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mCD99L2基因沉默对小鼠B淋巴瘤细胞系A20细胞转化为 H/RS样细胞的影响
目的 探究mCD99L2基因沉默对小鼠B淋巴瘤细胞系A20细胞转化为H/RS样细胞的影响.方法 重组SiRNA表达质粒LV-mCD99L2,体外转染内源性mCD99L2表达阳性的A20细胞,筛选出稳定表达LV质粒的细胞株并扩增培养;采用免疫荧光技术和流式细胞仪检测转化前后两组细胞鼠源CD30表达;透射电镜观察转化后细胞超微结构的形态特点;细胞计数方法动态观测培养细胞干扰组A20-LV-mCD99L2和未经干扰组A20细胞的H/RS样细胞(直径≥25 μm)转型率,以人霍奇金淋巴瘤细胞系L428作为对照;采用流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 获得了稳定表达LV质粒的单克隆细胞株A20-LV-mCD99L2;免疫荧光标记显示转化细胞CD30(+);流式细胞仪检测A20-LV-mCD99L2细胞CD30阳性率为54.4%;透射电镜观察转化后细胞核增大,可见单核、双核及多核,核仁明显的H/RS样细胞;干扰组H/RS样细胞的转型率明显高于未经干扰组(P＜0.01).两组处于S期的细胞无明显差异,两组细胞均未见凋亡峰.结论 mCD99L2基因沉默可诱导小鼠B淋巴瘤细胞系A20细胞转化为H/RS样细胞.
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IMP3和CD30蛋白在霍奇金淋巴瘤H/RS细胞中的表达及意义
目的 探讨IMP3蛋白在霍奇金淋巴瘤(HL) H/RS细胞中的表达及意义.方法 采用免疫组化半定量及计数方法观测34例HL组织标本中IMP3和CD30蛋白的表达,比较两种蛋白在H/RS细胞中的阳性率和表达强度之间的差异.结果 34例HL中结节性淋巴细胞为主型(NLPHL) 13例,经典型(CHL)21例.13例NLPHL中,IMP3阳性率100％,CD30均呈(-);IMP3阳性的H/RS细胞所占比例86.07％±14.21％,明显高于CD30(P＜0.01).在21例CHL中,IMP3和CD30阳性率100％,病变中～重度中IMP3阳性率90.4％(19/21)明显高于CD30的阳性率42.8％ (9/21)(P＜0.01).H/RS阳性细胞数占总H/RS细胞数的比例,IMP3 (92.07％±5.34％)明显高于CD30 (84.86％±10.65％)(P＜ 0.05).结论 IMP3在NLPHL和CHL的瘤细胞胞质内普遍高强度表达,极易识别,结合CD30蛋白免疫标记,可以提高HL的诊断率.IMP3很有可能成为HL辅助诊断的新型免疫标记物.
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经典霍奇金淋巴瘤MUM1和CD99及PRDM1表达与临床意义分析
目的:检测MUM1、CD99和PRDM1在经典霍奇金淋巴瘤(classic Hodgkin lymphoma,CHL)肿瘤细胞中的表达以及相互关系,分析其在H/RS细胞形成中的作用及临床意义.方法:采用免疫组化的方法检测62例CHL组织MUM1、CD99和PRDM1的表达,蛋白质印迹法检测CD99和PRDM1在6株B细胞来源和3株T细胞来源淋巴瘤细胞的表达;蛋白质印迹法检测CHL细胞株L428过表达CD99后以及重新抑制CD99后PRDM1表达.结果:62例CHL组织,61例(98.4％) MUM1呈强阳性高表达,1例(1.6％)CD99在H/RS细胞表达阳性,且为30％以下的H/RS细胞表达,PRDM1均呈阴性表达,阳性表达率差异有统计学意义,x2=177.145,P＜0.001;蛋白质印迹法结果显示,CD99和PRDM1在多发性浆细胞性骨髓瘤细胞株RPMI-8226中表达较高,在包括L428细胞在内的其他B细胞来源的淋巴瘤细胞株中表达较低;L428过表达CD99后PRDM1表达增加;重新抑制CD99表达后PRDM1表达消失.结论:H/RS细胞具有浆细胞分化潜能,CD99和PRDM1在H/RS细胞的形成中存在紧密的内在联系,上调L428中CD99的表达可能恢复PRDM1的失活,诱导H/RS细胞向成熟B细胞方向分化,结果对临床开展霍奇金淋巴瘤的诱导分化治疗具有指导意义.
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应用组织芯片探讨凋亡及EB病毒与经典型Hodgkin淋巴瘤的关系
目的:探讨凋亡及EB病毒与经典型Hodgkin淋巴瘤的关系.方法:应用组织芯片、免疫组化双标记和原位杂交技术检测bcl-2、LMP1、EBER、TUNEL(TdT-mediated dUTP nick end-1abeling)显示的凋亡在62例经典型Hodgkin淋巴瘤H/RS细胞的表达.结果:62例经典型Hodgkin淋巴瘤中35例表达bcl-2,37例表达LMP1/EBER,62例的背景细胞均可见TUNEL显示的凋亡,但仅有10例CD+30的H/RS细胞出现凋亡.经X2检验,bcl-2、LMP1/EBER、TUNEL显示的凋亡与分期、分型均无相关性(P>0.05);EBV与bcl-2、凋亡也无相关性(P>0.05);bcl-2与凋亡之间呈负相关(P<0.05).结论:凋亡是CHL的一个发病因素.bcl-2的过表达可阻断细胞的凋亡,促进肿瘤的生长.但凋亡与临床分期及分型均无相关性;一半以上的经典型Hodgkin淋巴瘤是EBV相关性的,但EBV与临床分期、分型及凋亡均无相关性,其发病机制尚不清楚.
