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内皮一氧化氮合酶基因多态性与颅内动脉瘤相关性研究进展
颅内动脉瘤（ intracranial aneurysm ）系颅内局部血管异常导致的瘤样突起，多发生于颅内动脉分叉处，破裂后可以导致自发性蛛网膜下腔出血（ subarachnoid hemorrhage ），预后不良。其病因迄今尚未十分清楚，目前多认为颅内动脉瘤是一种由多种环境因素与多个基因共同作用的复杂性疾病［1］。随着遗传学和分子生物学技术的发展，对颅内动脉瘤的病因研究进入分子阶段，确定其发病的基因基础成为国内外研究的热点。在众多候选基因中内皮型一氧化氮合酶基因由于其对血管舒缩调节及维持血管张力的重要作用目前受到了重视。本文就内皮型一氧化氮合酶基因多态性和颅内动脉瘤的关系作一综述。
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内皮一氧化氮合酶基因5'-侧翼区T-786→C突变与2型糖尿病并发冠心病的关系
目的研究血管内皮一氧化氮合酶(eNOS)基因5'-侧翼区T-786→C突变与2型糖尿病(T2DM)并发冠心病(CHD)的关系.方法选择T2DM患者186例,其中65例并发CHD;选择正常人63例作为对照.采用PCR/ASO杂交技术检测T-786→C突变. 结果与对照组相比,T2DM伴CHD组TC基因型及C等位基因频率明显增高(P＜0.05).与T2DM不伴CHD组相比,T2DM伴CHD组C等位基因频率明显增高(P＜0.05).在T2DM患者中,与TT组比较,TC组HbA1 c明显增高.多元logistic回归分析显示,年龄、血压、病程、LDL-C、脂蛋白(a)、HbA1c、C等位基因与CHD呈正相关(P＜0.01).结论eNOS基因5'-侧翼区T-786→C突变增高T2DM患者并发CHD的危险性.
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罗格列酮对2型糖尿病大鼠主动脉内皮依赖性血管舒张功能的影响
目的 观察2型糖尿病(T2DM)大鼠胸主动脉内皮依赖性血管舒张功能和一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(eNOS)的变化及罗格列酮(RSG)治疗对其内皮功能的影响.方法 SD大鼠经高糖高脂喂养6周后予小剂量链脲佐菌素腹腔注射建立T2DM大鼠模型,糖尿病大鼠又分为对照(DM)组和RSG治疗组,RSG组用RSG干预8周,另选正常大鼠为正常对照(NC)组.实验终止时用正常葡萄糖高胰岛素钳夹技术的葡萄糖输注率(GIR)评价胰岛素抵抗,观察大鼠离体主动脉内皮依赖性血管舒张反应和主动脉NO、eNOS的变化.结果 T2DM大鼠GIR、胸主动脉内皮依赖性血管舒张反应、主动脉NO含量及eNOS阳性表达较NC组显著降低(P＜0.01),RSG治疗后上述指标均显著升高(P＜0.05).结论 T2DM大鼠存在内皮依赖性血管舒张功能紊乱,RSG治疗可改善内皮功能,增强NO水平和eNOS的活性.
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雷米普利对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺组织中一氧化氮和内皮型一氧化氮合酶活性的影响
目的 探讨雷米普利对野百合碱诱导的肺动脉高压大鼠肺组织中一氧化氮(NO)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响.方法 雄性SD大鼠60只,随机分为正常对照组、野百合碱组、雷米普利组(n=20).野百合碱组和雷米普利组一次性颈部注射野百合碱60mg/kg后,雷米普利组用雷米普利灌胃4周,野百合碱组生理盐水灌胃4周;对照组颈部注射生理盐水后再用生理盐水灌胃4周.4周后测定大鼠的右室收缩压(RVSP)和右心室肥厚指数(RVHI),运用图像分析软件测定肺小动脉管壁厚度(WT)占动脉外径(ED)的百分比(WT%)及管壁面积(WA)占血管总面积的百分比(WA%);检测肺组织中NO浓度.Western blotting分析肺组织中eNOS、P-Ser1177-eNOS的表达和蛋白激酶B(Akt)的磷酸化水平.结果 与正常对照组相比,野百合碱组RVSP、RVHI、WT%、WA%明显升高(P<0.05),肺组织中NO浓度、eNOS、P-Ser1177-eNOS和Akt磷酸化水平显著降低(P<0.05);雷米普利干预后RVSP、RVHI、、WT%、WA%明显降低(P<0.05),肺组织中NO浓度、eNOS、P-Ser1177-eNOS和Akt磷酸化水平明显升高(P<0.05).结论 雷米普利可抑制野百合碱诱导的肺动脉高压及肺血管重构,机制可能与其能使eNOS活性和NO生成增加有关.
