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褪黑素抑制白介素-1β诱导的人脐静脉内皮细胞通透性
目的 观察褪黑素(MLT)对自介素-1B(IL-1β)诱导的内皮通透性改变的影响.方法 用不同浓度的IL-1β和MLT干预人脐静脉内皮细胞(HUVECs).用Transwell系统检测透过单层HUVECs的荧光标记的葡聚糖.用免疫荧光和Western blot检测HUVECs钙黏素(VE-cadhefin)的表达.结果 与对照组相比,5、10和20ng/mL的IL-1β分别使HUVECs通透性由1.5±0.1升高为4.8±0.3、5.2±0.4和9.8±0.8(P＜0.01);10和100 μmol/L的MLT分别使10 ng/mL的IL-1β诱导的通透性从5.2±0.4降至2.8±0.3和2.7±0.3(P＜0.01).IL-1β破坏VE-cadherin在细胞膜上表达的连续性,MLT抑制IL-1β的这种作用.与对照组相比,IL-1β使HUVECs的VE-cadherin表达量由0.91±0.04降至0.42±0.05(P＜0.01).MLT可使其表达量上调至0.69±0.04,显著高于IL-1β组(P＜0.01),但仍低于对照组(P＜0.01).结论 MLT能够通过抑制IL-1β诱导的VE-cadherin表达的降低来保护人脐静脉内皮细胞屏障的完整性.
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普通肝素对高迁移率族B1介导的内皮细胞紧密连接蛋白Claudin-5下调的保护作用
目的 研究高迁移率族蛋白B1(high mobility group box-1 protein,HMGB1)对人脐静脉内皮细胞屏障通透性的影响,以及普通肝素对HMGB1介导的内皮细胞紧密连接蛋白Claudin-5下调的保护作用.方法 将经胰酶消化后的人脐静脉内皮细胞于培养瓶中传代培养,并分成4组:空白对照组(加入等量PBS)、rhHMGB1处理组(100 ng/mL)、普通肝素对照组(UFH 10 U/mL)、rhHMGB1+普通肝素处理组(100 ng/mL rhHMGB1+UFH 10 U/mL).传代培养后的人脐静脉内皮细胞,通过MTT法测定内皮细胞的存活率.Transwell法测定内皮细胞通透性;免疫荧光法对Claudin-5表达及分布进行测定;通过蛋白免疫印迹(Western blot)法检测Claudin-5蛋白表达.结果 用rhHMGB1(100 ng/mL)处理内皮细胞后,与空白对照组比较细胞活力无明显变化(P>0.05);用rhHMGB1(100 ng/mL)分别处理内皮细胞3 h、6 h后,内皮细胞屏障通透性较空白对照组无明显变化(P>0.05);而经rhHMGB1处理12 h、24 h后,与空白对照组相比,内皮细胞屏障通透性显著升高,差异有统计学意义(P<0.05).而普通肝素和rhHMGB1共同孵育内皮细胞12 h、24 h后,其内皮细胞屏障通透性均低于rhHMGB1处理组(P<0.05).免疫荧光和Western-blot研究表明,rhHMGB1处理内皮细胞24 h后,细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5分布和表达降低;而经普通肝素和rhHMGB1共同孵育后,细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5的表达提高,Claudin-5的荧光强度增强.结论 HMGB1可介导内皮细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5的分布异常和表达下降,以及增加内皮细胞屏障的通透性;普通肝素可改善HMGB 1介导的内皮细胞紧密连接相关蛋白Claudin-5的表达和分布及内皮细胞屏障通透性.
