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SPE-HPLC法测定桑椹中的反式白藜芦醇及其糖苷
建立SPE-HPLC法测定桑椹中反式白藜芦醇及其糖苷的方法.样品经冷冻干燥后提取,提取液经固相萃取后,以高效液相色谱法测定.二组分线性关系良好,相关系数均为0.999 2,检出限分别为0.014 μg/mL和0.016 μg/mL,平均回收率分别为98.2%和101.8%, RSD分别为2.3%和2.4%.方法简便、快速、灵敏、准确.
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白藜芦醇苷对人类乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响及其机制
目的:研究白藜芦醇苷(polydatin)在体外对乳腺癌细胞MCF-7增殖的作用,进一步探索其潜在的机制.方法:设定空白组及白藜芦醇苷(0.2,0.4,1.2,2.0,2.8 mg·L-1)组,5-氟尿嘧啶组,采用噻唑蓝(MTT)比色法测定不同质量浓度白藜芦醇昔对MCF-7细胞的生长抑制率;应用细胞克隆集落形成实验验证白藜芦醇苷对MCF-7细胞增殖的抑制作用;通过实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测5-氟尿嘧啶(1.0μg·L-1)和白藜芦醇苷(0.2,0.4,1.2 mg·L-1)对DNA聚合酶δ催化亚基P125(P125),P125编码基因(POLD1),p53基因(p53),细胞周期依赖性蛋白激酶抑制因子p21 mRNA表达水平的影响;应用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测白藜芦醇苷(0.2,0.4,1.2 mg·L-1)对P125,p53,p21蛋白表达水平的影响.结果:与空白组比较,白藜芦醇苷(0.2,0.4,1.2,2.0,2.8 mg·L-1)在体外对MCF-7细胞具有明显的抑制作用(P ＜0.05,P＜0.01),并且这种抑制作用呈浓度依赖性.与空白组比较,白藜芦醇苷(0.2,0.4,1.2 mg·L-1)均能明显抑制细胞集落的形成(P ＜0.05,P＜0.01).与空白组比较,5-氟尿嘧啶组和白藜芦醇苷(0.4,1.2 mg·L-1)能够显著抑制POLD1 mRNA表达水平,同时显著抑制P125 mRNA和蛋白表达水平,明显升高p53,p21 mRNA和蛋白表达水平(P ＜0.05,P＜0.01).与5-氟尿嘧啶组比较,白藜芦醇苷(1.2 mg·L-1)对POLD1,P125,p53,p21 mRNA和蛋白表达水平影响均无显著差异.结论:白藜芦醇苷在体外能够显著抑制MCF-7细胞的增殖,其潜在机制可能与提高p53表达水平,抑制POLD1表达,促进p21表达有关.
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产酸模素苷及白藜芦醇苷的毛脉酸模内生真菌筛选
目的:在前期的研究工作中已从不同产地分离得到毛脉酸模内生真菌278株,以这些内生真菌为研究对象,寻找能够通过自身发酵产生酸模素苷、白藜芦醇苷的内生真菌.方法:通过HPLC检测内生真菌的次生代谢产物,以酸模素苷、白藜芦醇苷为参照,筛选能够产生酸模素苷、白藜芦醇苷的内生真菌,并测定其含量.结果:发现其中的11株内生真菌的次生代谢产物中含有酸模素苷,5株次生代谢产物中含有白藜芦醇苷,其中内生真菌tq-sl的次生代谢产物中酸模素苷的质量分数高(530 μg·g-1),且白藜芦醇苷的质量分数也高(224 μg·g-1).结论:内生真菌的种类和其次生代谢产物的形成受到地理位置的影响,对于酸模素苷和白藜芦醇苷的高产菌种tq-sl,可以进行开发利用的研究.
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反相高效液相色谱法测定复方烧烫伤搽剂中黄芩苷和白藜芦醇苷的含量
目的 建立同时测定复方烧烫伤搽剂中黄芩苷和白藜芦醇苷含量的方法.方法 采用反相高效液相色谱法,Diamonsil ODS色谱柱(2 00 mm×4.6 mm,5 μm);流动相:乙腈(A)和0.05%磷酸水溶液(B),梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;检测波长:306 nm;柱温:30℃.结果 黄芩苷的线性范围为0.1 07～0.856 ug(r=0.999 6),平均回收率为100.6%,RSD=1.16%;白藜芦醇苷的线性范围为0.193～1.544 ug(r=0.999 8),平均回收率为100.1%,RSD=1.27%.结论 本方法操作简便,测定结果准确可靠,可用于复方烧烫伤搽剂的质量控制.
