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人食管癌Eca-109细胞膜抗原筛选的初步研究
目的 从人食管癌Eca-109细胞入手,寻找能引起CTL免疫反应的肿瘤抗原,筛选出高效肿瘤抗原的大致范围.方法采用敏感的序列特异性引物-聚合酶链反应(PCR-SSP)来确定Eca-109细胞HLA基因分型,用HLA血清学分型技术(Terasaki改良的微量细胞毒试验)筛选健康志愿者;用MTT法测定致敏T细胞的细胞毒活性.结果Eca-109细胞的HLA的基因分型为A*03,A*24;B*35,B*37;DRB1*01,DRB1*12;DRB3;筛选到一例表型为A03杂合子的健康志愿者.根据MTT检测,Eca-109细胞小于10KD膜蛋白免疫原性较未使用去垢剂的总膜蛋白的免疫原性高,小于3KD膜蛋白的免疫原性高.结论Eca-109细胞膜蛋白中存在能引起特异性的抗肿瘤CTL免疫反应的肿瘤抗原,其中小于3KD的膜蛋白成分中可能存在人食管癌的高效肿瘤抗原.
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人食管癌Eca-109细胞膜蛋白分离纯化方法的研究
目的 建立人食管癌细胞株Eca-109细胞膜蛋白分离和初步纯化方法.方法使用改良的Neville法提取细胞膜,在pH 6.3的条件下,用去垢剂Triton X-100和辛基β-葡糖苷把细胞膜上的蛋白溶解下来,以超滤法纯化膜蛋白并分组.结果在pH6.3的条件下,适当的去垢剂与膜蛋白之比(即mg去垢剂/mg膜蛋白),使用辛基β-葡糖苷时为6:1;使用TritonX-100时为2:1.超滤法将膜蛋白分为＜3KD、3～10KD、＜10KD、10～30KD、30～100KD、＞100KD共6个组.结论为进一步研究食管癌Eca-109细胞肿瘤抗原奠定基础.
关键词： 食管癌 Eca-109细胞株 膜蛋白 -
不同浓度山豆根对Eca-109细胞株生长的抑制和杀伤作用
目的探讨山豆根对体外培养人食管癌(Eca-109)细胞株的作用.方法将Eca-109细胞株分为对照组和实验组两组,测定不同浓度山豆根对两组的杀伤效应、酶活性测定及Fulgen-DNA法显示分裂指数.结果 100 mg/ml、200 mg/ml浓度对细胞的杀伤能力随药物作用时间延长而增强,50 mg/ml浓度维持在3%左右.100 mg/ml、200 mg/ml实验在加药第3天对细胞分裂指数抑制率接近或达到100%,50 mg/ml实验作用呈负相关.山豆根使谷氨酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶和乳酸脱氢酶活性下降,直至阴性反应.结论山豆根对Eca-109细胞株生长有抑制和杀伤作用,对脱氢酶有影响作用.
关键词： Eca-109细胞株 山豆根 脱氢酶 -
Photofrin光动力联合化疗对食管癌细胞株Eca-109增殖的影响
目的 研究Photofrin光动力联合氟尿嘧啶和顺铂化疗药物对食管癌细胞株Eca-109增殖的抑制作用.方法 将食管癌细胞株Eca-109分为6组,A:对照组,B:化疗组,C:化疗+高剂量光敏剂治疗组,D:化疗+低剂量光敏剂治疗组,E:高剂量光敏剂治疗组,F:低剂量光敏剂治疗组.种板孵育24 h后,采用台盼蓝染色法检测肿瘤细胞的存活率;于化疗组加入化疗药(5-Fu+DDP)作用12 h.再按实验分组加入光敏剂血卟啉衍生物(HPD)低剂量或高剂量,4 h后行630 nm激光照射,光能量密度30 J/cm2,照光后继续培育24 h,开始行MTT法检测食管癌细胞增殖的抑制率.结果 除了低剂量光敏剂+化疗组同高剂量光敏剂组差异不显著外,其余相互间差异均有统计学意义,高剂量光敏剂+化疗组细胞抑制率较高,低剂量光敏剂组抑制率较低.结论 在特定光源状态下,一定的光敏剂、光照能量密度、孵育时间.光敏剂孵育浓度是人食管癌细胞Eca-109体外光动力效应的主要影响因素.两种不同的HPD孵育浓度下细胞抑制率有显著性差异.相同光照能量密度及孵育时间下,孵育浓度越高,其杀伤效应越强.光动力与化疗联合对食管癌细胞的杀伤力提高,光动力与化疗有协同作用.