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应用多重标记法探讨经典型Hodgkin淋巴瘤H/RS细胞的细胞属性
目的探讨经典型Hodgkin淋巴瘤H/RS细胞的细胞属性.方法应用免疫组化多重标记法和原位杂交技术检测CD3、CD20、CD15、CD30、CD10、MPO、bcl-6、κ mRNA和λ mRNA在62 例经典型Hodgkin淋巴瘤H/RS细胞的表达.结果 62 例的H/RS细胞CD30全部阳性,41例表达CD15,只有5例表达CD20,均不表达CD3、bcl-6、CD10、κ mRNA、λ mRNA.结论经典型Hodgkin淋巴瘤的H/RS细胞为生发中心后期分化的B细胞起源;H/RS细胞对B系标记有较大的变异.它不表达免疫球蛋白轻链κ和λ,可能是这些肿瘤细胞无免疫球蛋白的合成.
关键词： 经典型Hodgkin淋巴瘤 H/RS细胞 细胞属性 免疫组化多重标记 原位杂交 -
Chl H/RS细胞与背景细胞蛋白表达的相关性
目的:探讨cHL肿瘤性H/RS细胞与反应性背景淋巴细胞蛋白表达的相关性.方法:采用免疫组化SABC法对32例cHL进行CD20、CD30、CD15、CD45RO和LMPI蛋白表达的检测.结果:(1)32例cHL中LrHL11例,NSHL2例,MCHL14例,LDHL5例;(2)30/32(93.8%)的H/RS细胞与14/32(43.8%)的北景淋巴细胞表达CD30,25/32J(78.1%)的H/RS细胞与7/32(21.9%)的背景淋巴细胞表达CD15 6/32(18.8%)的H/RS细胞与8/32(25.0%)的背景淋巴细胞优势表达CD20,7/32(21.9%)的H/RS细胞与18/32(56.3%)的背景淋巴细胞优势表达CD45RO;(3) 20/32(62.5%)的H/RS细胞表达LMP1蛋白.结论:H/RS及其背景细胞的在蛋白表达水平上具有一定的相关性,检测CD20、CD30、CD15、CD45RO和LMP1五蛋白表达基本能协助HL的诊断与分型诊断.
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CD99调控经典霍奇金淋巴瘤细胞株L428向B细胞方向分化
目的 分析上调CD99基因对经典霍奇金淋巴瘤(cHL)细胞株L428形态和免疫表型的影响,探究CD99基因对H/RS细胞发生发展的意义.方法 鬼笔环肽染色和大细胞计数分析过表达CD99基因对L428细胞形态的影响；免疫细胞化学和流式细胞检测分析上调CD99基因对L428细胞免疫表型的改变.结果 CD99基因的过表达导致L428细胞变小、骨架发生重建,丢失了cHL的诊断标记CD30和CD15,重现B细胞表型PAX5、CD19、CD79α、BCL-6和CD10.结论 CD99基因过表达调控L428细胞向B细胞方向转化,提示cHL的B细胞表型的缺失很可能是CD99基因下调的结果.
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CD99调控对H/RS细胞分化的影响
目的 探究CD99基因调控cHL细胞株L428的分化.方法 形态观察、免疫细胞化学和流式细胞检测上调CD99基因对L428细胞形态、免疫表型的影响,实时荧光定量RT-PCR、Western blot和免疫荧光共聚焦显微镜方法检测PRDM1的表达.结果 L428细胞过表达CD99后形态学观察显示细胞体积变小,免疫组化和流式检测显示CD15和CD30表达基本消失,CD79a、CD19和CD38表达增强,CD138无明显变化,PRDM1在mRNA和蛋白水平出现明显表达.结论 L428细胞过表达CD99后形态发生改变,在恢复了B细胞表型的基础上又进一步打开了向浆细胞分化的开关,诱导H/RS细胞向终末B细胞方向分化.
关键词： 经典霍奇金淋巴瘤 H/RS细胞 CD99 PRDM1/BLIMP1 分化 -
miR-9在H/RS细胞的表达及其对靶点PRDM1的调控
目的 检测miR-9在霍奇金淋巴瘤H/RS细胞的表达及其对靶点PRDM1的调摔作用.方法 采用荧光定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和原位杂交方法从定量和定位两方面检测miR-9在正常CD19+B淋巴细胞及8株淋巴造血系统肿瘤细胞株中的表达,并将化学合成的miR-9反义寡核苷酸瞬时转染L428细胞使其沉默,观测PRDM1蛋白表达的变化.结果 荧光定量RT-PCR结果显示L428细胞株miR-9的表达远高于正常的CD19+B淋巴细胞和其他淋巴瘤细胞株[分别为OCI-Ly1细胞、Raji细胞、EB病毒(EBV)+永生化B细胞、间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)细胞的47倍、50倍、7倍、6倍]；原位杂交结果显示miR-9的表达定位于胞质,在L428细胞呈弥漫强阳性表达,在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和伯基特淋巴瘤细胞株呈散在弱阳性表达,在KARPAS-299和Jurkat细胞表达阴性；瞬时下调L428细胞中miR-9后PRDM1蛋白的表达水平升高.结论 miR-9在经典霍奇金淋巴瘤中扮演着“癌基因”的角色,可能通过转录后调控PRDM1基因发挥着潜在的调节终末B细胞分化功能.
