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薯蓣皂苷元活性成分对心肌细胞损伤的保护作用及机制研究
目的 观察薯蓣皂苷元(MPD)活性成分对缺氧再复氧引起的心肌细胞损伤的保护作用,并研究其作用机制.方法 采用建立缺氧再复氧引起心肌细胞损伤的模型,将细胞分为正常组、对照组和MPD组,正常组不进行缺氧再复氧和药物干预,对照组进行缺氧再复氧无MPD干预,MPD组进行缺氧再复氧和MPD干预,观察乳酸脱氢酶(LDH)和心肌细胞膜ATP酶.另外对正常心肌细胞经MPD的处理后,检测钠钙交换器(NCX)的mRNA表达量.结果 与对照组比较,加入MPD(10μg/mL、50 μg/mL)处理后,细胞的损伤程度减轻.经缺氧再复氧后MPD组的钠钾ATP酶和钙镁ATP酶的活性显著高于对照组.与对照组比较,NCX的mRNA表达量经MPD处理后降低(P＜0.05).结论 MPD可能通过维持心肌细胞膜钠泵和钙泵功能,共同影响心肌细胞钙离子跨膜转运,维持细胞内低钙离子的环境.
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腺病毒介导的热休克蛋白70在神经元和胶质细胞中的抗缺氧研究
目的 探讨重组腺病毒介导的热休克蛋白70(HSP70)表达对神经元和胶质细胞缺氧/再复氧损伤的保护作用.方法 制备携带全长HSP70基因的重组腺病毒vAd-HSP70.感染体外培养的神经元和胶质细胞,检测靶细胞中外源性HSP70的表达.感染vAd-HSP70 24、48、72 h组和感染vAd-GFP对照组的细胞经缺氧/再复氧处理后,分别测定细胞活性、细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)活性及线粒体和胞质内细胞色素C含量.结果 感染vAd-HSP70的神经细胞可检测到外源性HSP70基因表达.经缺氧/再复氧处理,感染vAd-HSP70组细胞活性较感染vAd-GFP对照组明显增强(P均＜0.05);感染vAd-HSP70 24、48、72 h组细胞培养上清液中LDH活性[(1 480±121)、(1 023士106)、(1 132±197)U/L]均明显低于感染vAd-GFP对照组[(1 976±190)U/L],线粒体中细胞色素C含量(0.986±0.012、1.028±0.007、1.014±0.008)均明显高于感染vAd-GFP对照组(0.970±0.003),而胞质中的细胞色素C含量(0.987±0.008、0.960±0.005、0.964±0.003)则低于感染vAd-GFP对照组(1.011±0.005,P＜0.05或P＜0.01),其中以感染48 h为理想(P均＜0.01).结论 腺病毒介导的外源性HSP70表达可保护神经元和胶质细胞抵抗缺氧/再复氧损伤,具有明确的细胞保护作用.
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硫酸镁预处理对人脐静脉内皮细胞缺氧再复氧损伤的保护作用
目的 探讨高浓度镁离子对培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)损伤的保护作用.方法 对培养的HUVECs传代并分组:对照组常规培养;缺氧再复氧组缺氧1 h,再复氧1 h;镁离子干预组分别将细胞加入镁离子终浓度为2、4、6、8、10 mmol/L的培养液中进行培养,12 h后进行缺氧再复氧,观察三组细胞形态学变化,测定培养液乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)及内皮素(ET-1)的含量,并测定细胞内谷胱甘肽(GSH)含量并进行统计分析.结果 ①缺氧再复氧组细胞损伤严重,随镁浓度增加细胞形态结构趋于正常.②缺氧再复氧组培养液LDH、MDA及ET-1含量较对照组明显升高(P＜0.001﹚,镁离子组较缺氧复氧组降低(P＜0.05);缺氧复氧组NO及细胞GSH含量较对照组降低[(32.50±8.12)vs(96.46±8.77),P＜0.001;(6.37±1.03)vs(16.01±2.41),P＜0.001],镁离子组较缺氧复氧组升高(P＜0.05).结论 高浓度镁离子能预防缺氧复氧损伤引起细胞结构改变,保护细胞膜和内皮功能.
