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伊尼奥小单孢菌2-脱氧蟹肌醇胺脱氢酶基因sisP的克隆与表达
目的:克隆西索米星生物合成基因--2-脱氧蟹肌胺(DOIA)脱氢酶基因.方法:以庆大霉素生物合成基因簇(AY524043)中的DOIA脱氢酶基因gntP作为参考模板设计引物,从伊尼奥小单孢菌(Micromonospora inyoensis)中,通过PCR方法扩增参与西索米星生物合成的DOIA脱氢酶基因,经测序鉴定、序列分析,并通过表达载体对该基因进行异源表达.结果:PCR扩增到一条长约1 035 bp的条带,包含一个开放阅读框长1 023 bp,推测其编码含340个氨基酸残基的蛋白质(相对分子质量约36×103),与已报道的DOIA脱氢酶同源性很高,该基因在IPTG诱导下,在大肠杆菌E.coli BL21 (DE3)实现过量表达,表达产物的相对分子质量与预测值一致.结论:通过PCR技术从伊尼奥小单孢菌中克隆到参与西索米星生物合成基因--DOIA脱氢酶基因,命名为sisP,GenBank登录号为EU200975.
关键词: sisP 2-脱氧蟹肌胺脱氢酶 西索米星 伊尼奥小单孢菌 -
HPLC-ELSD法分析硫酸奈替米星中的西索米星含量
目的: 建立一种硫酸奈替米星中西索米星含量的分析方法.方法:应用高效液相色谱-蒸发光散射检测法分析硫酸奈替米星中西索米星的含量.色谱条件:C18 Agilent色谱柱,规格: 4.6 mm×250 mm,5 μm;流动相:0.1 mol*L-1三氟乙酸水溶液-乙腈(9∶2);检测器条件:汽化温度为105 ℃,雾化温度为50 ℃,气体流速1.90SLM.结果:硫酸奈替米星样品中主成分与西索米星分离良好,西索米星杂质峰型及进样峰面积重现性良好(RSD<1.5%),在选定进样量范围内线性良好(Y=0.364 5X-1.817 8,r=0.993 8).结论:本方法操作简单,方法的准确性、重现性均能很好的满足质量控制的要求.
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静脉使用海洛因致高热2例报告
例1:患者,男,40岁,初中文化,已婚,待业.吸食海洛因8年余,1年前开始改烫吸为静注,目前日静注量约1.0 g,患丙肝、痔疮病史3年余.入院治疗第13d,已停服MTD6d,躯体依赖基本解除.在输能量盐水时,趁机将约0.2g海洛因粉从输液器橡胶管处掺进盐水中.查房时发现患者似飘飘然,意识尚清楚,查体:P78次/分,R 18次/分,Bp 120/75 mmHg,双瞳孔等大等圆约1.5 mm,即予纳洛酮针0.4 mg iv,注后一般情况可,约1h后诉头晕、头痛.测T39.5℃,医嘱予复方氨基比林针2 ml im,5%GNS 1500 ml、西索米星针100 mg、地塞米松针20 mg分组静滴,头痛渐缓解,输液完毕后体温降至正常,至出院未再出现发热.
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西索米星与头孢哌酮钠存在配伍禁忌
西索米星又名莱赛,属氨基糖苷类抗生素,为广谱杀菌剂.抗菌谱与庆大霉素相近.常用于治疗呼吸道、皮肤和软组织感染,感染性腹泻等.对于上述严重感染,宜与青霉素或头孢菌素等联合应用.但该药的配伍未列入<静脉药物配伍禁忌表>中.笔者在临床应用中发现西索米星与头孢哌酮钠(瑞特安)存在配伍禁忌现象,经及时采取有效措施,病人未出现不良反应,现报告如下.
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西索米星与七叶皂苷钠联用致急性肾衰竭
[例1] 女,28岁.因左侧腮腺肿瘤入院手术,术前肝、肾功能检查均正常.术后考虑患者体质虚弱(2个月曾行剖宫产术),为预防感染,予硫酸西索米星氯化钠注射液100 mL(0.1 g)1日2次静脉滴注,七叶皂苷钠30 mg每日1次静脉滴注.
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西索米星引起药物性耳聋1例报告
1 病历摘要患者,男,39岁,因咽喉部不适于2004年10月10日就诊于耳鼻咽喉科.经常规检查,诊断为咽炎.使用10%葡萄糖250ml、地塞米松10mg、西索米星0.2静脉滴注.当天到院外取药并行1次/d输液治疗.4d后出现耳鸣、听力下降、头昏症状,于10月20日复诊.检查见双侧鼓膜陈旧性穿孔,中耳腔黏膜干燥.纯音测听见双耳气、骨导消失.
