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醒脑静对戊四氮慢性点燃大鼠癫痫模型脑内c-fos、c-jun蛋白表达的影响
目的:探讨醒脑静抗痫作用可能的分子生物学机制.方法:将健康雄性SD大鼠50只随即分成正常组、模型组、醒脑静组、苯巴比妥组及中西药合用组5组,每组各10只,通过免疫组化方法观察分析醒脑静对戊四氮点燃癫痫犬鼠脑组织中c-fos、c-jun蛋白表达的影响.结果:模型组大鼠脑组织中有大量c-fos、c-jun阳性细胞数.醒脑静组脑内阳性细胞数明显较模型组减少(P＜0.01),与苯巴比妥组比较,差别无统计学意义(P＞0.05).中西药合用组脑内阳性细胞数较醒脑静及苯巴比妥单用组更少(P＜0.01).结论:醒脑静的抗痫作用可能与其阻断脑内c-fos、c-jun蛋白的表达有关.
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“肾应冬”调控机制的分子生物学实验研究
目的:"肾应冬"是中医基础"五脏应时"理论的一个部分.方法:采用大鼠松果体摘除模型,运用原位杂交技术,探讨了在冬至、夏至SD雄性大鼠睾丸c-fos和c-jun的mRNA的变化规律.结果:睾丸c-fos和c-jun的mRNA具有冬至表达强、表达量多,夏至表达弱、表达量少的特点和趋势.摘除松果体在冬至使睾丸c-fos和c-jun的mRNA明显减弱,而在夏至则使睾丸c-fos和c-jun的mRNA明显增强.结论:1."肾应冬"在生殖方面的调控机制可能是,通过对肾所藏的生殖之精的两种调控成分即促进生殖之精的物质和抑制生殖之精的物质而起作用.肾封藏的抑制生殖之精的物质和功能在冬季加强,而所储藏的促进生殖之精的物质和功能在冬至减弱,故在冬至,肾外泻生殖之精的功能减弱,生殖机能处于低潮.2."肾应冬"的调控机制是肾中精气随季节的变化以松果体为中介,通过影响睾丸的c-fos和c-jun的mRNA表达来调节季节性生殖活动.3.中医"肾应冬"具有客观物质基础,中医"以时测脏"具有正确性和科学性.
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桂枝茯苓丸对低O2高CO2大鼠肺动脉血管重构的影响及机理
目的:研究桂枝茯苓丸对肺动脉高压大鼠血管重构的影响及机理.方法:复制低O2高CO2肺动脉高压大鼠模型后,右心导管法测肺动脉压;免疫组化法检测Ⅰ型胶原、磷酸化细胞外信号调节激酶(P-ERK)的表达;原位杂交法检测c-junmRNA;c-fosmRNA的表达.结果:桂枝茯苓丸干预组的各项指标均显著低于模型组.结论:桂枝茯苓丸阻断ERK信号通路,可抑制肺动脉高压血管重构.
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侧脑室注射EGb 761对MCAO大鼠神经细胞凋亡的影响
缺血性脑卒中缺乏有效的治疗措施,目前应用于临床的许多药物受到血脑屏障的限制,难以充分发挥疗效.EGb 761是银杏制剂的提取物,在改善心脑血管疾病方面积累了大量证据.为提高其局部血药浓度,我们采用侧脑室微量泵泵入EGb 761,并观察其对大脑中动脉缺血-再灌注(MCAO)大鼠脑区细胞凋亡的影响,探讨其作用机制及侧脑室注射途径的可行性.
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异补骨脂素对小鼠胚胎前成骨细胞胶原的影响
目的 探讨不同浓度异补骨脂素干预对小鼠胚胎前成骨细胞(MC3T3-E1)增殖、Ⅰ型骨胶原及AP-1亚基c-Jun表达水平的影响及其与原发性骨质疏松症的关系.方法 细胞分为正常对照组与不同浓度异补骨脂素组.分别采用MTT法检测成骨细胞(MC3T3-E1)增殖、天狼星红染色法测定细胞层的胶原含量、Western-Blot检测c-Jun及RT-PCR检测Ⅰ型胶原mRNA的表达.结果 不同浓度异补骨脂素刺激,可明显促进MC3T3-E1增殖,细胞层胶原含量增加,c-Jun蛋白表达逐渐增强及Ⅰ型胶原mRNA的表达增高,差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论 异补骨脂素可能通过促进核转录因子c-Jun表达,进而促进骨胶原合成,从而发挥其预防与治疗骨质疏松症的作用.
