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线粒体缝隙连接蛋白43的心肌保护作用机制研究进展
缝隙连接蛋白(Cx)通过形成缝隙连接介导细胞间电化学信息传递,而哺乳动物心室肌中的Cx主要为Cx43.Cx43不仅存在于心肌细胞膜上,也存在于线粒体中.其中,缺血预处理或药物预处理减轻心肌缺血/再灌注损伤作用的分子机制与线粒体Cx43有关,它主要通过改善线粒体的功能状态,减少再灌注后心肌细胞的死亡,从而发挥心肌保护作用.而线粒体Cx43是否存在更多的生理或病理功能以及能否成为临床治疗缺血/再灌注相关心血管疾病的新靶点将是未来的研究方向.
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缝隙连接蛋白43与肿瘤关系的研究进展
细胞缝隙连接通讯是细胞之间信息交流的一种方式,其发挥功能依靠细胞缝隙连接.缝隙连接蛋白(Cx)家族由Cx组成,而Cx43是Cx家族成员之一,其表达及功能异常涉及多种肿瘤的发生、发展.在胃癌、结肠癌、尤文肉瘤、卵巢癌组织中,Cx43表达呈现下调趋势;但在膀胱癌、乳腺癌、神经胶质瘤、肺癌组织中Cx43呈过表达,且在肺癌、乳腺癌神经胶质瘤中Cx43的过表达表现出抑癌和促进肿瘤转移的双向性.因此,寻求以Cx43为靶点治疗肿瘤,并深入探究Cx43与抗肿瘤药物之间的关系成为当前亟待解决的问题.
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低强度压力感受器刺激治疗心房颤动的实验研究
目的 探讨低强度颈动脉窦压力感受器电刺激(LL-CBS)对9小时快速心房起搏(9hRAP)所致的心房颤动(AF)的影响.方法 14只比格犬(7～9 kg)麻醉后分为对照组(6只)和LL-CBS组(8只).将多电极导管缝合于心房和肺静脉.所有动物均接受9hRAP,LL-CBS组的动物在行9hRAP同时给予持续的LL-CBS,将80％阈电压的电刺激定义为LL-CBS.9hRAP后测所有位点的有效不应期(ERP)、ERP离散度及AF诱发窗口(WOV).实验末留取心房组织采用RT-PCR分析缝隙连接蛋白43(Cx43)的表达情况.结果 与对照组比较,LL-CBS组所有位点的ERP延长,Cx43的DNA含量增加,ERP离散度和AF诱导性降低,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 LL-CBS可抑制AF发生,这种保护机制与调控心房Cx43的表达有关.
关键词： 低强度压力感受器刺激 心房颤动 缝隙连接蛋白43 -
心复康协同骨髓间充质干细胞上调心脏干细胞GATA4和Cx43 mRNA的表达
[目的]观察心复康协同骨髓间充质干细胞(BMSC)对心脏干细胞(CSC)GATA4和Cx43 mRNA表达的调节.[方法]采用全骨髓贴壁法获得BMSC,并对其进行流式细胞鉴定.制备心复康含药血清,高效液相色谱分析其成分,并作用于细胞共培养体系,采用实时定量PCR法检测各组CSC中GATA4和Cx43 mRNA的表达.[结果]相较于其他两组,心复康组CSC中的GATA4和Cx43 mRNA表达明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).[结论]心复康协同BMSC能够上调CSC中GATA4和Cx43 mRNA的表达.