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晚期糖基化终产物对血管内皮细胞通透性影响的研究
目的 探讨晚期糖基化终产物(AGEs)对血管内皮细胞通透性的影响作用. 方法 将人脐静脉内皮细胞(HUVECs)与不同浓度的糖化牛血清白蛋白(AGE-BSA)共同培养8h,采用ELISA检测细胞培养上清中血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)及金属基质蛋白酶(MMP9)的表达.然后将HUVECs与AGE-BSA100 μg/ml及抗金属基质蛋白酶抗体(MMP9,MMP2)共同作用于单层内皮细胞8h后采用FITC荧光标记白蛋白漏出法测定单层内皮细胞通透率. 结果 与正常对照(NC)组相比,AGE-BSA 50、100 μg/ml组细胞上清中VE-cadherin及MMP9含量明显升高(P＜0.05或P＜0.01).与NC组相比,AGE-BSA组单层内皮细胞通透性增加(P＜0.01);与AGE-BSA组相比,AGE-BSA+ MMP9抗体组单层细胞通透性得到改善(P＜0.05). 结论 AGE-BSA通过诱导MMP9激活,促进VE-cad herin自身解聚,从而导致内皮细胞通透性增高.
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乌司他丁对促炎症因子诱导的肺微血管内皮细胞通透性和细胞因子产生的影响
目的:研究乌司他丁对炎症因子诱导的体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞通透性和细胞因子产生的影响.方法:体外培养大鼠肺微血管内皮细胞分组进行实验:①对照组:内皮细胞培养液中加入生理盐水或乌司他丁;②炎症因子刺激组:因培养液中分别含烫伤血清、胰蛋白酶、前列腺素E2(PGE2)、缓激肽、组胺而分为5个炎症因子刺激亚组;③乌司他丁处理组:培养液中在含上述各炎症刺激因子基础上分别加入乌司他丁而分成5个乌司他丁处理组.采用Transwell方法测定各组单层内皮细胞对牛血清白蛋白(BSA)通透性的变化;取各组细胞培养上清液,用酶联免疫吸附方法(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的水平.结果:各炎症因子刺激组肺微血管内皮细胞通透系数均比对照组显著增高,TNF-α和IL-6的产生量也显著增多(P均＜0.01);乌司他丁处理组中烫伤血清和胰蛋白酶组的血管内皮细胞通透系数及TNF-α和IL-6产生量比相应炎症因子刺激组显著降低(P均＜0.01),但组胺、缓激肽和PGE2刺激后乌司他丁处理组与相应炎症因子刺激组比较,上述指标无显著改变(P均＞0.05).结论:乌司他丁能显著抑制烫伤血清和胰蛋白酶引起的肺微血管内皮细胞通透性及TNF-α和IL-6水平增高,对组胺、缓激肽和PGE2引起的肺微血管内皮细胞通透性增加和促炎细胞因子产生无显著影响.
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LOX-1介导oxLDL诱导的人脐静脉内皮细胞高通透性反应
目的 探讨凝集素样氧化低密度脂蛋白受体1(lectin like oxidized low density lipoprotein receptor 1,LOX-1)在氧化低密度脂蛋白(oxLDL)诱导的血管内皮高通透性反应中的作用.方法 采用Transwell单层细胞模型系统和油红O染色,观察oxLDL或和LOX-1阻断抗体对单层血管内皮细胞LDL通透性的影响以及下室THP-1巨噬细胞内脂质的蓄积情况;用Westernblot法和激光扫描共聚焦显微镜检测oxLDL或和LOX-1阻断抗体对桥粒芯糖蛋白1(DSG1)在人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中表达和分布的改变.结果 oxLDL可以增加单层内皮细胞对LDL的通透性和下室THP-1巨噬细胞脂质的蓄积,同时降低DSG1的表达及其在细胞间分布的连续性,而抑制LOX-1可以减弱内皮细胞的高通透性反应和巨噬细胞脂质蓄积.结论 oxLDL可能是通过降低桥粒蛋白表达使内皮细胞构型改变来诱导内皮高通透性,从而促进内皮下巨噬细胞内的脂质蓄积,其机制可能涉及LOX-1的介导.
