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HPLC测定新疆柴胡属4种植物中柴胡皂苷a,c,d的含量
柴胡是我国常用中药,<中国药典>规定正品柴胡为伞形科植物柴胡Bupleurum Chinese DC或狭叶柴胡B.scorzonerifolium Willd的干燥根[1],其主要成分为柴胡皂苷、挥发油、木脂素及多糖类等,因而相关产品也在不断地开发、投产和扩大生产,致使柴胡药材的使用量逐年增加.由于中国的药用柴胡绝大多数为野生品,所以扩大柴胡的野生资源和变野生为家种已到了非常迫切的地步.近年来,关于测定柴胡皂苷的报道很多,但极少涉及新疆地区的品种,为此本课题组特地到新疆维吾尔自治区调查当地柴胡的使用情况,结果发现除了已知的3种柴胡属植物外,还鉴定出了1个新种,喀纳斯柴胡B.kanasii S.L.Pan et Zh Chao sp.nov.本研究运用HPLC同时对新疆维吾尔自治区的4种柴胡属植物的柴胡皂苷a,c,d(简记为ssa,ssc,ssd)进行了含量测定,为其日后进一步的开发和应用提供依据.
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正交设计优化柴胡滴丸的工艺
中药柴胡系伞形科柴胡属植物的干燥根,具有解表、退热、疏肝解郁的功能,主治感冒发热、寒热往来、胸肋腹痛等症,其主要成分为柴胡皂苷及挥发油.柴胡滴丸系选用上等北柴胡,利用现代高科技手段制成的纯中药制剂,本研究探讨其佳滴制工艺.
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柴胡皂苷经不同给药途径血药和脑药动力学的比较研究
通过比较柴胡皂苷经不同途径给药后血药及脑药动力学,评价柴胡皂苷治疗癫痫的佳给药途径.柴胡皂苷经不同途径给予小鼠后于不同时间点取血和全脑,以乙腈-甲醇(9∶1)沉淀血浆蛋白质,采用UPLC-MS/MS测定SSa在小鼠血浆和脑组织中的浓度,用Kinetica程序软件计算药代动力学参数和生物利用度,并计算脑靶向系数(Re)和药物脑靶向指数(DTI).鼻腔给药后脑药Re为142.17%,DTI为3.06,要显著高于注射组.灌胃组DTI为1.25.柴胡皂苷鼻腔给药后脑靶向性要高于注射组和灌胃给药组,显示出鼻腔给药"引药入脑"的优势.
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柴胡皂苷防治肝病机制研究进展
柴胡是我国传统中药和常用中药,具有解表退热、疏肝解郁、升举阳气的功效,以其为君药的方剂小柴胡汤在临床治疗慢性肝炎和肝硬化方面有独特的疗效.柴胡的主要活性成分是柴胡皂苷(saikosaponins,SS),根据化学结构不同分为SSa、SSb1-4、SSc、SSd、SSe、SSf、SSh等单体成分,其中以SSa、SSc、SSd的含量高.近年来国内外对SS进行了药学、药理学等方面广泛的研究,发现其具有免疫调节、保肝、抗病毒及抗肿瘤等活性[1].本文就SS防治慢性肝病的机制进展综述如下,以期为其进一步研究和开发提供依据.