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黄连解毒汤有效部位对脑缺血半暗带区星形胶质细胞活化及Cx43表达的影响
目的 观察黄连解毒汤水提物及其有效部位(总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜)对局灶性脑缺血半暗带区星形胶质细胞活化及缝隙连接蛋白43 (connexin 43,Cx43)表达的影响.方法 线栓法建立大鼠永久性大脑中动脉栓塞模型,雄性SD大鼠随机分成假手术组、模型组、黄连解毒汤水提物组(800 mg/kg)、总生物碱组(44 mg/kg)、总黄酮组(50 mg/kg)、总环烯醚萜组(80 mg/kg),连续ig给药7d,每天给药1次.HE染色观察脑组织病理学改变;胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光染色观察星形胶质细胞活化;GFAP/Cx43免疫荧光双标染色检测Cx43表达;实时RT-PCR检测Cx43基因表达.结果 模型组大鼠缺血半暗带区神经元数目减少,GFAP、Cx43基因及蛋白表达上调(P＜0.01).黄连解毒汤水提物及其3个有效部位(总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜)均可增加脑缺血大鼠缺血半暗带区神经元数目(P＜0.05、0.01);降低缺血半暗带区GFAP及Cx43基因、蛋白表达(P＜0.05、0.01).结论 黄连解毒汤水提物及其有效部位(总生物碱、总黄酮、总环烯醚萜)通过抑制星形胶质细胞过度活化,干预Cx43表达,保护缺血半暗带区神经细胞.
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黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒感染乳鼠心肌细胞内质网应激及Calumenin蛋白和缝隙连接蛋白CX43的作用
目的:研究黄芪总黄酮对柯萨奇B3病毒(CVB3)感染心肌细胞内质网应激、网腔钙结合蛋白(calumenin)及缝隙连接蛋白43(CX43)作用.方法:原代培养的乳鼠心肌细胞分3组:对照组(正常细胞)、柯萨奇病毒感染组(正常细胞)、黄芪总黄酮组(正常细胞+黄芪总黄酮).柯萨奇病毒感染组感染,黄芪总黄酮组感染同时给予黄芪总黄酮20 mg/L.采用免疫组化方法检测培养乳鼠心肌细胞α-SMA蛋白,Westem blot技术检测各组心肌细胞Calu-menin蛋白及内质网应激伴侣蛋白GRP78,CX43表达.结果:①与对照组相比,柯萨奇病毒感染组心肌细胞GRP78表达增多(P＜0.01),calumenin蛋白及CX43表达减少(P＜0.01);与柯萨奇病毒感染组比较,黄芪总黄酮组心肌细胞GRP78表达减少(P＜0.01),Calumenin蛋白及CX43表达增多(P＜0.0l).结论:CVB3可引发心肌细胞内质网伴侣蛋白GRP78表达增加进而发生内质网应激,并使Calumenin蛋白及CX43表达减少;黄芪总黄酮抑制CVB3感染心肌细胞内质网应激伴侣蛋白GRP78表达从而减轻内质网应激,同时使Calumenin蛋白及CX43表达增多,该实验结果可能与其抗病毒性心肌炎并发心律失常作用密切相关.
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PI3K/Akt信号通路在白藜芦醇抗大鼠缺血/再灌注性心律失常中的作用及机制
目的:探讨磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路在白藜芦醇抗缺血/再灌注性心律失常中的作用及机制.方法:48只健康雄性SD大鼠,取心电图正常者随机分为4组(n=10):假手术(SC组)组、缺血/再灌注(I/R组)组、白藜芦醇处理(Res处理组)组、PI3K抑制剂LY294002(LY294002组)组.建立大鼠在体心肌缺血/再灌注模型,观察各组心律失常的发生情况及左室血流动力学变化,Western blot法测定心肌组织中蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、缝隙连接蛋白43(Cx43)蛋白表达水平,以RT-PCR法从转录水平检测Cx43的表达水平.结果:与I/R组相比,Res处理组心律失常的发生率(心律失常评分)明显降低、左室舒缩功能明显升高,同时心肌Akt、Cx43蛋白表达及Cx43mRNA水平也明显升高;使用PI3K抑制剂LY294002后,心肌Akt、Cx43蛋白表达及Cx43mRNA水平下降的同时心律失常的发生率明显升高、左室舒缩功能明显降低.结论:白藜芦醇的抗再灌注性心律失常作用可能是通过激活PI3K/Akt信号通路,改变Cx43活性及分布实现的.
