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多重荧光定量PCR快速检测缺失型α地中海贫血
目的 采用多重荧光定量PCR技术快速检测缺失型α地中海贫血(以下简称α地贫),初步评价其诊断性能,并探讨该体系应用于临床基因诊断的可行性.方法 采用多重荧光定量PCR体系检测300份,采用gap-PCR和β地中海贫血(以下简称β地贫)点突变反向点杂交法确定基因型的正常及地中海贫血标本,其中150例为α地贫标本,100例基因型为αα/αα的正常样本,50例为β地贫标本.结果 多重荧光定量PCR在150例α地贫样本及100例正常样本的检测结果与gap-PCR符合率均达到100%,50例β地贫标本,有49例检测结果与gap-PCR一致,有1例gap-PCR报告为αα/αα的标本,多重荧光定量PCR报告为α1以及α2各仅有一个拷贝,经多重连接探针扩增技术证实为--THAI/αα.结论 多重荧光定量PCR是一种快速、简便和可靠的缺失型α地中海贫血检测技术.
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Hb Quong Sze102例基因分型和临床特征
目的 了解Hb Quong Sze(Hb QS,αQSα/)不同基因型的临床特征,探讨之间的关系.方法 收集就诊患者行地中海贫血(地贫)基因检测诊断为Hb QS 102例样本和40例检测未见异常作为对照,进行血常规参数分析、血红蛋白分析、RDB和多重跨越断裂点PCR方法检测基因型.结果 Hb QS杂合子无论性别血红蛋白均处于正常范围,红细胞平均体积和红细胞平均血红蛋白量下降;Hb QS复合其他α地贫点突变既可以是轻型地贫,也可以类似于HbH病.Hb QS复合东南亚缺失型临床表现轻重不一,重者需要输血,轻者甚至无贫血.结论 Hb QS杂合子表现极可能为轻型地贫,并非像其他的α地贫点突变表现为静止型地贫.Hb QS复合其他α地贫点突变表型多样,在遗传咨询中值得注意.
关键词： α地中海贫血 Hb Quong Sze 基因型 -
中间型α地中海贫血伴痛风2例
例1.男,56岁,仫佬族.因反复双踝关节、膝关节疼痛4年余于2008年11月24日入院.平素常吃海鲜、生鱼片等.9岁时诊断中间型α地中海贫血,反复多次输血治疗.入院时体格检查:重度贫血貌,巩膜轻度黄染.心肺未见异常.腹平软,肝右肋下3cm可及,脾左肋下4cm可及.
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ROC曲线评价毛细管区带电泳用于α地中海贫血筛查的临床价值
目的 探讨血红蛋白毛细管区带电泳用于α地中海贫血筛查的临床价值,确定血红蛋白A2(Hemoglobin A2,HbA2)用于α地中海贫血诊断的截断值.方法 收集66例α地中海贫血病例(α地中海贫血组)和86例健康对照(正常对照组).采集各组研究对象的静脉血进行血红蛋白毛细管区带电泳和α地中海贫血基因检测,通过建立受试者工作特征曲线(ROC曲线)对HbA2在α地中海贫血诊断中的统计学指标进行综合评价,并确定HbA2用于α地中海贫血诊断的截断值；统计工具采用SPSS 17.0统计软件.结果 α地中海贫血组和正常对照组的毛细管区带电泳的HbA2检测结果分别为(2.33±0.22)％和(2.65±0.29)％,α地中海贫血组明显低于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).HbA2用于诊断α地中海贫血的ROC曲线下面积(AUC)为0.804(SE:0.035,95％ CI:0.736 ～ 0.872),诊断价值具有统计学意义(P＜0.01)；HbA2用于α地中海贫血诊断的截断值为2.55％,对应的诊断灵敏度和特异度分别为60.5％和89.4％.结论 血红蛋白毛细管区带电泳检测HbA2用于α地中海贫血筛查是目前较好的方法,具有较高的临床价值.