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清开灵对小胶质细胞BV2缺氧再复氧损伤gp91phox表达的影响
目的:建立小胶质细胞缺氧再复氧损伤模型,观察产生ROS的NADPH氧化酶的重要功能亚基gp91phox的表达变化及清开灵的干预作用,丰富清开灵基于解毒通络法以祛除内毒恢复脉络的作用内涵.方法:体外培养小鼠胶质细胞BV2,细胞分为正常组、模型组和清开灵高、中、低剂量组,在1％ O2三气培养箱中缺氧12小时再复氧12小时模拟缺血再灌注损伤,正常对照组在培养箱中培养24小时,实时荧光定量PCR法检测gp91phoxmRNA的转录水平,Western blot法检测gp91phox蛋白表达.结果:缺氧再复氧损伤后,模型组gp91phox基因转录水平和蛋白表达提高(P＜0.05);与模型组比较,清开灵低、中、高剂量组都有明显改善作用,其中低剂量(0.0625％)对基因转录降低更明显,高剂量组(0.25％)对gp91phox蛋白表达的抑制更显著,具有统计学意义(P＜0.05).结论:清开灵可通过降低缺氧再复氧后小胶质细胞gp91phox的表达,减少活性氧的产生而抑制脑缺血损伤氧化应激反应.
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镁对血管内皮细胞缺氧再复氧损伤的保护作用
目的探讨镁离子对人脐静脉血管内皮细胞缺氧再复氧损伤的保护作用及其可能机制.方法取人脐静脉分离内皮细胞培养传代,至第三代分为对照组、缺氧复氧组和硫酸镁组.用缺氧再复氧诱导血管内皮细胞损伤.镁离子组浓度分别为( 2、 4、 8、 11、 16 mmol/L).对照组常规培养,硫酸镁组加入不同浓度的镁离子预处理后缺氧再复氧.分别测定细胞培养液中一氧化氮( NO),丙二醛( MDA)及内皮素( ET- 1)的含量.结果缺氧复氧组 NO含量较对照组明显降低( vs , P<0.01), MDA与 ET- 1含量显著上升( vs , P<0.01),硫酸镁组 NO含量较缺氧复氧组明显升高( vs ,P<0.05), MDA和 ET- 1含量显著降低( vs ,P<0.05),且一定范围内呈剂量依赖关系.结论缺氧再复氧能造成 VECs损伤,镁离子能保护缺氧再复氧造成的 VECs损伤,其机制可能与抗脂质过氧化、稳定细胞膜及促进自由基清除有关.
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尼可地尔对培养乳鼠心肌细胞的保护实验
目的:通过建立心肌细胞缺氧再复氧模型,观察尼可地尔对其保护作用,揭示保护机制. 方法: 培养心肌细胞分4组,Ⅰ:对照K-H液;Ⅱ:St. ThomasⅡ液;Ⅲ:1.6 mmol*L-1尼可地尔液;Ⅳ:1.6 mmol*L-1尼可地尔+20 mmol*L-1牛磺酸. 分别于处理前后台盼蓝染色测定心肌细胞存活率、原子光谱法测定钙含量、自动生化仪测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量、比色法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量. 结果: 处理前各组心肌细胞指标无差异,Ⅰ组细胞存活率缺氧后明显下降,复氧后进一步下降,钙含量增加,LDH释放量增加,SOD活性下降,MDA含量升高. Ⅱ和Ⅲ组各指标在复氧后较Ⅰ组有明显改善,Ⅲ组保护作用更明显,与Ⅱ组比较具有统计学差异. Ⅳ组可进一步增加尼可地尔的保护效果. 结论: 超极化停跳液心肌保护效果明显,临床应用前景好. 牛磺酸可进一步增加超极化停搏的保护作用.
