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血清碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及热休克蛋白47(HSP47)水平与房颤发病的相关性研究
目的:通过测定房颤患者血清bFGF及HSP47水平与房颤的相关性研究,探讨血清bFGF及HSP47水平在早期房颤患者中的作用及意义.方法:用酶联免疫法检测40例房颤患者的血清bFGF及HSP47的含量,其中持续性房颤及阵发性房颤各20例,另外选取20例窦性心律的健康者作为对照组,结果采用SPSS17.0软件进行统计学处理.结果:持续房颤组及阵发房颤组的血清bFGF及SP47水平明显高于健康对照组(69.78±23.52 ng/ml vs 28.05 ±2.41 ng/ml vs 15.87±4.25 ng/ml,150.34±29.10 ng/ml vs 109.23±8.18 ng/ml vs 64.42±18.65 ng/ml,P＜0.01),且持续性房颤患者体内的血清bFGF及HSP47水平明显高于阵发性房颤组(69.78±23.52 vs 28.05±2.41,150.34±29.10 vs 109.23±B.18,P＜0.01).结论:房颤患者血清bFGF及HSP47水平上调且明显高于健康对照组,差异具有统计学意义(P＜ 0.01),bFGF及HSP47在房颤的发生和维持过程中可能发挥重要作用.
关键词： 心房颤动 碱性成纤维细胞生长因子 热休克蛋白47 酶联免疫 -
热休克蛋白47参与TGF-β1促人胚肺细胞胶原合成
目的 观察热休克蛋白47(HSP47)对人胚肺成纤维细胞(HELF)胶原合成及间质细胞标志物的影响,探讨它与肺纤维化的关系.方法 用TGF-β1诱导HELF表达HSP47,用5 ng/mL TGF-β1作用不同时间和用不同浓度TGF-β1作用于HELF 48 h;WST-8法检测细胞增殖;免疫荧光法检测HSP47的表达;Western blot检测HsP47、Ⅰ型胶原(Collage 1)及间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)的表达.结果 正常HELF表达少量HSP47,随着HELF在TGF-β1作用时间的延长和剂量逐渐增加,HSP47(5 ng/mL TGF-β1作用48 h,7.081±0.265)、Collage Ⅰ(5 ng/mL TGF-β1作用48 h,2.494±0.139)、α-SMA和Vimentin的表达均同步增强(P<0.05).结论 HSP47在TGF-β1的作用下,促进人胚肺成纤维细胞胶原蛋白的合成,作为胶原特异性分子伴侣在肺纤维化的发生发展过程中发挥至关重要的作用.
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慢性缺氧大鼠心肌HSP47 mRNA的表达及其与PⅠCP和PⅢNP含量的相关性研究
目的 探讨慢性缺氧大鼠心肌HSP47 mRNA表达与血清Ⅰ型前胶原C端原肽(PⅠCP)、Ⅲ型前胶原N端原肽(PⅢNP)含量及心肌纤维化的相关性.方法 模拟缺氧环境,建立慢性缺氧大鼠模型.将40只SD大鼠随机分为5组,每组8只.对照组不给于缺氧处理(A组),各慢性缺氧组大鼠分别缺氧7 d(B组)、14 d(C组)、21 d(D组)、28 d(E组).采用实时荧光定量PCR(q-PCR)检测心肌中热休克蛋白(HSP47) mRNA的表达量;运用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测血清及心肌中PⅠCP、PⅢNP的浓度;采用HE和MASSON染色法对对照组和慢性缺氧组大鼠进行组织切片染色.结果 与对照组比较,模型组的HSP47 mRNA表达量增多(P<0.01),血清和心肌的PⅠCP、PⅢNP浓度升高(P<0.01);心肌HSP47 mRNA的表达与血清和心肌的PⅠCP、PⅢNP含量呈正相关(P<0.05);HE和MASSON染色显示慢性缺氧组心肌组织广泛纤维化.结论 在慢性缺氧条件下HSP47 mRNA的表达量与PⅠCP、PⅢNP浓度正相关,提示HSP47作为心肌胶原分子伴侣在慢性缺氧所致心肌纤维化中起一定作用.