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新型氨基糖苷类抗菌药plazomicin的合成
硫酸西索米星(2)经游离后,用4-硝基苄氧羰基(PNZ)选择性保护6'-位氨基,然后依次用叔丁氧羰基(Boc)保护2'-和3-位氨基,芴甲氧羰基(Fmoc)保护1-位氨基,及Boc保护3"-位氨基得[6'-(4-硝基苄氧羰基)-2',3,3"-三叔丁氧羰基-1-芴甲氧羰基]西索米星(6),再依次经脱除Fmoc、与N-叔丁氧羰基-4-氨基-2(S)-羟基丁酸(12)缩合和脱除PNZ得[2',3,3"-三叔丁氧羰基-1-[N-叔丁氧羰基-4-氨基-2(S)-羟基丁酰基]]西索米星(9),9与苯甲酰氧基乙醛(13)和三乙酰氧基硼氢化钠进行还原氨化制得[6'-苯甲酰氧基乙基-2',3,3"-三叔丁氧羰基-1-[N-叔丁氧羰基-4-氨基-2(S)-羟基丁酰基]]西索米星(10),脱除苯甲酰基保护得[6'-羟乙基-2',3,3"-三叔丁氧羰基-1-[N-叔丁氧羰基-4-氨基-2(S)-羟基丁酰基]]西索米星(11),后脱除Boc保护得plazomicin (1),总收率3.8%(以2计).其中10、11未见文献报道.
关键词: plazomicin 西索米星 氨基糖苷类抗菌药 合成 -
西索米星在卡那霉素链霉菌育种中的应用
卡那霉素(kanamycin,1)是临床上使用的重要抗生素,对大肠杆菌(Escherichia coli)、克雷白杆菌(Klebsiella)、肠杆菌属(Cedecea)、变形杆菌(Bacillus termo)、结核杆菌(Bacillus tuberculosis)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)等均有良好活性.1也是半合成抗生素丁胺卡那霉素的主要原料[1].
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西索米星发酵液絮凝预处理工艺研究
应用正交试验法研究非离子型聚丙烯酰胺和氯化铝六水合物的浓度、pH对西索米星发酵液过滤预处理过程的影响并确定适宜的絮凝工艺条件.结果表明:絮凝剂的浓度与pH对过滤过程的影响显著.佳絮凝工艺条件为聚丙烯酰胺浓度0.125g/L、氯化铝六水合物浓度8g/L,pH5.经絮凝处理的发酵液过滤常数比未经絮凝处理的提高28倍.
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硫酸奈替米星的合成工艺改进
改进了硫酸奈替米星合成工艺中的关键步骤,将三乙酰基西索米星中活性官能团先行保护后 ,改用硼氢化钠代替昂贵进口品氰基硼氢化钠,并采用一锅合成法制得成品,简化了工艺, 降低了原材料成本,成品的收率和质量也有明显的提高.
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伊尼奥小单孢工程菌S96深层优化培养特性研究
目的:伊尼奥小单孢工程菌S96的深层优化培养特性.方法:借助于国内外学者的经验,并结合微生物生长和生产营养原理,粗筛出一组较合适的生产配方,然后应用正交试验和数理统计法,优化出适合于工程菌S96的发酵生产配方,其组成为:淀粉5.5%,黄豆粉3.5%,K2HPO40.04%,花生粉1.5%,蛋白胨0.3%,葡萄糖0.1%,CoCl2 10 r/ml,消沫剂适量.根据溶氧曲线,优化发酵工艺,获得一套较适合于工程菌S96的代谢曲线特性图,按照该曲线特性图进行调控,可使西索米星的生产水平接近于实验室生产水平,充分发挥了工程菌S96的抗生素生物合成潜力,达到了较为理想的效果.
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伊尼奥小单孢工程菌S96培养特性研究
目的:对伊尼奥小单孢工程菌S96的培养特性进行研究.方法:采用单亲灭活原生质体融合技术,从伊尼奥小单孢菌融合的杂合体中筛选到的工程菌S96,根据培养特征比较,其菌丝形态特征,斜面培养特征,碳源利用特征和深层培养特征不同于出发菌株.结果:工程菌S96 几乎不产生色素,不利用可溶性淀粉,不产生孢子.但它在深层培养时,生长快,菌丝长,易成网,衰亡期大大推后,稳定期明显延长,可达9d之久.结论:工程菌S96的新特征是出发菌所没有的,是一株新的工程菌.
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凡命注射液致过敏反应2例
凡命注射液含有人体蛋白质所需要的十七种必需非必需氨基酸,能维持营养不良者的正氮平衡,促进肌体康复,在临床中凡命过敏反应很少报导,本院第二门诊部近期发现二例凡命致过敏反应,现报告如下.患者1 男,67岁,2000年5月来我院就诊.查T:36.8℃,Bp:17/8kPa,R:78次/min神志清,心肺正常.先滴注5%GNS250ml加Vc针20g,西索米星针0.1g,然后滴注凡命注射液(华瑞制药有限公司,0003115*1A),5min后,病人出现大汗发抖、胸闷、胸痛、心悸、周身皮肤湿冷,查体T:36℃,P:116次/min,Bp:9/6Kpa,诊断为过敏性休克,立即停止给药,吸氧、胸外按摩、注射肾上腺素1mg,20min后症状好转.