关键词： 白藜芦醇 再灌注性心律失常 PI3K/Akt信号转导通路 缝隙连接蛋白43 大鼠 -
缝隙连接蛋白43在人食管胃连接部的表达及意义
目的 探讨缝隙连接蛋白43(Cx43)在人食管胃连接部的表达水平及临床意义.方法 选取高位食管中段癌患者8例,在行根治性食管癌切除食管胃吻合术时切除食管胃连接部,分离出食管下括约肌的套索纤维和钩状纤维,以及部分下段食管环行肌和胃底环行肌,应用Western blot法检测Cx43在各环行平滑肌中的表达水平.结果 下段食管环行肌和胃底环行肌之间Cx43的表达水平没有差异(153.77±13.54与139.34±16.54,P>0.05),套索纤维和钩状纤维平滑肌细胞之间Cx43表达量也没有差异(259.01±16.70与303.32±22.02,P>0.05);但套索纤维和钩状纤维平滑肌细胞Cx43的表达水平高于下段食管和胃底环行肌的表达水平(P<0.05).结论 人食管下括约肌的套索纤维、钩状纤维以及下段食管和胃底环行肌中Cx43的表达水平不同.
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复方黄芪养心合剂对心室重构大鼠心肌细胞缝隙连接蛋白43分布与表达的影响
目的 观察复方黄芪养心合剂对冠状动脉(冠脉)结扎术后心室重构(VR)大鼠心肌缝隙连接蛋白43 (Cx43)分布改变和表达的影响.方法 73只健康雄性清洁级SD大鼠,随机取8只作为假手术组,其余65只大鼠行冠脉左前降支(LAD)结扎术,术后观察10d.存活的49只大鼠按随机数字表法分为复方黄芪养心合剂高、中、低剂量组和琥珀酸美托洛尔组,每组10只,VR模型组9只.复方黄芪养心合剂高、中、低剂量组分别按14.0、7.0、3.5 mL-1·kg-1·d-1灌胃复方黄芪养合剂(黄芪20 g、党参20 g、太子参20 g、苦参20 g、丹参20 g、甘松20 g、炙甘草10 g、生山楂15 g);琥珀酸美托洛尔组按7.0 mL-1·kg-1·d-1灌胃琥珀酸美托洛尔;VR模型组和假手术组均灌胃蒸馏水7.0 mL-1·kg-1·d-1.连用8周后,取大鼠心脏组织,用免疫组化法(IHC)观察心肌Cx43分布的改变,用蛋白质免疫印迹试验(Western Blot)检测心肌Cx43蛋白的表达.结果 显微镜下可见,假手术组心肌Cx43呈棕黄色颗粒状表达;VR模型组较假手术组有所减少;琥珀酸美托洛尔组表达较假手术组减少不明显,但较VR模型组增多;复方黄芪养心合剂高、中、低剂量组表达较VR模型组有所增加,与琥珀酸美托洛尔组相近.Western Blot结果显示:与假手术组比较,VR模型组心肌Cx43蛋白表达明显减少[(309.25±56.72)％比(597.67±78.25)％];琥珀酸美托洛尔组和复方黄芪养心合剂高、中、低剂量组则较VR模型组明显增加[(466.81±99.29)％、(446.61±68.25)％、(455.20±81.58)％、(528.87±57.69)％比(309.25±56.72)％,P＜0.05或P＜0.01];高、中、低剂量复方黄芪养心合剂组之间及与琥珀酸美托洛尔组比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).结论 复方黄芪养心合剂能够改善冠脉结扎术后VR大鼠心肌细胞Cx43的分布变化与表达减少,作用与琥珀酸美托洛尔相近,但其作用无剂量依赖性.
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缝隙连接蛋白43基因及其辐射诱导表达反应
由缝隙连接蛋白构成的膜通道是相邻细胞间细胞通讯方式之一.缝隙连接蛋白是一超基因家族,其中缝隙连接蛋白43分布为广泛,它在调控细胞增殖及分化、维持细胞内环境稳态、维护机体正常发育、血细胞形成等方面有着重要的生理功能.新研究表明,低剂量电离辐射能诱导该基因高表达,由此,从分子水平揭示了细胞间通讯在低剂量辐射反应中的作用,而且缝隙连接蛋白43还有可能被发展成新的辐射损伤生物分子标记物.
