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脂多糖预处理对人外周血单核细胞分泌TNFα和PGE2的影响
探讨不同剂量脂多糖预处理对健康人外周血单核细胞分泌细胞因子TNFα和PGE2的影响.分离健康志愿者外周血单核细胞,以不同剂量脂多糖(0、10、100、1000 μg/L)预处理24 h,然后测定其再次受到不同剂量脂多糖(0、10、100、1000 μg/L)刺激后分泌TNFα和PCE2水平.采用ELISA方法测定TNFα,EIA方法测定PGE2.脂多糖可刺激人外周血单核细胞分泌TNFα和PGE2.脂多糖预处理导致外周血单核细胞分泌TNFα减少,而明显增加PGE2的生成.脂多糖预处理可以引起人单核细胞产生耐受.
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LPS通过P38MAPK-CBP诱导巨噬细胞RAW264.7表达和释放HMGB1
目的 检测LPS刺激后小鼠腹腔巨噬细胞HMGB1和相关信号分子P38 MAPK、NF-κB、CBP的表达,探讨脓毒症时巨噬细胞表达和释放HMGB1的信号传导机制.方法 采用LPS刺激RAW264.7细胞,在不同的时间点用免疫细胞化学、激光共聚焦显微镜观察细胞内相关信号分子P38 MAPK、NF-κB、CBP的变化,ELISA检测培养上清HMGB1的含量,Real-time PCR检测培养细胞HMGB1的mRNA水平,Western blot检测胞质和胞核内HMGB1的含量.结果 随着LPs的刺激,胞质内P38 MAPK的绿色荧光逐渐增强,NF-κB的绿色荧逐渐减弱,而胞核内NF-κB绿色荧光逐渐增强,CBP的绿色荧光逐渐增强,3者均于刺激后6h达高峰.LPS刺激后12 ～48 h培养细胞胞质和上清中HMGB1蛋白含量逐渐增加,而12～24 h胞核内HMGB1含量逐渐减少,36h后又逐渐增多,各不同时间点差异具有显著性(P＜0.01)；而细胞内HMGB1 mRNA表达在LPS刺激后0～12 h无明显变化,24、36和48h明显增高,与0h相比差异有显著性(P＜0.01).结论 LPS通过依次激活巨噬细胞内信号分子P38 MAPK、NF-κB及CBP来诱导HMGB1的合成、转位和释放表达的.
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硫化氢在脂多糖所致大鼠急性肺损伤中的作用
目的探讨硫化氢(H2S)在脂多糖(LPS)所致大鼠急性肺损伤(ALI)中的作用及可能的机制.方法将64只SD大鼠随机分为对照组、LPS组(经气管内滴注LPS复制ALI)、NaHS+LPS组和炔丙基甘氨酸(PPG)+LPS组.给药后4 h或8 h处死,测定肺系数;光镜观察肺组织形态学改变;化学法检测血浆H2S和CO含量、肺组织丙二醛(MDA)含量、胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)和血红素加氧酶(HO)活性;用免疫组织化学法检测肺组织HO-1蛋白表达及吸光度值.结果气管内滴注LPS可引起肺组织明显的形态学改变;肺系数和肺组织MDA含量增加;血浆H2S含量和肺组织CSE活性下降;肺组织HO活性和HO-1蛋白表达增强;血浆CO含量增加.预先给予NaHS可显著减轻LPS所致上述指标的改变.而预先给予PPG可加重LPS所致肺损伤,但对CO含量、HO活性和HO-1蛋白表达无明显影响.结论H2S/CSE体系的下调在LPS所致ALI的发病学中有一定作用,而外源性给予一定量的NaHS对肺组织具有保护作用,该作用可能与其抗氧化效应和上调CO/HO-1体系有一定关系.