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东南亚缺失型α地中海贫血的胚胎植入前遗传学诊断
目的:探讨荧光PCR结合毛细管电泳技术在东南亚缺失型(--SEA)α地中海贫血胚胎植入前遗传学诊断(PGD)中的临床应用.方法:获取东南亚型α地中海贫血携带者单个淋巴细胞,利用PCR结合毛细管电泳的方法建立检测体系,并对生殖助孕中心24对携带东南亚缺失型α地贫夫妇进行胚胎植入前遗传学诊断.结果:单个淋巴细胞扩增成功率为93.39%(113/121),等位基因脱扣率为8.85%(10/113).24对夫妇进行24个周期PGD,共检测202个胚胎,获得202份囊胚期滋养外胚层细胞,其中检测成功为188个,扩增成功率为93.07%(188/202).经毛细管电泳分析,共诊断出35个正常胚胎,102个杂合子胚胎,51个重型地贫胚胎.移植了20个胚胎,12例获得临床妊娠.妊娠的12例孕妇中,孕18周进行羊水穿刺产前诊断4例,其中3例检测结果与PGD实验结果一致,1例发生等位基因脱扣;流产2例,1例孕7周流产,流产物检测结果与PGD结果一致,1例孕11周流产,流产物未送检.结论:应用荧光PCR结合毛细管电泳技术可对携带东南亚缺失型α地贫的夫妇进行植入前遗传学诊断.
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HbH病合并多器官损害1例
患者女,25岁,因"面色苍白25年,浮肿、气促1个月"于2012年4月11日就诊我院.患者25年前出生后即被发现面色苍白,外院诊断"α地中海贫血",每年需输血1～2次(具体不详),未曾行去铁治疗.2004年因"脾功能亢进"行"脾脏切除术".近1个月症状加重,伴全身浮肿、气促,伴发热.
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广东省唇腭裂流行病学研究
先天性唇腭裂(CLP)是人群中常见的生理缺陷之一,其发病率居各种缺陷的首位或仅次于胎儿水肿综合征(广东80%为α地中海贫血).通过对1986～1997年广东省356 782例围产儿出生缺陷监测资料进行流行病学分析.本资料来自省内25所医院,分布于大中小城市,沿海及山区,按国家监测标准,了解广东省唇腭裂发病情况及相关因素.
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771例α地中海贫血产前基因诊断
目的:对可能生育α地中海贫血(地贫)高危胎儿的夫妇进行产前基因诊断.方法:通过绒毛膜穿刺、羊膜腔穿刺及脐带血穿刺获取胎儿DNA,应用聚合酶链反应(PCR)等方法进行α地贫产前基因诊断,并于分娩后取胎儿脐带血检测Hb Bart's含量.结果:771对夫妇的胎儿检出Hb Bart's胎儿水肿综合征73例,Hb H病47例,东南亚(SEA)缺失型α地贫-1杂合子251例,α地贫-2(-α3.7, -α4.2缺失型或非缺失型Hb CS)杂合子85例,α珠蛋白基因正常315例,及2例纯合子α地贫-2.胎儿合并重型β地贫21例,轻型β地贫45例.误诊Hb H病1例.结论:广西地区α地贫携带者夫妇的基因型组合较为复杂,合并β地贫亦较常见.本文所实施的产前基因诊断可有效检出Hb Bart's胎儿水肿综合征、Hb H病胎儿,及各种α地贫杂合子.
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多重PCR方法检测缺失型和非缺失型α地中海贫血基因型
目的:建立多重聚合酶链反应(PCR)方法,对广西地区α地中海贫血Hb H病进行基因诊断.方法:外周血提取DNA,应用多重PCR、DNA测序等方法进行α地中海贫血基因型诊断.结果:298例Hb H病患者检出154例缺失型Hb H病(-α3.7缺失型Hb H病104例,-α4.2缺失型Hb H病50例);非缺失型Hb H病144例包括138例Hb CS-H病,5例Hb QS-H病及1例罕见的东南亚缺失型α地中海贫血-1复合α2珠蛋白基因密码子30缺失.基因型检测结果提示缺失型Hb H病占51.68%,非缺失型Hb H病占41.32%.而非缺失型Hb H病中,以Hb CS-H病为主,占非缺失型的95.83%.结论:文中所建立的单管多重PCR方法可同时检测4种缺失型和2种非缺失型α地贫基因型,操作简便、快速,结果准确.