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柴胡皂苷对慢性胆源性胰腺炎大鼠胰腺外分泌功能的影响及机制探讨
目的 观察柴胡皂苷(SS)对慢性胆源性胰腺炎(CGP)大鼠胰腺外分泌功能的影响,并探讨其机制.方法 选取40只Wistar大鼠建立CGP模型,将建模成功大鼠随机分为模型组、高剂量组和低剂量组,剩余10只健康Wistar大鼠作为对照组(仅游离胆总管末端),高剂量组和低剂量组分别灌胃160 mg/kg、80 mg/kg SS溶液,对照组和模型组灌胃生理盐水溶液,每天1次,连续5 d.对比各组灌胃后第1、3、5天血清淀粉酶、胆红素水平,对比灌胃前和灌胃第1、3、5天粪弹性蛋白酶-1(FE-1)水平;末次灌胃6 h后进行胰泌素(CCK)试验并进行组织形态学观察,对比3组大鼠胰液分泌量、胰液蛋白及HCO 3-水平;并对比大鼠胰腺组织中即刻早期基因(c-fos、c-jun)mRNA及蛋白相对表达量.结果 经血清生化检验及HE染色检验,确认30只大鼠建模成功,灌胃后模型组胰腺纤维组织增生加重,低剂量组纤维组织减少;高剂量组纤维组织明显较少.灌胃后大鼠血清淀粉酶、胆红素组间比较,对照组低、高剂量组其次、低剂量组稍高、模型组高,且每两组间比较差异均显著(P<0.05),灌胃后高、低剂量组随时间延长呈显著降低趋势(P<0.05),模型组随时间延长呈显著升高趋势(P<0.05);灌胃前低、高剂量组和模型组FE-1水平均显著低于对照组(P<0.05),灌胃后FE-1水平组间比较,对照组高、高剂量组其次、低剂量组稍低、模型组低,且每两组间比较差异有显著性(P<0.05);灌胃后高、低剂量组随时间延长呈显著升高趋势(P<0.05),模型组随时间延长呈显著降低趋势(P<0.05);对照组血清淀粉酶、胆红素、FE-1水平随时间延长变化不显著(P>0.05);注射后CCK后大鼠胰液分泌量、胰液蛋白及HCO3-水平均显著高于基础值(P<0.05),注射前、后上述指标比较,对照组高、高剂量组其次、低剂量稍低、模型组低,每两组间比较差异均显著(P<0.05);胰腺组织中c-fos、c-jun mRNA及蛋白相对表达量组间比较,对照组低、高剂量组其次、低剂量组稍高、模型组高,且每两组间比较差异均显著(P<0.05).结论 SS可显著改善CGP大鼠的胰腺外分泌功能,可能与c-fos、c-jun mRNA及蛋白表达抑制有关.
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柴胡属药用植物的分子鉴定及市售柴胡药材的质量调查
柴胡是常用的大宗中药材之一,在我国有着两千多年的药用历史.但是目前柴胡药材品种混乱,有25种、8变种、3变型的柴胡属药用植物在不同地区和中药材市场作为柴胡使用,通过传统方法鉴别极为困难.为快速准确地对柴胡属为数众多的药用植物进行鉴定,本文从全国9省份14居群采集了168株柴胡属药用植物,扩增获得了长度为600～606 bp的ITS序列;通过DNAMAN比对分析找到86个变异位点,并确定了19种ITS单倍型(TH1～TH19);利用MEGA 5.0进行K2P (Kimura 2-parameter)遗传距离分析,发现种间遗传距离显著大于种内遗传距离;利用邻接(neighbor joining,NJ)法构建系统发育树,显示各物种聚类关系清晰,因此建立了基于ITS序列的柴胡属药用植物分子鉴定方法.利用该方法对来自全国5个主要中药材市场的52份柴胡药材进行了分子鉴定,并进一步利用HPLC法测定各药材中柴胡皂苷a、柴胡皂苷c及柴胡皂苷d的含量,应用ANOVA和LSD T检验进行统计学分析,从而对市售柴胡药材的质量进行评价.本文不仅对柴胡属药用植物的快速准确鉴定具有重要意义,而且对于掌握市场上柴胡药材的流通现状及质量评价具有指导意义.
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北柴胡不同产地、不同采收期和不同炮制品中6种柴胡皂苷的含量测定
为研究不同产地、不同采收期和不同炮制品种北柴胡中皂苷类成分的含量差异,建立了可以同时测定北柴胡中柴胡皂苷a、b2、c、d、e和f含量的HPLC方法,采用Ageia Venusil MP C18 (4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,乙腈-水为流动相进行梯度洗脱,流速为1.0 mL·min-1,柱温为30℃,检测波长为210 nm和254 nm.以6种柴胡皂苷的含量为指标,系统研究了北柴胡4个产地、8个采收期和11种炮制方法中皂苷类成分差异.结果表明:4个产地中,辽宁、陕西和甘肃的北柴胡中柴胡皂苷的含量在5月和8月均较高,而山西产只在8月达到大值.11种炮制品中柴胡皂苷含量依次为:生品＞麸炒品＞炒制品＞酒拌品＞鳖血炙品＞酒润麸炒品＞酒炙品＞醋拌品＞鳖血黄酒炙品＞醋炙品＞蜜炙品＞蜜拌品.