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HPLC-ELSD法测定硫酸西索米星氯化钠注射液中西索米星含量
目的建立高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定西索米星的含量.方法采用ZORBAX Extend-C18(4.6×250mm,5μm)柱,以0.2mol·L-1三氟醋酸-甲醇(92:8)为流动相,流速为0.6ml·min-1;蒸发光散射检测器:漂移管温度110℃,载气流速为2.8L·min-1.结果西索米星在1.021-10.21μg范围内呈良好线性关系,r=0.9999;平均回收率为101.6%,RSD=1.1%(N=9).结论本法简便快速,结果可靠,可用于西索米星的含量测定.
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西索米星生产培养基优化
在西索米星发酵与生产过程中,培养基组份品质、培养基配比极大地影响菌体生产与产抗能力.我们对西索米星发酵主氮源黄豆饼粉加工方法进行考察,发现采用热榨黄豆饼粉的稳定性优于冷榨黄豆饼粉;应用均匀设计优化发酵培养基也取得好效果.
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反相离子对色谱法测定发酵液中西索米星的含量
目的 建立可快速准确测定伊尼臭小单孢菌发酵液中西索米星含量的HPLC.方法 采用反相离子对色谱法,PDA检测界全波段扫描.结果 西索米星浓度范围在0.125~2.5mg·mL-1线性良好,相关系数为0.9993;测得发酵液样品的平均回收率为101.3%,RSD为0.68%,发酵液中西索米星与主要杂质的分离度为1.52.结论 方法准确可靠,可以用于西索米星发酵过程的含量测定.
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西索米星提取的动态吸附法研究
目的 探讨西索米星提取的动态吸附法的效果.方法 运用金属膜分离系统对西索米星发酵液进行固液分离,滤出液进行动态吸附.结果 过滤收率96.18%,采用动态吸附法,吸附废液效价13.5γ/mL,树脂吸附容量14.18γ/mL,脱色液透光度为93%~96%.结论 运用金属膜分离技术可有效进行西索米星发酵液的固液分离,动态吸附法在减少吸附损失、提高吸附交换率和树脂饱和度等方面具有明显的效果,可放大应用于工业化生产.
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西索米星治疗尿路感染88例临床体会
尿路感染在临床上较为多见,如不及时治疗病程迁延到6个月以上,易转为慢性尿路感染.我们2001年~2004年共遇130例患者,对治疗组88例采用西索米星治疗,收到良好效果,现报告如下.
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荚膜组织胞浆菌病一例
1临床资料
患者,女,30岁,2015年3月22日出现发热,持续三月余,每天一个热峰, Tmax 39.5℃,伴有畏寒、肌肉酸痛、头晕;无皮疹、头痛、咳嗽、咳痰、流涕、胸痛、腹痛、腹泻。自患病以来,精神、体力、食欲欠佳,睡眠可,大小便正常,体重下降5.5kg。自用头孢米诺、左氧氟沙星、西索米星抗感染,利巴韦林抗病毒治疗,无改善。2015年5月19日外院查体:浅表淋巴结、肝脾均未扪及;心肺(-),腹软,肝脏触诊锁骨中线肋下3cm,肝区叩痛,脾脏触诊第 II 线长约2cm。血常规:WBC 4.6×109/L, HGB 100g/L↓, PLT 159×109/L。尿常规(-);便OB (-);肝肾功能:TP 61g/L, Alb 29g/L↓,PA 79mg/L↓, ESR 14mm/h,其余指标未见明显异常;无特殊既往史、家族史,2015年3月15日参加过一次野外露营,近期未出国和去外地。2015年7月转入我院,入院诊断:发热原因待查。 -
液相色谱串联质谱法测定猪肉中奈替米星、西索米星和小诺霉素的残留量
目的 建立利用液相色谱串联质谱(HPLC-MS/MS)同时测定猪肉中奈替米星、西索米星、小诺霉素残留量的方法.方法 采用三氯乙酸溶液提取,HLB固相萃取柱净化,液相色谱串联质谱法测定.结果 奈替米星的检出限为9 μg/kg,线性范围为30μg/kg~300 μg/kg,相关系数为0.9999,回收率为76.4% ~88.5%,相对标准偏差为2.1%~8.6%;西索米星的检出限为9 μg/kg,线性范围为30μg/kg~300 μg/kg,相关系数为0.9990,回收率为94.3%~103.2%,相对标准偏差为1.0%~3.4%;小诺霉素的检出限为3μg/kg,线性范围为10 μg/kg~100μg/kg,相关系数为0.9995,回收率为87.6%~107.6%,相对标准偏差为5.9%~8.4%.结论 该方法准确、简单、易操作,满足猪肉中奈替米星、西索米星、小诺霉素的日常检测要求.