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人重症胸腹损伤所致急性凝血功能障碍相关因素的分析
目的 探讨肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、内毒素(LPS)、磷脂酶A2(PLA2)和血小板活化因子(PAF)与重症胸腹损伤凝血功能障碍的相关性.方法 收集2009年1月至2012年6月在解放军第253医院就诊,创伤指数≥17分,除外合并颅脑损伤及急诊死亡的胸腹损伤患者82例,在救治同时检查血小板计数(PLT)、血浆D-二聚体(D-D)、凝血酶时间(TT)、TNF-α、LPS、PLA2和PAF,对结果进行相关性检验.结果 PLT:83.4 ±38.5(109/L),D-D:1 824±608(U/L),TT:58.3±12.4(s);TNF-α:36.4±18.1(ng/mL),LPS:344±106 (IU/L),PLA2:41.4±14.3 (ng/mL),PAF:15 765±4 432 (ng/L).PLT与TNF-α、LPS、PLA2、PAF之间相关系数(r)均小于-0.881,显著负相关,D-D、TT与TNF-α、LPS、PLA2、PAF之间r均大于0.917,显著正相关.结论 TNF-α、LPS、PLA2、PAF可能参与了胸腹损伤凝血功能障碍的发生.对TNF-α、LPS、PLA2、PAF早期干预,或可改善伤者的凝血功能,提高生存率.
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内毒素对内皮细胞促凝及抗凝功能的影响
革兰阴性杆菌所致重症感染常引起弥散性血管内凝血和多器官功能衰竭.其主要病理生理机制之一是内毒素直接或间接作用于内皮细胞,受损的内皮细胞释放多种促凝因子、趋化因子、调节因子、粘附因子和血小板活化因子等.在促进炎症反应、启动补体系统的同时,进一步加剧凝血系统的活化;天然抗凝系统,包括抗凝血酶、蛋白C和组织因子途径抑制物,则受到不同程度的抑制;纤溶系统虽然在一定程度上被活化,但不能抵御内毒素血症时促凝和抗凝系统的失衡,其结果促进了高凝状态的发生.
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血必净注射液对急性梗阻性黄疸大鼠心肌损伤的保护作用
目的:观察血必净注射液对急性梗阻性黄疸大鼠心肌损伤的保护作用.方法:采用结扎SD大鼠胆总管的方法制作急性梗阻性黄疸动物模型.将54只SD大鼠随机均分为胆总管结扎(BDL)组、胆总管结扎血必净治疗组(XBJ)、假手术组(SO)3组.XBJ组在胆总管结扎后48h开始尾静脉注射血必净注射液,BDL组和SO组同样方法注射等量生理盐水.分别于给药后第3、7、14天各取6只大鼠采样,观察血清胆红素(TBIL)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、内毒素(ET)含量,心肌组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量,以及光镜下观察心肌病理变化.结果:急性胆道梗阻后,血清TBIL、CK-MB、ET水平及心肌组织MDA含量随梗阻时间延长逐渐增高,心肌组织SOD含量减少.XBJ组与同时相BDL组比较,血清TBIL、CK-MB、ET水平及心肌组织MDA含量减少,心肌组织SOD含量增高.光镜下可见随胆道梗阻时间延长,心肌损伤加重,XBJ组与同时相BDL组比较,心肌损伤减轻.结论:血必净注射液对急性胆道梗阻所致心肌损伤有保护作用,作用机制可能与其抗内毒素血症、TNF-a作用及对抗氧自由基有关.
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绿原酸对肠黏膜微血管内皮细胞分泌NO和ET-1的影响
目的:探讨绿原酸对治疗大肠杆菌内毒素性疾病的作用机制.方法:利用体外培养大鼠肠黏膜微血管内皮细胞,研究金银花主要成分绿原酸对正常肠黏膜微血管内皮细胞作用1、3、6、9h后的NO和ET-1分泌量的影响,以及对经大肠杆菌内毒素作用1h后肠黏膜微血管内皮细胞于3、6、9h后的NO和ET-1分泌量的影响.结果:绿原酸有效地抑制了肠黏膜微血管内皮细胞分泌的ET-1和NO的比值升高.结论:绿原酸对内毒素作用下的肠黏膜微血管内皮细胞的功能有保护作用.