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基于NF-κB信号通路的柴胡皂苷促乙醇诱导Ges-1增殖作用机制研究
目的:探讨柴胡皂苷通过影响NF-κB信号通路促进乙醇诱导的Ges-1细胞增殖的作用机制.方法:ELISA法检测NF-κB信号通路中各组细胞IL-8含量;PCR法检测NF-κB,TNF-α及Flt-1 mRNA的表达水平;Western blotting法检测VEGF蛋白的表达水平.结果:柴胡皂苷各个剂量均能显著提高Ges-1细胞的增殖率;降低NF-κB信号通路中IL-8含量;抑制NF-κB及TNF-α m RNA表达;促进VEGF及Flt-1 mRNA表达,其中柴胡皂苷中剂量的治疗效果好且对上述物质的影响作用强.结论:柴胡皂苷通过影响NF-κB信号通路促进乙醇诱导的Ges-1细胞增殖,进而起到治疗胃溃疡的作用,该研究为胃溃疡新药的开发提供理论依据.
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柴胡皂苷及其代谢产物潜在靶点蛋白预测和部分验证
目的 以柴胡的主要药效/毒性成分柴胡皂苷(SS)及代谢产物(共30种化合物)为研究对象,预测并验证部分靶点蛋白.方法 ①通过PharmMapper反向分子对接法和Sybyl X正向分子对接预测SS及其代谢产物的潜在靶点蛋白,并预测了柴胡皂苷a(SSa)与潜在靶点蛋白谷胱甘肽S转移酶A2(GST A2)间的结合模式.②体外实验:用SSa 0,0.03,0.06,0.13,0.25和0.50 mmol·L-1处理HepaRG细胞24 h,采用CCK-8法检测细胞存活率;HepaRG细胞用SSa 0,0.03,0.13和0.50 mmol·L-1处理24 h,GST活性检测试剂盒检测细胞GST酶活性.结果 ①PharmMapper和Sybyl X预测SS及代谢产物的潜在靶点蛋白包括:GST A2、磷脂酰胆碱转移蛋白、腺苷激酶、胸苷酸合成酶、雌激素受体、雌二醇17-β-脱氢酶1、原癌基因丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶Pim1、胆汁酸受体和维A酸结合蛋白2.预测结果显示,SSa与GST A2之间对接得分高,二者匹配良好,很可能存在相互作用.②体外实验:SSa能抑制HepaRG细胞存活,呈一定的量效关系(R 2=0.8848,P<0.05);随着SSa浓度升高,细胞内GST活性升高(P<0.01).结论 SS及其代谢产物的潜在靶点蛋白为GST和磷脂酰胆碱转移蛋白等,GST可能是SSa的靶点蛋白之一.
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不同精制工艺对柴胡皂苷类物质含量及急性毒性影响研究
目的 通过对树脂类型、洗脱溶剂种类和浓度的比较研究,探讨不同精制工艺对柴胡皂苷类物质基础含量高低及急性毒性大小的影响,以确定柴胡的毒性物质基础.方法 采用HPLC法、经典急性毒性实验法,进行不同精制工艺的柴胡皂苷a的含量测定及急性毒性比较研究.结果 以柴胡皂苷a含量为指标,确定D101大孔树脂比AB-8更优于皂苷类物质的分离纯化,洗脱溶剂为70%乙醇可以达到更为理想的洗脱效果;对小鼠急性毒性的影响大小为:70%乙醇洗脱液>50%乙醇洗脱液>30%乙醇洗脱液>80%乙醇洗脱液>水洗脱液>95%乙醇洗脱液.结论 不同精制工艺对柴胡皂苷a含量和毒性大小存在显著差异,且柴胡毒性大小与皂苷类物质含量高低有一定的相关性,故确定采用D101大孔树脂吸附,洗脱液为70%乙醇为富集柴胡皂苷的佳精制工艺.