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Ang Ⅱ诱导的心肌肥大中c-fos,c-jun mRNA表达变化及丹参酮ⅡA的影响
目的:在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,探讨血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞c-fog,c-junmRNA表达变化及丹参酮ⅡA的影响.方法:取12只1 d龄新生Wistar乳鼠,进行心肌细胞培养,分为正常对照组,AngⅡ(10-6 mol·L-1)组,AngⅡ(10-6mol·L-1)+丹参酮ⅡA(10-8g·L-1)组,AngⅡ(10-6mol·L-1)+缬沙坦(10-mol·L-1)组,丹参酮ⅡA(10-1g·L-1)组,缬沙坦(10-6mol·L-1)组.相差显微镜测量心肌细胞大小,[3H]一亮氨酸掺入法测定心肌细胞蛋白质合成速率;RT-PCR检测心肌细胞c-fog,c-jun mRNA的表达.结果:在培养液中加入AngⅡ作用30 min后,心肌细胞c-fos,c-jun mRNA的表达显著增强(P<0.01);AngⅡ作用24 h后,AngⅡ组心肌细胞蛋白质合成速率较对照组明显增加(P<0.01);AngⅡ持续作用7 d后,AngⅡ组心肌细胞直径较对照组显著增大(P<0.05).采用丹参酮ⅡA或缬沙坦干预,二者可抑制AngⅡ诱导的c.fog,c-jun mRNA的表达增强(P<0.01)、心肌细胞蛋白质合成速率的增加(P<0.01)及心肌细胞直径增大(P<0.05).结论:丹参酮ⅡA可通过抑制AngⅡ诱导的心肌细胞c-fos,c-jun的表达增强,减轻心肌肥大.
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霍乱毒素或联合外周神经对再生视网膜节细胞c-Jun表达的研究
目的:观察成年金黄地鼠视神经近端微挤压断(MC)后,再生视网膜节细胞(RGCs)c-Jun的表达与再生的关系.方法:实验动物随机分为CTx组、SN+CTx组,每组5只.近端微挤压断视神经后,玻璃体内注射霍乱毒素(CTx)或联合植入小段坐骨神经分支(SN).术后4W,用荧光金(FG)逆行标记和c-Jun免疫荧光组织化学双标法观察再生的RGCs和c-Jun的表达.结果:再生RGCs胞核内有c-Jun蛋白表达,CTx组表达c-Jun的再生RGCs为(317±61)个,约占其再生总数的89.9%;SN+CTx组c-Jun阳性再生的RGCs为(418±102)个,占再生总数的96.8%,两组相比差异有统计学意义(P＜0.05).结论:c-Jun表达可能与RGCs的再生有密切关系,霍乱毒素或联合外周神经可显著提高再生RGCs的c-Jun表达.
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降钙素基因相关肽和神经生长因子对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达的影响
目的探讨外源性降钙素基因相关肽(CGRP)和神经生长因子(NGF)对短暂性全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达的影响.方法原位杂交和免疫组织化学结合显微图像分析方法.结果假手术组大鼠纹皮质c-jun mRNA表达弱;缺血组较假手术组c-jun mRNA表达显著强(P＜0.01);CGRP组和NGF组c-jun mRNA表达弱于缺血组(P＜0.05);CGRP和NGF合用组c-jun mRNA表达明显弱于缺血组(P＜0.01),分别弱于CGRP组和NGF组(P＜0.05).假手术组大鼠纹皮质未见c-Jun蛋白表达;缺血组较假手术组c-Jun蛋白表达明显强(P＜0.01),缺血后再灌注3 h强,1 d、3 d时弱;CGRP组和NGF组c-Jun蛋白表达较缺血组弱(P＜0.05);CGRP和NGF合用组较缺血组c-Jun蛋白表达明显弱(P＜0.01),分别弱于CGRP组和NGF组(P＜0.05);CGRP和NGF合用组缺血后再灌注3 h时强,1 d、3 d时弱. 结论CGRP和NGF分别抑制全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-junmRNA及蛋白表达,联合应用显著抑制全脑缺血后再灌注大鼠纹皮质c-jun mRNA及蛋白表达,两者对保护缺血神经元可能有协同作用.
