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中药菊花决明散防治大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的研究
目的 探讨中药菊花决明散对大鼠高危角膜移植排斥反应的抑制作用.方法 角膜缝线法诱导受体角膜新生血管,行穿透性角膜移植,建立大鼠高危角膜移植排斥反应模型.术后治疗组采用每天菊花决明散方0.1g/2 mL灌胃,对照组采用生理盐水2 mL灌胃,观察植片存活状况;应用组织病理学、免疫荧光组织化学,流式细胞仪等方法对受体局部和全身免疫状态进行检测.结果 治疗组大鼠角膜植片存活时间为(14.50±3.55)天,明显长于生理盐水组的(8.25±0.71)天(P<0.01);治疗组术后虹膜铺片Fas、FasL的表达低于对照组;术后14天外周血中CD_4~+CD_(25)~+FOXP3~+阳性细胞治疗组[(14.81±2.58)%]高于对照组[(5.11±3.92)%],差异有统计学意义(P<0.01);治疗组房水中IL-2浓度低于对照组而IL-10浓度高于对照组.结论 菊花决明散方对高危角膜移植排斥反应模型大鼠术后免疫排斥反应具有一定抑制作用.
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角膜新生血管与角膜移植排斥反应的关系的研究进展
角膜盲患者在我国有200～300万人，角膜病是仅次于白内障的第二大致盲性眼病，角膜移植手术是这些角膜盲患者复明的有效的治疗手段。由于角膜存在多种免疫赦免机制，如角膜不含血管和淋巴管，处于相对免疫“赦免”状态，而且正常情况下角膜的朗格汉斯细胞分布不均匀以及前房相关免疫偏离的存在，这些特点使得角膜移植手术是众多器官和组织移植手术中成功率高的手术［1-3］。虽然随着显微手术操作技术的提高和抗排斥新药的应用，手术成功率有了更大的提高，但是术后免疫排斥反应仍是角膜移植手术失败的主要的原因之一，尤其在高危角膜移植（新生血管、多次角膜移植及活动性炎症）手术后免疫排斥反应高达50％以上［4-5］。角膜移植术后免疫排斥反应是一个复杂的多因素过程，随着近代分子免疫学的发展，人们对其发生机制的认识正在不断深入，已经确认有许多危险因素可以导致角膜移植排斥的发生，如角膜血管化、炎症、虹膜前黏连、多次角膜移植手术史、年龄、大植片移植、偏中心移植以及青光眼病史、化学伤等［6］。其中角膜新生血管是一个主要危险因素。本文将就角膜新生血管与角膜移植排斥反应的关系的研究进展做一综述。
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免疫耐受对角膜移植片长期存活的价值
穿透性角膜移植是治疗角膜盲的主要手段,尽管角膜是器官移植的免疫赦免部位,但同种异体免疫排斥反应仍是角膜移植片失败的主要原因.据统计,18%的常规角膜移植或75%的高危角膜移植患者会发生排斥反应.目前临床使用的各种免疫抑制剂主要通过作用于T淋巴细胞达到抑制免疫排斥反应的目的,但长期使用费用昂贵,且为非特异性免疫抑制.当免疫抑制剂不足时就会发生排斥反应,而抑制过强易诱发感染或肿瘤,并且阻断受体形成免疫耐受.
