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红曲霉中桔霉素定量分析及其合成相关基因簇的研究
目的 对红曲霉中真菌毒素桔霉素进行定量分析,并研究桔霉素合成相关基因簇,为从基因水平上对桔霉素的产生进行调控、提高红曲霉相关食品的安全性提供理论依据.方法 采用高效液相色谱(HPLC)法对3株红曲霉(紫色红曲霉YY-1、M2,丛毛红曲霉FJ-1)在液态发酵过程中产生的桔霉素开展定量分析,采用二代测序技术鉴定桔霉素合成基因簇的序列特征,应用实时定量聚合酶链式反应(RT-PCR)法进行相关基因表达水平分析.结果 在固态培养和液态发酵过程中,3株红曲霉菌体生长情况无明显差异;在液态发酵过程中,HPLC结果显示M2桔霉素产量高,其次为YY-1,F J-1产量少;M2、YY-1、F J-1桔霉素合成基因簇相似度达99.9％;膜转运蛋白基因(orf5)、聚酮合酶基因(pksCT)、氧化还原酶基因(ctnB、转录调节蛋白基因(ctnA)、脱氢酶基因(orf1、ctnE)六个基因表达水平在M2中高,在FJ-1中低.结论 桔霉素的产量差异与桔霉素合成基因簇所表达酶的种类无关,而与其基因表达的调控相关.
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高效毛细管电泳分析法检测中药红曲的桔霉素含量
目的:建立高效毛细管电泳法测定中药红曲中微量毒性成分桔霉素的方法.方法:采用复合提取剂提取红曲样品,熔融石英毛细管柱50 μm×45 cm(有效长度40 cm);缓冲体系为20 mmol·L-1硼砂含10 mmol·L-1脱氧胆酸钠(pH 9.3),进样压力34.5 kPa,分离电压15 kV(恒压方式),柱温25℃,检测波长212 nm.结果:桔霉素检测的回归方程为Y=9 434+16 781X(r=0.990);低检测限为0.5 mg·mL-1,相对回收率98.8%～101.1%,日内和日间RSD分别为0.83%～1.54%和1.86～5.09%.结论:本法灵敏准确,简便易行,重现性好,专属性强,可用于中药红曲桔霉素含量的检测.
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桔霉素液用于浅Ⅱ度烧伤的疗效观察
在诸多烧伤因素中,一般热力烧伤占80%左右,主要有热液、热灰、蒸气、高温金属、火焰等引起的人体皮肤或组织的损伤[1].我院门诊治疗的烧伤病人以小面积浅Ⅱ度居多,此类病人的创面感染率很高,占治疗病人的50%左右.其原因,一方面是病人对小面积浅Ⅱ度烧伤重视不够,而延误治疗所致;另一方面是缺乏较理想的止痛抗感染的外用药品.为此,自1994年3月-1996年4月我院采用桔霉素液治疗小面积浅Ⅱ度烧伤50例,效果满意,现报告如下:
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红曲中桔霉素的检测及控制
红曲是指以大米为原料,用红曲菌属(Monascus spp.)红曲霉发酵培养制得,具有红色的颗粒或用其制成的粉末.目前红曲可分为色曲、酒曲和功能性红曲.在红曲霉的发酵过程中,同时与红曲色素相伴产生一种有害的次级代谢产物一桔霉素.研究表明桔霉素具有肾毒性,可致畸、致癌和诱发基因突变.桔霉素的存在,制约了红曲在食品及药品方面的广泛应用,在一定程度上阻碍了红曲产业的发展.为此,在红曲生产中如何快速准确检测桔霉素以及有效地防控桔霉素,是我们当前迫切需要解决的问题.本文对近年来国内外红曲中桔霉素的检测方法及控制策略进展进行了综述.目前,桔霉素的检测方法主要有抑菌圈法、TLC法、酶联免疫法和HPLC法等,其中HPLC法是检测红曲中桔霉素高效且应用广泛的方法.桔霉素的控制主要从菌种选育,发酵工艺及产品后续处理等方面进行调控.目前尚没有成熟的控制策略全部去除桔霉素,只有采用低产桔霉素的菌种,适合的生产工艺及结合后续的物理或化学处理等综合措施,生产出符合桔霉素控制标准的高品质红曲产品.
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液相色谱-串联质谱法检测食品中的桔霉素
目的:建立食品中桔霉素的液相色谱-质谱测定方法.方法:样品经处理后,以水(含0.1%甲酸)+乙腈=40+60作流动相,在Hypersil Gold液相色谱柱(150×2.1 mm,3um)上进行分离;用三级四极质谱检测器:电喷雾源(ESI),正离子方式,选择反应监测(SRM)对桔霉素的母离子和子离子进行监测并定性定量.结果:本方法桔霉素的标准在0.01～100 ug/L范围内线性良好,Y=1042863X-588493,r=0.9998,方法的精密度(RSD)为2.8%,样品回收率95.6%～98.0%,以母离子(m/z 251),子离子(m/z 233和m/z 205)为定性定量离子,检测限为0.01ug/L,取样品5 g,处理定容体积10.0 ml,样品中桔霉素小检测浓度达0.02 ug/kg.结论:本方法简便快速、灵敏、定性定量准确,适合食品中桔霉素的测定.