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柴胡口服液的工艺研究
目的：探讨完善柴胡口服液中的柴胡提取工艺及其参数的方法。方法以药典质量标准为指标，通过调整浸渍方法、浓缩温度和时间、冷藏条件和pH值、辅料用量等方法，解决原工艺产品鉴别和澄清度不合格的质量问题。结果通过增加药材冷浸12 h提高了挥发油的提取率；通过控制浓缩温度和时间尽可能减少了柴胡皂苷d的分解；通过正交试验筛检，将得到的提取液置于1℃、pH值为7.0条件下冷藏48 h，将杂质有效除去。通过增大丙二醇用量增加了产品的溶解稳定性。结论按改进后的工艺条件生产，三批成品质量合格，初步稳定性试验结果表明该工艺稳定、可行。
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柴胡的HPLC-ELSD指纹图谱研究
本文建立了一种简单、有效的柴胡药材的高效液相色谱-蒸发光散射(HPLC-ELSD)指纹图谱方法,并对不同产地和不同品种的柴胡药材及其饮片进行了系统评价.研究结果显示南柴胡药材和市售柴胡饮片的化学成分变化较大,而北柴胡药材的化学成分则相对稳定,且南柴胡药材与北柴胡药材化学成分差别明显,提示南柴胡药材作为柴胡应用要谨慎.另外与柴胡药材相比,柴胡饮片的指纹图谱也发生了变化,尤其是保留时间在30-40分钟之间和45分钟之后色谱峰变化尤为明显,提示在炮制过程中可能发生了化学成分的变化.终本文确定了柴胡中12个主要皂苷类成分的色谱指纹峰,并建议柴胡皂苷a、c和d为其基本特征峰,这对于柴胡的品种鉴定和质量控制具有指导意义.
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高效液相色谱串联质谱同时测定柴胡配方颗粒中柴胡皂苷a、b1、b2、c的含量
目的 建立高效液相色谱串联质谱同时测定柴胡配方颗粒中柴胡皂苷a、b1、b2、c的含量,为其质量标准的研究提供依据.方法 采用Kinetex C18色谱柱(2.1 mm×100 mm,2.6 μm);流动相为乙腈-0.1％甲酸水溶液,梯度洗脱;流速为300μL·min-1;柱温40℃;质谱条件:采用电喷雾离子源负离子模式进行检测,多反应监测模式(MRM)用于定量测定,源喷射电压为-4500 V,离子源温度为550℃.结果 柴胡皂苷a、b1、b2、c的峰面积与质量浓度在测定范围内均呈良好的线性关系,r≥0.999 1;平均加样回收率分别为100.56％、98.50％、97.44％、99.12％.结论 该方法同时测定了柴胡配方颗粒中柴胡皂苷a、b1、b2、c的含量,方法可行,重现性好,可为柴胡配方颗粒的质量控制提供方法参考.
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炮制对柴胡药材中4种柴胡皂苷的影响
目的 建立生柴胡、醋柴胡和酒柴胡中柴胡皂苷a、b2、b1、d的HPLC含量测定方法,并比较炮制前后4种柴胡皂苷的含量的变化.方法 采用Hypcrsil C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈-水,梯度洗脱(0～50 min:30:70→50:50):流速:1.0mL·min-1;柱温:30℃;检测波长:210和254nm.结果 柴胡经不同的方法炮制后,4种柴胡皂苷的含量有不同程度的变化.结论 本方法简便、可靠、重现性好,可用于柴胡及其炮制品中柴胡皂苷a、b2、b1、d的含量测定,并为全面控制其质量提供参考,为深入探讨柴胡炮制的意义,提供一定的实验依据.