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虎杖中白藜芦醇苷的大孔树脂吸附工艺研究
目的研究大孔树脂对白藜芦醇苷的吸附工艺.方法考察了白藜芦醇苷的提取条件、白藜芦醇苷纯化时大孔树脂类型、上样液浓度、流速对吸附率的影响,并绘制泄漏曲线以确定佳上样量.结果将虎杖30%乙醇渗漉液浓缩为含白藜芦醇苷0.7774 mg/mL,以3BV/h的流速过D101大孔树脂柱为佳吸附条件,佳上样量为10.88 mg/mL.结论此法操作简单可行,适合工业大生产.
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虎杖商品药材中白藜芦醇苷的含量测定
目的:改善虎杖药材中白藜芦醇苷含量测定的方法,并对不同来源商品药材进行测定.方法:高效液相色谱法,C18 柱为固定相,乙腈-水(20∶80)作为流动相,检测波长为303 nm,流速1mL*min-1.结果:白藜芦醇苷在0.0066～0.0792 μg*μL-1浓度范围内呈现良好的线性关系,相关系数r=0.9999 (n=5);平均回收率为98.5%,RSD为2.5%(n=9).结论:该方法简单、准确,重现性好.不同来源商品药材测定结果表明,白藜芦醇苷含量高达到3.63%,低为1.20%,平均含量为2.23%,差异并不十分悬殊.该方法可作为虎杖质量控制的方法之一.
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大孔吸附树脂吸附纯化虎杖有效部位的研究
目的:研究大孔吸附树脂纯化虎杖有效部位的工艺条件.方法:以白藜芦醇苷、白藜芦醇、大黄素、大黄素甲醚和总蒽醌的吸附量和解吸率为评价指标,筛选树脂,并优化了吸附和洗脱条件.结果:D101树脂对虎杖各有效成分具有较好的吸附分离性能,适于纯化虎杖有效部位.佳工艺条件为:虎杖样品溶液1 BV,吸附流速2.4 BV·h-1,上样后静置30 min,先用2 BV水洗涤,再用20%,50%,70%,95%乙醇各2,5,2,5 BV进行梯度洗脱,流速2 BV·h-1,合并50%和95%乙醇洗脱液,即为纯化的总有效部位.结论:总有效成分纯度为36.87%,说明采用D101树脂分离纯化虎杖有效部位是可行的.
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白藜芦醇苷对大鼠肺间质纤维化的防治作用
目的:建立博来霉素(BLM)诱导的大鼠肺间质纤维化的动物模型,分别给予3种剂量的白藜芦醇苷(PD),观察PD对大鼠肺间质纤维化的防治作用并探讨其可能的作用机制.方法:192只3月龄健康SD大鼠,随机分为正常对照组(A组),肺纤维化模型组(B组),PD低剂量组(C组),PD中剂量组(D组),PD高剂量组(E组),地塞米松组(F组).每组于第3,7,14,28天各随机处死8只.光镜下观察肺组织形态学变化；观察肺组织匀浆中羟脯氨酸(HyP)含量,PLA2活性及支气管肺泡灌洗液(BALF)中前列腺素E2(PGE2),白三烯C4(LTC4)和转化生长因子-β1(TGF-)含量变化.结果:第3,7,14,28天,模型组肺组织匀浆中PLA2活性,BALF中的PGE2,LTC4和TGF-β1含量均较正常组显著增高(P＜0.01),肺组织HyP含量于第7天开始较正常对照组增高(P＜0.05),第28天达高峰；与模型组比较,3种剂量的PD( 10,20,40mg· kg-1·d-1)及地塞米松在各观察时间点均可降低肺组织匀浆中PLA2活性和HyP含量及BALF中的PGE2,LTC4和TGF-β1含量(P＜0.05)；PD组间比较差异有统计学意义(P＜0.05),其中上述指标E组低于D组,D组低于C组；E组与地塞米松组差异无统计学意义；但上述观察指标仍高于正常组(P＜0.01).病理组织形态学提示,PD各组及地塞米松组肺泡炎及肺纤维化程度较轻.结论:PD具有抑制肺间质纤维化的作用,但不能完全阻止其进展过程.
