首页 > 文献资料
-
Zn2+增强非洲爪蟾卵母细胞ATP-激活电流
目的 研究Zn2+对非洲爪蟾卵母细胞ATP激活电流(IATP)的调制作用.方法 用双电极电压钳技术记录不同浓度Zn2+对IATP的影响.结果 Zn2+对IATP(尤其是D1部分)的影响有明显的浓度依赖性.3×10～mol/L(30 μmol/L)Zn2+可使IATP幅值增加(117.6±8.21)%,显著高于对照值(P＜0.01);并使IATP量-效曲线左上移,但并不改变反应的大幅值.结论 Zn2+对ATP-激活电流调制效应可能是通过改变配体和受体的亲和力而实现的变构调制.
-
Mg2+抑制表达在爪蟾卵母细胞上P2X4受体介导的ATP-激活电流
本文旨在研究Mg2+对表达在非洲爪蟾卵母细胞上P2X4受体介导的ATP-激活电流(ATP-activated current,IATP)的调制及机理.大鼠P2X4受体野生型及突变体型cDNA在体外转录成cRNA,通过显微注射技术将该cRNA注入非洲爪蟾卵母细胞中进行表达.应用全细胞双电极电压钳技术研究Mg2+对IATP的影响.结果显示,细胞外液加MgCl2对IATP的影响如下:(1)Mg2+在0.5～10 mmol/L范围内,浓度依赖性地抑制IATP,半效抑制浓度(IC50)为(1.24±0.07) mmol/L,冲洗10 min后,IATP可恢复;(2)1 mmol/L的Mg2+使IATP量-效曲线右下移,大效应电流(Emax)降低了(42.0±2.1)％,但半数有效浓度(EC50)不变；(3)预加Mg2+ 80 s后再加ATP,Mg2+对IATP抑制效应可达大；(4)Mg2+对IATP的抑制不受膜电位的影响；(5)以100 μmol/L ATP激活的电流为对照,将P2X4受体280位的天冬氨酸突变成不带电荷的谷氨酰胺后,相同浓度的ATP诱发的IATP幅值仅为对照值的(4.12±0.15)％；将280位的天冬氨酸突变成带负电荷的谷氨酸,IATp幅值和对照值相比没有显著性差异；(6)当P2X4受体280位的天冬氨酸缺失后,100 μmol/L ATP诱发的IATP的幅值几乎为对照值的两倍,且0.5～10 mmol/L的Mg2+对相应的IATP无明显影响.以上结果提示:Mg2+抑制P2X4受体介导的IATP是非竞争性的、可逆的、具有浓度依赖性、时间依赖性、无电压依赖性;Mg2+的这种抑制效应可能是通过作用于P2X4受体280位的天冬氨酸而实现的.
-
α7烟碱型乙酰胆碱受体点突变体的制备及其功能研究
目的 利用氨基酸定点突变技术以大鼠野生型α7烟碱型乙酰胆碱受体(nAChR)为模板制备α7nAChR突变体.方法 采用体外转录、定点突变、凝胶电泳、双电极电压钳等技术对α7 nAChR进行点突变,在非洲爪蟾卵母细胞上表达α7 nAChR及其突变体,并研究其受体活性功能.结果 将α7 nAChR第111位的丙氨酸突变为丝氨酸,制备了α7 nAChR的点突变体,测定了突变体对激动剂乙酰胆碱(ACh)的半数效应浓度(EC50)为165.6 μmol/L.结论 该结果不仅为受体定点突变提供了1种方法,同时为药物筛选和研究α7nAChR结构与功能关系提供了模型.
-
厄贝沙坦对电压依赖性的Kv1.3和Kv1.5通道电流的阻断作用
目的 通过观察厄贝沙坦对电压依赖性的Kv1.3和Kv1.5的阻断作用,探讨厄贝沙坦对此类通道的阻断可能具有的临床作用.方法 使用双电极电压钳技术记录表达于非洲爪蟾卵母细胞的Kv1.3和Kv1.5钾通道电流,不同浓度厄贝沙坦灌流对其电流的影响.结果 ①厄贝沙坦浓度依赖性的阻断Kv1.3通道,阻断的IC50是2.46 μmol/L,且阻断具有电压依赖性.②厄贝沙坦浓度依赖性的阻断Kv1.5通道,阻断的IC50是0.47 μmol/L,且阻断具有显著的电压依赖性.结论 厄贝沙坦阻断开放状态的Kv1.3可能是其发挥免疫调节和抗动脉粥样硬化作用的机制之一;而对开放状态的Kv1.5的阻断可能是其具备减少心房颤动发生率的作用机制之一.
-
酒精对大鼠颈上神经节P2X4受体介导的ATP-激活电流的调制及机制
目的 研究酒精对大鼠颈上神经节P2X4受体介导的ATP-激活电流(IATP)的调制及机制.方法 将大鼠颈上神经节P2X4受体表达在非洲爪蟾卵母细胞中,应用双电极电压钳技术记录P2X4受体介导的IATP及酒精对IATP的影响.结果 ①1～500 mmol/L的酒精浓度依赖性地抑制P2X4受体介导的IATP,这种抑制效应是可逆的,当细胞外的酒精被冲洗后,IATP可恢复到对照值;②60 mmol/L的酒精使P2X4受体介导的IATP量-效曲线平行右移,大电流(Emax)不变,半数有效浓度(EC50)增大,浓度大于500 mmol/L的酒精不能使EC50继续增大;③酒精对IATP的抑制不具有电压依赖性,且不改变翻转电位;④1 mmol/L的镁离子和10 mmol/L的酒精分别能抑制10μmol/L ATP诱发的电流,当两者同时加入到细胞外液(两者的终浓度不改变)时,对IATP的抑制呈现叠加效应.结论 ①酒精对表达在非洲爪蟾卵母细胞上大鼠颈上神经节P2X4受体介导的IATP具有抑制效应,这种抑制效应具有浓度依赖性、可逆性和无电压依赖性,可能是酒精通过对P2X4受体的变构调节实现的;②酒精和镁离子在P2X4受体胞外环上可能具有不同的调制位点.
