首页 > 文献资料
-
PCR-LIS-SSCP检测大肠癌PTEN基因的点突变
目的探讨PTEN基因突变在大肠癌发病机理中的作用.方法应用聚合酶链反应-低离子强度-单链构象多态性技术,对大肠癌及正常大肠石蜡包埋组织中PTEN的第7、第8个外显子进行点突变检测.结果在60例大肠癌组织中,第7个外显子SSCP带型异常的有28例,阳性率为46.7%(X2=5.081,P＜0.05),第8个外显子未见阳性带.在10例正常大肠组织中,2个外显子均未见异常SSCP带型.结论大肠癌组织中PTEN的第7个外显子点突变的发生率高,PTEN基因突变可能在大肠癌发病机理中有重要作用.
-
贵州地区临床酵母菌种类组成和分布
目的 调查贵州地区临床常见病原真菌的种类及其分布特点.方法 收集来源于贵州地区各种系统性疾病(深部组织来源)和外阴阴道念珠菌病(VVC)患者的临床酵母菌248株,根据CHROMagar培养基鉴定结果,进行基于ITS1区单链构象多态性(SSCP)图谱和序列分析的分子生物学菌种鉴定.结果 分子生物学鉴定结果显示,收集的菌种主要来源于2个属10个种,其中优势属为Candida,优势种为C.albicans;分子生物学与CHROMagar培养基鉴定结果的符合率为91.53％;贵州地区深部组织与VVC来源的临床酵母菌的菌相分布具有显著差异.结论 ITS1区SSCP图谱结合序列测定分析在酵母菌种鉴定中是一种准确、可靠的方法.C.albicans仍为贵州地区的主要病原真菌,但其他酵母菌感染较以往报告呈增多趋势,特别是VVC来源的C.glabrata比例明显高于全国平均水平.
-
单链构象多态性分析检测Leber遗传性视神经病变
目的筛查Leber遗传性视神经病变(Leber hereditary optic neuropathy,LHON)患者的线粒体DNA碱基突变,研究LHON的临床发病特点及分子生物学改变.方法对3个疑似LHON家系进行调查,知情同意后,抽取了30个母系成员的血样,对照组32个血样均来自无视力障碍的正常人.采用聚合酶链反应扩增结合单链构象多态性分析对3个家系的30个母系成员的线粒体DNA(mtDNA)进行了11个位点的突变筛查.结果3个家系的母系成员共41人(男23人,女19人),发病20例,发病率48.78%,男女比例3:1,平均发病年龄28.73岁.3个家系患者发病年龄随传代数的增加而减小,呈现遗传早发现象.含11 778、11 696两个位点的片段1,实验组30例检测结果全部为异常,对照组32例单链构象多态性检测结果全部正常.含14 459、14 482、14 484、14 498位点的片段2实验组30例中仅有1例检测结果为异常,对照组32例SSCP检测结果全部正常.含3 394、3 460两个位点的片段3和含4 136、4 160、4 216三个位点的片段4,实验组和对照组的所有样本均未发现异常.结论 LHON患者发病年龄随传代数的增加而提前,具有遗传早发现象;综合国内的文献资料和我们的研究结果,我国LHON患者以携带11 778点突变占绝大多数;所检测3个家系母系成员有共同的突变位点,但只有部分发病,其中已发病者可确诊为LHON患者,未发病的母系成员为该病的携带者.
关键词： 线粒体DNA Leber遗传性视神经病变 聚合酶链反应 单链构象多态性 -
早产儿视网膜病变Norrie disease基因突变研究
目的验证Norrie disease(ND)基因是否与早产儿视网膜病变有关及黄种人中是否存在较高的突变率.方法对25例进展期早产儿视网膜病变的患儿进行临床及生物分子学检查.通过外周血人基因组DNA提取,采用聚合酶链式反应(PCR)扩增,非同位素标记单链构象多态性(SSCP)分析,硝酸银染色法及直接测序法.结果2例患儿的第3外显子的非读码框架基因序列经银染后可见2条异常条带出现,并经直接测序验正发生基因的点突变由T到C,而外显子1及2以及其剪接区均未发现突变.对照组未发现相同突变.结论早产儿视网膜病变与ND基因的突变可能具有一定的联系.