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内皮一氧化氮合酶胞内定位作用蛋白的研究
内皮细胞一氧化氮合酶活性的调节是一系列影响其转录、翻译和翻译后因素的综合作用过程,其调节机制迄今尚未完全查明.内皮一氧化氮合酶的胞内定位调节是其翻译后调节的重要组成部分.近年来发现的几种蛋白,包括动力蛋白2、一氧化氮合酶相互作用蛋白以及一氧化氮合酶转运诱导蛋白与内皮一氧化氮合酶共存于内皮细胞中,介导一氧化氮合酶的胞内定位.从而影响内皮一氧化氮合酶的活性.
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Angiostatin损伤内皮细胞功能的机制
目的 Angiostatin(AS)是一种具有抑制血管生成和抗肿瘤作用的物质.本实验探讨AS损伤内皮功能的机理.方法采用牛主动脉内皮细胞(Bovine aortic endothelial cells.BAEC)做细胞培养,用AS 120nmol/L孵育BAEC 15min,然后①用氯化钒Ⅲ臭氧化学发光法测量一氧化氮(Nitric Oxide,NO)的产量;②用超氧化物歧化酶可抑制的铁化细胞色素C还原法测量氧自由基(Superoxide Anion,O2-)的产量;③用Western印迹和免疫沉淀法测量磷酸化内皮一氧化氮合酶(phosphorylation of endothelial nitric oxide synthase.P-eNOS)、内皮一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase.eNOS)、热休克蛋白90(heat shock protein 90,hsp 90)的表达及eNOS与hsp90结合情况.结果 AS可抑制BAEC NO的产生,而增加eNOS来源的O2-产生,对P-eNOS,eNOS和hsp90的表达无影响,但可减少hsp90与eNOS的结合.结论 AS可以阻止hsp90与eNOS结合,使eNOS非偶联,破坏NO与O2-的平衡,从而损伤内皮细胞功能,这可能是AS抗血管生成和抗肿瘤作用的机理,为将来AS应用于临床提供理论依据.
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L-4F抑制低密度脂蛋白对热休克蛋白90的影响
目的探讨L-4F(一载脂蛋白A-I类似物)能否抑制低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)对热休克蛋白90(heat shock protein 90,hsp90)与内皮一氧化氮合酶(endothelial nitric oxide synthase,eNOS)结合的影响和LDL诱导的脂质氢过氧化物产生的增加.方法采用牛主动脉内皮细胞(bovine aortic endothelial cells,BAEC)进行细胞培养,用LDL 6.2 mmol/L和/或L-4F10 μg/ml处理细胞24小时,然后,①分对照、L-4F、A23187(钙离子导体)、L-4F+A23187、LDL、LDL+L-4F、LDL+A23187、LDL+A23187+L-4F 8组,用免疫沉淀法测定磷酸化内皮一氧化氮合酶(phosphorylation of eNOS,P-eNOS)、eNOS和hsp90的表达和结合情况;②用Auerbach法测定有BAEC和无BAEC情况下LDL诱导的脂质氢过氧化物的产生情况.结果①LDL减少A23187刺激状态下的BAEC的hsp90与eNOS的结合,而经L-4F预处理的LDL对hsp90与eNOS结合无抑制作用;②在无BAEC情况下,L-4F稍微抑制LDL诱导的脂质氢过氧化物的产生,然而在BAEC培养情况下,L-4F可以明显抑制LDL诱导的脂质氢过氧化物的产生.结论L-4F可以阻止LDL对hsp90与eNOS结合的抑制,并可能与L-4F抑制脂质氢过氧化物的产生有关,这可能是L-4F保护内皮细胞功能、抑制动脉粥样硬化形成的一个重要机制.
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他汀防治脑卒中的作用和机制
血脂异常与脑卒中的关系,特别是胆固醇与脑卒中的关系一直是人们关注的焦点.许多具有里程碑意义的他汀类降脂治疗的临床试验显示,他汀类能降低脑卒中发生的危险.
