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高效液相色谱法测定虎杖有效成分白藜芦醇的含量
目的 建立中药虎杖中有效成分白藜芦醇的高效液相色谱(HPLC)测定方法.方法采用Hypersil ODS-C18色谱柱(250×4.6mm,5.0μm),以甲醇:水=40:60作为流动相,流速为1.0ml/min,温度:25℃,紫外检测波长为303nm.结果 HPLC检测结果表明白藜芦醇在0.08～0.35μg范围内呈良好的线性关系,其平均回收率为99.97%(RSD=1.32%,n=5).结论 高效液相色谱法测定中药虎杖中有效成分白藜芦醇,其操作方法简单快速,结果准确可靠,是一种有效的测定含量的方法.
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白藜芦醇对大鼠非酒精性脂肪肝的保护作用
目的 观察白黎芦醇对大鼠非酒精性脂肪肝的保护作用,并初步探讨相关机制.方法 采用高脂膳食喂养方式建立大鼠非酒精性脂肪肝模型,SD大鼠50只,随机平均分成5组:正常组、模型组、白藜芦醇高、中、低剂量组(100、50、25 mg·kg-1·d-1).每组10只.实验12周后观察各组大鼠血清与肝组织生化指标及肝组织病理改变.结果 RES中、高剂量组的大鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)四项指标均低于模型对照组(P<0.05);RES中、高剂量组的肝组织SOD活性、MDA含量、GSH含量与模型组相比差异均有统计学意义(P<0.05);组织学观察表明RES高、中剂量均能明显减轻肝细胞脂肪变性(P<0.05).结论 RES对大鼠NAFL具有很好的保护作用,并有一定的量效关系,其机制可能与对抗脂质过氧化以及提高抗氧化能力有关.
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HPLC 测定壮药剑叶龙血树中白藜芦醇和7,4'-二羟基黄酮的含量
目的 建立一种同步测定剑叶龙血树中白藜芦醇和7,4'-二羟基黄酮含量的方法.方法 以C18反相键合硅胶为填料,甲醇-乙腈-0.2%磷酸(30:7:63)为流动相,检测波长为306 nm,柱温35 ℃.结果 白藜芦醇和7,4'-二羟基黄酮分别在0.185 0～1.850 μg(r ＝0.999 9)和0.158 2～1.582 0 μg(r ＝0.999 9)范围内呈良好的线性关系,平均加样回收率分别为101.02%、99.09%,RSD 分别为2.57%、2.24%.结论 本方法简便、灵敏、准确度高,可用于建立剑叶龙血树质量控制标准.
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维生素C、白藜芦醇和大黄素对幽门螺杆菌体外抗菌作用的研究
目的:评价维生素C、白藜芦醇和大黄素对幽门螺杆菌(Hp)的抑制作用,以及它们与抗生素的联合抑菌作用.方法:检测上述三种物质对Hp的小抑菌浓度(MIC)；分别将它们和抗生素混合,比较单一药物与混合溶液对耐药菌株的抑菌率.结果:1、维生素C的MIC50为1000mg/L,MIC90为2000mg/L；白藜芦醇的MIC50为62.5mg/L,MIC90为250mg/L;大黄素的MIC50为0.5mg/L,MIC90为2mg/L.2、白藜芦醇与甲硝唑、大黄素与克拉霉紊的联合抑菌率比其单独抑菌率要高,其差异均有统计学意义(P＜0.0125).结论:维生素C、白藜芦醇和大黄素在体外对Hp都有抑制作用；白藜芦醇与甲硝唑、大黄素与克拉霉素有协同抗Hp的作用.
