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苯并[a]芘作用下ADP-核糖基化修饰蛋白分析方法的建立
目的 建立苯并[a]芘(B[a]P)作用下ADP-核糖基化修饰蛋白分析方法.方法 使用免疫共沉淀技术收集可能发生ADP-核糖基化修饰的蛋白,同步使用高效液相色谱技术和双向电泳技术对蛋白进行分离,再进行MALDI-TOF-MS/MS鉴定,比较两种分离方法鉴定蛋白的差异,并将鉴定蛋白的氨基酸序列与文献报道的ADP-核糖基化修饰蛋白的保守序列进行比对.结果 通过高效液相色谱分离结合质谱鉴定找出3个蛋白,双向电泳分离结合质谱鉴定找出12个蛋白,双向电泳分离结合质谱鉴定方法存在明显优势;所鉴定蛋白存在与文献报道的ADP-核糖基化修饰蛋白相似的保守序列.结论 免疫共沉淀蛋白双向电泳分离结合质谱鉴定方法可用于分析ADP-核糖基化修饰蛋白,并发现ADP-核糖基化蛋白存在相对保守的结合序列.
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高效液相色谱法测定血清中的9种多环芳烃
目的 建立固相萃取—高效液相色谱同时测定血清中蒽、荧蒽、芘、苯并[a]蒽、苯并[b]荧蒽、苯并[k]荧蒽、苯并[a]芘、苯并[a,h]蒽和苯并[g,h,i]芘9种多环芳烃的高效液相色谱测定方法.方法 样品经过C18固相萃取小柱富集、净化,以甲醇洗脱后,采用Waters Symmetry C18色谱柱,以乙腈为流动相A,高纯水为流动相B梯度淋洗,流速为1.0 ml/min,荧光检测器测定,检测波长为Ex=340nm,Em=425nm.结果 在给定浓度范围内各多环芳烃的峰面积与浓度具有良好的线性关系.其线性范围为0.10～3.00ng/ml；相关系数为0.9941 ～0.9999;回收率为87.1％～113.4％；相对标准偏差为2.56％～12.7％；检出限为0.05 ～0.10ng/ml.结论 该方法可用于血清中9种多环芳烃的同时测定.
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固相萃取-高效液相色谱法测定食品中的靛蓝和亮蓝
目的 建立固相萃取-高效液相色谱法测定多种类食品中靛蓝、亮蓝的检测方法.方法 采用固相萃取技术,用乙腈水溶液提取样品中色素并经WAX小柱净化,以甲醇-0.02 mol/L乙酸铵溶液作为流动相梯度洗脱,经Waters Symmetry C18(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱分离,运用高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-PDA)检测.结果 该方法靛蓝、亮蓝在0.50 ～ 20.00 tμg/mL范围内有较好的线性关系,均r＞0.999;靛蓝和亮蓝的方法检出限分别为0.04和0.02 mg/kg;样品加标平均回收率为81.8% ～ 101.1%,相对标准偏差为2.1%～4.9%(n=6).结论 该方法具有较高的选择性和灵敏度,回收率和重现性良好,可用于GB 2760-2014食品分类系统中多种类食品中靛蓝、亮蓝含量的分析.
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高效液相色谱法检测化妆品中5种限用防腐剂
目的 开展化妆品中5种限用防腐剂(氯己定、苯甲酸、氯二甲酚、o-苯基苯酚和p-氯-m-甲酚)检测方法的研究.方法 以甲醇提取市售10种化妆品中5种防腐剂组分,饱和氯化钠溶液作为沉淀剂,以Agilent Eclipse XDB-C18 (250 mm×4.6mm,5μm)为色谱分析柱,甲醇-0.1 mol/L磷酸二氢钠水溶液(pH 3.0)为流动相洗脱,流速为1.0 ml/min,检测波长为285 nm进行测定.结果 氯己定等5种防腐剂在一定浓度范围内呈良好线性,相关系数均大于0.9990,检出限(LOD)为0.8～2.2ng,方法的回收率为95.0％～104.0％.结论 该方法准确可靠,是对规范方法有益的补充.
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高效液相色谱法测定去屑香波中水杨酸、吡啶硫酮锌吡啶酮乙醇胺、甘宝素和酮康唑5种去屑剂
建立了高效液相色谱法同时测定去屑香波中的水杨酸、吡啶硫酮锌(ZPT)、吡啶酮乙醇胺、甘宝素和酮康唑5种去屑剂.在C18(5μm,4.6mm×150mm)色谱柱上,以乙腈:甲醇:水(10mmol/L磷酸二氢钾和0.5mmol/L EDTANa2,磷酸调pH4.0)=50:10:40为流动相,流速为1.0ml/min;二极管陈列检测器检测波长为230nm,柱温为25℃下检测.该方法各组分变异系数小于3.8%,加标回收率在92.7%～104.9%之间,具有操作简便、准确、快速等特点.