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黑睛排斥汤防治大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的机理研究
目的 探讨黑睛排斥汤在大鼠高危角膜移植免疫排斥反应中作用的机理.方法 角膜缝线法诱导角膜新生血管,建立大鼠高危角膜移植模型,随机分为A组(模型对照),B组(灌服黑睛排斥汤4g/(kg·d)),C组(灌服黑睛排斥汤4g/(kg·d)+ CsA 10 mg/(kg·d)).行封闭群大鼠SD-Wistar组间同种异体全板层角膜移植,观察植片存活状况；应用流式细胞分析,免疫荧光组织化学等方法对受体局部和全身免疫状态机制进行检测.结果 1.角膜植片存活时间:A组(10.38±1.69)d,B组(13.00±2.03)d,C组(22.50±3.07)d,3组比较差异有统计学意义(P＜0.01).2.外周血淋巴细胞CD4+和CD8+亚群:术后7d,CD4+,CD8+,CD4+/CD8+各组之间比较均无明显差别(P＞0.05)；术后14d,C组CD4+、CD4+/CD8+与A组比较明显降低(P＜0.05)；术后21d,B、C组CD4+、CD4+/CD8+与A组比较明显降低(P＜0.05),但各组CD8+比较无明显差异(P＞0.05).3.ConA诱导的脾淋巴细胞的增殖:B组、C组脾T淋巴细胞的增殖被明显抑制,与A组比较差异有统计学意义(P＜0.01),其中以C组更为明显.结论 黑睛排斥汤对高危角膜移植排斥反应模型大鼠术后免疫排斥反应的抑制作用主要是通过抑制T淋巴细胞的增殖来实现的.
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高危角膜移植后免疫排斥反应与颈淋巴结切除
背景:颈淋巴结是角膜的引流区淋巴结.角膜移植后,抗原提呈细胞随着房水经由脉络膜巩膜外途径引流至颈淋巴结而诱发角膜免疫排斥反应.目的:观察在碱烧伤的角膜植床上行角膜移植后的免疫排斥反应现象,认识颈淋巴结切除抑制角膜移植后免疫排斥的效应.设计:随机对照动物实验.单位:中山大学中山眼科中心.材料:实验于2005-05/2007-02在中山大学中山眼科中心完成(眼科学国家重点试验室.实验室编号2006DA105054).选用SD大鼠104只, Wistar大鼠40只,均为雄性,鼠龄1～2个月,均由中山大学实验动物中心提供.实验所用的白细胞介素2 和干扰素γ ELISA试剂盒由美国Biource International公司提供.实验过程对动物的处置符合在眼科研究使用动物的ARVO声明.方法:以SD鼠为受体,Wistar鼠为供体,所有受体大鼠均行同种异体角膜移植.受体鼠被随机分为4组:正常对照组:行正常角膜移植;B组为颈淋巴结切除组:正常大鼠切除双侧颈淋巴结;碱烧伤后角膜移植组:角膜碱烧伤后21 d时行角膜移植;碱烧伤后角膜移植合并颈淋巴结切除组:角膜碱烧伤后立即行双侧颈淋巴结切除,21 d后再行角膜移植;每组20只.应用ELISA法检测角膜移植后各组植片中干扰素γ、白细胞介素-2蛋白的表达,记录角膜排斥反应发生的时间并比较各组植片平均存活时间.其余24只受体鼠用于在裂隙灯下及组织切片后显微镜下观察碱烧伤后角膜炎症及新生血管的动态变化.结果: ①病理组织学:正常角膜无炎症及新生血管.碱烧伤后3天时,角膜基质中存在着大量的炎症细胞浸润.3周末时无明显的炎症征象,但角膜新生血管达到高峰.碱烧伤后8周时,角膜新生血管已完全消退.②植片平均存活时间: 正常对照组、颈淋巴结切除组、碱烧伤后角膜移植组、碱烧伤后角膜移植合并颈淋巴结切除组分别为(10.40±1.14),(46.30±9.46),(7.00±1.58)和(15.00±3.39)d;颈淋巴结切除组较正常对照组明显延长(P < 0.05),而碱烧伤后角膜移植合并颈淋巴结切除组较碱烧伤后角膜移植组明显延长,差异具有显著性意义 (P < 0.05).③移植后角膜中干扰素γ及白细胞介素2蛋白的表达:角膜移植后颈淋巴结切除组植片中无干扰素γ及白细胞介素2蛋白的表达.在角膜移植后3,7,10,14 d,碱烧伤后角膜移植合并颈淋巴结切除组干扰素γ和白细胞介素-2的表达均明显下降,与碱烧伤后角膜移植组比较,差异有显著性意义(P < 0.05).结论:颈淋巴结切除能有效抑制正常及碱烧伤后角膜移植术后的免疫排斥反应.