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α2珠蛋白基因Codon31(AGG＞AAG)突变导致α地中海贫血的研究
目的:分析广西地区血红蛋白H病(Hb H病)的基因突变类型,并对先证者进行家系调查.方法:对2016年10月至2017年11月在广西医科大学第一附属医院经血常规、血红蛋白(Hb)分析确诊为Hb H病的360例患者,利用荧光PCR熔解曲线分析法及DNA测序方法进行α地中海贫血基因突变分析.结果:在360例Hb H病患者中发现1例罕见的非缺失型Hb H病.病例为女性,广西北海人,1岁,无黄疸、肝脾肿大等,未输过血.血常规结果显示:RBC 3.75×1012/L,Hb 77.3 9/L,MCV 69.05 fL,MCH 20.62 pg,MCHC 296.9 g/L,HCT 0.26.Hb分析Hb H+-Hb Bart's 20.1％,基因分析结果显示,α2珠蛋白基因Codon 31(AGG＞ AAG)突变复合东南亚缺失型α地中海贫血-1(-SEA/αCCD31 α).患者的家系分析显示,其父亲的血常规及血红蛋白分析正常,基因分析为α2蛋白基因Codon 31突变杂合子.母亲为东南亚缺失型α地中海贫血-1杂合子.结论:首次在广西地区检出α2珠蛋白基因Codon 31 AGG＞AAG基因突变.Codon 31 AGG＞AAG基因突变导致α地中海贫血,当复合东南亚缺失型α地中海贫血-1时有中度贫血.首次发现其杂合子无临床症状,血液学检测正常,临床上较容易误诊和漏诊.
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广东湛江地区血红蛋白H病基因突变研究
目的:对广东省湛江地区血红蛋白H病(Hb H病)进行基因分析,了解其基因突变类型及临床特征.方法:采用血常规、血红蛋白分析、Gap-PCR及荧光PCR熔解曲线法、DNA测序等方法对Hb H病进行基因分析.结果:83例HbH病患者中检出73例缺失型Hb H病(88.0％),包括--SEA/-α 3.7 51例,--SEA/-α4.2 22例.检出10例非缺失型Hb H病(12％),包括--SEA/αCS α 7例,--SEA/αQS α 1例,--SEA/αPolyAα 2例.非缺失型Hb H病血常规结果显示,红细胞计数(RBC)、血红蛋白(Hb)及平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的平均水平比缺失型Hb H病低,非缺失型Hb H病的Hb H平均水平比缺失型Hb H病的高,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:湛江地区Hb H病基因类型以缺失型为主,其中-SEA/-α3.7多见,--SEA/-α4.2次之.非缺失型Hb H病比缺失型Hb H病的贫血严重,非缺失型Hb H病比缺失型Hb H病的Hb H含量高.首次在广东地区发现--SEA/αPOlyAα Hb H病,临床上有中度贫血.
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广西地区200例儿童α地中海贫血血红蛋白H病基因突变的研究
目的:对广西地区儿童α地中海贫血血红蛋白H病(Hb H病)进行基因分析,明确基因突变类型.方法:应用多重PCR、反向斑点杂交及DNA测序方法进行α地中海贫血基因突变分析;应用统计软件SPSS13.0对数据进行统计分析.结果:200例Hb H病患儿检出104例缺失型Hb H病,占52.0%,包括67例--SEA/-α3.7,36例--SEA/-α4.2,1例--Thai/-α3.7;非缺失型HbH病96例,占48.0%,包括86例--SEA/αcsα,8例--SEA/αQSα,1例--Thai/αcsα及1例--SEA/α△30α.血红蛋白分析显示非缺失型Hb H病患儿的Hb H水平高于缺失型Hb H病(P＜0.001).结论:广西地区儿童Hb H病基因突变类型多样,以缺失型HbH病为主.首次在广西儿童中检出罕见的α2珠蛋白基因密码子30缺失及泰国缺失型α地中海贫血导致的Hb H病,丰富了Hb H病基因突变的研究,可为遗传咨询及将来的产前诊断提供重要的依据和指导.