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白藜芦醇苷对乳腺癌细胞转移潜能影响观察
目的 探讨白藜芦醇苷对乳腺癌细胞的迁移及侵袭能力的影响并初步探讨其可能的分子机制.方法 采用MTT法检测白藜芦醇苷对乳腺癌细胞的生长抑制作用,采用划痕实验及Tranwell细胞迁移实验观察白藜芦醇苷对乳腺癌细胞迁移能力的影响,Tranwell细胞侵袭实验观察白藜芦醇苷对乳腺癌细胞侵袭能力的影响,免疫印迹法检测白藜芦醇苷对乳腺癌细胞内转移相关蛋白表达变化的影响.组间比较采用one-way ANOVA和Dunnett法.结果 0～7.0 μmol/L白藜芦醇苷处理乳腺癌细胞MDA-MB-231 48 h后,细胞存活率随着白藜芦醇苷浓度的增加而降低,差异有统计学意义,F=38.394,P＜0.001;同法处理MDA-MB-468细胞株,结果与MDA-MB-231一致,F=107.748,P＜0.001.细胞迁移实验结果显示,与药物未处理组相比,0.5和1.0 μmol/L白藜芦醇苷处理细胞8h后,MDA-MB-231细胞的迁移率显著降低(F=14.461,P=0.005),分别降低了(11.81±0.06)％(P=0.018)和(16.68±0.04)％(P=0.004);MDA-MB-468细胞的迁移率也明显下降(F=42.272,P＜0.001),分别下降了(11.44±0.68)％(P=0.006)和(19.77±0.41)％(P＜0.001).细胞侵袭实验结果显示,与药物未处理组相比,白藜芦醇苷处理MDA-MB-231细胞12 h后,细胞侵袭率明显下降,F=105.793,P＜0.001.0.5μmol/L白藜芦醇苷使MDA-MB-231细胞的侵袭率下降了(43.42±0.54)％,P＜0.001;1.0μmol/L藜芦醇苷使MDA-MB-231细胞的侵袭率下降了(41.92±0.46)％,P＜0.001.白藜芦醇苷处理MDA-MB-468细胞16 h后,细胞的侵袭率也明显降低,F=136.234,P＜0.001.0.5和1.0 μmol/L白藜芦醇苷使MDA-MB-468细胞的侵袭率分别降低了(36.78±0.39)％(P＜0.001)和(38.89±0.86)％(P＜0.001).蛋白质印迹实验提示,白藜芦醇苷对乳腺癌细胞迁移及侵袭能力的抑制作用可能与白藜芦醇苷抑制N-Cadherin及增加E-Cadherin的表达有关.结论 白藜芦醇苷可在体外抑制乳腺癌的迁移及侵袭能力,具有应用于乳腺癌临床治疗的潜能.
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利用基因转化提高虎杖毛状根中活性成分的含量
通过转白藜芦醇合酶(resveratrol synthase,RS)基因提高虎杖毛状根中主要活性成分--白藜芦醇(resveratrol,RE)和白藜芦醇苷(polydatin,PD)的含量.用改进的高盐低pH法提取葡萄基因组DNA,通过PCR扩增获得RS基因序列,构建表达载体pCAMBIA1300-35S-RS,然后采用冻融法转化发根农杆菌ATCC11325,继而浸染划伤的虎杖无菌幼苗叶片,PCR和RT-PCR法鉴定RS基因在虎杖毛状根中的整合与表达,高效液相色谱(highly effective liquid chromatography,HPLC)法测定转基因毛状根中RE及PD的含量.首次成功诱导获得转RS基因虎杖毛状根,经鉴定该基因已在虎杖毛状根中得到整合与表达,RE和PD的含量分别为17～187 μg·g-1 DW和836～1 970 μg·g-1 DW,而未转基因虎杖毛状根中RE和PD的含量分别为0～130 μg·g-1 DW和190～320 μg·g-1 DW.在所选取的不同根系中,转基因毛状根PD的含量均得到显著提高,高含量是未转基因毛状根的5倍,而RE含量提高不显著.
