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survivin反义寡核苷酸对肝癌细胞生长抑制作用的研究
目的:采用反义寡核苷酸封闭肝癌细胞中survivin基因的表达,研究其对肝癌细胞生长的抑制作用.方法:针对survivin mRNA翻译起始位点设计并合成反义寡核苷酸(antisense oligonucleotide,ASODN);采用脂质体介导survivin ASODN转染人肝癌细胞株SMMC-7721细胞,western-blot及原位杂交方法检测survivin蛋白及mRNA表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率的变化,检测转染前后细胞贴壁率及细胞生长抑制率变化,绘制细胞生长曲线.结果:脂质体介导survivin反义寡核苷酸转染肝癌细胞后survivin蛋白及mRNA表达分别从69.59及75.61降低至10.71及22.94,细胞贴壁率从90.68%降低至33.16%,细胞凋亡率从0.7%增加至31.35%,均有显著差异.转染后对细胞生长的抑制作用可以维持大约1 wk,在转染后第3 d抑制率高可达71.8%.结论:脂质体介导转染survivin反义寡核苷酸可以有效降低细胞内survivin基因的表达,诱导细胞发生凋亡,抑制肝癌细胞生长.
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IL-17体外促进小鼠脾淋巴细胞对髓母细胞瘤的生长抑制作用
目的 研究在脾细胞抗髓母细胞瘤的免疫过程中,IL-17所起的免疫调节功能.方法 将小鼠脾脏取得的脾淋巴细胞在不同浓度的IL-17下与髓母细胞瘤Daoy细胞株共培养,以Daoy细胞株单独培养组作为对照,用二苯基溴化四氮唑蓝法测定细胞毒性效应.结果 实验结果 发现各组Daoy细胞株和脾细胞共培养组在不同浓度IL-17(20ng/mL、40ng/mL、60ng/mL、80ng/mL)条件下细胞抑制率有统计学意义(P<0.01),且IL-17在一定浓度范围内(20~80ng/mL),IL-17浓度越高,髓母细胞瘤的细胞生长抑制率越大.此外且随着时间的增加,各组肿瘤细胞的生长抑制率也均有增加.结论 IL-17在一定浓度范围内能增加小鼠脾细胞对髓母细胞瘤Daoy细胞株的生长抑制作用,且在一定时间段内,随着时间的增加,各组肿瘤细胞的生长抑制率也均有增加.
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含HSV-TK基因的重组腺病毒的构建及其对肿瘤细胞的抑制作用
目的:构建含HSV-TK基因的重组腺病毒AdTK并观察AdTK/GCV系统对体外培养的PG49、H460、MCF-7和HeLa4种肿瘤细胞株的抑制作用.方法:采用同源重组法构建AdTK;用MTT法测定细胞生长抑制率.结果:已成功构建了AdTK;AdTK/GCV系统对4种肿瘤细胞的生长抑制率随AdTK、GCV浓度及作用时间的增加而升高.结论:所构建的AdTK/GCV系统对4种肿瘤细胞株有明显的抑制作用.