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双板层角膜移植对高危角膜移植患者疗效观察
目的 观察双板层角膜移植对高危角膜移植患者的治疗效果.方法 回顾性病例系列研究.选取2008年1月至2012年6月在南华大学附属第二医院接受手术的高危角膜移植患者25例(男性15例,女性10例),并按术式不同分为两组:双板层角膜移植组8例(男性5例,女性3例);穿透性角膜移植组17例(男性10例,女性7例).术后定期复查裸眼视力、眼压、眼底及裂隙灯检查;术后1、3、6、12个月行验光(查矫正视力)及角膜内皮细胞计数检查.采用秩和检验比较两组患者术前裸眼视力;采用Fisher确切概率法检验比较两组患者排斥反应发生率;采用t检验比较两组患者年龄、术后裸眼视力、矫正视力、眼压及角膜内皮细胞密度.结果 双板层角膜移植组患者平均年龄(43.6±16.5)岁,术前视力为FC/20 cm～0.1;穿透性角膜移植组患者平均年龄(45.3±15.7)岁,术前视力为FC/20 cm～0.08.两组患者年龄及术前视力比较差异无统计学意义(t=1.322,P=0.199;t=116.5,P =0.264).双板层角膜移植组裸眼视力在术后1、3、6、12个月均优于穿透性角膜移植组,差异比较有统计学意义(P＜0.05);矫正视力:术后1个月双板层角膜移植组较穿透性角膜移植组差异有统计学意义(t =2.637,P=0.014),术后3、6个月两组差异比较无统计学意义(t=1.544、1.592,P =0.137、0.135),术后1年双板层角膜移植组优于穿透性角膜移植组差异有统计学意义(t=2.216,P =0.038).两组患者角膜内皮细胞密度均呈明显下降趋势,但双板层角膜移植组角膜内皮细胞密度下降较穿透性角膜移植组缓慢.术后1、3、6、12个月双板层角膜移植组角膜内皮细胞密度均高于穿透性角膜移植组,两组差异比较有统计学意义(P＜0.05).穿透性角膜移植组有2例在手术后1个月内发生继发性青光眼,双板层角膜移植组均无病例发生.手术后1年内穿透性角膜移植组共有6例发生排斥反应,发生率为35.3％ (6/17);双板层角膜移植组有2例发生排斥反应,发生率为25％ (2/8),两组差异比较无统计学意义(P =0.487).经抗排斥处理,穿透性角膜移植组有4例排斥反应被控制,2例角膜植片出现混浊;双板层角膜移植组2例排斥反应均被控制,植片恢复透明.结论 对于高危角膜移植患者,双板层角膜移植较穿透性角膜移植视力恢复理想,内皮细胞密度下降缓慢,排斥反应发生率低,但仍需要大样本及长时间的观察来进一步证实.
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雷帕霉素抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的实验研究
目的:研究雷帕霉素对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用.方法:建立大鼠高危穿透性角膜移植动物模型,以角膜新生血管化SD大鼠为受体,Wistar大鼠为供体,分别腹腔注射0.5%羧甲基纤维素(对照组)、雷帕霉素、环孢霉素A、雷帕霉素+环孢霉素A,共12 d.用裂隙灯显微镜对角膜植片进行临床观察,记录角膜植片存活时间,并进行组织学检查.结果:用药组角膜植片的存活时间显著增加(P＜0.01);组织学发现联合用药组的角膜炎性细胞浸润、新生血管形成及水肿程度均明显好于其他各组.结论:雷帕霉素能显著延长角膜植片的存活时间,对大鼠高危穿透性角膜移植排斥反应具有抑制作用,与环孢霉素A联合用药具有协同作用,优于各单药物治疗组.