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白藜芦醇对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用
目的:观察白藜芦醇(resveratrol,RVL)对大鼠离体胸主动脉血管的舒张作用并探讨其机制.方法:采用离体血管环灌流方法,观察RVL在含Ca2+或无Ca2+Krebs液孵育条件下对去甲肾上腺素(NA)引起的血管平滑肌收缩的影响;同法观察RVL对30,80 mmol·L-1的KCl引起的血管平滑肌收缩的影响;RVL对NA引起的依赖于细胞内钙和细胞外钙收缩反应的影响,以及加入N-G-硝基-L-精氨酸(L-NNA)和优降糖后RVL舒张大鼠离体主动脉环效应的变化.结果:RVL呈浓度依赖性舒张NA引起的血管收缩;无Ca2+组RVL抑制NA所致血管平滑肌收缩效应大于含Ca2+组;RVL能够拮抗NA诱发的依内钙的收缩反应,而对外钙收缩无抑制.RVL对80,30 mmol·L-1的KCl引起的血管平滑肌收缩均有抑制作用,且前者量效曲线明显上移.L-NNA使RVL舒血管效应降低(26.0±4.6)%;优降糖组的血管舒张受抑程度与对照组无显著差别(P＞0.05).结论:RVL可呈内皮依赖性舒张血管平滑肌,其作用机制可能与该药促进NO合成释放,开放钙激活的钾通道以及抑制血管平滑肌细胞外钙内流和内钙释放有关.
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白藜芦醇纳米脂质体体外释药和大鼠小肠吸收特性的研究
目的:考察白藜芦醇纳米脂质体的体外释药性质,研究小肠佳吸收部位及其吸收机制.方法:以动态透析法测定白藜芦醇纳米脂质体体外释药速率;以大鼠在体肠循环法研究白藜芦醇纳米脂质体在大鼠十二指肠、空肠、回肠及结肠中的吸收动力学特征及考察不同质量浓度(20,40,60,80 μg·mL-1)的白藜芦醇纳米脂质体在大鼠肠道的吸收行为.结果:药物的体外释放以对数正态分布方程拟合好;白藜芦醇纳米脂质体在回肠段的吸收速率常数高于其他肠段,差异具有显著性(P＜0.001).不同质量浓度的白藜芦醇纳米脂质体在小肠的吸收速率常数(ka)不具有显著性差异.结论:白藜芦醇纳米脂质体在体外释放介质中可缓慢持续释药;在小肠回肠部位吸收较好,药物质量浓度对ka无影响,吸收呈一级动力学过程,吸收机制为被动扩散.纳米脂质体作为载体可以促进白藜芦醇在小肠的吸收.
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白藜芦醇对U251人脑胶质瘤细胞生长的抑制及相关机制的研究
目的:研究白藜芦醇(Res)对U251人脑胶质瘤细胞生长的抑制及相关作用机制.方法:将不同浓度Res作用于U251细胞系,MTT法检测Res对U251细胞生长增值的抑制作用,流式细胞仪(FCM)检测Res.对细胞凋亡的影响,免疫组织化学法检测Res处理前后Bcl-2,Bcl-XL,CyclinD1,STAT3的表达及Westem blot(蛋白印迹法)法检测Bcl-2,Bcl-XL,cyclinD1,Caspase-3,Bax,STAT3的表达.结果:经Res处理后的U251细胞,MTT结果显示细胞增殖现象被抑制,并呈时间-剂量依赖性;FCM显示随着Res作用时间的延长,细胞晚期凋亡数增加;免疫组织化学法显示Bcl-2,Bcl-XL,CyclinD1,STAT3的表达下降;Westem-blot检测显示Bcl-2,Bcl-XL,CyclinD1,STAT3表达下降,而Caspase-3和Bax的表达上调.结论:Res诱导U251细胞凋亡的分子机制可能是通过下调Bcl-2,Bcl-XL蛋白的表达,而上调Bax与Caspase-3蛋白的表达,并随着Res剂量与作用时间的延长这种趋势在加强.
关键词： 白藜芦醇 U251人脑胶质瘤细胞 Bcl-2 Bax Caspase-3 -
不同产地菝葜中白藜芦醇的含量比较
目的:比较不同产地菝葜中有效成分白藜芦醇的含量.方法:对采自我国不同产地的菝葜样品进行成分分析比较,以菝葜活性成分白藜芦醇为指标,采用高效液相色谱法测定其含量.结果:不同产地菝葜中白藜芦醇的含量有显著差异.结论:产自安徽潜山菝葜中白藜芦醇的含量显著高于其他产地.