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肾上腺髓质素在脓毒症中的研究进展
肾上腺髓质素（ ADM）是一个在机体的多个系统都有表达的多功能肽，属于降钙素基因相关肽家族。近几年研究发现ADM在脓毒症发生发展的病理生理过程中有重要作用，如减少血管内皮细胞高通透性、调节炎性介质的释放等，另外ADM的血浆水平可以提高临床脓毒症患者的早期诊断率，且与脓毒症患者的临床预后相关，可作为预测脓毒症患者的临床预后的指标等。
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表没食子儿茶素没食子酸酯改善Nε-羧甲基赖氨酸诱导的牛主动脉内皮细胞高通透性
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)改善Nε-羧甲基赖氨(Nε-carboxymethyl-L-lysine,CML)诱导的血管内皮细胞高通透性及其机制.方法牛主动脉内皮细胞(bovine aorticendothelial cells,BAECs)经EGCG(10 μmol/L)预处理12h后,用100 μg/ml羧甲基赖氨酸结合白蛋白(CML-BSA)刺激24 h(EGCG+ CML-BSA组).同时设定正常对照组(BSA组),CML模型组(CML-BSA组)及EGCG处理组(EGCG+BSA组).采用Transwell弥散模型,以FITC-Dextran标志物漏出法检测细胞单层通透性;试剂盒检测胞内ROS水平;qPCR法测定VE-Cadherin (vascular endothelial cadherin) mRNA表达水平;Western-bloting法测定RAGE(receptor of advanced glycation end products)、VE-Cadherin和MCP-1(monocyte chemoattractant protein-1)蛋白表达水平.结果EGCG预处理能改善CML诱导的内皮细胞通透性升高(P＜0.05),降低细胞内活性氧水平(P＜0.05),增加VE-Cadherin蛋白和mRNA表达水平(P＜0.05),降低MCP-1蛋白表达水平(P＜0.05).结论CML可诱导内皮细胞通透性升高,而EGCG预处理能改善CML诱导的内皮细胞高通透性,其机制与EGCG抑制CML-RAGE轴有关.
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复方葶苈注射液对体外新生小牛肺主动脉内皮细胞单层通透性的影响
目的:观察复方葶苈注射液对体外新生小牛肺主动脉内皮细胞单层通透性的影响.方法:新生小牛肺主动脉内皮细胞培养于醋酸纤维膜上,分别测定Hank's液1:10稀释的复方葶苈注射液作用60分钟前后同一滤膜上正常内皮单层和组胺处理内皮单层的滤过系数(Kf)和渗透压反射系数(σ).结果:经1:10的复方葶苈注射液作用后,正常内皮单层[(11.80±0.75)μl.min-1.cm-2.kPa-1比(7.77±0.67)μl.min-1.cm-2.kPa-1]和组胺处理内皮单层[(16.87±1.11)μl.min-1.cm-2.kPa-1比(12.82±1.19)μl.min-1.cm-2.kPa-1]的Kf均明显降低(P均<0.01),σ(正常内皮单层σ为0.32±0.06比0.44±0.03,组胺处理内皮单层σ为0.19±0.06比0.28±0.06)则均明显升高(P均<0.01).结论:复方葶苈注射液有降低肺主动脉内皮单层通透性的作用,可减轻肺动脉高压引起的肺水肿.