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灯盏生脉胶囊含药血清对神经元缺氧复氧损伤的保护作用及机制研究
目的：从细胞水平探讨灯盏生脉胶囊（ DZSM ）含药血清对原代大鼠皮质神经元氧糖剥夺/复氧（ OGD/R ）损伤模型的保护作用及其可能机制。方法将出生24 h内SD大鼠的皮质神经元原代培养7 d后随机分为空白对照组、OGD模型组、正常血清对照组、低剂量DZSM组、高剂量DZSM组。空白对照组不进行预处理及造模，其他各组在OGD/R前分别采用0.9%氯化钠溶液、正常大鼠血清、低剂量DZSM含药血清、高剂量DZSM含药血清预处理，在OGD/R后24.0 h用光镜观察神经元形态学变化，采用XTT法测定细胞存活率、流式细胞术测定细胞凋亡率、Western blotting测定缝隙连接蛋白43（Cx43）表达量，并观察OGD/R后0.5、6.0、12.0、24.0 h Cx43表达变化。结果OGD/R后24.0 h，OGD模型组神经元呈现损伤特征，细胞存活率〔（54.6±6.4）%〕较空白对照组（100.0%）降低（P<0.05），细胞凋亡率升高〔（48.6±4.6）%与（8.8±1.0）%〕（P<0.05）；OGD/R模型组Cx43在OGD/R后0.5 h表达量升高，并持续整个观察过程（ P<0.05）。低、高剂量DZSM组光镜下可见神经元损伤，较OGD模型组减轻；低剂量DZSM细胞存活率为（69.6± 7.7）%，高剂量DZSM细胞存活率为（76.1±8.8）%，均较OGD模型组细胞存活率高（P<0.05）；低剂量DZSM组细胞凋亡率为（25.0 ± 5.9）%，高剂量DZSM组为（18.2±4.9）%，与OGD模型组〔（48.6± 9.2）%〕比较，差异有统计学意义（ P<0.05）。OGD模型组、正常血清对照组、低剂量DZSM组和高剂量DZSM组Cx43表达量分别为（72.8± 6.9）、（63.1±6.6）、（21.1±3.2）、（24.4 ± 3.8），低、高剂量DZSM组与OGD模型组相比，Cx43表达均下降（P<0.05）。结论 DZSM含药血清可抑制OGD/R模型神经元凋亡，提高细胞存活率，其机制可能与抑制Cx43的表达有关。
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银杏黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤及缝隙连接蛋白43的作用
目的 研究银杏黄酮对大鼠心肌缺血再灌注(I/R)损伤(MIRI)及缝隙连接蛋白43(Cx43)的作用,并探讨其可能机制.方法 将32只雄性SD大鼠随机分为假手术组、I/R组、金纳多组、银杏内酯组,每组8只.建立在体心肌I/R损伤模型,HE染色法观察大鼠心肌组织形态学改变;黄嘌呤氧化酶法测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)浓度;免疫组化法检测Cx 43的表达及分布特点;观察记录再灌注30 min内各组心律失常情况,进行评分比较.结果 与I/R组比较,金纳多组心肌坏死减少,SOD增高、MDA降低,Cx43表达增多且多分布在端端连接处,心律失常发生次数减少;银杏内酯组SOD增高、MDA降低、心律失常评分降低(P＞0.05),心肌细胞坏死及Cx43表达无明显异常.结论 银杏黄酮可对抗大鼠心肌缺血再灌注损伤以及减少Cx43表达异常,进而改善MIRI性心律失常,其作用机制可能与抗细胞氧化应激及减少缝隙连接蛋白表达异常有关.