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角膜移植排斥反应的发生机制及治疗
角膜盲人在我国约有200～300万,已经成为第二大致盲原因,角膜移植是这部分患者复明的唯一手段.角膜移植术是目前器官和组织移植成功率高的手术,但术后的免疫排斥反应仍是手术失败的主要原因.我国目前每年开展约5 000例角膜移植手术.大样本量、前瞻性的研究显示,角膜移植后10年排斥反应发生1次的累积发生率为20%,而严重感染、化学伤等高危角膜移植患者,术后的免疫排斥反应发生率高达60%～90%,因此减少因免疫排斥反应导致的再次致盲是摆在我国广大从事角膜移植的眼科工作者亟待解决的问题.深刻地理解角膜移植排斥反应的发生机制,采取有效的预防措施,一旦发生免疫排斥反应则给予规范的免疫排斥治疗并加强随诊,对我国的防盲治盲工作具有重大的意义.
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雷帕霉素兔眼房水及血液中药物分布及防治兔高危角膜移植后新生血管增殖的研究
目的 探讨雷帕霉素(RAPA)全身和局部使用后兔眼房水及血液中药物含量;观察其对兔眼角膜新生血管增殖的影响.方法 健康新西兰白兔30只,其中20只制作高危角膜移植受体动物模型.将16只兔随机分为4组,每组4只.A组术后不用药,B组涂RAPA眼膏1次/d,C组注射0.5%RAPA豆油注射液2.5mg/kg,2次/d,D组注射0.5 %RAPA豆油注射液1.5mg/kg,2次/d.术后观察90d.用药后1、2、7、14、28、56d高效液相色谱法(HPLC)检测4组兔房水及血液中RAPA 浓度.术后观察术眼新生血管长入情况并记录新生血管指数(NI),共90d.结果 4组兔各时间点房水及血液中均可检测到RAPA,各组浓度间存在统计学差异.A组术后NI2周后一直呈上升趋势,6周后维持在较高水平;B、C、D组NI一直维持在较低水平.结论 全身或局部用RAPA具有抑制兔眼高危角膜移植后新生血管增殖作用,局部用药优于全身用药.
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角膜移植免疫排斥反应防治研究进展
同种异体角膜移植是角膜病致盲患者复明的终末治疗手段,但移植术后免疫排斥反应是角膜移植失败的首要原因,尤其在高危角膜移植(新生血管、多次角膜移植及活动性炎症)免疫排斥反应高达50％以上[1].因此,预防角膜移植排斥反应发生是角膜移植成功的关键.本文针对角膜移植排斥反应发生机制,对目前防治角膜移植免疫排斥反应等研究热点进行综述.
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他克莫司滴眼液预防高危角膜移植免疫排斥反应的研究
目的 观察他克莫司滴眼液预防高危角膜移植免疫排斥反应的效果.方法 回顾性研究.选取山东省眼科医院2013年至2015年间成功施行角膜移植术的高危免疫排斥患者48例(50只眼),根据术后局部免疫抑制剂使用种类,分为他克莫司组23例(25只眼)和环孢素组25例(25只眼).术前对所有患者进行排斥风险评分,以排斥反应指数(RI)判断是否出现植片免疫排斥反应,当RI≥5时视为发生免疫排斥反应,所有患者术后随访1年,对比1年内患者术后植片免疫排斥发生率.结果 两组各25只眼,排斥风险评分他克莫司组与环孢素组不具有统计学差异(t=0.65,P=0.52>0.05).术后1年内免疫排斥发生率,环孢素组10例(10只眼)发生排斥,免疫排斥发生率为40.00%,他克莫司组3例(3只眼)发生排斥,免疫排斥发生率为12.00%,他克莫司组免疫排斥率明显低于环孢素组,差异具有显著性(χ2=5.09,P<0.05).结论 他克莫司滴眼液对高危角膜移植免疫排斥反应有较好的预防和治疗作用.