关键词： 突变 进展期早产儿视网膜病变 Norrie基因 单链构象多态性 -
Leber遗传性视神经病变家系线粒体DNA突变检测
目的:探讨Leber遗传性视神经病变(LHON)患者的线粒体DNA(mtDNA)突变.方法:运用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)和DNA序列测定方法,设计4对引物,扩增出含11 778、14 484、3 460三个已知原发突变位点和3 394、4 136、4 160、4 216、11 696、14 459、14 482、14 498八个已知继发突变位点的4对mtDNA片段,对3个LHON家系30位母系成员的血样进行检测.32份无视力障碍的正常人血样作对照.参照mtDNA序列为剑桥标准mtDNA序列.结果:30位母系成员均含11 778位点突变,其中1人合并4 164位点突变(A→G).与剑桥标准mtDNA序列对比,30位LHON母系成员和32位正常对照均含有11 719位点突变.结论:11 778是LHON患者常见的突变位点,4 164位点突变可能是新的继发突变或正常人单核苷酸位点多态性.11 719位点突变可能是中国人存在的单核苷酸位点多态性.
-
宫颈癌组织中DNA聚合酶β基因突变检测
目的:观察宫颈癌组织中DNA聚合酶β基因(polβ)突变的情况.方法:利用RT-PCR、SSCP及DNA序列分析法,对18例正常宫颈组织和21例宫颈癌组织(Ⅰ～Ⅱ期10例,Ⅲ～Ⅳ期11例)标本中polβ基因的突变情况进行分析.结果: 8例宫颈鳞癌组织(8/21)发现SSCP异常,正常宫颈组织无SSCP异常.2例正常宫颈组织polβ基因片段测序结果完全正确,而2例SSCP异常的癌组织polβ基因在660位核苷酸由A变为G.polβ在Ⅰ～Ⅱ期及Ⅲ～Ⅳ期宫颈癌中突变率分别为10%(1/10)和63.64%(7/11),2者间差异有统计学意义(P=0.024).结论:宫颈癌中存在DNA聚合酶β基因突变现象,可能与宫颈癌的发生发展相关.
-
运用限制性长度多态性和单链构象多态性技术鉴别大肠杆菌血清型
目的扩增大肠杆菌GroEL基因并通过限制性长度多态性(RFLP)和单链构象多态性(SSCP)分析,探讨进行大肠杆菌血清型鉴定的可行性.方法选择大肠杆菌GroEL基因作为鉴别的靶基因,通过设计合适的通用引物进行PCR扩增,并对5种不同血清型大肠杆菌扩增产物的酶切片段进行RFLP分析和SSCP分析.结果运用通用引物可以扩增出5种不同血清型大肠杆菌的GroEL基因,Pst I酶切产物的RFLP分析表明,不同血清型大肠杆菌表现出不同的RFLP图谱,SSCP分析表明,图谱变异性更大,有利于进行血清型鉴别甚至株间的鉴别.结论运用PCR-RFLP和PCR-SSCP可以进行不同血清型大肠杆菌的鉴定诊断.
关键词： groEL基因 聚合酶链反应 限制性片段长度多态性 单链构象多态性 大肠杆菌 -
特异扩增法检测大肠癌淋巴结微转移突变等位基因的研究
我们设计用K-ras基因第一外显子(12/13密码子)和结肠腺瘤性息肉(APC)基因突变聚集区(MCR)引物,采用多基因聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)和突变等位基因特异扩增(MASA)法对60例大肠癌的癌组织及突变病例所属常规病理检查转移阴性的淋巴结进行联合检测,探讨癌基因检测淋巴结微转移的途径及意义,并经DNA序列分析证明了此方法学的可靠性.
-
DPC4基因在胃癌中的丢失突变研究
我们应用聚合酶链反应-简单重复序列长度多态性(PCR-SSLP)和聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)等方法,对30例胃癌DPC4基因的杂合性丢失和突变状况进行研究,探讨该基因在胃癌发生中的作用.
