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鲤鱼汤对多柔比星肾损害模型鼠肾纤维化的影响
目的:观察鲤鱼汤对多柔比星肾损害大鼠的肾保护作用.方法:50只Wistar雄性大鼠随机分为正常组(A组)、模型组(B组)、鲤鱼高(C组)、低(D组)剂量组、厄贝沙坦组(E组).尾静脉一次性注射多柔比星6.2mg/kg建模.造模后14d灌胃相应药物干预.HE、Masson染色观察肾脏病变,免疫组化检测肾组织成纤维细胞特异性蛋白-1(S100A4)、Smad7、转化生长因子β1 (TGF-β 1)及胶原蛋白Ⅰ(Col-Ⅰ)的表达.结果:与B组相比,C组大鼠12h尿蛋白浓度(12h-Upc)、尿素氮(BUN)、血清肌酐(SCr)、肾组织TGF-β1、S100A4、Col-Ⅰ、肾小球硬化指数(GSI)及间质损伤指数(TII)降低(P＜0.05),血清总蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、12h尿量(12h-Uv)及肾组织Smad7升高(P＜0.05),除12h-Upc及12h-Uv外,上述指标C组D组E组间无差异.S100A4表达与Col-Ⅰ、GSI及间质胶原沉积呈正相关(P＜0.01),与Smad7呈负相关(P＜0.01).结论:鲤鱼汤利尿消肿、拮抗纤维化保护肾脏;上调Smad7负反馈调节TGF-β 1/Smad信号转导、抑制EMT及ECM可能是其作用机制之一.
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Renalase对肾小管上皮细胞-间充质转分化影响的研究
目的 本研究旨在探讨Renalase是否可以延缓肾脏纤维化.方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞,给予TGF-β1和(或)不同浓度的Renalase与细胞共同孵育,观察细胞形态的变化,应用免疫荧光观察E-cadherin、α-SMA的分布和表达情况;应用Western blot(WB)法和RT-PCR检测细胞中E-cadherin、α-SMA的蛋白和mRNA表达,应用WB检测FN和Col-Ⅰ蛋白表达,并检测细胞内信号分子p-Smad-2/3、p-ERK1/2、p-p38水平的变化,探讨其可能的分子生物学机制.结果 给予TGF-31刺激后,E-cadherin表达下调、α-SMA、FN、Col-Ⅰ表达增加.应用不同浓度Renalase与TGF-β1共孵育细胞,上述现象改善,且呈剂量依赖性.同时,与单独TGF-β1刺激相比,添加Renalase共孵育后,细胞内p-smad 2/3和p-p38表达无明显变化,但p-ERK 1/2表达明显下调,差异有统计学意义.而应用质粒转染过表达ERK信号通路后,Renalase抑制TGF-β1诱导的EMT和纤维化的作用被抵消.结论 本研究首次证实Renalase可以减轻TGF-β1所致的肾小管上皮细胞间充质转分化和纤维化,其机制可能与抑制ERK 1/2信号通路的激活相关,为临床延缓CKD进展提供新的治疗靶点和理论依据.
关键词： Renalase 上皮细胞间充质转分化 肾脏纤维化 ERK信号通路 -
烟草烟雾暴露对气道上皮细胞转分化改变的初探
目的:观察烟草烟雾暴露人气道上皮细胞(16HBE)后,发生间充质转分化(EMT)样改变.方法:(1)以不同浓度(5～50μg/mL)CSC刺激16HBE 7 d,用CCKit-8检测细胞总体活性,筛选佳浓度.(2)用CSC大活性影响浓度刺激16HBE 7 d,观察细胞形态改变,经Western-blot法和细胞免疫荧光技术检测上皮细胞标志物E钙黏蛋白(E-cad)及EMT标记物1型胶原(COL1)、波形蛋白(Vimentin)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)的表达水平.结果:(1)不同浓度CSC刺激后,16HBE在10μg/mL时OD值高,为(2.562±0.045).各浓度间OD值比较差异均有统计学意义(P<0.05).(2)经10μg/mL CSC刺激后,部分16HBE形态由鹅卵石状向长梭形、多角形或星形改变.(3)Western-blot检测发现试验组COL1、MMP-9的蛋白表达量分别为(0.566±0.011)和(0.463±0.003),高于对照组(0.272±0.020)和(0.201±0.023),差异均有统计学意义(P<0.05);而E-cad蛋白表达量则明显低于对照组,分别为(0.301±0.041)和(0.591±0.068),差异有统计学意义(P<0.05).(4)细胞免疫荧光检测发现试验组COL1、Vimentin和MMP-9蛋白表达量均高于对照组(P<0.05);而E-cad蛋白表达量明显低于对照组(P<0.05).结论:经CSC刺激后,16HBE可出现转分化样改变.