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JNK/c-Jun信号通路在大鼠胸主动脉瘤模型中的表达及意义
目的 探讨c -Jun氨基末端激酶(JNK)及c-Jun在实验性大鼠胸主动脉瘤中的表达及其意义. 方法 将20只成年雄性Wistar大鼠随机分为两组,即对照组和手术组.采用氯化钙(CaCl2)诱导法制备胸主动脉瘤模型,于术后4周取外敷CaCl2段胸主动脉.用免疫组织化学和Western blotting方法检测动脉瘤壁JNK和c-Jun的表达. 结果 免疫组织化学显示,磷酸化JNK(p-JNK)和磷酸化c-Jun( p-c-Jun)主要表达于动脉瘤中膜,而对照组表达很弱.Western blotting显示,动脉瘤组织中p-JNK和p-c-Jun表达均强于对照组. 结论 p-JNK和p-c-Jun在动脉瘤中表达强于对照组,JNK/c-Jun信号通路可能在动脉瘤形成过程中起重要作用.
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OSKM诱导过表达c-Jun肝癌细胞重编程
目的 构建OSKM诱导的过表达c-Jun肝癌细胞(C3A-c-Jun)重编程细胞系,探讨外源性c-Jun对肝癌细胞重编程的影响.方法 通过C3A细胞稳定过表达c-Jun后进行OSKM诱导重编程,通过碱性磷酸酶染色,Real-time PCR,免疫印迹法,免疫荧光等技术对细胞进行鉴定,建立C3A-c-Jun诱导肿瘤干细胞系C3A-c-Jun-iCSCs.结果 C3A-c-Jun-iCSCs克隆呈圆顶状,边缘圆钝,克隆内细胞小且排列紧密,多层分布,碱性磷酸酶染色阳性,mRNA和蛋白水平均可表达多潜能性标记物OCT4、SOX2;C3A-c-Jun-iCSCs组外源性和内源性Sox2的表达量均明显高于C3A-iCSCs对照组;在重编程过程中c-Jun持续表达.结论 OSKM诱导C3A、C3A-c-Jun肝癌细胞重编程,分别建立C3A-iCSCs和C3A-c-Jun-iCSCs细胞系,发现外源性c-Jun通过上调Sox2基因的表达,启动下游一系列反应,对肝癌细胞重编程过程起促进作用.
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心源性猝死心肌细胞凋亡与c-jun基因蛋白的表达
目的 探讨心肌细胞凋亡和c-jun基因蛋白在心源性猝死(SCD)中的表达及其法医学意义. 方法 50例法医尸检案例,其中冠心病猝死组16例,病毒性心肌炎猝死组14例,扩张型心肌病猝死组10例及对照组(非SCD猝死病例)10例.通过TUNEL法和免疫组织化学法对各组心肌细胞凋亡指数、c-jan基因蛋白表达情况的吸光度进行半定量检测,并分析各组之间的差异. 结果 冠心病猝死组、病毒性心肌炎猝死组、扩张型心肌病猝死组的凋亡指数均显著高于对照组(P<0.01).病毒性心肌炎猝死组和扩张型心肌病猝死组的凋亡指数均高于冠心病猝死组(P<0.01),前两者之间差异无统计学意义(P>0.05).冠心病猝死组、病毒性心肌炎猝死组、扩张型心肌病猝死组的c-jan基因蛋白吸光度值均显著高于对照组(P<0.01).3组之间的吸光度值差异无统计学意义(P>0.05). 结论 应用TUNEL法检测心肌细胞凋亡和免疫组织化学法检测心肌细胞内c-jun基因蛋白的表达,可作为法医鉴定SCD的重要指标.