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心房颤动患者热休克蛋白47的表达及其与心肌纤维化的相关性研究
目的 探讨胶原特异性分子伴侣--热休克蛋白47( HSP47)在心房颤动(房颤)的发生和维持中的作用.方法 60例行心脏手术的患者分为3组,其中窦性心律组20例,阵发性房颤组20例,持续性房颤组20例,术中获取右心耳心房组织,采用实时荧光定量(FQ-PCR)方法检测HSP47的mRNA表达；同时采用ELISA方法检测上述60例患者血液标本血清中PⅠCP,PⅢNP的浓度.应用超声心动图测定左心房内径,并研究三者的相互关系.结果 ①与窦性心律组比较,HSP47mRNA水平在阵发性房颤组,持续性房颤组心房组织中明显增加( P＜0.05,P＜0.05),且持续性房颤组较阵发性房颤组亦明显增加(P＜0.05).②与窦性心律组相比,房颤患者血清PⅠCP、PⅢNP含量明显增高、左心房明显扩大(P＜0.05),且持续性房颤组PⅠCP、PⅢNP含量及左心房内径高于阵发性房颤组(P＜0.05)；且血清中心肌纤维化指标PⅠCP、PⅢNP含量与左心房内径间呈显著的正相关关系.③经相关性分析得出房颤患者心肌组织中HSP47mRNA水平与血清中PⅠCP、PⅢNP含量呈独立的正相关；与左心房内径亦呈正相关关系.(r=0.831,P＜0.01；r=0.842,P＜0.01；r=0.780,P＜0.01).结论 ①房颤患者存在心肌纤维化及左心房扩大,两者呈正相关关系.提示房颤患者存在左心房结构重构,心肌纤维化在左心房结构重构中起重要作用.②心房组织中HSP47基因表达显著增加,并与房颤的严重程度密切相关,提示可能与房颤的发生和维持有关.③心房组织中HSP47的表达与心肌纤维化指标及左心房内径呈正相关,提示HSP47的表达增加可能是影响心肌纤维化的分子机制之一,与房颤患者心房结构重构密切相关.
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RNA干扰技术阻抑热休克蛋白对瘢痕疙瘩生成的影响
目的 利用RNA干扰(RNAi)技术,通过热休克蛋白47重组质粒(HSP47 siRNA)和脂质体的混合液,对瘢痕疙瘩裸鼠动物模型的体内干预后,分析HSP47基因在瘢痕疙瘩生成中的作用.方法 构建裸鼠瘢痕疙瘩动物模型,于第16天腹腔麻醉后在实验组瘢痕疙瘩内注射质粒、脂质体混合液0.25 ml,对照组裸鼠腹腔注射磷酸缓冲液(PBS)0.25 ml,原笼饲养,7 d回收标本,分别做mRNA水平检测,胶原蛋白水平检测以及免疫组织化学检测.结果 实验组 HSP47 mRNA表达明显降低,且实验组总胶原含量,Ⅰ型胶原蛋白 mRNA表达与对照组比较也明显降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 利用RNAi技术,通过过HSP47 siRNA表达载体特异性沉默瘢痕疙瘩中HSP47基因表达后,瘢痕疙瘩中胶原蛋白的合成和分泌均能得到明显抑制,表明HSP47基因具有促进瘢痕疙瘩生成作用,为抑制瘢痕疙瘩提供新的靶点.
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氨基胍在实验大鼠肺纤维化中的作用及机制初探
目的 初步探讨氨基胍(aminoguanidine,AG)在博莱霉素(bleomycin,BLM)诱导的大鼠肺纤维化模型中的作用及其机制.方法 实验第1天将48只SD大鼠随机分为8组:正常对照组、BLM模型组、AG干预组及AG对照组(包括低、中、高3个剂量组),每组6只,经气道滴入BLM/生理盐水后,于实验第2天开始按低、中、高3个剂量给予AG,2周后处死所有大鼠,收集标本.利用Masson染色,观察肺组织纤维化的情况,并进行纤维化评分;利用碱性水解法测定肺组织中羟脯氨酸的含量;利用RT-PCR的方法测定肺组织中热休克蛋白47的基因表达.结果 AG干预组与BLM模型组相比较,前者的纤维化程度均有所减轻,且呈现出剂量依赖性,尤其在中、高剂量组,纤维化评分、羟脯氨酸含量、热休克蛋白47的基因表达出现明显下降(P值均＜0.01).AG对照组与正常对照组比较差异无统计学意义.结论 AG能有效降低BLM诱导的肺纤维化程度,其机制可能与下调热休克蛋白47等纤维化因子的表达有关.