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分解后白术挥发油/环糊精包合物荧光分析方法研究
白术挥发油是白术药材抗肿瘤有效成分，挥发油抗肿瘤作用确切［1］。挥发油中苍术酮不稳定，易氧化分解［2］。
研究表明，分解前、后挥发油对肿瘤细胞株均具有杀伤抑制作用，作用浓度和作用时间与细胞生长抑制率呈正相关。分解前、后挥发油均具有诱导肿瘤细胞发生凋亡的作用。分解前的挥发油主要在凋亡早期发挥作用，分解后的挥发油在凋亡早期、晚期均发挥作用，分解前、后挥发油均具有抗肿瘤药用研发价值［3，4］。对分解前、后挥发油中化学成分种类及其相对含量进行的比较研究结果表明，分解后挥发油中极性成分占总化学成分90％以上，鉴定出的挥发油中的化学成分有27个，占总成分的91％。挥发油中苍术酮分解完成后，挥发油中的其他不稳定成分也随之完全分解，挥发油中各化学成分及其相对含量可处于一种稳定状态［5］。据此，我们确定了分解后白术挥发油为抗肿瘤药用研发对象。 -
紫杉醇对胶质瘤SHG-44细胞的增殖抑制和辐射增敏作用
目的 观察紫杉醇对胶质瘤SHG-44细胞的抑制及放射增敏作用,并探讨其作用机制.方法 不同浓度紫杉醇(0、0.062 5、1.25、2.5、5和10 μg/mL)作用于SHG-44细胞,MTT法检测紫杉醇对SHG-44细胞的增殖抑制作用；克隆形成法检测细胞辐射敏感性变化,流式细胞术检测细胞凋亡百分率变化.结果 紫杉醇有明显的抑制SHG-44细胞增殖和提高其放射敏感性的作用,紫杉醇可提高3、6Gy照射24h后SHG-44细胞的凋亡率.结论 紫杉醇对人胶质瘤SHG-44细胞具有杀伤及放射增敏作用.其可能机制是加强射线对肿瘤细胞的诱导凋亡效应,增强其杀伤肿瘤作用.
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顺铂对鼠胶质瘤SHG-44细胞的增殖抑制和辐射增敏作用
目的:观察顺铂对鼠胶质瘤SHG-44细胞的抑制及放射增敏作用,并探讨其作用机制.方法:不同浓度紫杉醇(0、0.625 μg/ml、1.25 μg/ml、2.5 μg/ml和5 μg/ml)作用于SHG-44细胞,MTT法检测顺铂对SHG-44细胞的增殖抑制作用;克隆形成法检测细胞辐射敏感性变化,流式细胞术检测细胞凋亡百分率变化.结果:顺铂有明显的抑制SHG-44细胞增殖和提高其放射敏感性的作用,顺铂可提高3 Gy、6 Gy照射24 h后SHG-44细胞的凋亡率.结论:顺铂对人胶质瘤SH-44细胞具有杀伤及放射增敏作用.其可能机制是加强射线对肿瘤细胞的诱导凋亡效应,增加其杀伤肿瘤作用.
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血清物质对人肝癌Bel-7402细胞存活及白蛋白mRNA表达的影响
目的 研究血清物质对人肝癌Bel-7402细胞生长抑制率及白蛋白(ALB)mRNA表达的影响.方法 用重型肝炎合并Ⅱ期肝性脑病患者血清对Bel-7402细胞进行干预,四氮唑蓝比色分析法(MTT法)染色后测出A值,根据A值计算出细胞生长抑制率.根据细胞培养上清中ALT、乳酸脱氢酶(LDH)释放率推断细胞膜的受损情况.细胞培养24 h后提取细胞内总mRNA,反转录成cDNA,用PCR法扩增得到ALB mRNA的特异电泳带,通过凝胶成像系统,测得电泳带光密度和面积,计算AIB mRNA的相对量.结果 (1)MTT实验表明,实验组血清对Bel-7402细胞的生长抑制率随血清浓度升高而增加,当血清浓度高达50.0%时培养48 h后细胞生长抑制率为73.14%,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01).(2)25.0%血清浓度作用下,不同时间段检测细胞培养上清液中ALT、LDH释放率,实验组与对照组差异均无统计学意义(P>0.05).(3)25.0%血清浓度作用24 h后,用RT-PCR法测得实验组血清培养后细胞内ALB mRNA表达明显减少(P<0.01).结论 发生Ⅱ期以上肝性脑病的重型肝炎患者血清对肝细胞的生长有抑制作用,可能通过抑制肝细胞内ALB mRNA的表达使肝细胞的生长受到抑制,但在肝细胞生长过程中对细胞膜无直接破坏作用.
