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高效液相色谱仪基本原理、应用及常见故障
本文介了高效液相色谱仪的系统组成、工作原理、应用及岛津LC-10AT高效液相色谱仪常见故障维修.
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HP1100高效液相色谱仪的常见故障分析
高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析[1].本文介绍了其在使用过程中出现的故障及维修方法,以供参考.
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高效液相保养与维修一例
本文简要的介绍了高效液相的组成和保养注意事项以及在线脱气机故障的维修
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消炎片中黄芩苷成分的含量测定研究
目的:建立消炎片中黄芩的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法测定消炎片中黄芩的黄芩苷的含量;采用EclipseXDB-C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-0.2%磷酸水(40:60);流速:1.0mL/min;柱温:25℃;检测波长为280nm.结果:黄芩苷在0.12～2.32μg(r=0.9998)范围内呈良好线性关系,精密度试验RSD为0.90%(n=6),加样回收率98.9%,RSD为1.22%.结论:本法简便、快捷,可作为消炎片质量控制的依据.
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银连片中对乙酰氨基酚成分的含量测定研究
目的:建立银连片中对乙酰氨基酚的含量测定方法.方法:采用高效液相色谱法测定银连片中对乙酰氨基酚的含量;采用EclipseXDB-C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相:甲醇-0.5%冰醋酸溶液(20:80)为;检测波长249nm;流速1.0ml/min,柱温为30℃.结果:对乙酰氨基酚在0.11～2.16μg(r=0.9997)范围内呈良好线性关系,精密度试验RSD为1.03%(n=6),加样回收率99.9%,RSD为0.88%.结论:本法简便、快捷,可作为银连片质量控制的依据.
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测定脐血血清游离氨基酸评估新生儿营养状况
目的:测定并建立本地区新生儿脐血氨基酸的正常值,探讨其变化规律及作为营养指标的科学性与可行性.方法:2003年9～11月随机抽取大连市妇产医院自然分娩新生儿82名(适于胎龄儿50名、小于胎龄儿9名、大于胎龄儿23名),孕龄39.45±1.25周,出生体重3 456.09±427.19g.采用高效液相色谱,AccQ.Tag柱法测量脐血血清游离氨基酸含量.结果:AccQ.Tag法使标准品和样品的所有峰得到良好的分离,脐血氨基酸总含量分别为适于胎龄儿组4.088±2.356 9 μmol/ml,小于胎龄儿组2.671 1±1.696 6μmol/ml,大于胎龄儿组4.∞7 4±L 882 5 μmol/ml.结论:高效液相色谱方法测定氨基酸准确,可靠,重现性好,此方法分析脐血氨基酸是可行的.脐血氨基酸有望成为评估胎儿宫内营养状况的生化指标.对不同胎龄儿组氨基酸的相关性比较推测,胎儿的宫内营养状况可能与母血营养的协调供给有关.
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复方左炔诺孕酮阴道环中有关物质检测的方法学研究
目的:建立复方左炔诺孕酮(LNG)阴道环中有关物质的高效液相色谱(HPLC)检测方法,并对该方法进行方法学研究.方法:经紫外光谱法确定吸收波长,利用双波长法进行HPLC的检测.在强酸、强碱、高温、氧化剂、强光照等条件下,分别对注塑成型法制备的LNG和炔雌醇(EE)阴道环进行破坏试验.利用HPLC法考察阴道环的稳定性、精密度、检测限等.实验方法为色谱柱DiamonsilR C18(250 mm×4.6mm,5μm);流动相乙腈-水体积比52:48;LNG和EE的检测波长分别为240 nm和205 nm;柱温35℃;流速1.0 ml/min.结果:专属性实验结果显示,复方LNG阴道环主成分与相关杂质及降解产物均分离良好,空白辅料对测定无干扰.结论:所建立的复方LNG阴道环中有关物质的测定方法操作简单、专属性强、重复性好.