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超声多普勒测量大脑中动脉和肝内脐静脉血流速度预测胎儿α地中海贫血的研究
目的:探讨应用超声多普勒联合测量胎儿大脑中动脉(MCA)和肝内脐静脉(IHUV)血流速度预测胎儿α地中海贫血(简称地贫)的价值.方法:对127例具有α地贫风险的胎儿和正常对照组44例胎儿行二维及多普勒超声检查,测量胎儿MCA收缩期峰值血流速度(PSV)和IHUV大速度(Vmax),并行羊膜腔穿刺或脐血穿刺术进行α地贫基因诊断.MCA-PSV和IHUV-Vmax均用中位数的倍数(MOM)表示.结果:重型α地贫胎儿MCA-PSV、IHUV-Vmax明显高于中间型α地贫、轻型α地贫和正常胎儿,差异有统计学意义(均P<0.05).MCA-PSV和IHUV-Vmax预测胎儿重型α地贫的佳临界点分别为1.29,1.27 MOM.MCA-PSV>1.29 MOM、IHUV-Vmax>1.27 MOM预测胎儿重型α地贫的灵敏度分别为80.00%、63.33%,特异度分别为93.62%、75.18%.MCA-PSV和IHUV-Vmax相结合预测胎儿重型α地贫的灵敏度、特异度分别为96.67%、98.42%.结论:超声多普勒测量胎儿MCA-PSV、IHUV-Vmax可作为预测胎儿重型α地贫的一种非侵入性方法.MCA-PSV是预测胎儿重型α地贫的可靠参数,优于IHUV-Vmax.MCA-PSV和IHUV-Vmax相结合,可以提高预测胎儿重型α地贫的灵敏度、特异度,降低重型α地贫漏诊率.
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α和β地中海贫血的羊水产前基因诊断
目的研究单管多重PCR体系检测缺失型α-地中海贫血及反向点杂交法检测β-地中海贫血在产前诊断中的应用价值.方法应用单管多重PCR体系产前检测37例父母均为α-地中海贫血杂合子的风险胎儿的羊水地贫基因及应用反向点杂交法产前检测18例父母均为β-地中海贫血杂合子的风险胎儿的羊水地贫基因.结果 37例α-地中海贫血风险胎儿中检出Hb Bart纯合子7例,左缺失型H病3例,右缺失型H病2例.18例β-地中海贫血的风险胎儿检出2例IVS-nt 654/CD41-42双重杂合子,1例IVS-nt 654纯合子.结论应用单管多重PCR体系及反向点杂交法进行α和β地中海贫血产前羊水基因检测,能快速、准确作出诊断,从而预防重症患儿的出生,达到优生目的.
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1280例新生儿脐带血α地中海贫血检测报告
目的探讨脐带血α地中海贫血的发生率.方法对1280例在我院出生的新生儿脐带血应用pH8.6琼脂糖凝胶血红蛋白电泳方法进行α地中海贫血检测.结果检出α地中海贫血153例,检出率为11.95%,其中α地中海贫血1 92例,α地中海贫血2 53例,HbH病4例,Bart水肿胎儿2例,另外检出2例慢泳Q组异常Hb.结论α地中海贫血是以基因携带者的形式存在人群中,对新生儿脐带血进行Hb电泳筛查,是较简便的方法.
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广西恭城瑶族自治县瑶、汉民族新生儿α地中海贫血4个类型的分布
目的:筛查广西恭城瑶族自治县瑶族和汉族新生儿4个类型α地中海贫血,以了解其分布规律及对指导优生优育的意义.方法:应用常规血红蛋白(Hb)电泳对广西恭城瑶族自治县1421例瑶族新生儿(男710例,女711例)和583例汉族新生儿(男296例,女287例)脐血定量检测Hb-Bart,按国内诊断标准对4个类型α地贫检出率进行分析.结果:瑶、汉两民族a地贫检出率分别为9.71%和7.72%,两者比较其差异有统计学意义(P＜0.05);其中瑶族新生儿α地贫4个类型的分布是:标准型α地贫(α1 地贫)占7.39%(105/1421),静止型α地贫(α2 地贫)占1.83%(26/1421),Hb-H病占0.42%(6/1421),Hb-Bart胎儿水肿综合征占0.07%(1/1421);汉族新生儿相应α地贫4个类型的分布是:α1 地贫占4.97%(29/583),α2 地贫占2.05%(12/583),Hb-H病占0.51%(3/583),Hb-Bart胎儿水肿综合征占0.17%(1/583).结论:广西恭城瑶族自治县瑶族新生儿α地贫发生率高于汉族新生儿,两民族的4个类型α地贫的分布规律相同.