关键词： 虎杖 毛状根 Resveratrol synthase基因 白藜芦醇 白藜芦醇苷 -
高效液相色谱荧光光谱法测定虎杖中的白藜芦醇及其苷的顺、反异构体
目的建立高效液相色谱法,分离和测定虎杖中的白藜芦醇及其苷的顺、反异构体的含量.方法采用Nucleodur 100-5 C18柱(250 mm×4.6 mm ID,5μm);流动相为异丙醇和水二元梯度洗脱系统;流速0.6 mL·min-1;荧光检测器激发波长为334 nm,发射波长为404 nm.结果在选定色谱条件下白藜芦醇及其苷的顺、反异构体线性关系良好.样品加样平均回收率:反式白藜芦醇及其苷分别为96.7%和99.1%;顺式白藜芦醇及其苷分别为91.1%和93.7%.相对标准偏差:反式白藜芦醇及其苷分别为1.34%和0.72%;顺式白藜芦醇及其苷分别为1.27%和2.08%.结论本方法精密度好、结果可靠,适合虎杖中白藜芦醇及其苷的顺、反异构体定量分析.
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虎杖中白藜芦醇苷提取方法及工艺的优化
目的:建立虎杖中白藜芦醇苷的提取方法及工艺.方法:采用回流提取、CO2超临界流体萃取、超声提取的方法,测定虎杖中白藜芦醇苷的含量.结果:从虎杖中提取白藜芦醇苷的佳工艺为20倍75%乙醇回流提取1 h,白藜芦醇苷的得率达到25.8 mg·g-1.结论:采用乙醇回流方式提取白藜芦醇苷的效果明显优于水回流提取、CO2超临界流体萃取以及超声提取的效果.
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ATP敏感性钾通道和线粒体通透转换孔参与白藜芦醇苷的心肌保护作用
目的 探讨白藜芦醇苷(Poly)对大鼠缺血再灌注(I-R)心肌损伤的保护作用及其机制.方法 应用Langendorff室技术制备离体大鼠心脏I-R损伤模型.雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、Poly(25, 50和75 μmol·L-1)组、格列本脲(Gli)+Poly组、5-羟基癸酸(5-HD)+Poly组和苍术苷(Atr)+Poly组.对照组心脏由K-H液灌流110 min;模型组由K-H液灌流20 min后, 停灌30 min, 复灌60 min;Poly组在I-R处理前用含不同浓度Poly的K-H液灌流10 min;Gli+Poly和5-HD+Poly组在I-R前分别用含Gli (10 μmol·L-1)和5-HD(100 μmol·L-1)的K-H液灌流5 min,再加入Poly (50 μmol·L-1)灌流10 min;Atr+Poly组用含Poly(50 μmol·L-1)K-H液灌流10 min及停灌30 min后,先用含Atr(20 μmol·L-1)的K-H液灌流15 min, 然后改用K-H液灌流.分别记录各组停灌前、停灌30 min和复灌60 min内的左心室舒张末压(LVEDP)、左心室舒张压(LVDP)、左心室等容期压力大变化速率(±dp/dtmax)和冠脉流量(CF)等心功能指标.心脏复灌60 min后,用氯化三苯基四氮唑染色法测定心肌梗死面积,透射电镜下检测心肌超微结构变化.结果 缺血前各组心功能参数无明显变化.与模型组相比,Poly可浓度依赖性地促进大鼠I-R后心功能的恢复,预防I-R损伤.复灌60 min后,Poly组大鼠心脏LVDP,±dp/dtmax和CF明显高于模型组;LVEDP则低于模型组;缺血前给予Poly(50 μmol·L-1)10 min可明显减小I-R后心肌梗死面积, 并改善心肌超微结构.Gli, 5-HD和Atr可阻断Poly对I-R心脏心功能参数和心肌梗死面积等的保护作用.结论 Poly具有明显的抗心肌I-R损伤作用,其心脏保护作用可能与其增加细胞膜和线粒体膜ATP敏感性钾通道开放和抑制线粒体通透转换孔开放有关.
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中药虎杖商品药材的定性鉴别与定量分析
目的建立较为合理的中药虎杖的质量评价标准.方法化学定性鉴别采用TLC法,含量测定采用HPLC法.结果以白藜芦醇苷和大黄素为对照品,以不同的展开系统展开,建立了虎杖的TLC定性鉴别方法;以白藜芦醇苷为对照品建立了HPLC含量测定方法.结论建立的TLC方法对虎杖药材的鉴别具有较好的专属性,能够区别虎杖与同科属常用药材(2000年版中国药典收载的同科根与根茎类药材).本文建立的测定白藜芦醇苷含量的HPLC法简单、准确,重现性好.