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抑瘤宁对体外培养MDA-MB-231、NCI-H520、A549、Hela细胞的影响
目的 研究抑瘤宁对体外培养MDA-MB-231、NCI-H520、A549、Hela细胞的生长抑制作用.方法 采用MTT法检测抑瘤宁对体外培养MDA-MB-231、A549、NCI-H520、Hela细胞的生长抑制作用;采用流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞周期分布及凋亡率.结果 抑瘤宁可明显的抑制MDA-MB-231、NCI-H520、Hela、A549细胞的生长.流式细胞仪检测MDA-MB-231细胞周期分布及凋亡率结果显示,各实验组S期细胞百分率明显升高,G0-G1期细胞百分比明显下降,细胞被阻滞于S期,细胞凋亡率升高.结论 抑瘤宁对MDA-MB-231细胞的增殖具有明显抑制作用,其机制可能与细胞周期阻滞和凋亡有关,对NCI-H520、A549细胞及人宫颈癌Hela细胞有明显的生长抑制作用.
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重组苦瓜MAP30蛋白对大肠癌LoVo细胞凋亡的影响
目的:克隆及重组苦瓜蛋白MAP30,观察MAP30对大肠癌LoVo细胞凋亡的影响.方法:RT-PCR法克隆MAP30基因的cDNA序列,并表达、纯化MAP30蛋白;MTT法测定纯化的MAP30蛋白对LoVo细胞的生长抑制作用;彗星实验观察MAP30引起凋亡的LoVo细胞基因组的降解情况.结果:成功克隆了苦瓜蛋白MAP30基因;MAP30蛋白对LoVo细胞体外生长具有抑制作用;MAP30蛋白对LoVo细胞半数抑制质量浓度(IC50)为70.0 mg/L.MAP30在体外能诱导LoVo细胞凋亡.结论:重组的苦瓜MAP30蛋白在体外能抑制LoVo细胞生长,并能诱导其凋亡.
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热疗与紫杉醇联合应用对H446细胞生长和MMP-2 mRNA表达的影响
目的:探讨单纯热疗、单纯化疗以及热化疗联合应用对H446细胞生长及MMP-2 mRNA表达的影响.方法:以不同温度(39℃、40℃、41℃、42 oC、43℃和44℃)、不同剂量紫杉醇(30μg/L、60μg/L、120μg/L、240μg/L和480μg/L)及热化疗联合的方法处理H446细胞.同时设对照组(0μg/L紫杉醇,37℃),每组又分为3个热疗时间(30 min、60 min和90 min),观察热疗、化疗和热化疗联合对H446细胞生长抑制率的影响;另取H446细胞.分为单纯热疗组(43℃,90 min),单纯紫杉醇化疗组(60μg/L、120μg/L和240 μs/L),43℃热疗90 min联合紫杉醇组(60μg/L、120μg/L和240μg/L),对照组(0μg/L、37℃),采用RT-PCR检测各组细胞MMP-2 mRNA的表达.结果与结论:单纯热疗与紫杉醇均可抑制H446细胞的生长,热疗不同程度地增强r紫杉醇对H446细胞的增殖抑制率,热化疗联合对H446细胞生长抑制的优组合是43℃热疗90 min联合120μg/L紫杉醇化疗,在此条件下,H446细胞MMP-2 mRNA的表达明显降低,提示热化疗联合对H446细胞增殖的抑制作用可能是通过降低MMP-2 mRNA的表达,从而抑制肿瘤细胞的侵袭和转移而实现.