-
鼻咽癌组织中p53基因突变及与EBV感染的关系
我们采用聚合酶链反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)技术,对p53基因突变情况进行检测和分析,以探讨EBV与p53基因突变的关系.
-
PCR-SSCP法检测乙型肝炎病毒前C区基因变异
为探索一种快速、简便检测乙型肝炎病毒(HBV)前C区基因变异的方法,用聚合酶链反应(PCR)技术扩增94例乙肝患者血清HBV前C区基因片断,阳性扩增产物用单链构象多态性(SSCP)法进行检测,对具有不同特征性电泳图谱的PCR产物再以直接测序法加以核定,以辨别不同图谱与野生株、变异株或野生株、变异株混合感染之间的关系.结果显示:有86例患者HBV前C区PCR扩增阳性,SSCP法检测发现有3种常见的特征性电泳图谱,测序后证实,它们分别代表了野生株、变异株(nt1896位G→A)及野生株、变异株混合感染的SSCP图谱;在某些变异株图谱中,尚可见其它位点也存在变异,其中以nt1899位G→A突变为常见.提示:以PCR-SSCP技术检测HBV前C区变异具有敏感性高,特异性强,简单、快捷、价廉等优点,而且特别适用于大样本的筛检,因此有应用价值,值得推荐.
-
PCR-SSCP法检测人胃癌组织中Rhobtb2基因突变的研究
目的 观察Rhobtb2基因在人胃癌组织中的突变情况,探讨Rhobtb2基因突变与胃癌发生的关系.方法 采用聚合酶链式反应-单链构象多态性(PCR-SSCP)方法 对58例胃癌组织以及癌旁正常组织的Rhobtb2基因进行突变检测,采集1例正常人抗凝血作为正常对照.结果 58例胃癌组织中发现1例位于外显子5的错义突变.结论 胃癌组织中存在Rhobtb2基因突变,其突变可能与胃癌的发生有关.
-
PTEN基因在膀胱癌组织中的表达和突变
目的检测抑癌基因PTEN在膀胱癌组织中的表达和突变情况.方法分别应用免疫组化和聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR-SSCP)技术对62例膀胱癌及18例膀胱良性病变组织(对照组)中PTEN的表达及其第1和第7个外显子的突变情况进行检测.结果在62例膀胱癌组织中,PTEN表达的阳性率为53.2%,而对照组全部为阳性表达;62例膀胱癌组织中,第7外显子突变率为25.8%,第1外显子未发现突变,在对照组织中,未发现有指示突变的异常带型;膀胱癌PTEN的突变率可能与肿瘤的病理学分级有关.结论PTEN基因突变所致表达障碍可能在膀胱癌的发生、发展中有着重要的作用.
-
哈萨克族苯丙酮尿症F161S/EX6-96A→G双重突变基因杂合子鉴定
目的 鉴定新疆哈萨克族苯丙酮尿症(PKU)F161S和EX6-96A→G双重突变基因杂合子.方法 应用PCR及单链构象多态性(SSCP)分析技术结合基因序列测定方法确定突变类型.结果 对患者pAH基因第3、5、6、7、11、12外显子分别进行SSCP实验筛检,在外显子5和外显子6中,均发现患者的SSCP电泳条带位置与正常对照不同,遂对患者的这两个外显子基因区域分别测序,结果显示:在外显子5中cDNA第482位发生了T→c突变,是F161S型基因突变,而外显子6则在cDNA第611位发生了A→G突变,是EX6-96A→G型基因突变,即患者为F161S/EX6-96A→G型双重突变基因杂合子.结论 在新疆哈萨克族中检出的PKU F161S/EX6-96A→G型双重突变基因杂合子,为本民族首次报道.
