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腹膜透析流出液中腹膜间皮细胞热休克蛋白47的表达及意义
目的:探讨腹膜透析流出液中培养的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)热休克蛋白47(heat shock protein,HSP47)的表达,并分析其与腹膜间皮细胞转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的关系.方法:取桂林医学院附属医院门诊随诊的连续非卧床腹膜透析(continuous ambulatory peritoneal dialysis,CAPD)患者,按腹透时间分为两组:(1)新置管组(PD≤30 d),(2)腹透1年以上组(PD≥1年),取其夜间留腹腹透液分离培养的腹膜间皮细胞,采用Western-blot方法检测HSP47、E-cadherin、α-SMA的蛋白表达,分析HSP47表达与E-cadherin、α-SMA表达的相关性.结果:随着腹膜透析时间的延长,腹膜间皮细胞由圆形或椭圆形的上皮细胞形态逐渐变成梭形的纤维样细胞形态,与新置管组比较,PD 1年以上组腹透液腹膜间皮细胞HSP47的表达和α-SMA均同步增强,而PD一年以上组E-cadherin蛋白明显降低.两组细胞HSP47表达与α-SMA表达呈正相关(P<0.05),HSP47表达与E-cadherin表达呈负相关(P<0.05).结论:HSP47随着腹膜透析时间的延长表达上调,可能参与腹膜间皮细胞EMT而导致腹膜纤维化.
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扶肾方对大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响及机制探讨
目的:观察扶肾方对腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响及可能机制.方法:采用SD大鼠切除5/6肾脏+1.5％百特腹透液的方法复制大鼠腹膜纤维化模型.扶肾方干预6周后, 检测血清学指标肌酐和尿素氮的含量;HE观察腹膜形态的变化;RT-PCR法检测各组腹膜间充质标志物Vimentin和α-SMA的表达;ELASA法检测TGF-βRI和TGF-βRII含量的变化.结果:扶肾方干预后, 各组血清肌酐及尿素氮均呈现下降趋势, 尤其以高剂量组为明显 (P＜0.05);扶肾方组腹膜间皮细胞变性、脱落, 炎症细胞浸润以及血管新生现象明显减少;RT-PCR检测结果显示, 与模型组相比, Vimentin各组表达均有所下降, 但以中剂量组下调为明显 (P＜0.05);腹膜纤维化相关因子TGF-βRI和TGF-βRII检测结果中, TGF-βRI的表达呈上升趋势, 同模型组相比有显著性差异 (P＜0.01, P＜0.05), TGF-βRII的表达则呈下降趋势, 差异有统计学意义 (P＜0.05) .结论:扶肾方能够有效抑制腹膜间皮细胞转分化, 改善腹膜纤维化, 可能与调节TGF-βRI和TGF-βRII的表达有关.
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硫化氢对高糖腹膜透析液诱导大鼠腹膜结构和功能损伤的影响
目的:观察硫化氢(H2S)对高糖腹膜透析液诱导大鼠腹膜结构和功能损伤的影响. 方法:SD大鼠随机分为四组(对照组、单独H2S组、模型组及治疗组).第28天行腹膜平衡试验;取壁层腹膜组织观察腹膜结构变化,检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、胶原蛋白Ⅲ(Col-Ⅲ)和转化生长因子β1(TGF-β1)表达情况.检测大鼠腹膜间皮细胞单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素6(IL-6)、细胞间黏附分子1(ICAM-1)、α-SMA、E-钙黏素(E-cadherin)和TGF-β1 mRNA表达情况. 结果:与对照组相比,模型组腹膜增厚伴血管增生、炎症细胞浸润增加,且间皮下α-SMA、Col-Ⅲ及TGF-β1表达显著增加(P＜0.05);与模型组相比,治疗组腹膜形态明显改善,α-SMA、Col-Ⅲ及TGF-β1表达显著减少(P＜0.05).与对照组相比,模型组超滤量显著减少,腹膜通透性显著升高,治疗组大鼠腹膜转运功能显著改善(P＜0.05).2.5％葡萄糖透析液刺激腹膜间皮细胞12h使肌成纤维细胞标志蛋白α-SMA表达显著增加、上皮细胞标志蛋白E-cadherin表达显著减少,同时MCP-1、IL-6、ICAM-1和TGF-β1 mRNA表达显著增加(P＜0.01);透析液中加入100 μmol/L、300 μmol/L NarHS可显著抑制上述炎症因子及纤维化因子表达(P＜0.01). 结论:在腹膜透析液中加入外源性H2S可显著改善腹膜结构及功能损伤,并可部分逆转腹膜间皮细胞转分化,进而减少炎症因子和纤维化因子合成.