关键词： 复方葶苈注射液 滤过系数(Kf) 渗透压反射系数(σ) 内皮细胞通透性 肺水肿 -
嗜铬粒蛋白A衍生多肽CGA47-66抑制脓毒症血清所致血管内皮细胞高通透性的研究
目的 观察嗜铬粒蛋白A衍生多肽CGAn47-66(Chromfungin,CHR)对脓毒症患者血清引起的血管内皮细胞高通透性的影响.方法 分别用CHR、脓毒性休克患者血清、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)作用于人脐静脉内皮细胞株EA.hy926,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法、Transwell小室法测定EA.hy926的活性[吸光度(A)值]和通透性(A值),免疫荧光法镜下观察细胞纤维肌动蛋白(F-actin)的形态和分布.结果 与空白对照组比较,1、10、100 nmol/L CHR对EA.hy926细胞活性无明显影响(A值:1.219±0.253、1.179±0.065、1.179±0.062比1.306±0.162,均P＞0.05),而1 000 nmol/L CHR对EA.hy926细胞活性有显著抑制作用(A值:1.049±0.256比1.306±0.162,t=-2.390,P=0.031).与空白对照组比较,1、10、100 nmol/L CHR作用下EA.hy926细胞通透性明显降低(A值:1.619±0.324、1.496±0.356、1.132±0.280比2.315±0.440,P＜0.05或P＜0.01);脓毒性休克患者血清或TNF-α单独作用下EA.hy926细胞通透性明显升高(血清组A值:1.204±0.248比0.277±0.017,P＜0.01;TNF-α组A值:2.485±0.113比1.602±0.679,P＜0.05);1、10、100 nmol/L的CHR既可明显降低脓毒性休克患者血清引起的高通透性(A值:0.299±0.065、0.224±0.028、0.131±0.015比1.204±0.248,均P＜0.01),也可明显降低TNF-α引起的高通透性(A值:1.995±0.394、1.920±0.096、1.744±0.475比2.485±0.113,P＜0.05或P＜0.01),且在1～100 nmol/L范围内,CHR的上述作用呈现一定的剂量依赖性.与空白对照组比较,脓毒性休克患者血清或TNF-α单独作用下,F-actin细胞骨架发生明显重组和再分布,应力纤维形成增多,而CHR可以抑制上述变化的发生.结论 CHR可以抑制脓毒性休克患者血清引起的血管内皮细胞的高通透性,且呈现一定的剂量依赖性,其机制与抑制TNF-α的作用有关.
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高糖培养脂多糖刺激下肺脏微血管内皮细胞通透性改变及DDAH/NOS/NO失平衡在其发生机制中的作用
目的 探讨高糖对脂多糖(LPS)刺激下血管内皮细胞损伤的影响及其机制.方法 将人肺脏微血管内皮细胞(PMVEC)分为正常糖组(NG组)、正常糖+LPS刺激组(NGL组)、高糖组(HG组)、高糖+LPS刺激组(HGL组),分别给予含10％小牛血清的正常糖(5.5 mmol/L)或高糖(33 mmol/L)培养5d,加入10 mg/L LPS刺激细胞24h.采用免疫荧光染色观察细胞纤维肌动蛋白(F-actin)的分布及变化；扫描电镜观察细胞膜窗孔数量及孔径变化；细胞迁移实验(Transwell)测定单层内皮细胞的辣根过氧化物酶(HRP)通透性；硝酸盐还原法(Griess法)检测细胞培养上清液中一氧化氮(NO)含量；蛋白质免疫印迹试验(Western blotting)测定细胞二甲基精氨酸-二甲胺水解酶2(DDAH2)、诱生型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)的蛋白表达.结果 与NGL组比较,HGL组PMVEC的F-actin分布排列紊乱,细胞膜窗孔异常增大、增多,细胞单层对HRP通透率增加[(53.62±6.70)％比(23.63±3.92)％,P＜0.01],细胞DDAH2表达(积分A值)减少(0.33±0.08比0.77±0.14,P＜0.01),iNOS表达(积分A值)增加(1.40±0.29比1.04±0.09,P＜0.01),eNOS表达(积分A值)减少(0.67±0.09比0.91±0.17,P＜0.05),上清液NO含量(μmol/L)增多(20.36±2.25比7.99±0.33,P＜0.01).结论 高糖加重LPS刺激下体外培养PMVEC的F-actin分布紊乱、单层细胞通透性增加；NO调节紊乱可能参与了PMVEC损害的发生.