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抗CD44单克隆抗体A3D8对HL-60细胞AP-1表达的影响
目的:探讨抗CD44单克隆抗体A3D8对急性髓系白血病细胞转录因子AP-1表达的影响.方法:用A3D8干预人白血病细胞株HL-60,采用MTT法和流式细胞术检测细胞增殖、细胞周期变化;RT-PCR及Western blot检测A3D8对HL-60细胞中c-JUN及c-FOS在mRNA及蛋白水平的表达变化.结果:A3D8对HL-60细胞生长有抑制作用;A3D8可诱导细胞周期G0/G1期阻滞;A3D8可降低HL-60细胞c-JUN mRNA及蛋白表达水平,而对c-FOS mRNA及蛋白表达无影响.结论:A3D8通过下调c-JUN转录及蛋白表达影响急性白血病细胞转录因子AP-1活性,抑制白血病细胞生长.
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PD98059对急性淋巴细胞白血病细胞MAPK信号通路的抑制作用
本研究检测阻断Ras/Erk信号通路对原代人类急性淋巴细胞白血病(ALL)细胞重要转录因子c-fos、c-jun、TAK1基因表达的影响.筛选PD98059作用的佳有效浓度和时间,采用SYBR Green Ⅰ实时定量PCR检测PD98059作用于原代ALL细胞前后和正常人原代细胞的目的基因的表达水平.结果表明:与正常人原代细胞相比,处理前原代ALL细胞c-fos、TAK1 mRNA的相对表达升高(P值分别为0.014和0.017).经PD98059处理后原代ALL细胞中c-fos、c-jun、TAK1 mRNA的相对表达情况为:c-fos、c-jun mRNA 7个样本均低表达,TAK1 mRNA 5个样本低表达,2个样本高表达;较处理前c-fos、c-jun、TAK1 mRNA表达明显下降(P值均为0.018).处理后原代ALL细胞与正常人原代细胞相比,c-fos、c-jun、TAK1 mRNA表达无统计学差异.结论:原代ALL细胞的c-fos和TAK1基因的活性增高,阻断ALL细胞的Ras/Erk信号通路可导致重要转录因子c-fos、c-jun、TAK1基因表达明显下降.
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汉防己甲素预防K562细胞获得性耐药机制的研究
本研究从MDR1基因转录调控和细胞凋亡两方面探讨汉防己甲素(TTD)预防K562细胞阿霉素(ADM)诱导性多药耐药(MDR)产生的作用机制.本实验分3组,第1组为K562细胞空白对照组;第2组用ADM作用K562细胞24小时诱导细胞耐药;第3组采用TTD预处理K562细胞24小时后,再用ADM诱导耐药.采用RT-PCR检测各组细胞转录因子c-Jun、YB-1及Survivin的mRNA表达水平;Western blot法检测c-Jun、YB-1的核内蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞的凋亡程度.结果表明,0.6μg/ml阿霉素作用后K562细胞MDR1基因转录上调;与空白对照组(第1组)相比,ADM诱导的耐药细胞组(第2组)c-Jun mRNA和蛋白表达减低(p均＜0.05),YB-1 mRNA和蛋白表达明显上调(p均＜0.05);Survivin mRNA表达无明显差异(p＞0.05);细胞凋亡率(8.31%)比空白对照组(0.75%)稍有增加;TTD预处理后再用ADM诱导组(第3组)与ADM作用组相比,c-Jun mRNA和蛋白表达增加(p均＜0.05);YB-1 MRNA和蛋白表达下调(p均＜0.05);Survivin mRNA表达明显减少(P＜0.05),细胞凋亡率(97.2%)明显增加.结论:TTD预防白血病细胞耐药形成的机制可能与其下调YB-1基因和蛋白的表达、上调c-Jun基因和蛋白的表达,从而下调MDR1基因表达有关,另外,TTD与ADM联合作用还能抑制Survivin的表达,增加白血病细胞的凋亡.