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网膜素的研究进展
网膜素[1]的氨基末端有一个由16个氨基酸组成的高度疏水区的蛋白质分泌性信号肽,它与2型糖尿病密切相关,主要通过促进丝/苏氨酸蛋白激酶(Akt)磷酸化而增加胰岛素敏感性,影响血糖变化[2];抗糖尿病药物也影响网膜素的水平,已有报道,口服二甲双胍[3]和利拉鲁肽注射治疗后可以升高血清网膜素-1的水平[4].网膜素通过5'-AMP激活蛋白激酶(AMPK)介导的内皮一氧化氮合酶(eNOS)产生NO,NO抑制C-Jun N端激酶(JNK)的活化使肿瘤坏死因子-α(TNF-α)介导的环加氧酶-2 (COX-2)的产生减少,抑制炎症反应[5].网膜素还可以通过NF-κB体活化因子(RANK)途径减轻动脉的钙化[6],达到抗动脉硬化作用.国内外的研究焦点主要集中在网膜素与糖尿病、心血管及炎症性疾病的关系上,网膜素与其他脂肪细胞因子、肿瘤、骨质疏松症、高血压、肾病也相关,本文综述如下.
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急性ST段抬高心肌梗死患者体内循环微粒对血管内皮功能的影响
目的 探讨急性ST段抬高心肌梗死(STEMI)患者体内循环微粒(MPs)对离体大鼠血管内皮功能影响的差异.方法 通过离心提取正常志愿者(正常对照组,n=35),急性心肌梗死并心电图显示ST段抬高患者(STEMI组,n=40)体内的MPs,然后用分别用正常对照组和STEMI组的MPs孵育离体SD大鼠血管,进而用Westem blot检测两组MPs对离体SD大鼠血管内皮素-1(ET-1)蛋白、内皮一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表达影响的差异;用一氧化氮(NO)试剂盒检测两组MPs对离体SD大鼠血管NO水平影响的差异.结果 与来自正常对照组的MPs比较,STEMI组的MPs明显抑制离体SD大鼠血管eNOS蛋白的表达、NO的产生(P＜0.05),同时促进离体SD大鼠血管ET-1蛋白的表达(P＜0.05).结论 急性STEMI患者体内MPs可能通过eNOS和ET-1途径影响血管内皮功能.
关键词： 急性ST段抬高心肌梗死 循环微粒 内皮素-1 内皮一氧化氮合酶 -
eNOS基因多态性与糖尿病肾病之间关系的临床研究进展
一氧化氮具有广泛的生理作用,其合成失调可介导糖尿病肾病.一氧化氮是由一氧化氮合酶氧化L-精氨酸合成的.近年来,内皮型一氧化氮合酶基因第4内含子的1个27bp的插入/缺失(a/b)多态性、第7外显子的894G→T点突变、(-786)T)C多态性与糖尿病肾病的关系已成为临床上新的研究热点,且各方面的结论不一.本文主要对这一研究热点的临床进展情况进行综述.
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肾毒性物质对甲酚抑制内皮祖细胞增殖和eNOS磷酸化
目的:观察对甲酚对人外周血晚期内皮祖细胞(EPCs)的体外增殖和内皮一氧化氮合酶(eNOS)活性的影响.方法:用密度梯度离心法分离健康成人外周血中的单个核细胞,在含有血管内皮生长因子等的培养基中培养.通过形态学、免疫荧光、流式细胞分析鉴定细胞,在贴壁细胞中加入不同浓度对甲酚,用细胞计数和集落生成实验法评价对甲酚对EPCs增殖的影响.定量PCR分析eNOS转录水平的变化,Western blot分析磷酸化eNOS的变化.结果:晚期EPCs为典型的铺路石样,CD34和血管内皮细胞生长因子受体2(VEGFR2)阳性,CD133阴性细胞.细胞计数和集落生成实验显示对甲酚呈量效抑制EPCs增殖能力,Wesstern blot则显示随着对甲酚浓度的升高有明显磷酸化eNOS水平降低.结论:对甲酚可以抑制人外周血晚期EPCs的体外增殖能力,并抑制磷酸化eNOS水平.