关键词： 高糖 内毒素 二甲基精氨酸-二甲胺水解酶2 一氧化氮合酶 内皮细胞通透性 -
肝素对脂多糖诱导内皮细胞通透性增高的保护作用
目的 研究肝素对脂多糖(LPS)诱导入脐静脉内皮细胞(HUVECs)单层通透性和细胞骨架形态的影响.方法 HUVECs细胞株传代培养后随机分为空白对照组、LPS组、肝素组、LPS+肝素组,n=8.用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定内皮细胞活性；用Transwell小室法测定单层内皮细胞通透性；用免疫荧光染色法测定内皮细胞纤维状肌动蛋白(F-actin)形态.结果 与空白对照组比较,LPS 10 mg/L及100 mg/L对细胞活性起到明显的抑制作用(0.695±0.015、0.476±0.030比0.860±0.053,P＜0.05和P＜0.01),肝素100 kU/L对内皮细胞活性产生抑制作用(0.675±0.030比0.840±0.023,P＜0.05).LPS10mg/L可增加单层内皮细胞通透性,于4h时达峰值,与空白对照组比较差异有统计学意义(5.882±0.101比4.489±0.015,P＜0.05),并能增加细胞骨架应力纤维的形成；而LPS+肝素刺激2～12h时单层内皮细胞的通透性较LPS组明显降低(2 h:4.382±0.053比5.084±0.129,4 h:4.528±0.044比5.882±0.101,6 h:4.381±0.089比5.479±0.125,12 h:4.447±0.054比4.719±0.080,均P＜0.05),并能减少内皮细胞骨架的重排及应力纤维的形成.结论 肝素可以减轻LPS诱导单层内皮细胞通透性增高及细胞骨架重排,对内皮细胞屏障功能起到保护作用.
关键词： 脓毒症 肝素 内皮细胞通透性 细胞骨架 内皮细胞纤维状肌动蛋白 -
血中可溶性白细胞分化抗原40配体对内皮细胞损伤的影响
目的 研究血中可溶性白细胞分化抗原40配体(sCD40L)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的损伤并探讨其发生机制.方法 应用不同浓度人重组CD40L(r-CD40L)刺激HUVEC 24 h,建立单核细胞(THP-1)渗出模型,评价内皮细胞通透性.应用不同浓度r-CD40L刺激HUVEC24h,逆转录PCR技术检测HUVEC中TNF-α mRNA水平,观察不同浓度r-CD40L对内皮细胞功能的影响(以TNF-α mRNA水平表示).采用ELISA法测定不同浓度r-CD40L刺激HUVEC后上清液中TNF-α蛋白水平.应用25μg/L r-CD40L刺激HUVEC不同时间,流式细胞技术检测HUVEC凋亡情况.结果 随着r-CD40L刺激浓度的增加,单核细胞透膜数逐渐升高,HUVEC中TNF-α mRNA表达水平逐渐升高,HUVEC上清液中TNF-α的浓度逐渐增加.应用25 μg/L r-CD40L刺激HUVEC不同时间,未诱导出细胞凋亡.结论 sCD40L对脐静脉内皮细胞通透性的影响呈浓度依赖性,其机制可能是通过上调内皮细胞核内TNF-α mRNA表达并促进其分泌TNF-α实现的.sCD40L对HUVEC功能的影响明显早于细胞的凋亡.