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SD 大鼠抗青光眼滤过术后热休克蛋白47表达的动态观察
目的：探讨 SD 大鼠采用抗青光眼滤过术处理后热休克蛋白47（heat shock protein 47，HSP47）在滤过泡中的表达变化及其意义。方法选取健康成年 SD 大鼠24只，雌雄各半，采用随机数字表法分为2 d 组、4 d 组、6 d组、10 d 组、14 d 组、正常组6组（每组4只），2 d、4 d、6 d、10 d、14 d 组大鼠均行右眼抗青光眼滤过术处理，术后采用裂隙灯观察各组大鼠滤过泡及眼前节情况，分别于术后第2、4、6、10、14 d 处死相应组大鼠，检测滤过泡中 HSP47及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、mRNA 的表达情况。结果2 d 组大鼠 HSP47及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、mRNA 在滤过泡中的表达略微上升，但与正常组比较差异无统计学意义（P ﹥0.05），4、6、10、14 d 组大鼠滤过泡中的 HSP47及Ⅲ型胶原蛋白、mRNA表达水平较正常组显著升高（P ﹤0.05）；6、10、14 d 组大鼠滤过泡中的Ⅰ型胶原蛋白、mRNA 表达水平较正常组显著升高（P ﹤0.05）。结论 SD 大鼠抗青光眼术后 HSP47及 mRNA 的表达水平变化基本与Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白、mRNA 表达变化一致，表明 HSP47在大鼠眼滤过泡瘢痕形成过程中可能起重要作用。
关键词： 抗青光眼滤过术 热休克蛋白47 滤过泡 大鼠 Sprague-Dawley -
腹膜透析流出液中腹膜间皮细胞热休克蛋白47的表达及意义
目的:探讨腹膜透析流出液中培养的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)热休克蛋白47(heat shock protein,HSP47)的表达,并分析其与腹膜间皮细胞转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的关系.方法:取桂林医学院附属医院门诊随诊的连续非卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)患者,按腹透时间分为两组:(1)新置管组(PD≤30 d),(2)腹透1年以上组(PD≥1年),取其夜间留腹腹透液分离培养的腹膜间皮细胞,采用Western-blot方法检测HSP47、E-cadherin、α-SMA的蛋白表达,分析HSP47表达与E-cadherin、α-SMA表达的相关性.结果:随着腹膜透析时间的延长,腹膜间皮细胞由圆形或椭圆形的上皮细胞形态逐渐变成梭形的纤维样细胞形态,与新置管组比较,PD 1年以上组腹透液腹膜间皮细胞HSP47的表达和α-SMA均同步增强,而PD一年以上组E-cadherin蛋白明显降低.两组细胞HSP47表达与α-SMA表达呈正相关(P<0.05),HSP47表达与E-cadherin表达呈负相关(P<0.05).结论:HSP47随着腹膜透析时间的延长表达上调,可能参与腹膜间皮细胞EMT而导致腹膜纤维化.
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热休克蛋白47在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用
目的:研究热休克蛋白47在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化(EMT)中的作用,探讨以HSP47为靶点防治肾脏间质纤维化的策略.方法:采用UUO大鼠模型,雄性SD大鼠72只随机分为假手术组(Sham组)、UUO模型组(UUO组)、UUO模型+超声联合脂质微泡+HSP47反义寡核苷酸组(antisenseODNs组)以及UUO模型+超声联合脂质微泡+ HSP47正义寡核苷酸组(senseODNs组),每组18只,于术后14 d处死各组大鼠.HE和Masson染色法观察各组大鼠肾脏病理改变,Western blotting及Real-time PCR方法检测HSP47、波形蛋白(Vimentin)、紧密连接蛋白(Zona occludens-1,ZO-1)及Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的表达.结果:HE和Masson染色显示,与Sham组相比,UUO组大鼠肾间质宽度明显增加,肾小管扩张及上皮细胞变性,肾小管损伤程度、间质纤维化程度逐渐增加(P＜0.05).与UUO组相比,antisenseODNs组病变程度较UUO组减轻(P＜0.05),senseODNs组无明显差别(P＞0.05).Western blotting及Real-time PCR显示,与Sham组相比,UUO组HSP47蛋白及mRNA表达明显升高(P＜0.05),同时Vimentin、Col-Ⅰ蛋白及mRNA表达上调,而ZO-1蛋白及mRNA表达下调(P＜0.05);与UUO组相比,antisenseODNs组HSP47蛋白及mRNA表达明显降低(P＜0.05),同时Vimentin及Col-Ⅰ蛋白及mRNA表达下调,而ZO-1蛋白及mRNA表达上调(P＜0.05),纤维化程度明显减轻;senseODNs组HSP47、Vimentin、Col-Ⅰ、ZO-1蛋白及mRNA表达无明显变化(P＞0.05).结论:UUO模型大鼠肾小管上皮细胞EMT过程中HSP47表达上调,抑制HSP47表达能部分逆转肾小管上皮细胞EMT.