关键词： 烟草烟雾凝集物 气道上皮细胞 上皮细胞间充质转分化 -
抗纤灵二号方对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的调节作用
目的:通过研究中药复方--抗纤灵二号方对单侧输尿管梗阻(unilateral reteral obstruction,UUO)大鼠肾问质α-平滑肌肌动蛋白(alpha-smooth muscle actin ,α-SMA)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-beta1,TGF-β1)、肝细胞生长因子(helmtocyte growth factor,HGF)表达的影响,探讨其对肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial mesenchymaltransdifferentiation,EMT)的调节机制.方法:建立大鼠UUO模型,90只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、代文组,及抗纤灵二号方低、中、高剂量组,于遣模4周后腹主动脉采血检测血清肌酐(serum creatinine,Scr)、尿素氮(blood urea nitrogen,BUN),收集24 h尿液检测N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-scety1-β-D-gluoosaminidase ,NAG)、β2-微球蛋白(β2-mi-crogloblin,β2-MG),取梗阻侧肾组织,HE、Masson染色观察肾小管间质病变,免疫组织化学染色观察α-SMA、TGF-β1及HGF在肾间质的阳性染色表达,免疫印迹法检测肾组织α-SMA的蛋白表达,并进行半定量分析.结果:与假手术组相比,模型组大鼠Scr、BUN、尿NAG、β2-MG水平以及α-SMA、TGF-β1阳性表达显著升高(P<0.01).与模型组相比,抗纤灵二号方高剂量组大鼠Scr、BUN水平降低,尿NAG、β2-MG排泄减少(P<0.01);抗纤灵二号方高剂量组和代文组α-SMA、TGF-β1阳性表达显著下调,而HGF阳性表达则显著上调(P<0.01),α-SMA蛋白表达也明显下调(P<0.05);低、中、高三个剂量组的疗效呈剂量依赖关系.结论:抗纤灵二号方可能通过改善肾小球、肾小管功能,抑制α-SMA、TGF-β1的表达,诱导HGF的高表达,从而抑制肾小管EMT,达到改善肾间质纤维化的作用.
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热休克蛋白47在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用
目的:研究热休克蛋白47在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化(EMT)中的作用,探讨以HSP47为靶点防治肾脏间质纤维化的策略.方法:采用UUO大鼠模型,雄性SD大鼠72只随机分为假手术组(Sham组)、UUO模型组(UUO组)、UUO模型+超声联合脂质微泡+HSP47反义寡核苷酸组(antisenseODNs组)以及UUO模型+超声联合脂质微泡+ HSP47正义寡核苷酸组(senseODNs组),每组18只,于术后14 d处死各组大鼠.HE和Masson染色法观察各组大鼠肾脏病理改变,Western blotting及Real-time PCR方法检测HSP47、波形蛋白(Vimentin)、紧密连接蛋白(Zona occludens-1,ZO-1)及Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)的表达.结果:HE和Masson染色显示,与Sham组相比,UUO组大鼠肾间质宽度明显增加,肾小管扩张及上皮细胞变性,肾小管损伤程度、间质纤维化程度逐渐增加(P＜0.05).与UUO组相比,antisenseODNs组病变程度较UUO组减轻(P＜0.05),senseODNs组无明显差别(P＞0.05).Western blotting及Real-time PCR显示,与Sham组相比,UUO组HSP47蛋白及mRNA表达明显升高(P＜0.05),同时Vimentin、Col-Ⅰ蛋白及mRNA表达上调,而ZO-1蛋白及mRNA表达下调(P＜0.05);与UUO组相比,antisenseODNs组HSP47蛋白及mRNA表达明显降低(P＜0.05),同时Vimentin及Col-Ⅰ蛋白及mRNA表达下调,而ZO-1蛋白及mRNA表达上调(P＜0.05),纤维化程度明显减轻;senseODNs组HSP47、Vimentin、Col-Ⅰ、ZO-1蛋白及mRNA表达无明显变化(P＞0.05).结论:UUO模型大鼠肾小管上皮细胞EMT过程中HSP47表达上调,抑制HSP47表达能部分逆转肾小管上皮细胞EMT.