-
应用PCR-SSCP方法鉴定深圳市龟分支杆菌暴发感染的研究
目的:鉴定深圳市龟分支杆菌脓肿亚种的基因.方法:通过聚合酶链反应(Polymerase Chain Reactior)-单链构象多态性(Single-Stranded Conformation Polymorphism,SSCP)方法分析深圳龟分支杆菌分离株的16SrRNA,根据其电泳图谱与标准株的相似性进行鉴定.结果:35株龟分支杆菌分离株与龟分支杆菌脓肿亚种标准株的SSCP图谱对比,6株显示出与龟分支杆菌脓肿亚种标准株相似的图谱,29株显示出不同的图谱.结论:应用PCR-SSCP方法可将深圳市龟分支杆菌脓肿亚种分为两种基因型.
-
PCR-SSCP分支杆菌菌种初步鉴定方法的建立及其应用
目的:建立一种简便、快速、灵敏和特异的分支杆菌菌种鉴定方法.方法:通过聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)-单链构象多态性(Single-strnde d Conformation Polymorphism,SSCP)方法分析分支杆菌16S rRNA,根据其电泳图谱与标准株的相似性进行菌种初步鉴定.结果:29种分支杆菌标准株中,除结核分支杆菌、牛结核分支杆菌和卡介苗之间及堪萨斯分支杆菌和胃分支杆菌之间SSCP电泳图谱相似外,其余各种分支杆之间电泳图谱均有显著差异.70株BACTEC TB460初步鉴定为结核分支杆菌复合群的临床分离株中,55株显示与结核分支杆菌SSCP电泳图谱相似,15例(21.4%)显示出与结核分支杆菌完全不同的电泳图谱;10株经传统方法鉴定为结核分支杆菌的分离株中,仅1株显示出与结核分支杆菌不同的电泳图谱.结论:PCR-SSCP有可能成为一种快速、有效的分支杆菌菌种初步鉴定方法.
-
PCR-SSCP检测耐多药结核菌基因与细菌培养结果对比分析
目的应用PCR-SSCP检测常规及BACTEC培养耐INH、RFP、SM的耐多药结核分枝杆菌临床分离株KatG、rpoB、rpsL基因突变,分析其敏感性和特异性,评价其在检测结核分枝杆菌耐药性方面的价值和临床实用性.方法22株常规培养和8株BACTEC培养检出的高浓度及低浓度耐INH、RFP、SM耐多药结核分枝杆菌分离株,分别用PCR-SSCP检测KatG、rpoB、rpsL基因,观察其电泳条带,并与结核菌标准株H37Rv对比.结果22株常规培养耐INH、RFP、SM的耐多药结核分枝杆菌分离株中,KatG、rpoB、rpsLPCR扩增产物,用SSCP分别检出KatG基因16株(72.7%)、rpoB基因19株(86.4%)和rpsL基因14株(63.6%).8株BACTEC培养耐INH、RFP、SM的耐多药结核分枝杆菌分离株中分别检出KatG基因5株(62.5%),rpoB基因6株(75%)、rpsL基因5株(62.5%).综合两者KatG、rpoB和rpsL基因检出率分别为70.0%(21/30)、83.3%(25/30)和63.3%(19/30).高浓度耐药与低浓度耐药分离株中的检出率有显著差异(P＜0.05),常规培养与BACTEC培养分离株中的检出率无显著差异(P＞0.05),与结核菌标准株H37Rv电泳条带对比,特异性为100%,敏感性97%.结论PCR-SSCP敏感、特异,可快速检测结核分枝杆菌的KatG、rpoB和rpsL基因,可用于耐多药结核分枝杆菌的临床检测.