关键词： 肾间质纤维化 热休克蛋白47 上皮细胞间充质转分化 超声微泡转染 -
黄芪注射液改善肾间质纤维化的作用机制研究
目的:观察黄芪注射液对肾间质纤维化的改善作用并探讨其机制.方法:以单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)大鼠模型为研究对象.将36只SD大鼠随机分为对照组、UUO模型组和黄芪注射液治疗组.治疗组每日给予黄芪注射液(5 ml·kg-1·d-1)腹腔注射,术前1天始至术后第9天止.术后第10天取术侧肾脏组织.HE、PAS和苦味酸-天狼星红染色,观察肾小管间质病理改变、肾皮质相对间质容积和相对胶原含量的变化.免疫组织化学方法检测转化生长因子-β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和Ⅰ型胶原在肾间质中的表达.免疫印迹方法检测热休克蛋白47(heat shock protein 47,HSP47)在肾脏中的表达.结果:UUO大鼠模型组和治疗组均出现明显的肾间质纤维化病理改变,但治疗组病变程度相对较轻.肾皮质相对间质容积和相对胶原含量于模型组及治疗组明显高于对照组(P＜0.01),但治疗组明显低于模型组(P＜0.01).免疫组化染色显示:TGF-β1、α-SMA和Ⅰ型胶原表达于模型组和治疗组均明显高于对照组(P＜0.05),但治疗组较模型组有明显减少(P＜0.05).免疫印迹方法显示:HSP47蛋白表达于模型组和治疗组明显高于对照组(P＜0.05),但治疗组较模型组有明显减少(P＜0.05).结论:黄芪注射液对大鼠肾间质纤维化具有明显的改善作用,这种作用部分是通过抑制TGF-β1表达,阻止肾小管上皮细胞转分化,减少胶原合成实现的.
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大鼠急性脊髓损伤后热休克蛋白47基因mRNA的转录水平
目的 探讨大鼠急性脊髓损伤(Spinal cord injury,SCI)后热休克蛋白47(HSP47)基因mRNA的转录水平.方法 将12只Wistar大鼠随机分为1周SCI组、3周SCI组、5周SCI组和8周SCI组,复制钳夹型SCI模型,另设正常对照组和假手术组.分别在SCI后3 d及每周进行BBB评分,并在1周、3周、5周和8周采用半定量RT-PCR法检测各组大鼠脊髓组织中HSP47基因mRNA的转录水平.结果 SCI后,BBB评分低,随着时间的延长,评分逐渐上升;HSP47基因mRNA的转录水平明显升高,且在第8周升高更为明显.结论 Wistar大鼠SCI后,HSP47基因mRNA的转录水平升高,提示其很可能参与了SCI的病理改变过程.
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热休克蛋白47和热休克蛋白60在小鼠胚胎器官形成过程中的表达
目的:研究小鼠胚胎器官形成过程中热休克蛋白47(Hsp47)和热休克蛋白60(Hsp60)的表达情况.方法:于GD11～GD18,取得小鼠胚胎脑、眼、心、肺、胃、肝、四肢,于GD13～GD18取得肾,利用RT-PCR方法半定量检测Hsp47和Hsp60在各器官的表达丰度.结果:Hsp47在GD11～GD12和GD18的脑、GD11～GD12和GD17～GD18的眼、GD11～GD12和GD16～GD18的肺、GD11～GD18的肝脏不表达,在其余时间和其余器官均有表达;Hsp60在GD11～GD18时段胚胎的脑、眼、心、肺、胃、肝、肾(GD13～GD18)、四肢中均有表达.结论:Hsp47和Hsp60在小鼠胚胎器官形成过程中有不同的表达丰度,其表达模式也不一致;Hsp47在小鼠胚胎发育过程中可能有重要功能,Hsp60则具有广泛表达的特点.