关键词： 绿原酸 肠黏膜微血管内皮细胞 内毒素 一氧化氮 内皮素 -
人参提取物对内毒素所致小鼠脾细胞损伤的保护作用
目的观察人参提取物在内毒素脂多糖(LPS)所致的SIRS/MODS中对脾细胞的作用. 方法通过HE、TUNEL染色和透射电镜比较注射人参提取物(GS)后再注射LPS时的脾脏形态学及凋亡情况,并用免疫组织化学的方法检测Bcl-2,Fas,FasL的表达.结果随LPS作用时间的延长,脾损伤逐渐加重.动脉周围淋巴鞘细胞碎片及TUNEL阳性细胞增多,电镜观察可见到凋亡的淋巴细胞.而人参组细胞损伤明显减轻.Bcl-2的表达随着LPS作用时间的延长而减少,Fas,FasL则增强.人参提取物主要阻止Bcl-2表达减少. 结论人参提取物对LPS脾细胞损伤有保护作用,其作用机制与增强Bcl-2表达有关.
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锌指蛋白基因对内毒素诱导选择素表达的影响
目的探讨外源性A20基因对内毒素诱导的内皮细胞E-选择素表达的影响. 方法 DOTAP脂质体介导的pCNDA3.1 EHA20基因转染人脐静脉内皮细胞,经G418筛选阳性克隆,免疫荧光检测A20基因的表达,原位杂交、免疫荧光及Western blot分别检测内皮细胞E-选择素的表达. 结果 A20基因在经C418筛选后的内皮细胞中有高表达;内毒素能诱导人内皮细胞E-选择素表达;A20基因能抑制内毒素诱导的内皮细胞90%的E-选择素表达,两者间相差显著(P＜0.05). 结论 A20基因能够显著抑制内毒素诱导的内皮细胞活化,有助于创伤的治疗.
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锌指蛋白A20在内毒素所致人脐静脉内皮细胞损伤中的作用
目的探讨外源性锌指蛋白A20对内毒素(LPS)诱导的内皮细胞同型半胱氨酸蛋白酶caspase-3表达和凋亡的影响. 方法 RT-PCR检测A20基因在内毒素诱导内皮细胞中的表达.DOTAP脂质体转染pCDNA3.1EHA20于脐静脉内皮细胞,经G418筛选,A20表达经免疫荧光鉴定.Tunnel原位末端标记法、原位杂交检测转染前后内毒素诱导内皮细胞凋亡情况及caspase-3的表达情况. 结果 A20基因在内毒素诱导的内皮细胞中能表达.正常对照组及转染A20基因组人脐静脉内皮细胞(HUVEC)凋亡为(5±1)%、(6±1)%,LPS作用后对照组与转染A20基因组凋亡分别为(36±3)%、(10±1)%,两者相差显著(P<0.05).A20基因能显著抑制内毒素诱导的内皮细胞caspase-3的表达. 结论 A20基因在创伤的治疗中可能有一定作用.
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三种去除人巨噬细胞迁移抑制因子(HuMIF)重组蛋白内毒素方法的比较
运用3种方法(C8反相柱层析-复性法、多步层析法和本实验室改进的C8反相柱层析-非复性法)去除重组HuMIF蛋白的内毒素,比较其所得蛋白内毒素含量、酶活性以及蛋白回收率等,评价这3种去内毒素方法的优劣.结果表明,C8反相柱层析-复性法蛋白回收率很低,酶活性低但内毒素去除效果好;多步层析法蛋白回收率高,酶活性高但内毒素去除效果稍差;而本实验室改进的C8反相柱层析-非复性法蛋白回收率稍差,酶活性较好且内毒素去除效果不错.由于C8反相柱层析-非复性法内毒索去除方法简单有效,适合实验室范围内推广.
关键词： 巨噬细胞迁移抑制因子 内毒素 蛋白回收率 酶活性 -
内毒素耐受性与TLR4信号通路
内毒素(lipopolysaccharide,LPS)耐受性普遍存在,并与其他病原微生物致病因子(LAM、STF等)存在交叉耐受性.不同种类LPS产生耐受性的可能性与机制不同.TLR4作为LPS 靶细胞膜上的跨膜受体,主要介导LPS信号的跨膜转导,TLR4结构与功能的改变,以及TLR4信号通路中各个环节(MD2、MyD88、IRAK、IκB、NF-κB、炎症因子)的功能缺陷,都将导致LPS耐受性的产生.