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内皮型一氧化氮合酶基因转染犬骨髓源内皮祖细胞的实验研究
目的:探讨人内皮型一氧化氮合酶(heNOS)基因转染犬内皮祖细胞(EPCs)的有效方法.方法:分别用5型腺病毒和pEGFP-N1质粒作为载体携带heNOS,对体外定向培养扩增的骨髓来源的犬EPCs进行体外转染,然后对转染heNOS基因后的EPCs进行鉴定及功能检测.观察heNOS基因的功能表达情况.结果:heNOS转染犬EPCs 48 h后,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测到5型腺病毒转染组EPCs的eNOS表达量(2 091.67±172.49 pg/ml)较pEGFP-N1质粒转染组(173.67±36.76 pg/ml)和未转染组(158.00±30.91 pg/ml)均显著增多(P<0.01);硝酸还原酶法测定5型腺病毒转染组细胞培养上清中的NO含量(49.5±5.2 μmol/L)较质粒转染组(38.5±7.1μmol/L)和未转染组(39.7±7.2μmol/L)均显著增多(P<0.01).结论:5型腺病毒载体介导的heNOS基因能够成功地转染犬EPCs,并能在EPCs中有效表达.
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内皮源性超极化因子对内皮一氧化氮合酶基因表达的调节
目的以内皮细胞产生NO的关键酶--eNOS(内皮一氧化氮合酶)为研究目标,探讨外源性内皮源性超极化因子EDHF(EETs)对内皮细胞合成NO的影响.方法在原代培养3～4代以内的牛主动脉内皮细胞中,分别加入不同浓度(50～200 nmol*L-1)的8,9-EET、11,12-EET、14,15-EET,作用1 h后用不同的方法收获细胞.用Western Blot以及Northern Blot方法检测EETs对eNOS基因表达的影响;同时通过检测L-[3H]-精氨酸转化为L-[3H]-瓜氨酸的量研究EETs对NOS活性的影响.结果显示8,9-EET、11,12-EET、14,15-EET均呈浓度依赖性地增加eNOS蛋白质的表达,并提高eNOS mRNA表达水平以及NOS酶活性.结论外源性EDHF对eNOS基因表达是一种正反馈调节作用,从而能够促进内皮细胞NO的产生,通过药物调节内皮表氧化酶进而促进eNOS基因表达可作为防治心血管疾病的新策略.
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白藜芦醇对高脂血症大鼠多种抗氧化系统的影响
近年研究已证实白藜芦醇(resresveratrol，Resv)具有抗肿瘤、抗氧化、抗心血管疾病等作用[1].Resv抗氧化作用的研究主要集中在其对超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的影响,但Resv对其他抗氧化作用影响的研究较少,本次实验我们观察了白藜芦醇对L-Arg-NO途径及HDL的抗氧化成分--对氧磷酶1(paraoxonase-1,PON1)的表达和活性影响,以便更深入了解白藜芦醇的抗氧化作用机制.
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内皮一氧化氮合酶与代谢综合征的关系
代谢综合征是近年来国内外关注的热点,其主要特征为多种心血管代谢危险因素的聚集,其关键的病理生理机制涉及高血压、动脉粥样硬化、2型糖尿病、胰岛素抵抗等.研究表明内皮一氧化氮合酶参与高血压、动脉粥样硬化、2型糖尿病、胰岛素抵抗等病理过程.本文总结了一氧化氮合酶与代谢综合征之间的关系,以更好地为代谢综合征的治疗提供的思路.
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2型糖尿病患者循环内皮微颗粒的变化与内皮一氧化氮合酶的关系
目的：探讨2型糖尿病（T2DM）患者循环内皮微颗粒（EMPs）水平与内皮一氧化氮合酶（eNOS）的关系。方法采用流式细胞仪技术测定105例糖尿病患者和40例健康对照者血清 EMPs 水平，ELISA 法检测 eNOS水平，分析 EMPs 与 eNOS 的关系。结果①与健康对照组相比，T2DM 组循环 EMPs 水平显著增高，eNOS 水平明显下降；②循环 EMPs 与 eNOS 呈负相关。③以 eNOS 为因变量的多因素回归分析显示，循环内皮微颗粒水平是其独立影响因素。结论 T2DM 患者循环 EMPs 增加，eNOS 水平下降，EMPs 水平是 eNOS 水平的独立影响因素，提示T2DM 患者体内较高的 EMPs 水平加速了大动脉弹性功能减退。
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脂联素及其受体对血管内皮细胞一氧化氮合酶活性差异调节的分子机制
目的:探讨脂联素Ⅰ型及Ⅱ型受体(AdipoR1和AdipoR2)在内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性调节中的作用.方法:采用随机数字表法,将体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)随机分为对照组、脂联素组、脂联素+ siRNA-adipoR1组、脂联素+siRNA-adipoR2组和脂联素+L-NAME组.使用siRNA分别沉默AdipoR1和AdipoR2受体基因,Western blot方法检测脂联素作用下磷酸化eNOS的表达情况.结果:不同浓度(0、5、10和15 μg/ml)以及不同时间(0、15、30和60 min)脂联素干预内皮细胞,eNOS磷酸化水平不同,浓度为5 μg/ml干预15 min时,磷酸化的eNOS蛋白表达多(P＜0.05).特异性siRNA-adipoR1沉默AdipoR1基因而抑制其表达(P＜0.01),脂联素对内皮细胞eNOS的磷酸化水平明显降低(P＜0.05).相反,AdipoR2的表达被siRNA-ad-ipoR2抑制(P＜0.01),脂联素作用于内皮细胞时,eNOS的磷酸化水平无明显变化.NOS抑制剂L-NAME阻断NO的形成,脂联素引起内皮细胞eNOS磷酸化作用降低,磷酸化eNOS蛋白表达量减少(P＜0.05).结论:脂联素通过AdipoR1影响内皮细胞eNOS的活性,促进eNOS的磷酸化(ser1177)及NO的分泌,维持正常内皮细胞的功能.