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热休克蛋白47(HSP47)-短发夹RNA的构建及其细胞水平对HSP47表达的影响
目的 针对肝纤维化发病关键基因热休克蛋白47 (HSP47)基因构建HSP47-shRNA,初步验证其在NIH/3T3细胞系干预HSP47基因的表达,影响HSP47 mRNA及蛋白水平表达,并观察该细胞功能学变化. 方法 设计HSP47-shRNA模板,并将其分别设计于U6启动子的下游引物,将U6启动子及其下游HSP47-shRNA的模板双链DNA连接入载体,构建HSP47-pGCsi-U6-shRNA重组质粒(HSP47-1-pGC si-U6-shRNA、HSP47-2-pGCsi-U6-shRNA和HSP47-3-pGCsi-U6-shRNA).以非相关干扰质粒作为对照,通过脂质体介导转染HSP47-shRNA至小鼠胚胎成纤维细胞(NIH/3T3)中,分别于12、24、48和72 h在倒置荧光显微镜下观察细胞转染效率和荧光表达强度;同时于转染后0、24和48 h收集细胞,采用RT-PCR和蛋白质印迹(Western blotting)分析HSP47 mRNA和蛋白表达情况;并观察干预后该细胞分泌胶原功能和小鼠转化生长因子(TGF-β1)表达的变化. 结果 成功构建HSP47-shRNA载体,通过脂质体介导转染入NIH/3T3细胞,各干扰质粒转染效率均约为60.0％,各干扰质粒转染效率间差异无统计学意义(P＞0.05).转染12h,可见少量绿色荧光细胞,随转染时间的延长,细胞荧光表达量逐渐增加,各干扰质粒于转染72h荧光表达强.shRNA干扰显著抑制HSP47蛋白的表达,以转染HSP47-1-shRNA 24h后对蛋白表达抑制效果佳,对HSP47 mRNA的相对沉默效率为(25.83±1.79)％,与空白组及非相关对照组比较,差异有统计学意义(P＜0.05).HSP47-1-shRNA转染24h,Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA相对表达量分别下调为(56.52±1.64)％和(53.48±2.54)％,转染48 h分别下调为(54.17±2.63)％和(50.21±2.34)％,明显低于空白组和非相关对照组(P＜0.05),但各实验组间差异无统计学意义(P＞0.05).各组HSP47-shRNA干扰质粒对TGF-β1 mRNA的抑制效率以转染24h效果佳,相对表达分别为(63.23±2.18)％、(64.53±3.17)％和(75.19±4.20)％,均低于空白组和非相关对照组(P＜0.01),但干预组间对TGF-β1的抑制率差异无统计学意义(P＞0.05).各HSP47-shRNA干扰质粒组细胞上清中TGF-β1的抑制率以转染24h为佳,分别为(51.79±3.12)％、(66.67±2.13)％和(69.61±3.65)％,与空白组相比,HSP47-1-shRNA组与HSP47-2-shRNA组对TGF-β1均有显著抑制作用,且以HSP47-1-shRNA组抑制效率更佳(P＜0.05),HSP47-3-shRNA组与空白对照组间差异则无统计学意义(P＞0.05). 结论 构建了HSP47-shRNA干扰质粒,初步证实其对HSP47的表达干预有效,并引起NIH/3T3细胞功能学的变化.
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大鼠热休克蛋白47真核表达载体的体外构建
目的:体外构建大鼠热休克蛋白47(47 kDa heat shock protein,HSP47)的荧光真核表达载体,并检测其在鼠胚胎成纤维细胞NIH/3T3中的表达.方法:应用RT-PCR方法从大鼠肝脏中分离、扩增目的片断,双酶切定向克隆到真核表达载体pTracer-CMV中,构成重组质粒pTracer-CMV-HSP47,测序验证.通过脂质体介导质粒瞬时转染NIH/3T3细胞,Western b1otting和免疫细胞化学检测HSP47及Ⅰ型胶原蛋白(collagen Ⅰ)的表达变化.结果:通过RT-PCR获得1.3kb的cDNA片断,测序发现除个别碱基差异外,其余cDNA序列与基因库(Genebank)中序列一致,且编码的氨基酸序列完全一致.转染后经Western blotting和免疫细胞化学检测证实HSP47和collagen Ⅰ表达明显增强.结论:本研究成功构建了大鼠HSP47荧光真核表达载体pTracer-CMV-HSP47,并能在NIH/3T3细胞中表达,同时证实HSP47能促进collagen Ⅰ的表达.