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放射增敏剂沙纳唑的生物利用度研究
目的:探讨放射增敏剂沙纳唑的生物利用度的价值.方法:沙纳唑由本实验室合成,经质谱鉴定后使用,内标物为甲硝唑.测定血药浓度的仪器为日本岛津LC-10A高效液相色谱仪.C18柱(25cm×Φ4.6mm×10um),流动相为甲醇:水(15:85,V:V).紫外检测,检测波长252nm;内标物浓度为100ug/ml的甲醇液.血清经提取后的校正曲线回归方程为Y=0.01137+0.0068x,相关系数R=0.9998,(n=7).提取方法平均回收率(%)为84.9±9.8(n=3).日内和日间精密度在10%以内,按3倍噪音计算,血清中沙纳唑的灵敏度为1μg/ml.大鼠每组5只,共两组,分别静注和肌注200μg/kg沙纳唑溶液,药后按设定时间点取血.用高效液相色谱法测血清中药物浓度,绘制血药浓度曲线,得出两个注射剂的峰值Cm和达峰时间Tm以及曲线峰下面积AUC.结果:静注给药后的数据峰值Cm为754.4±170.3μg/ml,达峰时间Tm为药后立即,AUCiv为21752μg. min/ml;肌注给药后Cm为205.5±12.0μg/ml,Tm为药后30min,AUCim 为16643μg. min/ml.经计算得出肌肉注射的绝对生物利用度为76.51%.结论:放射增敏剂沙纳唑能增加肿瘤组织对射线的敏感性,提高放射治疗的效果,具临床实用价值.
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实验性脑积水脑磷酸化合物含量变化
目的探讨实验性狗脑积水高能磷酸化合物及AMP含量变化.方法成年健康杂种狗随机分为诱导后3天、8天、4个月和对照组4组.经穿刺枕大池,注入白陶土(kaolin)悬混液诱导、建立经CT证实的狗脑积水模型.经高效液相色谱(HPLC)检测右侧顶叶1cm3离体脑组织高能磷酸化合物及AMP含量.结果同对照组比,脑积水脑组织AMP、ADP、ATP及磷酸肌酸(PCR)等的含量均下降,但不呈现一致性变化趋势.脑积水诱导后脑PCR的变化比ATP敏感,先于ATP下降,3天达显著差异(P＜0.05).诱导8天PCR几乎耗竭,ATP和ADP下降也严重(P＜0.01).4个月组经代偿ADP与PCR恢复良好,ATP与AMP部分恢复,但均低于对照组.结论脑积水早期脑处于能量状态极度困难时期,存在急性进行性缺血;脑积水慢性期脑仍持续存在轻度灌注和产能低下.
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米氮平血药浓度的高效液相色谱检测法
目的建立反相高效液相色谱检测抗抑郁新药米氮平血药浓度的方法.方法采用日本岛津LC-10DVP高效液相色谱仪,大连依利特Sinochrom-C18分析柱,检测波长为292nm,柱温40℃,甲醇、磷酸铵缓冲液的移动相,流速为1ml/min,乙醚提取处理样本,以丙米嗪为内标.结果批内、批间试验:RSD＜4.9%,回收率:100.0%-119.0%.低检测限:3ng/ml.线性方程:Y=133.4X-4.5,r=0.9999,线性范围:5-160ng/ml.结论该方法快速、简便、正确、适合临床药物治疗时血药浓度的监测以及药代动力学的研究.
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HPLC测定复方碳酸钙咀嚼片中微量维生素D3的含量
目的测定复方碳酸钙咀嚼片中微量维生素D3含量.方法异丙醇-水(50:50),回流皂化提取制剂是微量维生素D3,采用正相硅胶柱,正已烷:异丙醇(994:6)为流动相,分别以265nm和254nm为检测波长,进行系统适应性试验.结果适应性试验结果维生素D3及分解产物在265nm波长测定的峰面积明显地大于254nm峰面积,其回收率为:96.16±1.88%,RSD为2.44%.结论该法简便、快速、专属性强,适用于含微量维生素D3制剂的质量控制要求.
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茶碱缓释片剂的犬药代动力学
目的测定犬血浆中茶碱浓度,并应用于茶碱缓释片剂的犬药代动力学研究.方法12只健康犬随机分为两组,进行双交叉自身对照试验.采用高效液相色谱柱切换技术,样品在线净化富集预处理和组分分离测定.药代动力学参数采用3P87程序计算.结果茶碱缓释片剂的主要药代动力学参数Cmax,tmax,AUC0 48,AUC0∞是(11.52±2.68 and 8.513±1.18)mg·L1,(7.763±1.61 and 8.969±0.965)h,(230.5±32.9 and 201.9±29.1)mg·h1·L1,(226.9±35.9 and 207.6±31.4)mg·h1·L1.结论提供了中国犬茶碱缓释片剂药动学参数,供临床参考.