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化妆品中维生素D2、维生素D3的高效液相色谱测定
目的建立化妆品中维生素D2、维生素D3的高效液相色谱检测方法,用于监测化妆品中维生素D2、维生素D3的使用情况.方法通过考察不同型号液相色谱柱、不同类型流动相及配比,确定了佳色谱条件,并进行了线性范围、检出限、精密度、准确度试验.结果在Alltima C18(250mm×4.6mm I.D.,5μμm)色谱柱;流动相为甲醇:乙腈=90:10;流速为1.0 ml/min;检测波长为265nm;柱温为25℃时,维生素D2、维生素D3在0.5～100mg/L浓度范围内具有良好的线性关系,检出限分别为0.12mg/L和0.06mg/L;不同浓度维生素D2、维生素D3的变异系数分别小于3.8%和3.5%;加标量为20μg/g时,维生素D2、维生素D3的加标回收率分别在94.2%～101.4%和91.6%～97.2%之间.结论该方法具有操作简便、准确、快速等特点,适于同时测定化妆品中的维生素d2、维生素D3.
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改良的高效液相色谱法测定尿中1-羟基芘
改进并规范了尿中1-羟基芘的碱水解-高效液相色谱分析方法.尿样经碱水解、二氯甲烷提取后,用反相柱分离,荧光检测器检测.内标标准曲线法定量.标准曲线线性范围10～500μg/L.尿样加标的检出限(三倍噪声)为0.01ng,定量限为1.0μg/L尿.高、低两个浓度下的回收率分别为99.5%和94.0%;天内精密度为5.8%和6.2%(RSD);天间精密度为7.7%和8.9%(RSD).该方法可用于测定接触多环芳烃人群的尿中1-羟基芘,具有快速简便、准确可靠的特点.
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高效液相色谱法同时测定市售醒酒护肝产品中8种化合物
目的 建立同时分析醒酒护肝产品中儿茶素、表儿茶素、表没食子儿茶素、表儿茶素没食子酸酯、表没食子儿荼素没食子酸酯、二氢杨梅素、甘草酸和甘草次酸等8种化合物的高效液相色谱法,并与实验室已建立的毛细管电泳法进行方法学比较.方法 样品经甲醇-水(4∶1,V/V)超声提取30 min,10 000 r/min离心10 min,取上清液过滤膜后液相色谱进样,采用C18柱(5 μm×250 mm×4.6 mm)进行梯度洗脱,流速为0.8 mL/min,色谱柱温度为30℃,采用可变波长检测器在210 nm处对儿茶素类及二氢杨梅素进行检测,250 nm处对甘草酸及甘草次酸进行检测.结果 在优化的条件下,8种组分在各自的线性范围内相关系数(r)≥0.9996,检出限和定量限分别为0.07 ～ 1.25 μg/g(S/N=3)和0.22～4.18 μg/g(S/N=10),日内精密度和日间精密度分别为0.26％～ 1.95％和1.17％ ～3.89％,加标回收率为86.15％～ 98.61％.结论 该高效液相色谱法灵敏度高、重复性好,可用于醒酒护肝产品的质量控制.
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柱前衍生-高效液相色谱法测定保健食品中牛磺酸含量
目的 建立一种简便快速测定保健食品中牛磺酸的高效液相色谱-紫外检测方法.方法 采用Diamonsil C18色谱柱(250mm×4.6 mm,5μm),以乙腈-0.02mol/L磷酸盐缓冲液(加入400μl/L TFA,pH4.0)(35:65,ν/ν)为流动相,流速1.0 ml/min,4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧杂恶二唑(NBD-F)与牛磺酸柱前衍生后在469nm处检测.结果牛磺酸线性范围为1.00～200mg/L,r=0.9997(n=8),低检测限(S/N=3)为0.25mg/L,加标回收率94.2%～96.2%,RSD=2.0%～4.3%.结论 该方法简便快速,选择性好,灵敏度、准确度高,适用于保健食品中牛磺酸的测定.
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高效液相色谱法测定尿样中的1-羟基芘
目的 建立尿样中1-羟基芘的高效液相色谱法(HPLC)测定方法.方法 样品经酶避光水解后,通过C18固相萃取小柱,甲醇洗脱后,使用反相C18柱分离,液相色谱-荧光器检测器检测.以乙腈:水=75∶25为流动相,流速为0.8mL/min,荧光检测器λex=275nm,λem=430nm.结果 在给定浓度范围内1-羟基芘的峰面积与浓度有良好的线形关系,r=0.9997,添加一定浓度的1-羟基芘标准品测定其加标回收率为100%～126%,相对标准偏差为4.61%(n=6).结论 该方法可以快速的测定尿样中痕量的1-羟基芘,具有操作简便、快捷,回收率高,重现性好等特点.