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白藜芦醇对豚鼠离体心房肌收缩力和心率的影响
目的:观察白藜芦醇(resvaratrol,Res)对豚鼠离体心肌收缩力(contraction force,CF)和窦房结功能的影响.方法:测定Res对离体豚鼠心房肌CF和心率(heart rate,HR)影响的量效曲线,并研究不同类型钾通道阻断剂在Res对心脏负性变时变力作用的影响.结果:Res可减慢心率(P＜0.05),减弱心肌CF(P＜0.05);与Res组相比,ATP敏感性钾通道(KATP)阻断剂格列苯脲(Glibenclamide,Gli)、钙激活钾通道(KCa)阻断剂四乙胺(tetraethylammonium,TEA)可部分阻断Res的作用(P＜0.05),电压依赖性钾通道(KV)阻断剂4-氨基吡啶(4-aminopyridine,4-AP)、内向整流钾通道(KIR)阻断剂氯化钡(barium chloride,BaCl2)、乙酰胆碱(ACh)调节钾通道(KACh)阻断剂阿托品(Atropine)不能阻断Res的作用.结论:Res可呈剂量依赖性减慢HR、减弱CF,其作用是通过开放KATP及KCa有关,与KV,KIR和KACh无关.
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虎杖野生植株及组织培养物中白藜芦醇和虎杖苷含量的比较
目的:比较白藜芦醇和虎杖苷在不同来源的虎杖材料中含量积累的差异,以期筛选出适宜的培养材料用于进一步的代谢调控研究.方法:采用反相高效液相色谱法对不同样品中白藜芦醇及虎杖苷的含量同时进行检测.结果:在多年生野生植株和室内人工栽培幼苗中,白藜芦醇和虎杖苷均在植物根及根茎部特异性累积,其含量要远远高于叶片和茎段.其中,以室内人工栽培3个月的幼苗中有效成分含量较高,虎杖苷的积累量为1.27%,是野生植株的1.25倍,白藜芦醇含量(0.401%)则接近野生植株水平.从虎杖的各种组织培养物中也可检测到白藜芦醇和虎杖苷的存在,但是二者含量的高低与培养物的生长速度、生理状况及发育时期密切相关.在几种培养物中,以毛状根的培养具潜力,离体培养30d后,其干重增长率为8.29,分别是自然根和悬浮细胞的8.4倍和192.8倍,而且还可积累一定量的虎杖苷(0.037%)和白藜芦醇(0.007%).结论:所建立的分析检测方法,具有快速、简便和准确的特点,尤其适于大批量生物样品的同时测定.在几种不同来源的虎杖材料中,毛状根是适宜大规模培养并可持续收获有效成分的培养物.
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表面氨基游离的白藜芦醇壳聚糖纳米粒制备方法研究
目的:探索表面氨基游离的白藜芦醇壳聚糖纳米粒制备方法,以便连接配体实现主动靶向.方法:采用氯化钠沉淀法制备表面氨基游离的壳聚糖纳米粒;比较不同固化程度纳米溶液的浊度、体外释放、包封率、载药量和粒径等性质.结果:固化程度不同的纳米溶液经超声或水浴加热处理后,浊度降低值不同;含不同固化剂的纳米溶液均有明显缓释效果,随固化剂加入量增加,释放速度减慢;固化程度对包封率和载药量无明显影响.加固化剂200μL的壳聚糖纳米粒粒径为487 nm,多分散指数为0.144.结论:制备的白藜芦醇壳聚糖纳米粒粒径相对较小,表面氨基游离,可用于主动靶向给药系统的设计.
