首页 > 文献资料
-
小鼠间充质干细胞脂向分化过程中miRNA-143的表达
目的 探讨小鼠间充质干细胞(MSCs)脂向分化过程中miRNA-143 (miR-143)的表达,为阐明MSCs脂向分化的调控机制提供新线索.方法 采用全骨髓体外分离结合差速贴壁法纯化扩增C57BL/6小鼠MSCs,将第5代MSCs采用脂肪细胞分化诱导剂进行成脂诱导.运用miRNA芯片技术比较MSCs组和脂肪细胞组中miR-143的表达,并通过实时定量PCR技术验证.结果 成功分离、纯化和培养MSCs；MSCs经脂肪诱导剂诱导后,胞内大量脂滴形成,油红O染色阳性.MiRNA芯片及实时定量PCR结果均表明miR-143在MSCs脂向分化过程中显著上调(3.73 ±0.42vs1.00 ±0.14,P＜0.01).结论 miR-143可能参与调控MSCs的脂向分化.
-
microRNA-16在脂肪基质细胞脂向分化过程中的表达变化
背景:触发和控制脂肪基质细胞脂向分化的调控研究将有助于人为控制脂肪基质细胞的分化方向,促进对细胞分化的深入了解.目的:了解脂肪基质细胞脂向分化过程中microRNA-16的表达变化情况.设计、时间及地点:观察对比试验,2007-10/2008-03在四川大学口腔疾病研究国家重点实验室完成.材料:出生30 d雄性体健SD幼鼠8只.成脂诱导培养液[DMEM培养液中加入地塞米松(1μmol/L)、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(0.5 mmol/L)、胰岛素(10 mg/L)].方法:从SD幼鼠体内取出脂肪,采用密度梯度离心结合贴壁培养法获得了纯度高的脂肪基质细胞,采用脂向诱导液对第3代的脂肪基质细胞进行诱导培养,并以来诱导的细胞为对照.主要观察指标:应用microRNA芯片技术检测脂肪基质细胞脂向诱导后7 d和未诱导microRNA-16的表达差异.采用实时定量PCR检测microRNA-16在脂肪基质细胞脂向分化前后表达量变化.结果:①成功获得纯度较高的脂肪基质细胞,成功诱导其脂向分化,诱导培养后7 d观察到细胞形态学上表现出典型的脂肪细胞改变:细胞相互融合,成片生长,变为细长纺锤形;PPAR γ免疫细胞化学染色呈阳性;油红O染色脂滴被染成橙红色.②成脂诱导前后microRNA-16表达明显下调,诱导前microRNA-16表达量为90.25.诱导后microRNA-16表达量为56.75,③实时定量PCR结果显示microRNA-16表达显著下调,与microRNA芯片结果一致.结论:PCR及芯片结果一致支持microRNA-16在脂肪基质细胞脂向分化过程中表达显著下调,可能在脂肪基质细胞脂向分化过程参与调控.
关键词： microRNA-16 脂肪基质细胞 脂向分化 -
人脂肪干细胞脂向分化中长非编码RNA的差异表达
背景：肥胖导致了包括高血压、冠心病、脂肪肝、高脂血症、2型糖尿病在内的诸多疾病，因此深入理解脂肪细胞分化机制对于肥胖的防治具有深远意义。目前对于脂向分化机制的研究多集中在微小RNA上，对于长非编码RNA在脂向分化过程中的作用尚且知之甚少。目的：获得脂向分化过程中差异倍数明显的长非编码RNA，并进一步筛选在脂向分化过程中可能发挥重要作用的长非编码RNA进行验证。方法：取人腹部皮下脂肪，采用组织块培养法获取脂肪干细胞，传至第3代后进行成脂诱导分化，通过微阵列技术对脂向分化过程中0，5，12 d长非编码RNA及mRNA差异性表达量进行统计，并结合生物信息学报告筛选出呈现明显差异性表达的长非编码RNA，通过qRT-PCR进行验证。结果与结论：脂向分化过程中以差异倍数1.5(P <0.05)为标准，上调长非编码RNA的数量5 d vs.0 d 748个，12 d vs.0 d 847个，12 d vs.5 d 593个；下调长非编码RNA的数量5 d vs.0 d 828个，12 d vs.0 d 1113个，12 d vs.5 d 750个；结合生物信息学分析结果，在与脂类代谢有关的28个长非编码RNA中根据诱导0，5，12 d 差异表达倍数较高且其靶基因可能是已知的与成脂相关的基因中，筛选出3个长非编码 RNA：AK304548、BP216319、DA852857。通过PCR验证结果显示AK304548、BP216319及其靶基因表达量呈现先下调后上调的趋势，与微阵列测序结果相符，预示其在脂向分化过程中起到调控作用。
-
去卵巢对Wistar大鼠MSCs的形态学、生长曲线及骨/脂向分化能力的影响
目的:观察去卵巢对Wistar大鼠MSCs的形态学、生长曲线以及骨/脂向分化能力的影响.方法:6月龄Wistar大鼠随机分成模型组和假手术组,以双侧卵巢切除法复制OP模型,造模3个月后,采用全骨髓贴壁法提取MSCs,差速贴壁原理纯化MSCs,分别采用倒置相差显微镜观察并比较MSCs的形态学差异,MTT法检测MSCs生长曲线,ALP染色法比较骨向分化能力,油红O染色法比较脂向分化能力.结果:与正常组相比,OP大鼠MSCs细胞形态宽大、扁平,并可见少量脂肪细胞；OP大鼠MSCs体外增殖能力下降,其骨向分化能力及对成骨诱导剂反应力降低,脂向分化能力及对成脂诱导剂反应力增强.结论:去卵巢会导致大鼠MSCs形态变宽大、扁平,体外增殖能力下降,脂向分化能力增强,骨向分化能力减弱.