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HPLC法检测硝基咪唑类药物残留及其有效化学测量的研究
目的 建立检测硝基咪唑类药物残留的高效液相色谱法(HPLC),并且对该方法进行有效化学测量研究.方法 以猪肝组织为样品,以甲硝咪唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑3种兽药为目标分析物,Spherisorb C18柱分离,以醋酸缓冲液+乙腈=85+15为流动相,320nm紫外检测.结果 3种目标分析物甲硝咪唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑在50～750ng/ml范围有直性线性相关,相关系数分别为r=0.9997,r=0.9998,r=0.9996.组织中添加6ng/g水平时,回收率分别为:甲硝咪唑90.6%,洛硝哒唑84.7%,二甲硝咪唑为86.6%.结论 本方法具有合理、准确等特点,满足了化学溯源性的要求,实现了兽药残留监测的有效化学测量.
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重庆市某区小学女生多环芳烃内暴露水平及其与青春发动时相的关系
目的 建立同时测定尿中4种多环芳烃(PAHs)代谢物的检测方法,研究重庆市某区女童青春发动时相提前与体内多环芳烃暴露水平的关系.方法 研究对象采用目的性抽样,对重庆市某区4所小学1～4年级女生进行一般情况的问卷调查、生长发育的体格检查、并收集尿液,采用高效液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)对样品中4种PAHs代谢物进行定性和定量检测.结果 4种PAHs代谢物标准由线相关性高,方法检出限为0.1 ng/mL.研究共调查女童737名,青春发动时相提前组209人,正常组528人.尿液检测结果显示4种PAHs代谢物检出率为100％,4种代谢物的检出浓度范围分别为1-羟基芘0.01 ～ 4.77 ng/mL,2-羟基萘0.15～50.00ng/mL,2-羟基芴0.06～12.59 ng/mL及9-羟基菲0.29 ～23.17 ng/mL.青春发动时相提前组和正常组在2-羟基芴(Z=-1.996)和9-羟基菲(Z=-3.161)暴露水平上差异具有统计学意义(P＜0.05),控制了肥胖因素后,青春发动时相提前组9-羟基菲(Z=-3.012)暴露水平仍高于正常组(P＜0.05).结论 该方法适用于4种PAHs代谢物的同时检测,研究地区女童青春发育早期均有PAHs暴露,且PAHs暴露可能是女童青春发动时相提前的因素之一.
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食品中多种生物胺同时测定方法研究进展
生物胺是低分子量有机碱,存在于蛋白质丰富的食品尤其是发酵食品中.人体摄入过量的生物胺会引起过敏反应,严重的还会危及生命.另外,食品中生物胺含量与食品质量具有一定的相关性.本文对近年来食品生物胺的检测方法进行了综述.重点介绍了高效液相色谱、毛细管电泳、生物传感器和薄层色谱等方法的特点及其在食品生物胺测定中的应用.
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阿尔茨海默病患者血清中5种磷脂的代谢水平
目的 利用高效液相色谱法对阿尔茨海默病患者血清5种磷脂的代谢水平分析,探讨血清中磷脂在阿尔茨海默病发生、发展中的作用.方法 采用Si60色谱柱(5 μm,4.6 mm ×250 mm),乙腈-甲醇-磷酸为流动相,3阶梯度洗脱,分离5种磷脂,紫外检测器,波长205nm处,高效液相色谱法检测血清5种磷脂.结果 磷脂酰丝氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)和神经鞘磷脂(SM)的检出限分别为0.015、0.060、0.020、0.009和0.013 mg/mL;对照组血清中PS、PC、PE、SM含量明显高于病例组,而PI在两组间并无差异.结论 阿尔茨海默病患者血清中PC、PE、PS、SM的含量水平与对照组比较呈现下降趋势,可能与阿尔茨海默病的发病有关.
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高效液相色谱法测定化妆品中12种防腐剂
目的建立化妆品中防腐剂HPLC测定方法.方法样品经甲醇超声提取后,使用C18柱分离,HPLC-PDA检测.以甲醇为流动相A,0.02mol/l乙酸铵水溶液为流动相B,高纯水为流动相C梯度洗脱,流速为1ml/min,检测波长为280nm.结果在给定浓度范围内各防腐剂的峰面积与浓度具有良好的线性关系,除苯甲酸r=0.9950,山梨酸r=0.9981外,其它各防腐剂的r＞0.9995.添加一定浓度的防腐剂标准品测定其平均回收率为81.4～132.5%,相对标准偏差为0.31～7.63%(n=6).结论本方法可同时测定12种防腐剂,分离效果好,干扰少,方法简便、快捷,准确度高,重现性好,可用于多种防腐剂的同时检测.