关键词： Eca-109细胞株 光动力 化疗 血卟啉衍生物(HPD) 细胞生长抑制率 -
山奈酚诱导人食管鳞癌Eca-109细胞凋亡及其机制
目的 研究山奈酚对人食管鳞癌Eca- 109细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制.方法 山奈酚体外作用于Eca-109细胞后,用MTT法检测细胞增殖抑制作用；TUNEL染色测定细胞凋亡率；RT-PCR检测Bax、Bcl-2基因表达变化情况；分光光度法测定Caspase-3和Caspase-9活性.结果 山奈酚显著抑制Eca- 109细胞增殖(P＜0.01),呈剂量依赖关系.TUNEL染色结果表明山奈酚诱导Eca-109细胞发生凋亡,RT-PCR结果显示山奈酚作用后,肿瘤细胞Bax基因表达上调,Bcl-2基因表达下调,同时,Caspase-3和Caspase-9活性明显升高(P＜0.01).结论 山奈酚能抑制Eca- 109细胞增殖,诱导细胞凋亡.山奈酚可能通过线粒体途径诱导Eca- 109细胞凋亡.
关键词： 山奈酚 食管癌 细胞凋亡 Eca-109细胞株 -
光卟啉对Eca-109细胞的体外光动力效应
目的 探讨光卟啉不同孵育浓度和不同孵育时间对人食管癌细胞Eca-109体外光动力治疗(pho-todynamie therapy,PDT)效应的影响.方法 以不同浓度光卟啉孵育Eca-109细胞,并给予不同孵育时间(4,6,12,24 h)(光源采用DIOMED630PDT系统)后于饱和光能量密度20J/cm2下行PDT,24 h后通过MTT法检测细胞生存率.结果 光卟啉4种不同孵育时间和不同孵育浓度间生存率差异均有显著性(均P<0.01).同一孵育时间下不同浓度间的生存率差异均有显著性(均P<0.01),而同一浓度下不同孵育时间之间的生存率,则除了浓度为0μg/ml和0.1μg/ml外差异均有显著性(均P<0.05).结论 特定光源下,光卟啉的孵育浓度和孵育时间对人食管癌细胞Eca-109体外PDT效应影响显著.
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光卟啉对人食管癌细胞体外光动力效应的影响
目的:探讨光卟啉(Photofrin)不同孵育浓度和不同光照能量密度对人食管癌细胞Eca-109体外光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)效应的影响.方法:以不同浓度Photofrin孵育Eca-109细胞,并在不同光能量密度(10、30、50 J/cm2,光源采用DIOMED630PDT系统)下行PDT,24 h后通过MTT法检测细胞生存率.结果:Photofrin三种不同光照能量密度及不同浓度下Eca-109细胞生存率间差异均有显著性(均P<0.01).同一光照能量密度下不同浓度间其生存率差异均有显著性(均P<0.01),而同一浓度下不同光照能量密度间的生存率,则除了浓度为10.0μg/mL间无明显差异外,其余差异均有显著性(均P<0.05).孵育浓度和光照能量密度间存在显著交互效应(P<0.01).结论:特定光源下,Photofrin的孵育浓度和光照能量密度对人食管癌细胞Eca-109体外PDT效应影响显著.
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125I放射性粒子对体外培养的食管癌Eca-109细胞株克隆形成的影响
目的:研究125I放射性粒子对体外培养的人食管癌Eca-109细胞克隆形成率的影响.方法: 取高糖型DMEM培养的对数生长的人食管癌Eca-109细胞,制成单细胞悬液,细胞计数并稀释,接种于35mm直径培养皿.设置A组:对照组(不加粒子),B组:低剂量实验组(加入0.2mCi 125I粒子1枚),C组:中剂量实验组(加入0.4mCi 125I粒子1枚),D组:高剂量实验组(加入0.8mCi 125I粒子1枚),37℃、5% CO2恒温培养箱进行培养,于培养后第1-7日进行各组克隆计数并计算克隆形成率.结果: 1周后A、B、C、D各组克隆形成率分别为72.73%、57.84%、34.41%、22.35%,实验组各组细胞克隆形成率均低于对照组,差别有统计学意义(P<0.05) ;C组与B组,D组与B组比较,有显著统计学意义(χ2=10.73, P<0.01;χ2=24.02, P<0.01);D组与C组比较,差别无统计学意义(χ2=3.16, P>0.05).结论: 125I放射性粒子可以降低体外培养的人食管癌Eca-109细胞克隆形成率.
关键词： 食管肿瘤 Eca-109细胞株 125I放射性粒子 克隆形成率