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局部使用TNP-470后兔眼房水中药物分布及对兔高危角膜移植术后新生血管的影响
目的 探讨局部使用TNP-470[O-(氯乙酰氨甲酰基)烟曲霉醇]后兔眼房水中的药物质量浓度,观察其对兔眼高危角膜移植术后新生血管增殖的影响.方法 健康新西兰白兔30只,其中10只兔角膜作为供体、20只兔进行高危角膜移植受体动物模型的制备.将成功建立高危角膜移植动物模型的l6只兔按随机数字表法分为4组,每组4只:A组术后不用药,术后第1天B、C、D组分别予质量浓度为100、500、1 000 ng· mL-的TNP-470滴眼液,6次·d-1,1滴·次-1,共观察90 d.用药后1、2、7、14、28、56 d用高效液相色谱法(HPLC)检测4组兔眼房水中TNP-470的质量浓度；术后第2天开始隔日观察术眼新生血管长入情况,并在术后2、6、9、12周记录新生血管指数(NI).结果 3组各时间点兔眼房水中均可检测到TNP-470,且各组药物质量浓度比较,差异有统计学意义(P＜0.05).术后2周A组NI一直呈上升趋势,6周后维持在较高水平；B、C、D组在术后6、9、12周一直维持在较低水平,与A组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 局部用TNP-470具有抑制兔眼高危角膜移植后新生血管增殖的作用.
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TGF-β1对大鼠高危角膜移植排斥反应及超微结构的影响
目的 探讨重组腺相关病毒介导的转化生长因子-β1(recombinant adeno-associated virus mediated transforming growth factor-β1,rAAV-TGF-β1)抑制大鼠高危角膜移植术后免疫排斥反应的作用及对植片超微结构的影响.方法 构建rAAV-TGF-β1真核表达质粒栽体.碱烧伤的方法建立角膜新生血管化动物模型,52只角膜新生血管化的SD大鼠接受穿透性角膜移植手术,分为2组,实验组(26只)Wistar大鼠角膜植片浸泡在含rAAV-TGF-β1(10 × 1012v.g.·L-1)的DMEM/F12培养液中,37℃孵育30 min,移植到SD大鼠角膜植床上;对照组(26只)Wistar大鼠角膜植片浸泡在DMEM/F12培养液中,37℃孵育30 min,移植到SD大鼠角膜植床上.术后裂隙灯显微镜观察植片排斥情况,比较2组角膜植片的平均存活时间和各时间点排斥反应指数.术后9 d、14 d角膜植片行超微结构检查,免疫组织化学方法检测角膜组织中IFN-γ、TGF-β1的表达.结果 对照组角膜植片平均存活时间为(10.75±1.91)d,实验组为(22.85±3.48)d,2组比较差异有显著统计学意义(P＜0.01);实验组术后各时间点角膜植片排斥反应指数均明显低于对照组,差异均有显著统计学意义(均为P＜0.01).术后9 d、14 d角膜植片超微结构检查显示,实验组角膜植片基质层成纤维细胞凋亡与坏死明显减轻;免疫组织化学分析显示,实验组植片内IFN-γ表达低于对照组,TGF-β1表达高于时照组,差异均有统计学意义(P＜0.05或0.01).结论 rAAV-TGF-β1能显著延长角膜植片存活时间,抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应,改变植片的超微结构.
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TGF-β1对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应中植片IL-10表达的影响
目的 研究重组腺相关病毒介导的转化生长因子-β1(recombinant adeno-associated virus mediated transforming growth factor-β1,rAAV-TGF-β1)对大鼠高危角膜移植免疫排斥反应的抑制作用以及对白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)表达的影响.方法 构建rAAV-TGF-β1真核表达质粒载体.40只角膜新生血管化的SD大鼠行穿透性角膜移植术.实验组(20只):角膜植片预浸泡在rAAV-TGF-β1(10×1012v.g·L-1)的达尔伯克必需基本培养液F12混合培养液中37℃孵育30 min;对照组(20只):角膜植片预浸泡在0.1 mol·L-1磷酸盐缓冲液中37 ℃孵育30 min.裂隙灯观察TGF-β1对大鼠角膜植片存活时间、排斥反应指数的影响.术后第1周、第2周、第4周、第2个月对角膜植片行组织病理学检查,免疫组织化学方法检测角膜组织中IL-10的表达.结果 对照组角膜植片平均存活时间为(10.40±2.45)d,实验组为(18.70±1.51)d,比对照组显著延长,差异具有显著统计学意义(P＜0.01);术后第2周实验组角膜植片排斥反应指数(3.48±0.86)明显低于对照组(7.65±0.42),差异具有显著统计学意义(P＜0.01).IL-10在术后主要表达于角膜的上皮层与内皮层.术后各时期实验组IL-10的表达明显高于对照组,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 rAAV-TGF-β1能显著延长角膜植片存活时间,抑制大鼠高危角膜移植免疫排斥反应,其机制与提高角膜组织中IL-10的表达有关.重组腺相关病毒是眼科基因治疗的有效载体.