关键词： 肾间质纤维化 热休克蛋白47 上皮细胞间充质转分化 超声微泡转染 -
N-myc下游调节基因-2在输尿管梗阻大鼠肾脏中的表达及意义
目的 观察N-myc下游调节基因-2(N-myc downstream regulated gene-2,NDRG2)在大鼠单侧输尿管梗阻(unilateral ureteral obstruction,UUO)模型上的表达,探讨肾脏纤维化发病的机制.方法 雄性Wistar大鼠48只,数字法随机分为假手术组(24只,行左侧输尿管分离术)和手术组(24只,行左侧输尿管结扎离断术),各组大鼠分别在术后3d、7d、14 d、21 d各6只取材,留取左肾标本.用HE、Masson染色观察肾小管损伤的病理变化,采用Western blot、免疫组化方法检测E-cadherin和α-SMA的表达情况,从而验证造模成功.用实时定量PCR、Western blot、免疫组化验证NDRG2的表达.结果 假手术组各时间点无差异.与假手术组相比,UUO组大鼠随着梗阻时间延长,肾小管损伤程度逐渐加重,E-cadherin蛋白表达减少(P＜0.05),α-SMA蛋白表达增加(P＜0.05).NDRG2蛋白表达在UUO组明显低于假手术组(P＜0.05),随梗阻时间延长递减.用ImagePro Plus 6.0分析NDRG2免疫组织化学OD值,在21 d时低(14.33 ±2.45)×10-3;Westem blot结果采用目的蛋白与内参OD值之比,21 d时低为0.03 ±0.01;实时PCR显示NDRG2 mRNA在UUO组显著降低(P＜0.05).结论 在UUO模型中,NDRG2表达下调,其有可能参与了肾脏纤维化的病理过程.
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黄芪甲苷对TGF-β1诱导下肾小管上皮细胞间充质转分化的保护作用及机制
目的:探讨黄芪甲苷(AS-IV)对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞间充质转分化(EMT)的保护作用及可能机制.方法:将大鼠近端肾小管上皮细胞分为三组:正常对照组、TGF-β1刺激组(5 ng/ml,48h)及AS-IV干预组(TGF-β1刺激的同时加用AS-IV 100μmol/l).采用萤火虫荧光素酶法检测细胞内三磷酸腺苷(ATP)含量以评价线粒体功能.采用Western Blot法检测线粒体生物合成及EMT相关指标的表达.结果:TGF-β1刺激下肾小管上皮细胞ATP合成减少,线粒体生物合成相关蛋白下调(P<0.05).TGF-β1刺激可诱导EMT,表现为纤连蛋白及I型胶原蛋白表达增加、E-钙粘素表达减少(P<0.05).而AS-IV干预后可显著提高细胞ATP含量、增加线粒体生物合成并改善EMT(P<0.05).结论:黄芪甲苷可保护TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞间充质转分化,其机制可能与增加线粒体生物合成有关.