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热休克蛋白47在糖尿病大鼠皮肤创口愈合过程中的表达
目的:使用糖尿病大鼠模型探讨热休克蛋白47(47kDa heat shock protein,HSP47)在糖尿病大鼠皮肤创口愈合过程中的表达水平.方法:在距正常大鼠和糖尿病大鼠头部1 cm的背部做一直径1 cm的圆形全层皮肤创口,糖尿病大鼠分为不注射组、注射空质粒组和注射重组质粒组,在创口愈合的第3、5、7天分别取对照组和实验组大鼠的创周皮肤,应用免疫组织化学和Western免疫印记法(Western blotting)检测HSP47在各组大鼠皮肤创口愈合过程中的表达水平.结果:正常大鼠皮肤创周组织中HSP47的表达,在愈合过程中呈明显增高的趋势.同正常大鼠相比,糖尿病大鼠皮肤创口愈合缓慢,皮肤创口组织中HSP47的表达明显减少.注射重组质粒pTracer-CMV-HSP47的糖尿病大鼠皮肤创周组织中HSP47的表达增强.结论:HSP47在糖尿病大鼠皮肤创口组织中的低表达与糖尿病大鼠皮肤创口愈合缓慢密切相关.通过体外构建HSP47的重组质粒再注入糖尿病大鼠皮肤创周组织中的方法,可以增强HSP47在体内的表达.
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siRNA对鼠成纤维细胞株中HSP47表达的抑制作用
目的:构建小鼠热休克蛋白47(47 kDa heat shock protein,HSP47)基因的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)表达载体,及HSP47第一外显子克隆表达载体,观察其在小鼠成纤维细胞(NIH3T3细胞株)中对HSP47基因表达的抑制作用.方法:针对小鼠HSP47的mRNA序列,在368、718位点分别设计两对21nt的,编码HSP47siRNA基因片断的寡核苷酸,退火成双链后将其连接到pSilencer1.0质粒的U6启动子下游,构建pSilencer-HSP47siRNA重组质粒;同时构建HSP47第一外显子重组质粒.经酶切、测序鉴定后,用脂质体介导的基因转染方法,转入MH3T3细胞,用半定量RT-PCR法检测HSP47表达水平的变化.结果:经酶切、测序鉴定,成功构建了siRNA真核表达载体及靶基因克隆表达载体.经脂质体转染NIH3T3细胞后,RT-PCR显示NIH3T3细胞中HSP47基因的mRNA表达水平明显降低,所构建的HSP47-siRNA基因的真核表达载体,成功地抑制了目的基因的表达.结论:构建的小鼠HSP47基因的RNA干扰真核表达载体pSilencer-HSP47siRNA,在NIH3T3细胞中有效地发挥了对HSP47基因表达的干涉作用,从而提示HSP47特异的siRNA具有抑制皮肤瘢痕形成的潜力.
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转录后水平的基因沉默技术在HSP47中的应用
热休克蛋白47(47 kDa heat shock protein,HSP47)是位于内质网内一种应激蛋白,它能与胶原特异性结合,在哺乳动物细胞内参与原胶原的折叠、装配、修饰、转运等过程.除了应激诱导之外,在正常情况下HSP47的表达通常与各种细胞组织中的胶原相关.HSP47先在内质网内与前胶原暂时结合,到达高尔基体后与胶原分离.因此HSP47作为胶原特异性的分子伴侣可能具有如下功能:防止原胶原链聚合,影响原胶原的修饰,抑制胞内原胶原的降解,参与应激状态下调控机制,以及影响原胶原从内质网到高尔基体的分泌过程等[1].近年来,随着研究人员对HSP47功能认识的深入和基因沉默技术的日趋成熟,已经有学者利用基因沉默技术来研究HSP47的功能,通过降低或抑制HSP47的基因表达,观察相关的组织器官病理学改变及可能具有的潜在临床价值.本文主要就近年来国内外对基因沉默技术及其在HSP47功能研究中的应用进展做一概述.