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高危角膜移植的围手术期治疗
目的探讨高危角膜移植患者围手术期的处理措施,以降低术后免疫排斥反应率.方法对680例有完整随访记录的穿透性角膜移植中的124例(137眼)高危角膜移植患者,分别在围手术期(术前、术中、术后早期)进行相应处理.结果经围手术期处理后,本组137眼高危患者穿透性角膜移植后的免疫排斥率为37%,植片透明率为80.1%.结论重视高危角膜移植围手术期的处理,是减少术后免疫排斥反应和提高植片透明率的重要措施.
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高危角膜移植
角膜病盲占眼科盲的1/3,这些病人大多数可通过角膜移植术得到复明.随着眼科设备和器械的不断完善,穿透性角膜移植术(penetrating keratoplasty,PKP)的成功率已达85%以上[1],但造成PKP术后失败的主要原因仍是排斥反应,特别是血管化角膜、大植片移植、植片偏中心以及结角膜化学伤等病人,术后因排斥反应致手术失败者高达60%以上[2].因此,近年国际眼科界把这部分病人称为高危角膜移植病人(high-risk keratoplasty patients).
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α-GalCer活化的自然杀伤T细胞对高危角膜移植后排斥反应的防治作用
背景 角膜移植排斥反应是导致角膜移植手术失败的主要原因,抑制角膜移植排斥反应的各种药物均有不良反应.研究发现自然杀伤T(NKT)细胞可致器官移植患者免疫耐受,但目前有关NKT细胞用于治疗高危角膜移植免疫反应的研究较少. 目的 探讨体外α-GalCer活化的NKT细胞在防治大鼠高危角膜移植免疫排斥反应中的作用. 方法 无菌条件下取Lewis大鼠脾脏淋巴细胞,加入质量浓度为100 mg/L的α-GalCer,在RPMI 1640培养基培养1周后,流式细胞仪分选出NKT细胞(密度为5×106个/ml).取10只Fisher 344大鼠为供体,20只Lewis大鼠为受体,受体角膜移植前1周角膜缝线诱导角膜新生血管(CNV).将受体大鼠按照随机数字表法随机分为NKT细胞组和生理盐水组,每组各10只.Lewis大鼠行穿透角膜移植.NKT细胞组在手术结束时球后注射0.1 ml NKT细胞液,生理盐水组注射相同体积的生理盐水.术后裂隙灯下观察记录角膜植片的反应情况并按照Holland的标准进行评分.术后第14天,两组各获取3只大鼠角膜植片行组织病理学检测,采用免疫组织化学法检测角膜植片中CD4+和CD8+T淋巴细胞的浸润情况.结果 生理盐水组角膜植片平均存活时间为(7.90±1.37)d,NKT细胞组为(14.70±1.49)d,差异有统计学意义(t=10.61,P=0.00).术后2周,生理盐水组角膜植片重度混浊水肿,大量炎性细胞浸润,新生血管长入植片,而NKT细胞组角膜植片仅轻度混浊、水肿,炎性细胞明显少于生理盐水组.免疫组织化学检测可见,生理盐水组角膜植片中大量CD4+和CD8+T淋巴细胞浸润,NKT细胞组中CD4+和CD8+T淋巴细胞明显减少.流式细胞仪检查结果表明,NKT细胞组大鼠脾脏中NKT细胞百分数为(5.67±0.25)％,明显高于生理盐水组的(1.21±0.19)％,差异有统计学意义(t=8.43,P=0.00).结论 α-GalCer活化的NKT细胞球后注射可以明显延长大鼠高危角膜移植植片的存活时间,为角膜移植排斥反应的防治提供了新的手段.