关键词： 热疗 紫杉醇 细胞生长抑制率 MMP-2 mRNA H446细胞 -
全反式维甲酸对EC9706细胞体外增殖抑制及诱导凋亡作用
目的:观察全反式维甲酸(ATRA)对食管癌细胞体外增殖抑制及诱导凋亡的作用.方法:应用不同浓度(1×10-6、1×10-5、5×10-5 mol/L)ATRA体外处理人食管癌细胞EC9706(ATRA1、ATRA2、ATRA3组),并设不加ATRA的对照组,倒置显微镜下观察细胞的生长状态,HE染色后光镜下观察细胞结构的改变,应用MTT法测定细胞生长抑制率,免疫组织化学技术检测凋亡相关蛋白Bax及Bcl-2的表达情况.结果:经ATRA处理后,ATRA3组与对照组比较,细胞生长速度减慢,群体倍增时间延长(P均＜0.05);光镜下可见细胞形态趋向良性分化,细胞质内成熟细胞器增多,生长抑制率增加(P＜0.05).与对照组比较,3个ATRA组细胞Bax蛋白表达增加、Bcl-2蛋白表达下降(P<0.01),且以ATRA2、ATRA3组为明显(P<0.05).结论:ATRA能有效抑制EC9706细胞增殖,其机制与Bax及Bcl-2蛋白表达调控有关.
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扶正解毒方对肺腺癌 A549细胞生长及凋亡的影响
目的：探讨扶正解毒方对肺腺癌 A549细胞生长及凋亡的作用。方法：将10只大耳白兔随机分为扶正解毒方高剂量组、中剂量组、低剂量组，对照组，环磷酰胺（ CTX）组5组，每组各2只。扶正解毒方高剂量组、中剂量组、低剂量组分别按16 g·kg -1、8 g·kg -1、4 g·kg -1剂量口服灌胃；对照组给予相同剂量生理盐水，每日1次，连灌1周；环磷酰胺（CTX）组第1天予20 mg ·kg -1腹腔注射。末次用药后1 h，各组均在无菌条件下心脏采血，分离血清。采用血清药理学方法，对 A549细胞株进行体外培养，然后分别加入扶正解毒方高剂量、中剂量、低剂量含药血清、对照组含药血清、CTX 含药血清，通过光学显微镜直观法、细胞计数法、MTT 法、流式细胞仪法等对 A549细胞生长及凋亡指标进行测定。结果：A549细胞在显微镜下呈现典型的凋亡形态学改变；细胞生长曲线提示，扶正解毒方对 A549细胞的抑制作用呈明显时效和量效关系；MMT 法提示，扶正解毒方对 A549细胞生长的抑制率随浓度的增加而增加，呈效应-剂量依赖关系；流式细胞仪检测显示，细胞凋亡率随着药物剂量的增加和作用时间的延长而增加，药物作用72 h 后，扶正解毒方低剂量组、中剂量组、高剂量组凋亡率分别为（6.30±1.01）%、（15.72±1.54）%、（23.40±1.34）%，与对照组比较，差异均有统计学意义（P <0.05）。结论：扶正解毒方可抑制肺腺癌 A549细胞生长、诱导细胞凋亡。
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槐定碱抑制人胃癌细胞株SGC7901增殖的实验研究
目的 观察槐定碱对人胃癌细胞株SGC7901增殖的影响.方法 应用不同浓度槐定碱作用于体外培养的人胃癌细胞株SGC7901,分别用倒置显微镜观察各组细胞形态学改变,MTT法检测SGC7901细胞吸光度及生长抑制率.结果 不同浓度的槐底碱与阴性对照组比较,细胞生长明显受到抑制(P＜0.05),抑制率3.6％ -72.1％.随着槐定碱浓度的增加,SGC7901存活细胞显著减少,呈明显的剂量依赖性.结论 槐定碱能显著抑制人胃癌细胞株SGC7901细胞增殖.