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不同光照强度对虎杖愈伤组织的影响
目的:研究光照强度对虎杖愈伤组织的诱导形成及其白藜芦醇含量的影响.方法:分别以虎杖茎段、叶片为外植体,在不同光照强度下诱导和培养愈伤组织,对愈伤组织生长状况进行观察统计,HPLC测定其中白藜芦醇的含量.结果:光强为1 340～1 560 lx条件下诱导的茎段愈伤组织诱导形成较早,生长速度适宜,维持时间长,且其白藜芦醇质量分数高,鲜茎中为18.350 μg·g-1,干茎中为140.074 μg·g-1,高于同期野生品.结论:不同光照强度下,虎杖愈伤组织的诱导和形态有差别,适当的光照强度能促进虎杖愈伤组织中白藜芦醇的合成.
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大孔吸附树脂吸附纯化虎杖有效部位的研究
目的:研究大孔吸附树脂纯化虎杖有效部位的工艺条件.方法:以白藜芦醇苷、白藜芦醇、大黄素、大黄素甲醚和总蒽醌的吸附量和解吸率为评价指标,筛选树脂,并优化了吸附和洗脱条件.结果:D101树脂对虎杖各有效成分具有较好的吸附分离性能,适于纯化虎杖有效部位.佳工艺条件为:虎杖样品溶液1 BV,吸附流速2.4 BV·h-1,上样后静置30 min,先用2 BV水洗涤,再用20%,50%,70%,95%乙醇各2,5,2,5 BV进行梯度洗脱,流速2 BV·h-1,合并50%和95%乙醇洗脱液,即为纯化的总有效部位.结论:总有效成分纯度为36.87%,说明采用D101树脂分离纯化虎杖有效部位是可行的.
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HPLC测定菝葜芪类提取物在大鼠体内的分布
目的:研究菝葜芪类提取物在大鼠体内的组织分布规律.方法:菝葜芪类提取物大鼠灌胃给药1g·kg~(-1)后,应用HPLC测定氧化白藜芦醇和白藜芦醇在大鼠心、肝、脾、肺、肾中的含量.Zorbax SB-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-水(B)进行梯度洗脱;流速1.0 mL·min~(-1);检测波长320 nm;进样量10μL;柱温40℃.结果:建立了氧化白藜芦醇和白藜芦醇在大鼠心、肝、脾、肺、肾中的含量测定方法.结论:本方法简便、准确、专属性强,可以成功应用于大鼠灌胃给药菝葜芪类提取物后,氧化白藜芦醇和白藜芦醇在大鼠体内组织分布的研究.
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白藜芦醇对阿霉素致心衰大鼠心肌损伤的保护作用
目的:观察白藜芦醇(resveratrol,RES)对阿霉素(adriamycin,ADR)致急性心衰大鼠心功能的保护作用.方法:取成年雄性SD大鼠30只,随机分为5组:空白对照组(NC),ADR模型组、RES低剂量(RESL)+ADR组,RES高剂量(RESH)+ADR组及RES组.RESL+ADR,RESH+ADR组及RES组,分别给予RES 30,120,120 mg·kg-1·d-1腹腔注射,1次/d,连续3 d;其他两组腹腔注射等量生理盐水.第4天除NC组及RES组外,其余3组一次性腹腔注射ADR10 mg·kg-1,制备急性心衰大鼠模型.24 h后,光镜观察心肌细胞形态及生化指标的变化.结果:光镜观察显示,RES+ADR组心肌细胞的变性坏死明显减轻.ADR模型组丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)显著增加,超氧化物岐化酶(SOD)显著减少(P＜0.05).与ADR模型组相比,RESL+ADR,RESH+ADR组的MDA,NO,NOS显著减少,SOD增加(P＜0.05),并呈剂量依赖性.结论:RES可显著减轻ADR对心肌的毒性作用,其作用与抗氧化和减少NO的产生有关.