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TGF-β1基因在高危角膜移植术后对移植排斥反应的作用
目的 研究高危角膜移植术后,重组腺相关病毒(rAAV)携载的TGF-β1基因(rAAV-TGF-β1)在角膜中的表达及对免疫排斥反应的影响.方法 用碱烧伤的方法建立受体角膜新生血管(CNV)化模型.20只Wistar大鼠角膜为供体,40只SD大鼠为受体进行大鼠穿透角膜移植.治疗组术前将20只供体植片置于含rAAV-TGF-β1的DMEM/F12混合培养液中常温培养30 min,对照组术前将20只供体植片置于DMEM/F12培养液中常温培养30 min,术后裂隙灯下观察植片排斥反应及存活情况.免疫组织化学染色观察2组术后1、2、4周TGF-β1在角膜中的表达.Western blot检测2组术后1、2、4、8周TGF-β1的表达量.结果 治疗组角膜平均存活时间为(17.60±2.31)d,对照组为(9.27±1.50)d,治疗组角膜植片混浊及血管化程度明显低于对照组(P<0.01).免疫组织化学染色显示治疗组术后1周TGF-β1在角膜上皮呈弱阳性表达,术后2～4周角膜上皮及内皮细胞层呈阳性表达并高于对照组.对照组术后1～4周TGF-β1在角膜上皮及基底膜呈弱阳性表达.Western blot检测显示术后1周2组角膜TGF-β1含量差异无统计学意义(P>0.05),术后2、4、8周治疗组角膜TGF-β1的表达较对照组增高(P>0.05).结论 rAAV-TGF-β1能减轻高危角膜移植的排斥反应.
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1,25-二羟维生素D3对高危角膜移植急性排斥反应及角膜新生血管的影响
目的研究药物1,25-二羟基维生素D3(二羟维D3)在高危角膜移植模型中对免疫排斥反应及新生血管生长情况的影响,揭示1,25-二羟维D3作为免疫抑制剂在角膜移植中的治疗作用及机制.方法建立大鼠高危角膜移植模型,按不同浓度的1,25-二羟维D3(1×10-5和1×10-7mol/L)及环孢霉素A(CsA)分组,连续用药2周,观察移植物排斥情况并于术后4、7、14 d取材行原位杂交等实验,分析各组细胞因子:白介素1α(IL-1α)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、血管内皮生长因子(VEGF)mRNA水平的变化情况.结果在1,25-二羟维D3作用下,高危角膜移植物的存活时间明显延长;新生血管生长受抑制;合用CsA后效果更明显.原位杂交实验证实1,25-二羟维D3能显著抑制植片IL-1α、TNF-αmRNA表达(P＜0.01);对VEGF表达无直接影响.结论1,25-二羟维D3能有效地抑制新生血管生长及角膜移植急排期的免疫哌排斥反应,机制可能包括对前炎症因子(IL-1α、TNF-α)生成的抑制作用,而对VEGF无明显直接作用.
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基因治疗与角膜移植免疫耐受
角膜移植是组织或器官移植中成功率高的一种手术,是目前治疗角膜盲为有效的方法,但是术后免疫排斥反应仍是引起同种异体角膜移植尤其高危角膜移植手术失败的首要原因.随着近代分子生物学和免疫学技术的迅速发展,利用基因治疗技术将抑制免疫排斥反应的基因转入角膜防治移植免疫排斥反应成为很有希望的新手段[1].本文主要对近年来基因治疗诱导角膜移植免疫耐受的主要策略进行简要综述.