关键词： 黄芪甲苷 转化生长因子-β1 上皮细胞间充质转分化 线粒体生物合成 -
γ-分泌酶抑制剂对大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化的抑制作用
目的 探讨γ-分泌酶抑制剂(DAPT)对大鼠肾小管上皮(NRK52E)细胞间充质转分化(EMT)的抑制作用及机制.方法 含10μg/L转化生长因子-β1(TGF-β1)的无血清培养基孵育NRK52E细胞48 h构建EMT模型;或10 mol/L DAPT预处理15 min后构建NRK52E细胞EMT模型.Western blot法检测NRK52E细胞Notch-1、Hes-1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、E-钙黏素(E-cadherin)蛋白表达,小室迁移实验检测细胞迁移能力.结果 TGF-β1显著上调NRK52E细胞Notch-1、Hes-1、α-SMA蛋白表达,下调E-cadherin表达,并增强细胞迁移能力[(482.87±78.23)个比(1464.16± 31.82)个,P＜0.05].DAPT可显著抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞Notch-1、Hes-1、E-cadherin、α-SMA蛋白表达的变化及迁移能力的增强[(509.23 ±83.21)个比(1493.64±463.34)个、(983.06±169.49)个,P＜0.05].结论 Notch信号通路的活化参与了TGF-β1诱导NRK52E细胞EMT,DAPT阻断Notch信号通路活性,抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞EMT.
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热休克蛋白47在单侧输尿管梗阻大鼠肾小管间质中的表达变化
目的 建立单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾小管上皮细胞转分化(EMT)模型,检测EMT过程中热休克蛋白47(HSP47)的表达变化.方法 采用UUO模型,将雄性SD大鼠36只随机分为假手术组(Sham组)和模型组(UUO组),每组各18只.术后3、7和14 d分别处死两组大鼠.采用HE和MASSON染色法观察各组大鼠术后不同时间肾脏病理改变,用免疫组织化学检测HSP47、波形蛋白(Vimentin)及紧密连接蛋白(ZO-1)的表达.结果 随着梗阻时间延长,UUO组大鼠肾小管损伤程度和肾间质纤维化程度逐渐增加,HSP47和Vimentin表达上升(P＜0.05),而ZO-1表达下降(P＜0.05).结论 UUO模型大鼠EMT过程中伴有HSP47的高表达,HSP47表达上升可促进EMT过程.
关键词： 肾间质纤维化 HSP47 上皮细胞间充质转分化 -
虫草多糖对转化生长因子β1诱导人近端肾小管上皮细胞间充质转分化的影响
目的 探讨虫草多糖(Cp)对转化生长因子[β1(TCF-β1)诱导人近端肾小管上皮细胞间充质转分化的影响.方法 用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测不同浓度的Cp(0、0.01、0.1、1、5、10 g/L)对人近端肾小管上皮细胞(HK-2)增殖的作用.用不同浓度的TC-F-β1(0、0.1、0.5、1、5、10 μg/L)作用HK-2细胞48 h及5μg/L的TGF-B1作用不同时间[0、12、24、48和72 h),以实时定量PCR和Western印迹方法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、钙黏蛋白(E-cadherin)、纤连蛋白(FN)的表达.用递增浓度的Cp(1、5、10 g/L)预处理HK-2细胞24 h后,观察其对TGF-β1效应的干预作用.结果 Cp以剂量依赖方式促进HK-2细胞增殖(P＜0.05).TGF-β1无论在转录水平还是蛋白水平皆能诱导HK-2细胞α-SMA、FN表达上调,而下调E-cadherin表达.分别用1、5、10 g/L CP预干预24 h后,同单独5μg/L TGF-β1刺激组相比,上述因子表达被不同程度逆转.在转录水平.α-SMA mRNA表达被抑制率分别为37.98%、68.08%、84.36%;FN mRNA表达被抑制率分别为46.97%、63.82%、81.85%;E-cadherin mRNA表达分别增加0.67倍、2.69倍、5.43倍(均P＜0.05).在蛋白水平,α-SMA蛋白表达被抑制率分别为33.40%、47.75%、68.50%;FN蛋白表达抑制率分别为16.26%、65.92%、80.30%;E-cadherin蛋白表达分别增加1.33倍、3.19倍、4.29倍(均P＜0.05). Cp能明显拮抗TGF-β1诱导的HK-2细胞的表型改变.结论 Cp能有效阻止TGF-β1诱导的人近端肾小管上皮细胞发生转分化.