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欧洲越橘类保健食品中花色苷含量测定方法的研究
目的 建立一种快速、简单测定欧洲越橘类保健食品中花色苷的方法.方法 将样品回流水解,使花色苷水解成花色素苷元,用高效液相色谱法对苷元矢车菊素进行定性及定量分析,以矢车菊素含量表征花色苷含量.采用Xtimate C18柱(250 mm×4.6 mm × 5μm),流动相A:0.4%三氟乙酸(TFA)水溶液,流动相B:0.4%TFA乙腈,梯度洗脱,流速1 ml/min,检测波长190～800 nm,柱温35℃.结果 矢车菊素在2～100μg/ml范围内线性良好,r=0.999 9,平均加标回收率为95.1%～97.2%,检出限为0.005μg/ml.结论 该法简便、准确、灵敏度高,是快速测定欧洲越橘类保健食品中花色苷含量较合适的方法.
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红曲霉中桔霉素定量分析及其合成相关基因簇的研究
目的 对红曲霉中真菌毒素桔霉素进行定量分析,并研究桔霉素合成相关基因簇,为从基因水平上对桔霉素的产生进行调控、提高红曲霉相关食品的安全性提供理论依据.方法 采用高效液相色谱(HPLC)法对3株红曲霉(紫色红曲霉YY-1、M2,丛毛红曲霉FJ-1)在液态发酵过程中产生的桔霉素开展定量分析,采用二代测序技术鉴定桔霉素合成基因簇的序列特征,应用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法进行相关基因表达水平分析.结果 在固态培养和液态发酵过程中,3株红曲霉菌体生长情况无明显差异;在液态发酵过程中,HPLC结果显示M2桔霉素产量高,其次为YY-1,F J-1产量少;M2、YY-1、F J-1桔霉素合成基因簇相似度达99.9％;膜转运蛋白基因(orf5)、聚酮合酶基因(pksCT)、氧化还原酶基因(ctnB、转录调节蛋白基因(ctnA)、脱氢酶基因(orf1、ctnE)六个基因表达水平在M2中高,在FJ-1中低.结论 桔霉素的产量差异与桔霉素合成基因簇所表达酶的种类无关,而与其基因表达的调控相关.
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高效液相色谱-示差折光法测定保健食品中的低聚木糖
目的 建立高效液相色谱-示差折光测定保健食品中的低聚木糖(以木糖计)的方法.方法 样品经水提取,在沸水浴中用硫酸水解,用氢氧化钠调成中性后以乙腈+水(70+ 30)为流动相,通过氨基柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离后用示差折光检测器检测,同一样品在水解前后木糖含量的差值即为样品中低聚木糖的含量.结果 被测组分浓度(0.30～4.50 mg/ml)与峰面积线性关系良好(r=0.999 9);相对标准偏差1.86％～3.80％(n=6),在固体保健食品中加标回收率为90.3％～93.6％和92.6％～98.3％；在液体保健食品中加标回收率为89.0％～97.0％和91.0％～96.0％.结论 本方法快速、灵敏、重现性好,适用于测定保健食品中的低聚木糖.
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基质固相分散-高效液相色谱法测定蜂蜜中10种磺胺类药物
目的 建立基质固相分散一高效液相色谱法测定蜂蜜中10种磺胺类药物残留量的方法,包括磺胺、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲氧嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲噁唑和磺胺二甲异噁唑.方法 蜂蜜样品与C,:固相吸附荆于玻璃研钵中研磨均匀,得半干状混合物,装入空的固相萃取管中,盖上一层滤纸,以1+3二氯甲烷-乙酸乙酯(V/V)为洗脱剂洗脱,洗脱液经氮气吹干,用流动相溶解残渣,经0.45 μtm滤膜过滤,Agilent TC-C_18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱分离,高效液相色谱法测定.结果 10种磺胺类药物的线性范围为0.10～10.00 mg/L,相关系数r > 0.999,样品加标回收率60.0%～109.3%,相对标准偏差小于10%,方法检出限0.016-0.025 mg/L,样品中磺胺类检出限为0.050～0.079 mg/kg.