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紫杉醇对人喉鳞状细胞癌Hep-2放射增敏作用的实验研究
目的 在体外用细胞生物学实验技术了解紫杉醇联合直线加速器X射线照射对Hep-2细胞株的作用,以及紫杉醇对Hep-2细胞株细胞周期的影响,并探讨其作用机制.方法 ①用MTT法计算Hep-2细胞经直线加速器照射组;先紫杉醇作用12、18、24、30 h后再直线加速器照射组;先直线加速器照射再联合紫杉醇作用12、18、24、30 h组各组细胞生长抑制率.②应用流式细胞仪检测Hep-2细胞经紫杉醇作用12、18、24、30 h后各组细胞周期分布.结果 ①先紫杉醇作用再直线加速器照射组细胞生长抑制率较高(各组均值达到87.51%～89.64%),与先照射再联合紫杉醇组细胞生长抑制率(各组均值为57.84%～64.34%)及单纯照射组细胞生长抑制率(均值为41.90%)相比有统计学意义(P＜0.01).②用紫杉醇后Hep-2细胞株细胞周期停滞于G2/M期,G2/M期停滞于24～30 h达到峰值(24.65%～25.15%),并在用药后30 h观察到凋亡峰.结论 紫杉醇有放射增敏作用,其可能机制是使细胞生长停滞于射线敏感期G2/M期,从而加强射线对肿瘤细胞的杀伤效应.
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Photofrin光动力联合化疗对食管癌细胞株Eca-109增殖的影响
目的 研究Photofrin光动力联合氟尿嘧啶和顺铂化疗药物对食管癌细胞株Eca-109增殖的抑制作用.方法 将食管癌细胞株Eca-109分为6组,A:对照组,B:化疗组,C:化疗+高剂量光敏剂治疗组,D:化疗+低剂量光敏剂治疗组,E:高剂量光敏剂治疗组,F:低剂量光敏剂治疗组.种板孵育24 h后,采用台盼蓝染色法检测肿瘤细胞的存活率;于化疗组加入化疗药(5-Fu+DDP)作用12 h.再按实验分组加入光敏剂血卟啉衍生物(HPD)低剂量或高剂量,4 h后行630 nm激光照射,光能量密度30 J/cm2,照光后继续培育24 h,开始行MTT法检测食管癌细胞增殖的抑制率.结果 除了低剂量光敏剂+化疗组同高剂量光敏剂组差异不显著外,其余相互间差异均有统计学意义,高剂量光敏剂+化疗组细胞抑制率较高,低剂量光敏剂组抑制率较低.结论 在特定光源状态下,一定的光敏剂、光照能量密度、孵育时间.光敏剂孵育浓度是人食管癌细胞Eca-109体外光动力效应的主要影响因素.两种不同的HPD孵育浓度下细胞抑制率有显著性差异.相同光照能量密度及孵育时间下,孵育浓度越高,其杀伤效应越强.光动力与化疗联合对食管癌细胞的杀伤力提高,光动力与化疗有协同作用.
关键词： Eca-109细胞株 光动力 化疗 血卟啉衍生物(HPD) 细胞生长抑制率 -
3种齐墩果酸纳米粒对小鼠HCa-F细胞体外抑制作用比较
目的:比较齐墩果酸(OA)/乳酸羟基乙酸共聚物纳米粒(OPN)、OA/乳酸羟基乙酸共聚物-水溶性维生素E纳米粒(OPTN)和OA/聚己内酯-聚乳酸-水溶性维生素E纳米粒(OPPTN)对小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞(HCa-F)的体外抑制作用.方法:采用水溶性四氮唑(WST-1)法比较低、中、高浓度(2.5、10、20μg·mL-1)的OPN、OPTN、OPPTN、OA溶液剂(OS)组和阳性对照(氟尿嘧啶注射液)组对HCa-F细胞培养24、48、72h后的细胞生长抑制率(IR)和3种纳米粒的半数抑制浓度(IC50),另设立空白纳米粒(NPs)组、空白组(不加任何物质)、阴性对照组(加入培养液).结果:浓度分别为2.5、10、20 μg·mL-1的OPN组在72h时的IR分别为(42.9±0.9)％、(63.6±1.1)％、(75.4±1.3)％,OPTN组分别为(54.3±1.2)％、(79.2±1.4)％、(92.6±1.5)％,OPPTN组分别为(50.8±0.8)％、(71.7±1.3)％、(83.9±1.2)％,阳性对照组分别为(31.5±0.9)％、(50.3±0.8)％、(60.6±0.9)％.与阳性对照组相同浓度比较,72 h时OPN、OPTN、OPPTN组的中、高浓度的IR均明显升高(P均＜0.01).3种纳米粒对HCa-F细胞的IC50均随时间延长逐渐减小,其中OPTN组(8.64、1.39、0.38 μg·mL-1)明显小于OPPTN组(11.86、5.52、3.46 μg·mL-1)和OPN组(30.27、8.21、5.00 μg· mL-1)(P＜0.05或P＜0.01).结论:OPTN对HCa-F细胞的IR高,表明OPTN体外具有良好的细胞相容性和显著的抗肿瘤活性.