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兴安藜芦乙酸乙酯部位化学成分的研究
目的 对百合科藜芦属植物兴安藜芦乙酸乙酯部位的化学成分进行研究.方法 采用柱色谱分离,通过理化和波谱分析方法鉴定化合物的结构.结果 从其乙酸乙酯部位分离得到6个化合物,经理化与波谱分析鉴定,分别为vemmitaline (Ⅰ),计明碱(Ⅱ),藜芦托素(Ⅲ),伪介芬胺(Ⅳ),白藜芦醇苷(Ⅴ),mulberroside A (Ⅵ).结论 化合物Ⅰ～Ⅱ, Ⅳ-Ⅵ为首次从该植物中分得,其中化合物Ⅵ是首次从该属植物中分得.
关键词： 兴安藜芦 藜芦托素 伪介芬胺 白藜芦醇苷 mulberroside A -
白藜芦醇苷对内毒素休克大鼠肺组织中磷脂酶A2的影响
目的探讨白藜芦醇苷(PD)对内毒素休克大鼠肺组织中磷脂酶A2(PLA2)的影响.方法将32只大鼠随机分为4组:单纯手术组(A)、内毒素休克组(B)、PD治疗组(C)和PD预防组(D).采用酸式滴定法检测肺组织中PLA2活性,RT-PCR法检测sPLA2-ⅡA的基因表达.结果PD可抑制内毒素所致的PLA2活性增高及sPLA2-ⅡAmRNA表达增强,减轻肺损伤的程度,并且预防性应用的效果优于治疗效果.结论PD可通过抑制PLA2的活性增高和基因表达增强,从而对内毒素休克大鼠的肺脏具有保护作用.PD可能是一种PLA2抑制剂.
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虎杖苷的药理作用研究进展
虎杖苷是虎杖等中药的有效成分,其是白藜芦醇与葡萄糖结合的产物,因而也称为白藜芦醇苷,其药理作用与白藜芦醇类似,可在体内相互转化,但虎杖苷具有更强的抗氧化作用和稳定性.虎杖苷具有调节离子通道以及蛋白激酶的作用,广泛应用于改善心肌损伤、改善血管内皮功能障、抑制血小板聚集、抗氧化、抗休克、抗肺动脉高压、降血脂以及抗血栓形成等,提示其具有重要的开发和临床应用价值.
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白藜芦醇苷固体分散体的制备及体内外评价
目的 制备白藜芦醇苷(PD)固体分散体(SD),以期提高PD的生物利用度.方法 以溶出度为指标,采用溶剂蒸发法制备PD-SD,利用傅里叶变换红外光谱(FT-IR)、差示扫描量热分析(DSC)、粉末X衍射(XRD)和扫描电子显微镜(SEM)对PD-SD进行表征.采用HPLC法测定大鼠ig给药后的血药浓度.结果 PD-SD的体外溶出度较PD明显提高,FT-IR显示药物与载体间没有形成新的化学键,DSC和XRD结果显示PD在载体中以无定型的形式存在,SEM结果表明制备成的PD-SD外观形态为不规则球形.ig给药后,PD-SD和PD的药时曲线下面积(AUC0-∞)分别为328.79、139.70 μg.min/mL.结论 溶剂蒸发法制备PD-SD工艺简单可行,PD-SD能显著提高PD的生物利用度.
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汉中地区虎杖中白藜芦醇苷及苷元含量的测定
目的测定汉中地区虎杖中自藜芦醇苷及苷元的含量.方法采用HPLC法直接测定,色谱柱为EclipseXDB C8柱,流动相为乙腈-水,流速为1 mL/min,检测波长为303nm.结果虎杖中白藜芦醇苷的含量为2.5%,白藜芦醇的含量为0.43%.结论汉中地区虎杖中白藜芦醇的含量为首次报道,白藜芦醇苷的含量高于文献报道的结果.
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炮制对虎杖中白藜芦醇苷和大黄素的影响
目的探讨炮制对虎杖及其炮制品中有效成分的影响.方法采用薄层色谱法对炮制品中白藜芦醇苷和大黄素进行定性分析,并采用薄层扫谱法和HPLC法对大黄素进行定量分析.结果酒炙品、醋炙品、盐炙品中大黄素含量与生品相比有不同程度的增加.结论不同炮制方法、辅料对虎杖中大黄素含量有一定的影响.