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慢性摄入尼古丁加重大鼠脑缺血再灌注损伤性脑水肿的初步研究
目的 观察尼古丁慢性摄入加重大鼠脑缺血再灌注损伤性脑水肿的程度,并初步探讨其作用机制.方法 10周龄雄性Sprague Dawley(SD)大鼠90只,按数字表法随机分为对照组(45只)和尼古丁组(45只),分别给予生理盐水[0.5 ml/(kg·d)]、尼古丁[3 mg/(kg·d)]皮下注射,1次/d.6周后将2组大鼠制作成大脑中动脉缺血再灌注损伤模型,分5个时间点(每组每个时间点9只)观察脑水肿的发生情况和程度.取对照组和尼古丁组脑微血管内皮细胞株bEnd.3进行培养,分为3组:对照组、尼古丁组(1μmol/L)、尼古丁+α-金环蛇毒素组(尼古丁1 μmol/L,α-金环蛇毒素0.1μmol/L),检测3组细胞通透性的变化及细胞中水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)的表达变化.结果 与对照组比较,尼古丁组再灌注3.0h后脑水肿的程度明显加重,再灌注12.0 h时脑组织含水量大[2组分别为(86.53±2.26)％和(90.47±1.94)％],差异有统计学意义(P＜0.01).对脑微血管内皮细胞株bEnd.3的检测发现,尼古丁组细胞通透性[(143±11)％]明显高于对照组[(100±13)％],差异有统计学意义(P＜0.01);尼古丁+α-金环蛇毒素组通透性[(114±15)％]较尼古丁组明显改善,差异有统计学意义(P＜0.05).细胞内AQP1蛋白的表达,尼古丁组(1.49±0.19)明显高于对照组(1.04±0.12),差异有统计学意义(P＜0.01);尼古丁+α-金环蛇毒素组通透性(1.20 ±0.14)较尼古丁组有所减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 在尼古丁刺激下,脑微血管内皮细胞通透性的增加是脑水肿加重的原因.内皮细胞中α7尼古丁乙酰胆碱受体(α7nAchR)和AQP1蛋白参与了其中的发生过程.
关键词： 尼古丁 内皮细胞通透性 水通道蛋白1 α7尼古丁乙酰胆碱受体 α-金环蛇毒素 -
晚期糖化终产物诱导内皮细胞通透性增高
本文探讨了晚期糖化终产物(advanrced glycation end products,AGEs)修饰蛋白对内皮细胞通透性及细胞骨架肌动蛋白的形态学影响,以及特异的AGEs受体(receptors for AGEs,RAGE)、氧化应激和p38 MAPK通路在此病理过程中的作用.用不同浓度的AGEs修饰人血清白蛋白(AGE-HSA)与人脐静脉内皮细胞株ECV304在体外共同培养不同时间,并设立对照组进行比较,采用TRITC荧光标记白蛋白漏出法测定单层内皮细胞的通透系数Pa值,荧光染色法示细胞骨架的形态学改变.与对照组相比,AGE-HSA以时间和剂量依赖的方式引起单层内皮细胞通透性的升高及细胞骨架肌动蛋白F-actin形态的改变;可溶性RAGE的抗体(anti-RAGE IgG)、NADPH氧化酶抑制剂(apocynin)及p38抑制剂SB203580均可减轻AGEs对内皮细胞屏障功能和形态的影响.结果提示,AGEs修饰蛋白对单层内皮细胞通透性及骨架重排的作用可能通过与内皮细胞上的RAGE结合,引起细胞内的氧化应激,并激活p38 MAPK通路所介导.
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卡巴胆碱抑制肿瘤坏死因子所致微血管内皮细胞通透性增高
目的 探讨卡巴胆碱对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)诱导的增加微血管通透性的作用.方法 采用FITC标记白蛋白漏出法、考马斯亮蓝染色法观察卡巴胆碱对TNF-α诱导微血管内皮细胞通透性,细胞形态和细胞骨架变化的影响.结果 与对照组比较,TNF-α明显增加微血管内皮细胞通透性(P＜0.05),诱导细胞皱缩,细胞间隙增大和细胞骨架排列紊乱.给予卡巴胆碱可以明显抑制TNF-α诱导微血管内皮细胞通透性增加,并呈剂量依赖性,同时可以使细胞间隙明显减小,细胞骨架排列有序.结论 卡巴胆碱日可能通过抑制TNF-α对细胞骨架的损伤,进而抑制微血管通透性增加.