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内毒素耐受机制的研究进展
内毒素耐受(endotoxin tolerance)早在50多年前就已经引起人们的关注,但其具体的分子机制至今尚不清楚.Toll样受体4(Toll-like receptor-4,TLR4)作为脂多糖(LPS)的主要受体,参与LPS信号的跨膜转导,与LPS耐受密切相关.在内毒素耐受过程中,TLR4转导通路中的信号蛋白及下游转录因子在数量、结构和功能上发生改变,可引起炎性因子释放减少、抗炎因子产生增加,并导致特定信号通路(如PI3K通路)和负性调节因子(如SHIP1、SOCS、FLN29等)的激活.除此之外,TLR2通路、 Gi蛋白、蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)以及一些信号分子的剪接异构体等也参与了内毒素耐受现象的发生.总之,内毒素耐受是一个由多种原因引起的、多种生物物质参与的复杂病理生理过程,是机体抵抗G-细菌感染的重要保护机制.因此,探索内毒素耐受的机制,寻求机体内源性的抗炎机制将为败血症等一些致死性感染性疾病的治疗提供新的思路和理论依据.
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一个新的信号受体家族--Toll/IL-1R家族的研究进展
Toll受体初是在研究果蝇胚胎腹背侧体轴的形成中发现的,由于它与IL-1受体在结构、功能、信号转导通路上的诸多相似,人们将它们归入一个大的信号受体家族--Toll/IL-1R家族.许多研究均证实,除与胚胎发育有关外,这一信号受体家族的成员在机体对抗外来病原体的天然免疫中起到了重要的作用,尤其是人类Toll蛋白在介导内毒素对细胞损伤中的作用备受关注.
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过氧亚硝基阴离子介导内毒素致肺血管损伤及胆囊收缩素的保护作用
本文探讨过氧亚硝基阴离子(ONOO-)在内毒素致肺血管损伤中的介导作用和八肽胆囊收缩素(CCK)的保护作用及其机制。结果发现，内毒素主要成分脂多糖(LPS)可诱导大鼠肺组织生成ONOO-，ONOO-能导致肺微血管壁通透性明显增加和肺脏严重病理变化；ONOO-可引起离体肺动脉反应性异常改变，LPS也可产生类似变化；ONOO-有较弱的舒血管作用并受到内皮细胞的抑制性调节；LPS诱导培养的牛肺动脉内皮细胞(BPAEC)产生增多的ONOO-参与介导内皮细胞本身的损伤；CCK能拮抗LPS对BPAEC的损伤效应，此作用由CCK受体介导，并与抑制ONOO- 生成有关。结果提示，清除ONOO-或减少ONOO-生成可为防治内毒素引起的急性肺损伤等病理过程提供新对策；CCK是一种有应用前景的细胞保护因子
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大肠杆菌内毒素诱导的SD大鼠眼内炎
目的 观察细菌内毒素脂多糖(LPS)诱导的大鼠眼内炎性反应的临床、组织病理学和血眼屏障的特点.方法 SD大鼠玻璃体腔内注人大肠杆菌LPS(1μg)建立LPS诱导的眼内炎动物模型,对照组注入无菌生理盐水.在LPS注入后6h至7d的不同时点,分别对眼部炎性反应评分、浸润白细胞计数、前房水蛋白质浓度和玻璃体内LPS水平进行测定和评估.结果 在LPS注射后6～72 h眼内可见严重的炎性反应,至术后7d炎性反应基本消退.眼内白细胞的浸润数量在术后24h达到高峰[(1182.63±191.15)细胞/眼],至术后3 d浸润细胞数量迅速下降[(331.25±57.9)细胞/眼].在各观察时点,均可观察到眼内炎组房水蛋白质浓度较对照组显著增高(P<0.01). LPS注入眼内后前3 d,玻璃体腔内LPS含量迅速下降[前3d分别为(327.02±51.54)、(176.0±53.68)和(54.91±13.26)ng],在7d后玻璃体腔内LPS基本被清除.结论 大肠杆菌内毒素在SD大鼠可诱导出严重的实验性眼内炎,大量白细胞眼内浸润、血眼屏障破坏和玻璃体腔自发性细菌成分清除是本实验性眼内炎模型的主要病理特点.