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高效液相色谱法同时测定保健食品中红景天苷和腺苷
目的 建立同时测定保健食品中的红景天苷和腺苷含量的高效液相色谱测定方法.方法 采用50％甲醇为溶剂,超声提取样品中的的红景天苷和腺苷成分.采用shim-pack CLS-ODS色谱柱(150 mm ×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇+ 20 mmol/L磷酸二氢钾水溶液(15 +85,V/V),流速1.0 ml/min,进样量10 μl,紫外检测波长为红景天苷275 nm,腺苷260 nm.结果 红景天苷在10.0 ～200 μg/ml范围内线性良好(r=0.999 5),平均回收率92.5％～99.5％,精密度2.8％～4.7％(n=6)；腺苷在2.50～50.0μg/ml范围内线性良好(r=0.999 6),平均回收率90.0％～ 94.0％,精密度2.1％～5.2％(n=6).红景天苷和腺苷检出限LOD分别为0.01和0.005μ g/g.结论 本方法快捷、简便、灵敏度高,可准确同时测定保健食品中的红景天苷和腺苷含量.
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热处理与大豆异黄酮苷元的转化分析
目的 研究不同加热处理后大豆异黄酮苷元的含量和比例变化情况.方法 大豆样品经烘箱50、100和150℃烘干,微波加热5 min和炒熟等热处理后,由80%乙醇溶液超声提取,经高效液相色谱SB-C18柱(4.6 mm×250 mm,5μm)分离,0.2%冰乙酸+甲醇溶液梯度洗脱,紫外检测器260 nm检测苷元和β-葡萄糖苷型大豆异黄酮含量.结果 黄豆中检测出黄豆苷元、染料木素2种苷元和黄豆苷、黄豆黄苷2种β-葡萄糖苷.随烘箱加热温度升高,黄豆苷元含量增加1～5倍;染料木素增加3～15倍.炒豆中苷元和β-葡萄糖苷增加量多.微波加热与50℃烘箱加热结果基本相同.青豆、黑豆与黄豆结果相近.结论 加热使豆粉中部分糖苷型大豆异黄酮分解转化为苷元,活性成分增多,营养保健价值提高.
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固相萃取-高效液相色谱法双检测器同时测定水中莠去津和苯并(a)芘
目的 建立固相萃取-高效液相色谱法双检测器同时测定水中莠去津和苯并(a)芘分析方法.方法 用大体积固相萃取柱富集莠去津和苯并(a)芘,二氯甲烷洗脱,使用Eclipse XDB-C18分析柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),采用乙腈-水体系作为流动相,梯度洗脱,二极管阵列检测器(DAD)和荧光检测器(FLD)检测.结果 方法线性范围莠去津和苯并(a)芘分别为50 ～ 800 μg/L、5.19 ～ 83.04 μg/L,r均＞0.999;方法检出限分别为0.01、0.000 5μg/L;定量限为0.03、0.0015μg/L;莠去津和苯并(a)芘在水中平均回收率分别为88.9％和90.4％;RSD均＜6.8％.结论 该方法准确灵敏、精密度好,适用于水样中莠去津和苯并(a)芘测定.
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高效液相色谱-紫外检测法快速测定小麦面粉中偶氮甲酰胺
目的 建立小麦粉中偶氮甲酰胺的高效液相色谱快速检测法.方法 样品经二甲亚砜-丙酮混合溶剂超声振荡提取,采用Hypersil-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为10 mmol/L H2SO4水溶液,流速为1 ml/min,检测波长为275 nm,进样量20μl,二极管阵列检测器定量.结果 偶氮甲酰胺在0.01～1.00 mg/ml范围内呈良好线性关系,相关系数r =0.999 2,RSD＜4.3％,平均回收率为95.9％;山东地区85份样品偶氮甲酰胺含量检测结果均小于检出限,符合现行限量标准.结论 本方法准确可靠,方便快捷,灵敏度高,适合于大批量小麦粉中偶氮甲酰胺的检测.