-
前列腺癌患者雄激素受体N端区的突变研究
雌激素受体(androgen receptor, AR)由N端区、居中的DNA结合区和C端的激素结合区组成.N端区约由550个氨基酸组成,占AR的一半以上,其中第100～485位氨基酸与受体的转录活化功能(activation function, AF)有关,因此被称为AF1区,该区的缺失几乎可使AR的转录激活功能全部丧失,因而是AR充分发挥其转录激活功能所必需.国外研究表明AR的AF1区的基因突变是前列腺癌(prostate cancer, PC)发展和内分泌治疗抵抗的原因之一,但国内尚未见这方面的研究报道.目的:确定正常中国人AR N端AF1区的核苷酸顺序.在此基础上,检测PC患者癌组织中AR的AF1区突变,以探讨AF1区与PC进展的关系.方法:用4对引物(A3～A6)PC0例中国正常男性外周血中AR的AF1,双链DNA循环测序以确定正常中国人AR的AF1的核苷酸顺序.用PCR-SSCP(单链构象多态性)-DNA双链循环测序法对42例(低分化腺癌19例,中分化腺癌12例,高分化腺癌11例)PC患者石蜡切片癌组织中AR的AF1区进行突变检测.结果:正常中国人AR N端AF1的序列与欧美报道的完全一致.在3例低分化PC患者石蜡切片组织中(PC28、PC29、PC35)的AF1区各发现一错义突变(Gly 142 Val、 Asp221 His和Ser 296 Arg).结论:正常中国人AR的AF1序列与欧美人无差别.中国人PC组织中存在AR N端AF1区的突变,在AF1区发现的3种新突变AR均位于低分化PC患者中,提示AR的突变可能与PC的进展有关.
-
儿童急性白血病p16基因纯合子缺失和点突变的实验研究
目的:探讨p16基因纯合子缺失和点突变与儿童急性白血病(AL)发生、发展及预后的关系.方法:用聚合酶链反应(PCR)、DNA单链构象多态性(SSCP)分析和DNA测序技术研究53例初治和复发儿童AL及30例对照组p16基因纯合子缺失和点突变的情况.结果:儿童AL p16基因纯合子缺失及点突变为28.30%(15/33例),对照组未发现缺失及突变.ALL组p16基因纯合子缺失为35.00%(14/40例),其中HR-ALL为47.06%(8/17例),SR-ALL为8.33%(1/12例),复发ALL为45.45%(5/11例),未见点突变;ANLL组未见纯合子缺失,点突变1例,为7.69%(1/13例),测序分析发现其位于第2外显子(exon 2A)49密码子,发生错义突变,由GCC突变为ACC,由苏氨酸取代丙氨酸.结论:①p16基因失活与儿童AL,尤其与儿童ALL的发生、发展关系密切.②在儿童ALL中,p16基因纯合子缺失是基因失活的主要形式,点突变罕见.③在儿童ANLL中,p16基因纯合子缺失、点突变均罕见.④p16基因失活可能成为预测儿童AL病程进展、复发、预后的指标之一.
-
PCR-SSCP检测非霍奇金淋巴瘤患者骨髓克隆性T细胞受体基因重排及其临床意义
背景与目的:进一步了解非霍奇金淋巴瘤( non- Hodgkin' s lymphoma, NHL)患者骨髓标本克隆 T细胞受体( T cell receptor,TCR)基因重排情况及临床意义.方法:应用聚合酶链反应( polymerase chain reaction, PCR)联合单链构象多态性( single- strand conformation polymorphism, SSCP)分析 43例 NHL患者骨髓标本 TCRVγ I- Jγ基因重排情况.结果: 43例 NHL患者有 26例( 60.5%)存在克隆性 TCRVγ I- Jγ基因重排. 16例骨髓形态学检查未发现淋巴瘤细胞浸润者中有 3例( 18.8%)发现克隆性 TCRVγ I- Jγ基因重排,此 3例患者分别于 4～ 9个月后行骨髓形态检查时发现淋巴瘤细胞浸润; 27例骨髓形态学检查有淋巴瘤细胞浸润者有 23例( 85.2%)存在克隆性 TCRVγ I- Jγ基因重排阳性. 26例 PCR扩增阳性病例经 SSCP分析发现 7例 ( 26.9%)存在寡/亚克隆重排. 7例存在寡/亚克隆重排患者经 3～ 11个月有 5例( 71.4%)发展为白血病, 存在寡/亚克隆重排 NHL患者 1年内转化为白血病的发生率显著高于无寡/亚克隆重排患者( 10.5%)( P< 0.005).结论:应用 PCR检测 NHL患者骨髓标本克隆性 TCRVγ I- Jγ基因重排可较骨髓形态学检查更早发现 NHL患者骨髓浸润微小病灶.具有寡/亚克隆 NHL患者更易发展为白血病,还可发展为急性非淋巴细胞白血病.