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三七皂苷对造血细胞AP-1家族转录调控蛋白NF-E2,c-jun和c-fos的诱导作用
为了进一步研究三七总皂苷(PNS)对转录调控蛋白AP-1家族的主要成员NF-E2、c-jun和c-fos转录因子的诱导作用,探讨PNS在造血细胞内的信号传递途径,选用人粒系HL-60、红系K562、巨核系CHRF-288和Meg-014个细胞株作靶细胞,经PNS刺激处理后提取细胞核蛋白,分别用人抗NF-E2、c-jun和c-fos抗体与核蛋白作Western blot杂交试验,并用32P标记的具有与NF-E2、c-jun和c-foss转录因子共同结合位点的AP-1双链寡核苷酸探针作电泳带移动阻滞试验(EMSA).结果表明:①Westem blot显示PNS诱导HL-60,K562,CHRF-288和Meg-01 4株细胞的NF-E2和c-jun转录因子蛋白水平分别是未经处理细胞的1.5-2.5倍和2.0-3.0倍.诱导的c-fos蛋白在K562,CHRF-288和Meg-01 3株细胞分别提高2.0-3.0倍,但HL-60细胞的c-fos在PNS处理后无明显变化;②EMSA显示AP-1转录调控蛋白与DNA结合复合物的特异性条带,经PNS诱导后4株细胞的AP-1蛋白与DNA复合物条带密度明显高于未经处理的细胞.结论:PNS在造血细胞内对基因的转录调控涉及到AP-1家族转录因子成员NF-E2、c-jun和c-fos,通过诱导这些转录因子量的增加,与特异性DNA促进子结合的活性增高而调控与细胞增殖分化相关的基因的表达.
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丹参酮ⅡA对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥大c-fos和c-jun mRNA表达的影响
目的 在原代培养的新生大鼠心肌细胞上,观察丹参酮ⅡA(tanshinone Ⅱ,TSN)对血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ A,Ang Ⅱ)诱导的心肌细胞肥大的影响.方法 采用相差显微镜测量细胞大小,测定心肌细胞3H-亮氨酸掺入作为心肌细胞肥大的指标;用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测心肌细胞原癌基因c-fos和c-jun mRNA的表达,MTF法检测细胞活力.结果 培养的心肌细胞中加入TSN(5～80μmol/L),24 h后没有产生明显的细胞毒性.TSN能抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞增大、蛋白质合成速率的显著增加及心肌细胞原癌基因c-fos和c-jun mRNA表达的增强.结论 TSN可以抑制Ang Ⅱ诱导的心肌细胞肥大,这可能与其抑制了原癌基因c-fos和c-jun的表达有关.
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磷酸化环磷腺苷反应元件结合蛋白对持续惊厥后海马细胞凋亡调控基因表达的影响
目的：观察外源性磷酸环磷腺苷反应元件结合蛋白(pCREB)抗体对惊厥持续状态(SC)后海马细胞凋亡调控基因Bcl-2和c-Jun表达的影响，探讨pCREB在惊厥性脑损伤中的作用及其调控机制。方法成年Wistar鼠48只随机分为正常对照组(NC组，n=24)和惊厥持续状态组(SC组, n=24)。SC组采用氯化锂-匹罗卡品腹腔注射诱发SC模型。两组均根据脑室注射内容分为无注射组、生理盐水注射组(NS组)和抗pCREB注射组(抗pCREB组)3个亚组，每个亚组8只。注射后6 h处死动物。取双侧海马采用免疫组化和原位杂交(ISH)观察Bcl-2蛋白/mRNA、c-Jun蛋白/mRNA的分布，并进行半定量分析。结果 NC组中，3个亚组注射侧Bcl-2蛋白/mRNA表达均无显著性差异(P>0.05)，SC组中抗pCREB组低于无注射组和NS组(P<0.05)。NC组和SC组中，3个亚组注射侧c-Jun蛋白/mRNA表达均有非常高度显著性差异(P<0.001)， NS组和抗pCREB组c-Jun蛋白/mRNA表达高于无注射组(P<0.05)，抗pCREB组高于NS组(P<0.05)。结论 SC后脑室内注射外源性抗pCREB抗体可下调SC后海马Bcl-2蛋白/mRNA表达，上调c-Jun蛋白/mRNA表达。