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胎膜早破与SERPINH1基因多态性的相关性
目的 探讨SERPINH1基因启动子区-656位点的单核苷酸多态性与胎膜早破的相关性.方法 选择2010年1月-2012年10月在上海市第八人民医院明确诊断为早产胎膜早破(PPROM)患者56例(PPROM组,孕期＜37周)、足月胎膜早破(TPROM)患者74例(TPROM组)、自然分娩的早产产妇67名(自然早产组,孕期＜37周,未发生胎膜早破)和足月自然分娩的产妇134名(对照组).抽取各组产妇外周血提取DNA,以聚合酶链反应扩增带有目的单核苷酸多态性的基因片段,并对产物进行测序.采用Taqman-MGB技术检测各组中SERPINH1基因-656位点单核苷酸多态性分布-656T和-656C基因型频率,采用相对荧光素酶活性测定检测热休克蛋白47(HSP47)mRNA在各组胎膜组织中的表达,采用Western印迹法检测HSP47蛋白在各组胎膜组织中表达,采用苏木精-伊红染色观察各组胎膜病理学变化情况.结果 自然早产组、PPROM组和TPROM组中-656T基因型频率均显著高于对照组(P值均＜0.05),而-656C基因型频率均显著低于对照组(P值均＜0.05);HSP47 mRNA、HSP47蛋白的表达水平均显著低于对照组(P值分别＜0.05、0.01).与对照组比较,自然早产组、PTPROM组和PPROM组的胎膜结构均发生了明显的改变,具体表现为胎膜连接层变宽,羊膜层纤维蛋白减少,部分滋养细胞发生凋亡,以及核碎裂等.结论 SERPINH1基因-656位点的单核苷酸多态性与TPROM的发生有关.
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热休克蛋白47在大鼠放射线肾小管间质损伤中的作用
目的:使用放射线肾病动物模型,研究HSP47在放射线肾小管间质损伤中的作用.方法:雄性Wistar大鼠分组如下:对照组(n=12);照射组(n=60),右肾切除后,分别给予左肾7、15、25Gy单一剂量的放射线照射.对各组大鼠进行9个月随访.结果:照射组动物早期发生肾功能不全和高血压,并同时产生炎症细胞浸润及肾间质纤维化.同对照组比较,受放射线照射的肾组织内可见HSP47表达增加.双重免疫染色表明,具有HSP47表达的细胞包括平滑肌肌动蛋白阳性的肌纤维母细胞(myofibroblast)和波形蛋白(vimentin)阳性的小管上皮细胞.而且,HSP47表达增加与肾间质内胶原沉积密切相关.结论:过度表达的HSP47通过表型变化的小管间质细胞在胶原装配、合成过程中起作用,并对放射线肾病小管间质纤维化的形成起着关键性作用.
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硬皮病皮损中热休克蛋白47、碱性成纤维细胞生长因子及Ⅰ型胶原蛋白的检测及意义
目的:探讨热休克蛋白(HSP)47、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)及Ⅰ型胶原(COL-1)在硬皮病皮损中的表达及意义,分析三者在硬皮病发病机制中的作用及相互之间的关系.方法:采用免疫组化法检测早期硬皮病组(21例)、晚期硬皮病组(21例)及正常对照组(10例)皮肤石蜡包埋组织中HSP47 、bFGF及COL-1的原位表达情况.结果:HSP47 、bFGF及COL-1均弥漫表达于正常皮肤和硬皮病皮损的细胞质中.HSP47在早期硬皮病组和晚期硬皮病组中的表达均高于正常对照组(P＜0.01),但三者分别在早、晚期硬皮病组中的表达比较,差异无统计学意义(P＞0.05).硬皮病皮损中HSP47与COL-1的表达呈正相关(r=0.579,P=0.000);bFGF与COL-1的表达呈正相关(r=0.379,P=0.000);HSP47与bFGF的表达也呈正相关(r=0.493,P=0.000).结论:HSP47、bFGF及COL-1在早、晚期硬皮病皮损中表达均明显上调,HSP47、bFGF及COL-1可能参与硬皮病的病理纤维化进程.
关键词： 硬皮病 热休克蛋白47 碱性成纤维细胞生长因子 Ⅰ型胶原