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法舒地尔对腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响
目的:观察Rho激酶(Rho-kinase)抑制剂法舒地尔对腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响.方法:通过每日腹腔注射4.25％腹膜透析液建立腹膜透析大鼠模型.大鼠随机分为4组:正常对照组；腹膜透析模型组；法舒地尔5 mg组；法舒地尔10 mg组.4周后杀检大鼠,取脏层腹膜组织,分别用RT-PCR、Western杂交或免疫荧光方法检测转化生长因子β1(TGF-β1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E钙黏蛋白(E-cadherin)的表达,同时用Western杂交检测Rho-kinase活性. 结果:法舒地尔呈剂量依赖模式显著抑制Rho-kinase活性.与正常组比较,腹膜透析模型组TGF-β1蛋白及mRNA表达显著上调,转分化指标α-SMA蛋白及mRNA表达明显上调(P＜0.01),E-cadherin蛋白及mRNA显著下调(P＜0.01),腹膜超滤量显著降低.法舒地尔干预后,TGF-β1蛋白及mRNA表达呈剂量依赖模式下调,α-SMA蛋白及mRNA表达呈剂量依赖模式下调,E-cadherin蛋白及mRNA表达呈剂量依赖模式上调,腹膜超滤量显著改善. 结论:Rho-kinase激活在腹膜透析大鼠腹膜间皮细胞转分化中起重要作用.法舒地尔可通过抑制TGF-β1信号通路,阻止腹膜间皮细胞转分化,从而改善腹膜透析大鼠模型腹膜结构和功能.
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腹膜间皮细胞转分化小鼠模型差异表达长链非编码RNA的筛选及意义
目的 筛选高糖诱导腹膜间皮细胞转分化小鼠模型中差异表达长链非编码RNA(lncRNA),分析其作用.方法 将20只C57BL/6雄性小鼠随机分为对照组和模型组,每组10只.对照组正常饲养4周,模型组给予4.5%高糖腹膜透析液腹腔注射4 周(1 mL/kg、1 次/d).取两组壁层腹膜组织,进行HE 染色,并采用Western blotting法检测转化生长因子β1(TGF-β1)、E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,结果均提示转分化模型建立成功.采用芯片技术筛选模型组与对照组差异表达lncRNA,应用生物信息学方法分析lncRNA芯片结果,采用RT-PCR法进行验证.结果 芯片筛选结果显示,两组差异表达(≥2倍、P＜0.05)lncRNA共757条,差异表达mRNA共1 431条.差异表达倍数较大(＞5倍),长度为500～2 000 nt,表达丰度在1 000以上的2个上调和2 个下调的 lncRNA 分别为 ri |4732442J12 |PX00051O23 |2580、 NONMMUT055611、 NONMMUT002253、NONMMUT064302.差异表达lncRNA功能与细胞膜结合蛋白组成、膜蛋白基因转录、炎症防御反应、信号转导通路等有关;差异表达 mRNA 可能参与真核生物翻译过程、膜蛋白合成等途径.模型组 NONMMUT002253、NONMMUT064302相对表达量低于对照组,ri|4732442J12|PX00051O23|2580、NONMMUT055611相对表达量高于对照组(P均＜0.05),结果与芯片检测结果基本一致.结论 高糖诱导腹膜间皮细胞转分化小鼠模型中存在差异表达lncRNA,差异表达lncRNA参与腹膜间皮细胞转分化的形成.
