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古尼拟青霉对大鼠脑缺血/再灌注损伤的保护作用
冬虫夏草(Cordyceps sinensis(Rerk.)Sacc.简称虫草)系名贵传统的强壮滋补中药,种类繁多.其中古尼虫草是于贵州境内首次发现的一种大型虫草,经人工分离培养得到其无性型菌丝体——古尼拟青霉(Paecilomyces gunnii,Pg),研究发现该药具有抗小鼠脑缺血缺氧作用(1,2).我们为深入探讨其保护作用和相关机制,本文选用大鼠脑缺血/再灌注模型来进行研究.
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古尼虫草多糖改善小鼠学习记忆作用的研究
目的:评价古尼虫草多糖改善小鼠学习记忆的作用,通过脑组织中相关物质检测(CPG)与组织学观察探讨其作用机制.方法:将昆明小鼠随机分成,空白(C)、模型(MC)、脑复康(P)和虫草多糖(CP)组.空白组与模型组用0.9%的生理盐水灌胃1/d,P组、CP组分别用、脑复康、古尼虫草多糖灌胃1/d,连续30 d,采用亚硝酸钠和乙醇建立记忆巩固障碍和记忆再现障碍模型,再分别用跳台仪和避暗仪测量小鼠的记忆能力,同时检测小鼠大脑中蛋白质、SOD、MDA含量.HE及尼氏染色光镜观察皮层、海马病理形态及神经元数目改变.结果:CP组与其他组比较错误率显著降低(P＜0.05),潜伏期明显缩短(P＜0.05).与MC组比较,CP组的大脑MDA含量下降,蛋白质含量和SOD活力升高.CP组神经元数目明显多于MC组,MC组大脑皮层及海马神经细胞出现退化、衰退或坏死等病理现象. 结论:CP改善小鼠学习记忆的功能与脑复康比作用更为显著,这可能与其减缓海马神经细胞凋亡、改善脑供血量及抗氧化作用有关.
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古尼虫草与亚香棒虫草亲缘关系初探
目的:用分子生物学方法,对古尼虫草和亚香棒虫草进行研究,对其寄主昆虫COI( cytochrome oxidase subunitⅠ,细胞色素氧化酶亚基Ⅰ)和真菌ITS(Internal Transcribed Sequence,内转录间隔区)区的基因序列进行比较,以确定两者亲缘关系.方法:在古尼虫草和亚香棒虫草性状研究的基础上,对两者来源真菌ITS区和寄主昆虫COI基因进行了PCR扩增和序列测定,对序列进行比对分析,并与GenBank核酸序列数据库中的序列进行BLAST检索比对.结果:发现古尼虫草和亚香棒虫草的来源真菌ITS区和寄主昆虫COI基因序列均有较高相似度.结论:古尼虫草和亚香棒虫草有较近的亲缘关系.
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超声波对古尼虫草菌丝体多糖免疫调节活性的影响
目的:研究古尼虫草菌丝体多糖经超声波解聚前后的免疫调节活性.疗法:用超声波解聚古尼虫草菌丝体多糖,并分别采用MTT法、中性红比色法测定古尼虫草菌丝体多糖及其解聚物对小鼠脾淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞(PMφ)吞噬功能以及细胞毒T淋巴细胞(CTL)杀伤活性的影响.结果:解聚后的古尼虫草菌丝体多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖、PMφ吞噬功能以及CTL活性的免疫抑制效果明显增强,尤其在10μg/ml和100μg/ml剂量时的抑制效果更好.古尼虫草菌丝体多糖并不随超声波解聚时间的延长而提高其免疫抑制活性,解聚1～2h和4～8 h的抑制效果没有显著的差异.结论:古尼虫草菌丝体多糖经超声波解聚后有更强的免疫调节活性,其解聚时间以1～2 h为宜.
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古尼虫草多糖及其解聚物的免疫活性
目的比较研究古尼虫草纯多糖组分FP及其解聚物的免疫活性.方法采用超声波解聚多糖,并用葡聚糖凝胶分离获得解聚级分,通过MTT法和中性红比色法测定其对小鼠脾淋巴细胞增殖、腹腔巨噬细胞吞噬功能和细胞毒T淋巴细胞杀伤功能的影响.结果FP的解聚级分FP-1、FP-2和FP-3有更强的免疫活性,在中、低剂量(1和10μg/mL)与对照相比有显著差异,而其中以FP-2的活性明显.结论古尼虫草多糖解聚后能明显提高免疫活性,为多糖生物制品研究开发提供了一条新途径.
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皖产古尼虫草中核苷和碱基成分的HPLC分析
目的:建立高效液相色谱法测定皖产古尼虫草中核苷和碱基成分(尿嘧啶、虫草素、腺苷、腺嘌呤、尿苷、次黄嘌呤、肌苷和鸟苷)的含量,并比较其与天然冬虫夏草核苷和碱基成分的异同.方法:采用Zorbax SB- Aq(250 mm ×4.6 mm,5μm)色谱柱,以水-乙腈为流动相,梯度洗脱,流速为0.8 mL· min-1,检测波长260 nm,柱温20℃.结果:尿嘧啶、虫草素、腺苷、腺嘌呤、尿苷、次黄嘌呤、肌苷和鸟苷进样浓度分别在0.38～191.08,0.37～ 188.48,0.37～ 189.72,0.37～190.92,0.37～188.55,0.50～168.55,0.37～190.36,0.24 ～ 125.00 μg·mL-1范围内线性关系良好,R2为0.9998～0.9999;加样回收率分别为102.1%,102.1%,95.3%,96.2%,96.9%,94.1%,108.7%,101.8%,RSD未超过2.8%.皖产古尼虫草和冬虫夏草均含有核苷和碱基成分,其中:皖产古尼虫草含有较高的尿嘧啶、尿苷、腺苷,而冬虫夏草中肌苷含量较高；二者的次黄嘌呤、鸟苷、腺嘌呤的含量相近；在该检测限下,两者均未测得虫草素.结论:初步认为:皖产古尼虫草核苷和碱基成分与冬虫夏草具有一定的相似性,但尚有待扩大样本量作进一步的确证.
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基于ITS序列分析鉴别冬虫夏草与古尼虫草
目的:冬虫夏草与古尼虫草在外观上相似度高,易混淆,本研究将从基因水平对两者进行准确鉴别.方法:通过聚合酶链式反应扩增,得到样品的内转录间隔区(ITS)序列,同时从GenBank下载2种虫草的ITS序列;利用CodonCode Aligner 和MEGA软件对ITS序列进行分析,找到2种虫草差异的酶切位点;通过聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)实验进行验证.结果:在ITS序列上,冬虫夏草存在1个SacⅡ酶切位点,而古尼虫草不具有该位点.PCR-RFLP的实验结果表明,冬虫夏草ITS序列的PCR产物可被限制性内切酶SacⅡ切割为2个片段,大小分别约为488 bp和128 bp,古尼虫草不能被SacⅡ切割,所以酶切前后其PCR产物在琼脂糖凝胶图上的位置没有变化.从子实体取样和从虫体取样得到一致的结果.结论:PCR-RFLP法可以将冬虫夏草与古尼虫草明确区分,取样部位不同对本方法的结果没有影响.