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缺血后处理对大鼠缺血再灌注心肌缝隙连接蛋白43的影响
目的 观察缺血后处理对缺血再灌注心肌缝隙连接蛋白43(Cx43)的影响,进一步探讨其减少再灌注心律失常的可能机制.方法 将雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注组、缺血预处理组、缺血后处理组,每组8只.建立在体心肌缺血再灌注模型,观察心律失常的发生情况,应用免疫组织化学SP法检测Cx43在各组缺血再灌注心肌中的表达,应用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测各组Cx43的mRNA的表达水平.结果 与假手术组比较,缺血再灌注组心律失常评分显著增高,心室肌Cx43含量显著降低、分布紊乱,Cx43的mRNA水平显著降低(P＜0.01),与缺血再灌注组比较,缺血后处理组的心律失常评分显著降低,心室肌Cx43含量增高、分布规律,Cx43的mRNA水平显著增高(P＜0.01).结论 缺血后处理能通过抑制Cx43蛋白降解和再分布、上调其mRNA水平起到保护Cx43蛋白的作用,进而减少再灌注心律失常的发生.
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多西环素对心肌梗死模型大鼠缝隙连接蛋白43表达的影响
目的 探讨心肌梗死模型大鼠心肌组织缝隙连接蛋白43(Cx43)表达的变化及多西环素对心肌梗死大鼠Cx43的影响.方法 选择符合实验要求的大鼠,将其分为假手术组和模型组,假手术组只穿线,不结扎,将模型组分为多西环素组、心肌梗死组并分别给予多西环素与生理盐水.手术1个月后检测模型大鼠其心肌细胞Cx43表达相关变化情况.结果 心肌梗死组Cx43 mRNA与假手术组比较差异有统计学意义(P＜0.05);多西环素组Cx43 mRNA表达量,但与心肌梗死组比较差异无统计学意义(P＞0.05).多西环素组Cx43表达量高于心肌梗死组,差异有统计学意义(P＜0.05),但低于假手术组(P＜0.05).多西环素组心肌Cx43相对表达量高于心肌梗死组,差异有统计学意义(P＜0.05);但低于假手术组(P＜0.05).结论 多西环素对改善心肌梗死大鼠相关的缝隙连接蛋白重构有一定的促进作用.
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扶正化瘀胶囊对心肌梗死大鼠心肌缝隙连接蛋白43表达的影响
目的 研究扶正化瘀胶囊对心肌梗死大鼠心肌缝隙连接蛋白43(connexin 43,CX43)表达的影响.方法 SD雄性大鼠随机分为假手术组、模型组以及扶正化瘀胶囊组和卡托普利组,每组各6只,采用结扎左冠状动脉前降支造成心肌梗死.术后10 d开始灌胃给药,持续8周.用免疫组织化学方法观察心肌CX43表达的变化.结果 在心肌梗死区域内,模型组与假手术组比较,CX43排列紊乱,阳性表达面积、平均光密度值和积分光密度均显著低于假手术组(P＜0.01).在梗死边缘区,扶正化瘀胶囊组CX43平均光密度值高于模型组(P＜0.01),积分光密度高于模型组(P＜0.05),CX43排列紊乱有所减轻,阳性表达面积与模型组无统计学意义.卡托普利组CX43平均光密度值高于模型组(P＜0.01),积分光密度和阳性表达面积均高于模型组(P＜0.05),CX43排列紊乱也有减轻.结论 扶正化瘀胶囊能够部分改善心肌梗死大鼠心肌的CX43重构.