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HPLC同时测定虎杖及其提取物中4种有效成分的含量
目的:建立同时测定虎杖及其提取物中白藜芦、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚4种有效成分含量的高效液相色谱法.方法:Hypersil C18色谱柱(4.6mm×200mm,5μm),流动相为乙腈和1%HAc水溶液,梯度洗脱,流速1 mL·min-1,检测波长287 nm.结果:方法的平均回收率及RSD分别为:白藜芦醇101.8%,1.7%;大黄素96.2%,1.4%;大黄酚99.7%,1.0%;大黄素甲醚98.6%,0.97%.结论:该方法可用于虎杖药材及其提取物的质量控制.
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白藜芦醇对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的抑制作用与PI3K-Akt信号通路的关系
目的:探讨白藜芦醇对大鼠缺血再灌注心肌细胞凋亡的影响及与PI3K-Akt信号通路的关系.方法:50只成年雄性SD大鼠,随机分为5组,即对照组(SH组)、缺血再灌注组(I/R组)、白藜芦醇预处理组(Res组)、白藜芦醇预处理+渥曼青霉素组(Res+ Wom组)、缺血再灌注+渥曼青霉素组(I/R+ Wom组).结扎冠状动脉左前降支制备心肌缺血模型,缺血45 min,再灌注120 min,测定再灌注心肌组织中NOS,NO的含量,并用末端脱氧核苷酸转移酶介导的带生物素的dUTP缺口末端标记(TUNEL)的方法测定细胞凋亡,免疫组化测定心肌组织中Bcl-2,Bax蛋白的表达,利用Western blot测定Akt(又称PKB,即蛋白激酶B)及p-Akt(即磷酸化蛋白激酶B)含量.结果:与I/R组及Res+ Wom组比较,Res组NOS及NO表达增加,显著减轻心肌细胞凋亡,Bcl-2蛋白表达显著升高,Bax/Bcl-2降低,Akt的磷酸化水平增高,上述各项指标差异具有统计学意义(P＜0.05),而上述变化能够被PI3K-Akt信号通路的特异性阻断剂渥曼青霉素所阻断,且其差异具有统计学意义(P＜0.05).结论:白藜芦醇能够抑制缺血再灌注所致的心肌细胞凋亡,此过程有PI3K - Akt信号通路的参与.
关键词： 白藜芦醇 心肌缺血再灌注损伤 细胞凋亡 PI3K-Akt信号通路 -
虎杖白藜芦醇及其脂质体剂型对帕金森病模型大鼠黑质细胞保护作用的研究
目的:氧化应激是帕金森病发病机制中的重要病理因素,是导致黑质多巴胺能神经元死亡的主要原因之一.白藜芦醇具有广泛的药理学作用和较强的抗氧化特性.本研究探讨从中药虎杖提取的白藜芦醇及其脂质体制剂对帕金森病模型大鼠黑质细胞的保护效应,为临床帕金森病治疗药物的开发提供实验依据.方法:实验用Wistar大鼠50只,随机分为正常组、假手术组、模型组、白藜芦醇干预组、白藜芦醇脂质体干预组,以6-羟基多巴胺单侧纹状体微量注射法制备帕金森病大鼠模型.白藜芦醇干预组及白藜芦醇脂质体干预组在造模成功后,以白藜芦醇、白藜芦醇脂质体灌胃,20 mg·kg-1,1次/d,连续14 d.观察各组大鼠的旋转行为学改变,采用HE染色、Nissl染色、酪氨酸羟化酶(TH)免疫组化方法统计黑质细胞总数、神经元总数、多巴胺能神经元数量,采用TUNEL法检测黑质细胞凋亡,以分光光度法检测黑质区总ROS活力和总抗氧化能力.结果:帕金森病模型大鼠在阿普吗啡诱导后,出现明显的行为学异常表现,黑质区细胞总数、神经元总数及多巴胺能神经元数量明显减少,凋亡细胞数量增加,组织总ROS活力显著增强,总抗氧化能力明显降低.白藜芦醇及白藜芦醇脂质体均能明显改善模型大鼠行为学异常,增加黑质区细胞总数、神经元总数、多巴胺能神经元数量,降低细胞凋亡率,提高组织总抗氧化能力,降低组织总ROS活力.在组织学指标的改善方面,白藜芦醇脂质体的效应较白藜芦醇单体更强.结论:中药虎杖来源的白藜芦醇及白藜芦醇脂质体对帕金森病模型大鼠黑质细胞具有明显的保护作用,这种保护作用可能与抗氧化活性有关.白藜芦醇脂质体较白藜芦醇单体在组织学指标改善上作用更强,可能与脂质体制剂提高了白藜芦醇的生物利用度有关.白藜芦醇脂质体可能是更有效的口服给药方式.