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内毒素对脓毒性ARDS肺内皮细胞通透性的直接影响
内毒素可直接或间接作用于哝毒性ARDS肺内皮细胞,导致肺内皮细胞通透性增加.LBP/sCD14在LPS-EC相互作用中起着主要的调节和增敏作用,而Toll样受体可能是介导LPS信号在内皮细胞等CD14阴性细胞内传递的必要条件;同时MAPK酪氨酸磷酸化在LPS信号转导中起重要作用.内毒素对肺内皮细胞的直接影响可致肌动蛋白解聚、内皮接合部及内皮-酶底物粘着的分离,从而导致细胞旁路开放,肺内皮细胞通透性增加.另外内毒素直接引起肺内皮细胞凋亡、损伤也是导致通透性增加的原因.
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胰淀素对血管内皮细胞屏障功能的影响
目的:进一步观察amylin对血管内皮细胞屏障功能的影响.方法:采用内皮细胞二室弥散系统观察amylin对人脐静脉内皮细胞系(HUVEC)通透性的影响.通透性用生物素标记的白蛋白跨内皮细胞单层的通透率表示.用囊泡结构特异性探针FM1-43标记内皮细胞囊泡结构,在激光共聚焦显微镜下观察并进行定量测定.结果:内室单层内皮细胞在amylin浓度为0、0.1、1,10和100(nmol/L)的处理12h后,内皮细胞白蛋白通透率分别是:(5.8±0.80)、(6.1±0.42)、(9.4±0.35)、(18.2±1.72)和(22.7±3.9)%,随amylin浓度的增加白蛋白通透率相应增加.而amylin(100 nmol/L)与内皮细胞共孵育在0、0.25、0.5、1、3、6、12 h白蛋白通透率分别是:(5.4±0.3)、(5.8±0.5)、(6.3±1.1)、(9.8±0.6)、(11.6±0.3)、(16.9±1.6)、(20.2±5.1)%,随amylin作用时间的延长白蛋白通透率亦相应增加.内皮细胞胞浆内囊泡结构用特异分子探针染色后清晰可见.浓度为0、0.1、1、10、100 nmol/L的amylin与内皮细胞共孵育2h后,囊泡吞噬结构染色的平均荧光强度分别是:202±26、230±39、361±41、456±57和720±84/mm2.随amylin剂量的增加荧光强度相应地增加.amylin(100 mol/L)处理后与处理前相比,同一群内皮细胞囊泡结构染色的荧光强度明显地增加.伴有BSA的培养液培养的内皮细胞囊泡结构的荧光染色强度较无BSA组以及amylin加BSA组较单纯BSA组对比,均显著增高(P＜0.01).而amylin、IgG分别与无BSA对比以及IgG加BSA组与BSA组对比均无显著性差异(P＞0.05).结论:①amylin能够增加内皮细胞白蛋白的通透率,该作用呈剂量和时间依赖性;②amylin可通过增加内皮细胞囊泡转运的机制而增加内皮细胞的通透性.该研究为amylin在糖尿病慢性血管并发症的形成中的作用提供了体外实验证据.
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对氧磷对血管内皮细胞的损伤作用及机制探讨
目的 为探讨有机磷酸酯对血管内皮细胞和血管内皮功能是否有直接的损伤作用.方法 用不同浓度的对氧磷分别与大鼠离体血管环和培养的人脐静脉单层内皮细胞共孵不同的时间,以乙酰胆碱引起的血管内皮依赖性舒张反应和单层内皮细胞通透性等为观察指标,检测对氧磷对血管内皮的损伤作用.结果 对氧磷(36.3nmol/L～36.3/μmol/L)与血管环共孵,呈浓度和时间依赖性地显著抑制乙酰胆碱诱导的内皮依赖性舒张反应,而对硝普钠引起的非内皮依赖性舒张反应没有明显的影响.对氧磷与内皮细胞共孵不同的时间,呈浓度和时间依赖性地显著增加单层内皮细胞的通透性.对氧磷在损伤血管内皮的同时也导致了血管组织及细胞培养液中一氧化氮浓度和超氧化物歧化酶活性的降低、脂质过氧化代谢产物丙二醛浓度的升高.加入左旋精氨酸能部分拮抗对氧磷对血管内皮功能的损伤作用,用阿托品预处理则不影响对氧磷的作用.结论 该研究提示对氧磷对血管内皮细胞有直接损伤作用,其机制可能与对氧磷诱发氧化应激,进而导致脂质过氧化反应发生和增加内皮细胞的通透性有关.