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红曲药材中活性成分洛伐他汀和毒性成分桔霉素的HPLC-DAD/FLD测定
目的 建立HPLC方法测定红曲中酸式、酯式洛伐他汀,以及毒性成分桔霉素.方法 采用碱水解法以正交试验法为工具考察酯式洛伐他汀转化为酸式洛伐他汀的优选条件;建立HPLC-DAD法同时测定其酸式和酯式洛伐他汀,并用于测定洛伐他汀的转化率及红曲中两种洛伐他汀的含量;同时建立HPLC-FLD法测定红曲药材中桔霉素的含量.结果 酯式洛伐他汀水解为酸式洛伐他汀的条件为:2mg洛伐他汀加入0.1 mol·L-1 NaOH溶液5ml,于40℃加热40 min水解后,调节溶液pH至7.7.酸式、酯式洛伐他汀含量测定方法学研究表明:在2.088 ～ 208.8 μg·ml-1范围内线性关系良好,在乙腈溶液中其稳定性良好(RSD＜1.5％),红曲药材中测定酸式、酯式洛伐他汀回收率102.75％ ～ 104.67％(RSD＜3.0％).桔霉素测定方法学研究表明:在25.2～6300 ng·ml-范围内线性关系良好,桔霉素的回收率为100.73％(RSD＜3.0％).结论 建立HPLC-DAD方法测定酸式、酯式洛伐他汀简便、快速、准确,适用于洛伐他汀总量的测定.建立HPLC-FLD方法经方法学验证表明其灵敏度高、准确度高、专属性强,适用于红曲药材中微量毒性成分桔霉素的限度检查.
关键词： 碱水解 酸式洛伐他汀 酯式洛伐他汀 桔霉素 HPLC-DAD/FLD -
HPLC法检测血脂康胶囊中的桔霉素
目的 建立血脂康胶囊中桔霉素的HPLC检测方法,并同时考察数批市售相关红曲产品中桔霉素的含量.方法 采用HPLC法,色谱柱 Aichrombond-AQ C18柱(250 mm×4.6mm,5μm),流动相 乙腈-水(磷酸调节pH2.5),梯度洗脱,柱温 28℃,流速 1.0 ml·min -1,荧光检测,波长 λex=331 nm、λem=500 nm.结果 桔霉素在0.21 ～10.74 ng范围内线性关系良好(r=0.999 9),低检测限为0.0037 ng.血脂康胶囊及红曲保健品中均未检出桔霉素,而其他红曲产品中检出桔霉素,其含量在0.1 ～549.0 mg·kg-1范围内不等.结论 方法准确、灵敏度高,可有效地控制血脂康胶囊及其他红曲产品质量.
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固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定脂必妥片中桔霉素的残留量
目的:采用固相萃取-超高效液相色谱-串联质谱法测定脂必妥片中桔霉素的残留量.方法:采用固相萃取法进行前处理,色谱柱为Zorbax Eclipse Plus C18,流动相为水(加0.1%甲酸)-乙腈(70:30,V/V)(梯度洗脱),流速为0.30 mL/min,柱温为40℃,分析时间为7 min,进样量为2μL;离子化模式为正离子模式,离子源温度为150℃,干燥气流速为15 L/min,鞘气温度为350℃,鞘气流速为12 L/min,毛细管电压为3500 V,雾化器压力为40 psi,喷雾电压为0 V,工作模式为多反应监测模式.结果:桔霉素检测质量浓度线性范围为0.1~20 ng/mL(r=0.9994);定量限和检测限分别为0.05、0.01 ng/mL;精密度、稳定性、重复性试验的RSD<2.0%;加样回收率为98.868%~103.160%(RSD=1.5%,n=6).结论:该方法简便快速、灵敏、结果准确,适用于脂必妥片中桔霉素的残留量测定.
关键词： 超高效液相色谱-串联质谱法 固相萃取 桔霉素 残留量 脂必妥片 -
RP-HPLC测定红曲中的桔霉素
目的 采用HRP-HPLC测定中药红曲中的微量毒性成分桔霉素.方法 用复合提取剂提取红曲样品,采用Irrogulour-C18柱(250 mill ×4.6 mm,10um);流动相为乙腈-水(15:85,pH2.8);流速1 ml·min-1;柱温25℃;荧光检测,波长λex=331 am、λ=500 nm.结果 桔霉素7～220 ng与峰面积的线性关系良好(r=0.9999),低检测限0.5 ng,相对回收率99.8%～103.2%,日内和日间RSD分别为1.76%～3.31%、3.96%～5.02%.16批红曲发酵物中的桔霉素平均含量为21.4±19.1ug·kg-1.结论 所用方法灵敏准确、简便、重复性好、专属性强,可用于中药红曲中桔霉素的检测.