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柴胡皂苷对抑郁模型大鼠行为及海马Caspase-3、Caspase-9蛋白表达的影响
目的 探讨柴胡皂苷对抑郁模型大鼠行为学及海马Caspase-3、Caspase-9蛋白表达的影响.方法 60只2～3月龄SD大鼠随机分为对照组、模型组、氟西汀组和柴胡皂苷组,每组15只.采用慢性轻度不可预见性应激刺激(CUMS)结合孤养方式复制大鼠抑郁模型.从造模第2天开始,氟西汀组(1.2 mg/kg)及柴胡皂苷组(25 mg/kg)进行灌胃给药,每日1次.于实验21 d,分别进行敞箱实验及糖水消耗量实验检测大鼠行为学改变;采用免疫组化法及RT-PCR法检测大鼠海马区Caspase-3、Caspase-9蛋白及基因的表达水平.结果 造模21 d后,与对照组相比,模型组大鼠行为学指标明显降低(P＜0.05);与模型组比较,氟西汀组与柴胡皂苷组大鼠行为学指标明显改善(P＜0.05);免疫组化及PCR检测结果显示,海马区Caspase-3、Caspase-9蛋白及基因表达,模型组与对照组比较表达明显增强(P＜0.05),氟西汀组及柴胡皂苷组与模型组比较表达明显降低,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 柴胡皂苷可有效改善大鼠抑郁样行为,其机制可能与抑制海马区Caspase-3、Caspase-9蛋白表达有关.
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柴胡皂苷诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用机制
目的 探讨柴胡皂苷对卵巢癌SKOV3细胞增殖、自噬及凋亡的影响.方法 将SKOV3细胞分为对照组(正常培养SKOV3细胞)、低剂量组(SKOV3细胞+10μmol/L柴胡皂苷)和高剂量组(SKOV3细胞+20 μmol/L柴胡皂苷)进行培养.采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞24、48、72 h细胞增殖情况;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组细胞中Bcl-2、Bax和Caspase-3表达情况;采用Westernblot技术检测各组细胞LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ及Beclin-1表达情况.结果 与对照组比较,低剂量组和高剂量组可抑制SKOV3细胞生长并促进凋亡(P＜0.05);柴胡皂苷干预治疗SKOV3细胞后,细胞中Bax/Bcl-2比值升高,Cas-pase-3表达增多(P＜0.05);柴胡皂苷可使SKOV3细胞中LC3-Ⅰ/LC3-Ⅱ比值降低,Beclin-1表达升高,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 柴胡皂苷可通过增强卵巢癌细胞自噬强度,导致细胞凋亡,从而达到抑制人卵巢癌SKOV3细胞生长的作用.
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柴胡总皂苷对CCl4诱导的大鼠肝纤维化的保护作用
目的:研究柴胡总皂对CCl4诱导的肝纤维化大鼠的保护作用,为进一步临床应用提供理论基础.方法:对正常组,模型组,柴胡总皂苷高、中、低剂量组,秋水仙碱组6组进行观察比较.结果:柴胡总皂苷能明显降低血清ALT、AST的含量,显著升高血清ALB的含量,能明显降低血清HA、LN、PCⅢ含量.结论:柴胡总皂苷抑制胶原纤维的形成,具有保护肝细胞,抗肝纤维化的作用.
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柴胡果实挥发油成分的GC-MS分析
柴胡为常用中药,始载于<神农本草经>,列为上品.柴胡具有和解表里、疏肝、升阳的功效,主要用于感冒发烧、胸胁胀痛、月经不调等症,其主要化学成分是柴胡皂苷和挥发油等[1,2].Fujioka等[3]从圆叶柴胡 Bupleurum rotundi folium L.
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柴胡皂苷的药理作用及抗肝纤维化的应用
柴胡为伞形科植物柴胡Bupleurum chinenes BC.的根,味苦、微辛,性平,具有解表退热、疏肝解郁、升举阳气的功效.主治风热感冒、百日咳、肝郁肋痛、风疹、疮毒节肿等[1].
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HPLC法测定柴胡中柴胡皂苷a的含量
柴胡为伞形科植物北柴胡Bupleurum chinense DC.和狭叶柴胡B.scorzonerifolium Willd.的干燥根.柴胡主要有效成分为挥发油及柴胡皂苷,尚含微量的黄酮类成分.由于黄酮类成分甚微,挥发油的成分复杂,且多变,均难以测其含量.测定柴胡皂苷的含量是控制柴胡质量的理想方法.