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卡托普利对对氧磷所致血管内皮损伤的保护作用及机制探讨
目的 探讨卡托普利对对氧磷(paraoxon)所致血管内皮功能损伤的保护作用及其机制.方法 用大鼠离体血管环和培养的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为实验模型,以血管内皮依赖性舒张(EDR)反应、HUVEC的通透性、内皮细胞活力、内皮细胞的形态学改变及生化参数为指标,用对氧磷作为损伤因子,用血管紧张素转化酶抑制剂(ACEI)卡托普利(captopril)作为保护药,观察了对氧磷对内皮的损伤作用及卡托普利的保护作用.用非巯基类ACEI(依那普利拉,enalaprilat)和抗氧化酶为对照,探讨了卡托普利对对氧磷所致血管内皮损伤的保护作用的机制.结果 对氧磷(3.63 μmol·L-1)与血管环或内皮细胞共孵30 min,显著性地抑制了血管EDR反应和增加了单层内皮细胞的通透性.卡托普利与血管环共孵30 min,剂量依赖性(0.1、1.0、10 μmol·L-1)地显减轻了对氧磷(3.63μmol·L-1)对血管EDR的抑制作用、保护了培养的HUVEC中NO的释放.对氧磷和卡托普利对硝昔钠(SNP)诱导的非内皮依赖性舒张反应没有影响.卡托普利(10 μmol·L-1)显著性地阻滞了对氧磷所致的单层HUVEC通透性的增加以及内皮细胞活力的降低、保护了超氧化物歧化酶(SOD)活性、阻滞了丙二醛(MDA)浓度的升高.超氧化物歧化酶、过氧化物酶(catalase)有与卡托普利相似的抗对氧磷损伤作用,但依那普利拉对对氧磷所致损伤无明显保护作用,巯基抑制荆(4-羟基汞苯甲酸普罗比妥钠,cystain)能显著性拮抗卡托普利的保护作用.结论 对氧磷能直接损伤血管内皮细胞,卡托普利对氧磷所致的血管内皮细胞损伤有显著性保护作用,其机制可能主要依赖于其所含的巯基的抗氧化作用,而非依赖于抑制血管紧张素转化酶.
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1-磷酸鞘氨醇受体2在LPS介导的内皮细胞高通透性中的作用
目的 观察1-磷酸鞘氨醇受体2(S1PR2)在脂多糖(LPS)刺激后表达的变化,探讨其在LPS介导的内皮细胞高通透性中的作用.方法 用不同浓度和时间的LPS刺激培养的ECV 304细胞,采用RT-PCR方法检测S1PR2 mRNA的变化,Western blot方法检测S1PR2蛋白的变化,TRITC荧光标记白蛋白漏出法测定单层内皮细胞的通透系数Pa值.结果 与对照组相比,S1PR2 mRNA和S1PR2蛋白在LPS(500 ng/ml)刺激24 h后以及在LPS(1 000 ng/ml)刺激12 h显著增加(P<0.01);S1PR2拮抗剂JTE-013能显著降低LPS引起的内皮细胞通透性增高(P<0.05).结论 S1PR2在LPS引起的内皮细胞通透性增高中起着重要的作用.
关键词： 1-磷酸鞘氨醇受体2 ECV 304 内皮细胞通透性 LPS