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华支睾吸虫病患者血清LPS水平与肝功能关系的研究
目的 探讨华支睾吸虫病患者血清中的细菌脂多糖(LPS)水平与肝功能之间的关系. 方法 采用鲎三肽基质染色定量法检测患者血清中LPS,病人按Child-pugh分级标准分数,并作相关性分析. 结果 华支睾吸虫病患者血清LPS为(0.18±0.08) Eu/ml,健康对照组为(0.07±0.03) Eu/ml,差异有统计学意义(P＜0.01).按Child-pugh分级,随病人肝功能受累加重,血清LPS含量依次递增(P＜0.01),且LPS与总胆红素(TBL)和丙氨酸氨基转移酶(ALT)呈正相关,与ALB呈负相关. 结论 华支睾吸虫病患者血清LPS升高,且与肝损伤呈正相关性.血清LPS水平可作为了解肝损伤的程度、病情判断与预后的重要指标.
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血清降钙素原和内毒素检测在感染性肺炎患儿诊断中的临床应用价值
目的 探讨降钙素原 (procalcitonin, PCT) 和内毒素 (endotoxin, ET) 检测在小儿感染性肺炎中的诊断价值.方法 选择感染性肺炎患儿100例, 其中衣原体肺炎8例, 支原体肺炎14例, 病毒性肺炎23例, 细菌性肺炎55例.另选取45例健康体检儿童为对照组.比较各组血清PCT和ET水平, 对细菌性肺炎患儿痰液标本分离菌株进行鉴定和药敏试验.结果 细菌性肺炎组患儿血清PCT和ET分别为 (10.93±3.07) ng/ml和 (0.26±0.07) EU/ml, 与健康对照组 (0.23±0.14) ng/ml和 (0.04±0.02EU/ml) 比较差异均有统计学意义 (P<0.05);与衣原体肺炎组、支原体肺炎组及病毒性肺炎组PCT (0.24±0.12) ng/ml～0.29±0.18ng/ml和ET (0.04±0.02) EU/ml～0.05±0.03EU/ml比较差异均有统计学意义 (P<0.05), 其中革兰阴性菌组血清ET水平显著高于革兰阳性菌组 (P<0.05);衣原体肺炎组、支原体肺炎组及病毒性肺炎组血清PCT和ET与健康对照组比较差异均无统计学意义 (P>0.05) .55例细菌性肺炎患儿痰标本中分离出73株病原菌, 其中革兰阴性菌45株, 占61.64％.革兰阴性菌中的肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对氨苄西林耐药率在90％以上, 对头孢呋辛和头孢噻肟耐药率在30％以上.革兰阳性菌28株, 占38.36％, 其中的金黄色葡萄球菌和肺炎链球菌对青霉素耐药率在77％以上, 对红霉素耐药率在58％以上.结论 细菌性肺炎患儿血清PCT和ET升高, 因此可通过血清PCT和ET检测鉴别儿童感染性肺炎的致病菌种类.临床医师应根据病原菌的耐药状况及时选用敏感性药物治疗, 以减少重症肺炎的发生.
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肝素连接苯丙氨酸血液净化材料去除内毒素的研究
以氯甲基树脂为基底材料,肝素为连接臂连接配基苯丙氨酸,合成了一种安全无毒的新型内毒素吸附剂.本课题通过改变不同的反应物用量、反应时间和pH值寻找出佳实验条件,同时对合成好的肝素-苯丙氨酸吸附剂在不同介质(水及血浆)、不同内毒素初始浓度、不同时长条件下的吸附性能进行了研究,并对血液相容性进行了评价.在水以及兔子血浆的体外灌流实验中,2h以内可将内毒素含量降至较低水平,高清除率水中可达79％,血浆中为72％,且对血液中的其他物质含量影响较小(均小于10％),血液相容性良好.
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脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞基因表达谱分析
目的利用基因芯片技术分析脂多糖(LPS)活化的小鼠腹腔巨噬细胞基因表达谱,以更全面地了解LPS诱导的巨噬细胞反应. 方法以未刺激的和用1mg/L LPS刺激的小鼠腹腔巨噬细胞制备33P标记的cDNA探针,分别与含有1176个已知基因的小鼠cDNA芯片杂交. 结果活化组和未刺激组间的2倍差异表达基因为118个,3倍差异表达基因为69个,其中44个上调,25个下调.转录因子、细胞内信号调节蛋白、炎症细胞因子和细胞凋亡相关基因的转录发生明显的调节变化. 结论提供了LPS活化的巨噬细胞综合基因表达信息,并筛选出一些新的可能与LPS活化相关的基因.
