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Renalase对肾小管上皮细胞-间充质转分化影响的研究
目的 本研究旨在探讨Renalase是否可以延缓肾脏纤维化.方法 体外培养人近端肾小管上皮细胞,给予TGF-β1和(或)不同浓度的Renalase与细胞共同孵育,观察细胞形态的变化,应用免疫荧光观察E-cadherin、α-SMA的分布和表达情况;应用Western blot(WB)法和RT-PCR检测细胞中E-cadherin、α-SMA的蛋白和mRNA表达,应用WB检测FN和Col-Ⅰ蛋白表达,并检测细胞内信号分子p-Smad-2/3、p-ERK1/2、p-p38水平的变化,探讨其可能的分子生物学机制.结果 给予TGF-31刺激后,E-cadherin表达下调、α-SMA、FN、Col-Ⅰ表达增加.应用不同浓度Renalase与TGF-β1共孵育细胞,上述现象改善,且呈剂量依赖性.同时,与单独TGF-β1刺激相比,添加Renalase共孵育后,细胞内p-smad 2/3和p-p38表达无明显变化,但p-ERK 1/2表达明显下调,差异有统计学意义.而应用质粒转染过表达ERK信号通路后,Renalase抑制TGF-β1诱导的EMT和纤维化的作用被抵消.结论 本研究首次证实Renalase可以减轻TGF-β1所致的肾小管上皮细胞间充质转分化和纤维化,其机制可能与抑制ERK 1/2信号通路的激活相关,为临床延缓CKD进展提供新的治疗靶点和理论依据.
关键词： Renalase 上皮细胞间充质转分化 肾脏纤维化 ERK信号通路 -
Renalase基因的克隆及表达
目的:克隆与表达人Renalase基因.方法:提取总RNA,RT-PCR获得Renalase cDNA片段,克隆到表达载体pET42b(+)中,转染大肠杆菌BL21,采用异丙基硫代半乳糖苷诱导,获取融合蛋白,亲和层析纯化后,将产物进行聚丙烯酰胺凝胶电泳与蛋白质印迹分析.结果:克隆到大小为1029 bp的Renalase cDNA片段,表达载体pET42b(+)-Renalase经测序证实为所需质粒.获得的融合蛋白经鉴定证实为重组Renalase蛋白.结论:成功对Renalase基因进行克隆与表达,为进一步研究奠定了基础.
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renalase在人近曲肾小管上皮细胞系的表达与分泌
目的:探讨renalase在人近曲肾小管上皮细胞系(HK-2)的表达与分泌,为进一步研究细胞水平renalase及其通路建立稳定的实验平台.方法:以HK-2细胞系作为研究材料.①应用Western blot方法检测renalase蛋白的表达.②用real-time PCR方法检测renalase mRNA表达的变化.③用ELISA方法检测细胞上清液中renalase的浓度.结果:在mRNA水平及蛋白水平均检测到renalase表达.结论:首次在mRNA水平及蛋白水平证实了HK-2细胞能够表达renalase,为进一步研究儿茶酚胺或缺血缺氧刺激下细胞renalase的表达奠定了基础.
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Renalase与相关疾病关系的研究进展
Renalase是一种蛋白质,主要由肾小管近端上皮细胞合成和分泌,能够通过分解儿茶酚胺降低血压,并且在人类疾病中起重要作用.近几年,关于Renalase的结构、功能、作用机制及与疾病关系等研究已取得显著的进展,作者就Renalase与相关疾病关系的研究进展进行综述.
