参(Salvia shandongensis)及其近缘物种,本研究采用psb A-trnH序列对山东丹参、丹参(S.miltiorrhiza)和白花丹参(S.miltiorrhizaf.alba)共计33份材料进行了PCR扩增并测序,获得了该间隔区的完整序列.采用CodonCodeAligner进行序列拼接,应用MEGA5.0计算山东丹参及其近缘种的种内、种间的K2P距离,构建UPGMA树.结果显示,山东丹参psbA-trnH序列长度约为391 bp,丹参和白花丹参psbA-trnH序列长度约为386 bp,psbA-trnH序列在山东丹参及其近缘种种间存在丰富的变异,山东丹参种内平均K2P遗传距离为0,丹参和白花丹参种内平均K2P遗传距离分别为0.002和0.001,山东丹参与丹参种间遗传距离为0.034～0.04,与白花丹参种间遗传距离为0.005～0.008,山东丹参种内平均K2P遗传距离均远远小于丹参和白花丹参种间平均K2P遗传距离；聚类结果显示山东丹参与丹参、白花丹参(变型)可明显区分,这与形态分类特征相符.本研究首次从分子水平确立了山东丹参在植物分类学上的地位,揭示了山东丹参与近缘种之间的亲缘关系,为山东丹参药用植物新资源的开发提供DNA遗传分子鉴定的科学依据.研究结果表明psbA-trnH基因间区可作为条形码来鉴定山东丹参及其近缘种.
关键词： sbA-trnH基因间区 山东丹参 丹参 白花丹参 DNA分子鉴定 -
白花丹参HDS基因的全长克隆与原核表达分析
根据丹参转录组数据库提供的基因片段设计特异性引物,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法,从白花丹参中克隆1-羟基-2-甲基-2-(E)-丁烯基-4-二磷酸合酶基因的全长cDNA序列,命名为SmHDS,GenBank注册号KJ746807.序列长度为2 529 bp,含有2 229 bp的开放阅读框,推测编码742个氨基酸,含有170 bp的5'UTR和130 bp的3'UTR.利用生物信息学软件对获得的序列进行同源性分析,得出SmHDS与紫花丹参HDS的亲缘关系较近.原核表达分析结果表明SmHDS在大肠杆菌中表达出与预测蛋白大小相当的目标蛋白,同时对影响蛋白表达的4个因素,即诱导温度、诱导时间、IPTG浓度和诱导时宿主菌的密度(A600)进行了优化,得出SmHDS蛋白表达的佳条件为:温度30℃、诱导时间20 h、IPTG终浓度0.2 mmol·L-1、宿主菌的密度(A600)值为0.6.这为进一步研究1-羟基-2-甲基-2-(E)-丁烯基-4-二磷酸合酶在丹参酮类化合物生物合成途径中的作用提供了理论依据.
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白花丹参对过氧化氢致人脐静脉血管内皮细胞损伤的保护作用
目的 研究白花丹参对过氧化氢(H2O2)所致人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)损失的保护作用.方法 应用酶消化灌注法培养人脐静脉血管内皮细胞,采用形态学观察和Ⅷ因子抗体免疫荧光检测法进行鉴定;取对数生长期的细胞分组进行干预,应用形态学观察法和MTT法检测各组血管内皮细胞的活性.结果 H2O2损伤模型组细胞损伤明显,经白花丹参高、中、低各剂量组的干预,受损情况均有较明显地改善,使细胞活性(OD值)增高.结论 白花丹参对H2O2所致的HUVEC损伤具有保护作用.
关键词： 白花丹参 人脐静脉血管内皮细胞 过氧化氢 -
白花丹参对自发性高血压大鼠心肌病变的影响
目的 观察长期应用白花丹参水提物对自发性高血压大鼠心肌病变的影响及其机制.方法 24只12周龄SHR大鼠随机分为3组:SHR组、白花丹参高剂量组(SMH)和白花丹参低剂量组(SML).以WKY大鼠为阴性对照.灌胃给药12周后,记录24 h清醒动脉血压、左心室重量指数(LVMl),测血浆中一氧化氮合酶(cNOS)、一氧化氮(NO)、内皮素(ET),左心室组织切片用HE和VanGieson染色,全自动图像分析系统进行分析.结果 与WKY大鼠相比较,SHR组的血压、LVMI、心肌细胞直径(TDM)、心肌细胞面积(CA)、心肌组织胶原体积比例(CVF)和心肌血管周围胶原面积与管腔面积的比例(PVCA)显著升高[(190±19)/(143±11)mm Hg、(4.71±054)mg/g、(32.35±5.87)μm、(560.53±90.62)μm2,(8.13±0.71)%和(6.01±0.22)%],血浆ET水平显著升高,cNOS、NO、超氧化物歧化酶(SOD)均显著降低[(289.394-26.38)ng/ml、(54.41±6.25)μmol/L、(5.509±0.054)U/ml、(90.05±10.27)U/ml].而白花丹参组,除收缩压外,各指标与SHR组比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 白花丹参具有抑制自发性高血压大鼠心肌病变的作用.其机制可能与改善ET-NO系统和改善内皮功能障碍有关.