-
脂肪基质细胞脂向分化过程中MicroRNA-21的表达变化
目的:了解脂肪基质细胞(ADSCs)在脂向分化过程中MicroRNA-21(miRNA-21)表达变化情况.方法:从8只出生30 d雄性体健SD幼鼠体内取出脂肪,采用密度梯度离心结合贴壁培养法获得了纯度高的脂肪基质细胞,采用脂向诱导液对第3代的脂肪基质细胞进行诱导培养,并以未诱导的细胞为对照.成脂诱导培养液[DMEM培养液中加入地塞米松(1 μmol·L-1)、3-异丁基-1甲基黄嘌呤(0.5 mmol.L-1)、胰岛素(10 mg·L-1)].应用microRNA芯片技术检测脂肪基质细胞脂向诱导后7 d和未诱导microRNA-21的表达差异.采用实时定量PCR检测microRNA-21在脂肪基质细胞脂向分化前后表达量变化.结果:经显微镜下观察、油红O染色及PPARγ免疫细胞化学染色检测证实脂肪基质细胞已经脂向分化,miRNA芯片及实时定量PCR结果均表明miRNA-21在脂肪基质细胞体外脂向分化过程中表达显著下调.结论:miRNA-21在脂肪基质细胞脂向分化后的表达有显著降低,可能参与调控ADSCs的脂向分化过程.
-
糖基化终末产物对人牙周膜干细胞脂向分化相关基因C/EBPβ、PPAR-γ的影响
目的:通过检测CCAAT/增强子结合蛋白β( C/EBPβ)、过氧化物酶体增殖物激活受体γ( PPAR-γ)基因的表达探讨糖基化终末产物(AGEs)对人牙周膜干细胞(HPDLSCs)脂向分化能力的影响. 方法:体外组织块法和有限稀释法克隆化培养人牙周膜干细胞;成骨、成脂诱导人牙周膜细胞,对其进行干细胞鉴定. 分别成脂诱导正常的人牙周膜干细胞和AGEs刺激下的人牙周膜干细胞,油红O染色观测两组细胞脂滴形成情况. 实时定量聚合酶链反应(Reai time PCR)检测成脂诱导后AGEs刺激下C/EBPβ、PPAR-γ表达的改变. 结果:牙周膜细胞成骨诱导21 d后茜素红染色出现钙化结节;成脂诱导21 d后油红O染色出现脂滴;AGEs刺激后人牙周膜干细胞成脂过程中脂滴的形成增多;Reai time PCR结果显示:AGEs刺激7 d后C/EBPβ、PPAR-γmRNA表达水平较对照组升高,差异有统计学意义(P<0.05). 结论:AGEs可以促进人牙周膜干细胞的脂向分化并能改变C/EBPβ、PPAR-γmRNA的表达.
-
左归丸对衰老大鼠骨髓间充质干细胞成骨和成脂分化的影响
目的：研究左归丸对衰老大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）成骨与成脂分化的影响。方法通过腹腔注射D-半乳糖建模，制备衰老大鼠模型，分离培养MSCs，并诱导MSCs成骨和成脂分化。通过碱性磷酸酶（ALP）活性检测、ALP染色观察MSCs成骨分化能力，通过甘油三酯（TG）表达量和油红O染色观察MSCs成脂分化能力。结果模型组MSCs ALP染色阳性率明显低于正常组，左归丸组MSCs染色阳性率明显高于模型组（P＜0.05）。成骨诱导14 d，模型组MSCs ALP活性值明显低于正常组而左归丸组明显高于模型组（P＜0.05）。油红O染色，模型组MSCs染色阳性率明显高于正常组，左归丸组MSCs染色阳性率明显低于模型组（P＜0.05）。成脂诱导7 d，模型组MSCs TG表达量明显高于正常组而左归丸组MSCs TG表达量明显低于模型组（P＜0.05）。结论左归丸可促进衰老大鼠MSCs向成骨细胞分化，同时可抑制其向脂肪细胞分化。
-
脂肪基质细胞脂向分化过程中MicroRNA-134的表达变化
目的 了解脂肪基质细胞(ADSCs)脂向分化过程中MicroRNA-134(miR-134)表达变化情况,深入了解ADSCs脂向分化的分子调控机制,为脂肪组织工程的研究和发展奠定基础.方法 (1)采取出生30 d的雄性体健SD(Sprague-Dawley)幼鼠的腹股沟脂肪组织,用密度梯度离心结合贴壁培养法分离、纯化后诱导培养大鼠脂肪基质细胞(ADSCs)7 d,设置未诱导组以对照.(2)应用miRNA芯片技术比较诱导组和未诱导组的miR-134表达差异.(3)用实时定量PCR定量验证ADSCs脂向分化前后miR-134表达差异.结果 (1)成功分离、纯化、培养ADSCs,诱导组培养7 d后观察到典型脂肪细胞特征,细胞形态学上表现为细胞相互融合,成片生长,呈细长纺锤形,大量脂滴形成;PPARγ免疫细胞化学染色呈阳性;油红O染色脂滴被染成橙红色.(2)成脂诱导前后miR-134表达明显下调,其中诱导修正值2054.5,无诱导修正值2855.25.(3)实时定量PCR结果亦显示miR-134表达显著下调,与miRNA芯片结果一致.结论 miR-134在ADSCs脂向分化过程中miR-134表达显著下调,可能参与调控ADSCs的脂向分化.
关键词： MicroRNA-134 脂肪基质细胞 脂向分化 miRNA芯片 实时定量PCR