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四氢生物蝶呤保存液对Ⅱ型糖尿病患者大隐静脉氧化应激的影响
目的 观察四氢生物蝶呤(BH4)保存液对Ⅱ型糖尿病(T2MD)患者大隐静脉氧化应激的影响.方法 取22例T2MD(实验组)及20例无T2MD(对照组)患者的大隐静脉.分别用自体肝素化血液、含10 μmol/L BH4或含100μmol/L N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)的自体肝素化血液浸泡1 h后,用光泽精增强化学发光法检测血管NADPH氧化酶活性和超氧阴离子水平.结果 浸泡前,实验组NADPH氧化酶及超氧阴离子[(304.1±32.4)次/μg、(1821.2±322.3)次/(min·mg)]均明显高于对照组[(253.5±29.8)次/μg、(1563.5±272.4)次/(min·mg),P＜0.05];与浸泡前比较,实验组超氧阴离子经BH4和L-NAME浸泡后均明显降低[(1607.4±279.5)、(1683.7±267.9)次/(min·mg),P＜0.05],对照组经BH4浸泡后差异无统计学意义(P＞0.05),经L-NAME浸泡后明显升高[(1721.2±329.8)次/(min·mg),P＜0.05],两组经自体肝素化血液浸泡后差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 T2MD加重大隐静脉桥的氧化应激反应,BH4保存液能改善内皮一氧化氮合酶(NOS)功能而有助于减轻此反应.
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黄芪多糖通过活化 AMPK-eNOS 信号通路减轻游离脂肪酸对人血管内皮细胞的损伤
目的：研究黄芪多糖对游离脂肪酸所诱导的血管内皮细胞损伤的作用及机制。方法：培养人脐静脉内皮细胞（HUVECs），实验分为正常对照组、黄芪多糖组[黄芪多糖（200 mg／L）处理24 h]、游离脂肪酸组[游离脂肪酸（0.25 mmol／L）共同处理24 h]、游离脂肪酸加黄芪多糖组[游离脂肪酸（0.25 mmol／L）和黄芪多糖（200 mg／L）共同处理24 h]和compound C组[游离脂肪酸（0.25 mmol／L）、黄芪多糖（200 mg／L）及AMPK阻断剂compound C （10μmol／L）处理24 h]。采用MTT法检测细胞活性，硝酸还原酶法测定培养液中一氧化氮（ NO）含量，Western blot法测细胞总腺苷酸活化蛋白激酶（ AMPK ）、磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶（ p-AMPK ）、内皮型一氧化氮合酶（ eNOS）及磷酸化内皮型一氧化氮合酶（ p-eNOS）的蛋白水平。结果：黄芪多糖组各项指标较正常对照组无显著差异。 MTT结果显示游离脂肪酸组的细胞活性较正常对照组明显下降，游离脂肪酸加黄芪多糖组的细胞活性较游离脂肪酸组明显好转，compound C组的细胞活性与游离脂肪酸组无显著差异。游离脂肪酸组的NO含量及p-AMPK、p-eNOS水平较对照组明显减少，黄芪多糖能显著抑制游离脂肪酸所致的NO含量及p-AMPK、p-eNOS水平的减少， compound C则可阻断黄芪多糖的作用。各组AMPK及eNOS表达均无明显差异。结论：黄芪多糖可以减轻游离脂肪酸诱导的血管内皮细胞损伤，其机制与AMPK-eNOS信号通路有关。