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大鼠血浆中氯解磷定(PAM-Cl)高效液相色谱测定方法的研究
为给临床上治疗有机磷中毒提供参考依据,建立了高效液相色谱法测定大鼠血浆中氯解磷定含量的方法.本方法固定相采用BECKMAN C18色谱柱(ODS dp5u 4.6mm×25cm),流动相为乙腈:(0.02mol/LNaH2PO4,加入0.2%的1-辛烷基磺酸钠,磷酸调节pH至3.0)(体积比7.5:92.5),996 PDA检测器,检测波长为296nm或254nm,保留时间定性,峰面积定量.氯解磷定测定的线性范围1.0～50μg/ml,检测限为0.5μg/ml(S/N=2),该方法测得的氯解磷定的回收率为76%～84%,批内,批间测定RSD1.35%,2.73%
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食品中苏丹红染料的高效液相色谱测定方法
苏丹红是一种人工合成的偶氮类、油溶性的化工染色剂,人如果食用含苏丹红染料的食品,会增加致癌的可能性.目前检测苏丹红的方法主要是液相色谱法和液质联用法.本文在国标方法的基础上[1],有所改进.本方法操作简便、快速,准确度和精密度都符合要求.
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柱前衍生高效液相色谱法测定饮用水中草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸
目的 建立柱前衍生-固相萃取-液相色谱-荧光法测定饮用水中草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸的方法.方法 样品经衍生和固相萃取后,采用Waters Atlantis T3(4.6mm×250mm,5μm)色谱柱分离,流动相为甲醇-0.02 mol/L乙酸铵水溶液(50∶50,V/V),流速1.0 ml/min,荧光检测激发波长为266 nm,发射波长为315 nm,进样体积为10 μl.结果 3种目标物质在0.01～1.0 mg/L范围内线性良好,线性相关系数(r)均在0.9994 ～0.9998之间.通过对自来水样进行3个加标水平的添加回收试验(n=6),草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸的平均回收率分别为84.4％ ～ 92.0％、86.5％ ～93.8％和87.8％ ～96.8％,相对标准偏差(RSD)分别为1.12％ ～4.22％、1.05％ ～4.04％和1.08％ ～ 3.95％,方法的检出限分别为0.0021、0.0025和0.0032mg/L.结论 该方法准确灵敏,适用于饮用水中草甘膦、草铵膦和氨甲基膦酸3种物质的同时分析.
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高效液相色谱法同时测定食品中酸性橙Ⅱ染料和多种合成色素
目的 建立采用快速溶剂萃取技术处理固体样品,应用高效液相色谱—紫外检测器同时测定食品中酸性橙Ⅱ染料和柠檬黄、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝5种合成色素的方法.方法 液体样品经过稀释、过膜等简单处理后直接进样,固体样品经过快速溶剂萃取技术提取浓缩后进样,色谱柱采用YWG C18250×4.6mm,10μm,流动相为甲醇:0.02moL/L乙酸铵进行梯度洗脱,流速为0.6 ～ 1.0mL/min,检测波长为484和600nm进行检测.结果 液体样品平均回收率为95.3％～99.0％,RSD为0.3％～3.4％;固体样品平均回收率为84.3％ ～95.2％,RSD为0.7％～4.6％.6种物质的线性范围为2.5 ～ 25 μg/ml,相关系数为0.99978 ～0.99998,检出限为柠檬黄0.15μg/ml,苋菜红0.20μg/ml,胭脂红0.18μg/ml,日落黄0.20μg/ml,亮蓝0.18μg/ml,酸性橙Ⅱ0.20μg/ml.结论 建立的方法用于同时测定6种物质,分离度好,回收率高,适合于日常检测工作.
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化妆品中马来酸氯苯那敏与咖啡因的测定
目的 建立同时测定化妆品中马来酸氯苯那敏和咖啡因含量的HPLC方法.方法 采用Sheshido SPOLAR C18(4.6mm×250 mm,5μm)色谱柱,以1％三乙胺溶液(磷酸调至pH2.8)-甲醇-乙腈(85∶3∶12)为流动相,检测波长为262 nm,进样量10 μL,流速为1.0 mL/min,柱温为30℃.结果 方法线性浓度范围马来酸氯苯那敏为0 ～ 103.2 μg/mL,咖啡因为0～ 262.5 μg/mL,相关系数均大于0.999;低检出限马来酸氯苯那敏为8.7 mg/kg,咖啡因为2.5 mg/kg;高、中、低3个浓度水平的加标回收率为96％～103％;测定值的相对标准偏差(n=6)小于5％.结论 HPLC法准确、专属性强、灵敏度高,适用于同时测定化妆品中马来酸氯苯那敏和咖啡因.