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齐墩果酸PCL-PLA-TPGS纳米粒的工艺优化及体外细胞抑制试验研究
目的:优化制备齐墩果酸(OA)聚己内酯-聚乳酸-水溶性维生素E纳米粒(OA-PCL-PLA-TPGS-NPs,简称OPPTN)的工艺条件,并研究其对小鼠腹水型肝癌高淋巴道转移细胞株(HCa-F)的体外细胞生长抑制率(IR).方法:用自制的PCL-PLA-TPGS为载体材料,采用超声乳化-溶剂挥发法制备OPPTN,以平均粒径、载药量和包封率为评价指标,通过单因素考察优化制备OPPTN时OA与载体的质量比、TPGS浓度、超声功率、搅拌时间;采用MTT法测定OA浓度为2.5、10、20 μg· mL-1时OPPTN对HCa-F细胞作用24、48、72h的IR.结果:较佳工艺为OA与载体质量比为4:10、TPGS浓度为0.03％、超声功率为400W、搅拌时间为12h;按此条件制备的OPPTN的平均粒径、Zeta电位、载药量和包封率分别为(214.2±1.6) nm、(-23.7±1.1)mV、(26.97±2.13)％和(89.36±2.06)％;OA浓度为2.5 μg·mL-1时OPPTN在24、48、72 h时对HCa-F的IR分别为30.6％、44.8％、51.2％,OA浓度为20μg· mL-1时IR分别为66.1％、79.6％、89.7％.结论:OPPTN的制备工艺合理可行,体外细胞试验显示其具有良好的缓释作用、生物可降解性及较强的抗肝癌活性.
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异鼠李素体外抗肿瘤作用的研究
目的:观察异鼠李素对人细胞株A549、MCF-7、PC3、Caco-2、K562、AD293、Hacat等细胞增殖、分化的影响及相关基因的变化.方法:不同浓度异鼠李素处理上述细胞,光镜电镜下观察细胞形态;进行集落形成实验,3H-TdR掺人实验、生长曲线法、MTT法测细胞生长抑制率;流式细胞仪检测凋亡峰及bax,bcl-2等凋亡相关基因的表达.
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三七总皂甙诱导HL-60细胞凋亡的研究
目的:观察三七总皂甙是否能诱导人白血病细胞株HL-60细胞凋亡及相关基因的关系.方法:取200～1600ug/ml三七总皂甙处理HL-60细胞,光镜下观察细胞形态;MTT法测细胞生长抑制率;流式细胞仪检测细胞周期;免疫组化法检测p53,bcl-2凋亡相关基因的表达,采用真彩色图像分析仪定量分析免疫组化的结果;其结果表明200～1600ug/ml三七总皂甙可抑制HL-60细胞生长,抑制率随着剂量的增加而增加.流式细胞仪检测凋亡峰随药物浓度增大而增加.800,1600ug/毫升三七总皂甙可使p53基因表达上调,bcl-2表达明显下降,这两种基因表达改变有浓度依赖性.结论:三七总皂甙可抑制HL-60细胞生长,诱导其凋亡,其诱导凋亡的作用与凋亡相关基因p53的表达上调,而抗凋亡基因bcl-2表达下调有关.