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超声在α地中海贫血产前诊断中的应用和研究
α地中海贫血,简称α地贫,是一组由于α珠蛋白基因缺失或点突变,使血红蛋白中的α珠蛋白肽链合成减少或不能合成所致的遗传性溶血性贫血.本病以地中海沿岸国家和东南亚各国多见,我国以南方地区多见,在全国90万人的流行病学调查中得出的总发病率为2.46%,其中广西的发病率高,为14.95%.α地贫分为轻型、中间型和重型.重型和中间型是较严重的类型,目前治疗效果不理想,因此通过产前诊断预防患儿的出生就显得尤为重要.超声检查是目前诊断胎儿形态学直接、有效的手段之一.随着超声技术在产前诊断的应用范围不断拓宽,其在产前诊断α地贫中发挥着越来越重要的作用.
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超声技术在α地中海贫血产前诊断中的应用研究
α地中海贫血(简称α地贫)是地中海贫血的常见类型,是由于α珠蛋白基因缺失或缺陷使α珠蛋白链的合成受到部分或完全抑制而引起的溶血性贫血.若夫妇双方均为α地贫携带者,则有生育重型α地贫患儿的可能.重型α地贫又称血红蛋白Bart's胎儿水肿综合征,是一种致死性疾病,胎儿大多数在妊娠中晚期或者出生后数小时死亡;孕妇则可能出现妊娠高血压疾病、产后大出血等并发症,严重者可危及生命.由于α地贫无法根治,因此通过产前诊断预防重型患儿的出生就显得尤为重要.但是,传统的产前诊断方法如绒毛活检、羊膜腔穿刺术、脐血穿刺术等具有创伤性,可能导致流产、宫内感染、胎儿损伤等并发症,对母儿均有一定的危害.因此,无创性产前诊断方法成为了学者们研究的热点.
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海口地区α地中海贫血缺失型基因类型分析
目的 探讨海口地区α地中海贫血的发病率及分析缺失型基因的类型.方法 对具有α地中海贫血高风险的278人使用裂口PCR (gap-PCR)法进行缺失型基因的检测.结果 278人中检出α地中海贫血111人,发病率为39.93％.α地中海贫血缺失型基因类型分布为东南亚缺失型杂合子(-SEA/α α)28例,东南亚缺失型纯合子(--SEA/--SEA)4例,右缺失型杂合子(-α3.7/α α)23例,右缺失型纯合子(-α 3.7/-α 3.7)4例,左缺失型杂合子(-α 4.2/αα)17例,左缺失型纯合子(-α4.2/-α 4.2)2例,血红蛋白H病21例,3.7\4.2双重杂合子(-α3.7/-α4.2)4例,α地中海贫血复β地中海贫血8例.结论 α地中海贫血是常见、危害大的单基因遗传病,在海口地区属于高发病区,做好α地中海贫血基因类型的诊断对于优生优育起到极其重要的指导意义,提高整体人类出生素质.
关键词： α地中海贫血 裂口PCR法(gap-PCR) 缺失型基因类型 -
地中海贫血羊水及脐血产前基因诊断的临床研究
目的:研究检测α-地中海贫血及β-地中海贫血在产前基因诊断中的临床应用价值.方法:对48例地中海贫血的风险胎儿的羊水(或脐血)应用单管多重PCR体系和反向点杂交法检测α-地中海贫血和β-地中海贫血基因诊断.结果:共有38例胎儿检测出携有地中海贫血.其中α-地贫14例,包括东南亚缺失型杂合子(--SEA/αα)2例,东南亚缺失型纯合子(--SEA--SEA)8例;左缺失型杂合子(-α4.2/αα)1例,右缺失型杂合子(-α3.7/αα)2例,非缺失型点突变(ααT/αα)1例;β-地中海贫血24例,包括CD 41～42杂合子16例,-28(A-G)杂合子3例,双重杂合子3例(ⅣS2nt654/CD41-42,-28(A-G)/CD71-72(+A),-α3.7/CD41-42).其中10例重型地贫儿引产,1例重型地贫儿产后新生儿死亡.所有病例经引产或正常分娩后均留取脐带血作地贫基因诊断证实产前诊断.结论:应用单管多重PCR体系及反向点杂交法能快速、准确进行α和β-地中海贫血产前羊水基因检测,这对于有效预防重型地中海贫血胎儿出生具有重大临床意义.