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白藜芦醇与紫杉醇联合用药对人喉癌Hep-2细胞凋亡机制的研究
喉癌是呼吸道肿瘤中常见的恶性肿瘤之一,在呼吸道肿瘤中高居第二位.白藜芦醇(resveratrol,Res)是一种多酚类物质,可通过抑制细胞内核苷酸还原酶抑制肝癌细胞、胃癌细胞、胰腺癌细胞等肿瘤细胞生长.紫杉醇(taxol,Tax)是红豆杉属植物中一种次生代谢物,可抑制细胞内微管的解聚,对乳腺癌、宫颈癌、卵巢癌等肿瘤有良好的抗肿瘤活性.目前有关白藜芦醇联合紫杉醇用药针对人喉癌细胞株Hep-2的作用及其相关分子机制研究还鲜见报道.用白藜芦醇(Res)、紫杉醇(Tax)处理人喉癌细胞株Hep-2,采用CCK-8法检测2种药物对Hep-2细胞增殖的影响,AO/PI染色和JC-1检测Hep-2细胞凋亡,实时定量PCR检测Bax,Bcl-2,PARP,TRIB3,XIAP基因的表达,荧光定量法检测caspase-3,caspase-8活性.结果表明,与Tax,Re,单独用药相比,联合组显著增强对Hep-2细胞的抑制作用,且明显减少Tax的用药剂量,增加Bax,PARP,TRIB3的表达,降低Bcl-2,XIAP的表达,促进caspase-3,caspase-8活性.这表明Res,Tax以及其联合药物通过线粒体途径诱导喉癌细胞Hep-2的细胞凋亡.这为进一步研究Res,Tax联合用药治疗喉癌奠定理论基础,且扩大Res,Tax联合用药范围.
关键词： 白藜芦醇 紫杉醇 喉癌细胞株Hep-2 细胞凋亡 -
白藜芦醇对缺氧诱导大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用
目的:观察白藜芦醇(Res)对缺氧诱导大鼠乳鼠心肌细胞损伤的保护作用.方法:建立体外培养大鼠乳鼠心肌细胞缺氧模型,NTT法检测心肌细胞活力,免疫组织化学法检测心肌细胞缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达水平,检测心肌细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)水平和心肌细胞内谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.结果:大鼠乳鼠心肌细胞在体外缺氧培养24 h后,HIF-1α表达水平明显升高;心肌细胞培养液中LDH活性从正常对照组的(93.07±15.84)U·L~(-1)上升到(750.77±181.51)U·L~(-1)(P<0.01);心肌细胞内GSH-Px活性从正常对照组(46.96±8.36)U·mL~(-1)下降为(27.13±4.76)U·mL~(-1)(P<0.01).25,50,75 μmol·L~(-1)Res可剂量依赖性抑制缺氧诱导大鼠乳鼠心肌细胞内HIF-1α表达增加;心肌细胞培养液中LDH含量呈剂量依赖性下降,分别为(486.17±69.97),(189.43±32.07),(155.34±29.57)U·L~(-1)(P<0.05或P<0.01);心肌细胞内GSH-Px活性呈剂量依赖性升高,分别为(33.55±6.34),(37.67±6.73),(41.44±7.91)U·mL~(-1)(P<0.05或P<0.01).结论:Res对缺氧诱导大鼠乳鼠心肌细胞损伤有良好保护作用.