关键词： 持续惊厥 磷酸化环磷腺苷反应元件结合蛋白 Bcl-2 C-Jun 大鼠 -
肝脏缺血再灌注对即早基因 c-fos、 c-jun表达影响的研究
目的研究大鼠肝脏缺血再灌注中即早基因(c-fos,c-jun)表达的变化,以探讨其在细胞增殖和细胞凋亡中作用.方法选用大鼠原位肝部分缺血再灌注模型,缺血60min,于复灌后0、0.5、1、2、4、8、12和24h取材,RT-PCR检测不同时间点c-fos、c-jun mRNA的表达;应用流式细胞仪检测Ki-67抗原和Sub-G1,分别作为细胞增殖与细胞凋亡(Ap指数)的定量分析指标.结果血清ALT、AST随着复流时间的延长逐渐增高,在4 h左右达高峰,而后渐下降,至24 h达到基线水平;Ki67在复灌后1 h开始增高,持续到24 h;在复灌后肝细胞凋亡率Ap指数也逐渐增高,峰值于复灌后12 h出现;再灌注后0.5～2.0 hc-fos和c-jun的表达均增高,1 h达高峰;4h后只有c-jun有持续较高的表达,c-fos的表达开始下降.结论缺血再灌注过程中,肝细胞的凋亡与增殖是同时存在的.c-fos和c-jun在再灌注早期和后期两种不同的表达模式提示:c-fos和c-jun共表达可能与组织修复有关,而c-jun的持续高表达可能引起细胞的凋亡.
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c-Jun 氨基末端激酶在D-半乳糖胺/脂多糖诱导急性肝衰竭小鼠肝组织中的表达及意义
目的 研究c-Jun 氨基末端激酶(JNK)在D-半乳糖胺/脂多糖(D-GalN/LPS)引起的小鼠急性肝衰竭模型肝组织中的表达及其意义.方法 32 只C57BL/6 小鼠随机分成实验组与对照组,利用D-GalN/LPS 构建急性肝衰竭模型,于给药后0 h、2 h、4 h、6 h 取材,应用蛋白免疫印迹、免疫组织化学的方法 对磷酸化的JNK(p-JNK) 进行检测并作半定量分析,观察其在模型中的变化情况.结果 实验组肝组织损害、肝细胞坏死逐渐加重,6 h 重;p-JNK 在给药后的实验组小鼠肝组织中持续高表达,高峰出现在给药后2 h.结论 给小鼠注射D-GalN/LPS 后可以增加JNK 的磷酸化水平,JNK 信号通路可能在D-GalN/LPS 引起的急性肝衰竭损伤中起至关重要的作用.
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严重烫伤延迟复苏大鼠肺组织c-jun基因的表达及其意义
目的 探讨c-jun基因在大鼠严重烫伤延迟复苏后肺组织中的表达变化及其与肺组织损伤的相关性.方法 雄性Wistar大鼠96只,随机分为延迟液体复苏组(DF,n=40)、即时液体复苏组(IF,n=48)和正常对照组(NC,n=8).DF组和IF组建立总体表面积30%的Ⅲ度烫伤大鼠模型,分别于伤后1、6、12、24、48和72 h取材.应用病理切片HE染色、免疫组织化学染色与图像软件分析等技术,检测肺组织病理学变化与cqun基因的表达.结果 伤后6～24 h DF组大鼠肺组织病变较严重,IF组相对较轻.c-jun的阳性表达位于肺泡上皮细胞核或细胞质,其表达强度DF组与IF组分别高于NC组,且DF组明显高于IF组(P(0.05).结论 严重烫伤延迟复苏大鼠肺组织中c-jun基因表达强度的变化与肺损伤的程度具有相关性,c-jun可能参与了大鼠肺组织的损伤.