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奈必洛尔对L-NAME致高血压大鼠左心室重构和Cx43表达的影响
目的 观察奈必洛尔对L-NAME致高血压大鼠左心室重构及心肌连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达的影响. 方法 将24只Wistar大鼠随机分为4组:空白对照组、模型组、奈必洛尔组和阿替洛尔组.除空白对照组,其余三组给予L-NAME(60 mg/kg)制备高血压模型鼠,药物治疗组同时分别给予奈必洛尔(8 mg/kg)和阿替洛尔(80mg/kg).给药8周,期间每周测定一次收缩压.实验结束后,3％戊巴比妥钠(30 mg/kg)麻醉大鼠,快速分离心脏,免疫组化和Western blot观察左心室Cx43分布和蛋白表达. 结果 与空白对照组比较,模型组大鼠在给予L-NAME 1周后血压逐渐升高,到给药第8周时高达(192.36±6.95)mmHg.奈必洛尔组血压较模型组显著降低,且明显较阿替洛尔组低.模型组左心室重构,Cx43蛋白表达降低.奈必洛尔抑制左心室重构,增加Cx43表达,改善L-NAME致高血压大鼠Cx43排列紊乱,但阿替洛尔仅增加Cx43表达(P＜0.05),对左心室重构无显著影响. 结论 奈必洛尔在显著降压的同时,可改善L-NAME高血压大鼠左心室重构,增加心肌Cx43表达.
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鱼藤酮染毒大鼠纹状体缝隙连接蛋白43的表达及意义
目的 观察鱼藤酮对大鼠中脑纹状体组织的毒性作用及对缝隙连接蛋白43(CX43)表达的影响. 方法 建立大鼠Alzet微泵恒流给药鱼藤酮染毒模型,应用光镜和免疫组织化学染色观察纹状体神经元和星形胶质细胞的形态改变,采用RT-PCR法检测CX43mRNA的表达,Western blot技术观察CX43蛋白活性变化.结果 染毒大鼠出现类帕金森病综合征特征,中脑纹状体组织神经元形态明显改变,星形胶质细胞增生.与正常对照组比较,2.0 mg/kg鱼藤酮染毒组CX43表达明显上调(P＜0.05),而4.0 mg/kg鱼藤酮染毒组CX43表达显著降低(P＜0.05). 结论 鱼藤酮可损伤中脑神经元,诱导大鼠出现类帕金森病症状,星形胶质细胞缝隙连接蛋白43的异常表达,可能参与了鱼藤酮对大鼠纹状体组织的毒性作用.
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缝隙连接蛋白在PTSD大鼠蓝斑的表达变化
目的 观察创伤后应激障碍(PTSD)样行为异常大鼠蓝斑神经元缝隙连接蛋白43(Connexin43,Cx43)表达变化,探讨PTSD的发病机制.方法 采用国际认定的SPS方法刺激建立大鼠PTSD模型,取成年健康雄性Wistar大鼠100只,随机分为连续单一刺激(single prolonged stress,SPS)模型ld、4d、7d、14d组和对照组,应用免疫组化、免疫印记和逆转录-聚合酶链式反应(RT- PCR)方法检测PTSD大鼠蓝斑神经元缝隙连接蛋白43的表达变化.结果 经SPS刺激后大鼠蓝斑神经元细胞内Cx43蛋白和mRNA于ld开始逐渐升高,4d时表达多,之后逐渐下降.结论 创伤后应激障碍模型大鼠蓝斑Cx43的表达变化,可能与PTSD大鼠蓝斑功能异常相关.
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自体骨髓间充质干细胞移植后心肌缝隙连接蛋白43表达与室性心动过速发生的关系
目的:缝隙连接蛋白43对维持心肌细胞的连接通讯功能、电信号传导和正常的节律性收缩起重要作用,其表达和分布的异常是多种室性心律失常的解剖学基础.建立小型猪急性心肌梗死模型,观察自体骨髓间充质干细胞移植后室性心动过速的发生及心肌缝隙连接蛋白43的表达.方法:实验于2006-01/2007-01在河北省人民医院导管室完成.①材料:选取8～12月龄小型猪22头,由河北医科大学实验动物中心提供,体质量20～30 kg,随机数字表法分为细胞移植组12头、模型对照组10头,实验过程中对动物的处置符合动物伦理学标准.②实验方法:无菌条件下抽取猪双侧股骨骨髓20 mL,percoll法+贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,待细胞生长达75%融合时用胰酶消化传代.将传至第2代细胞加入终浓度为10 μmol/L的5-氮胞苷进行诱导,用胶体金标记12 h后继续培养20 d用于移植.两组小型猪均采用球囊堵闭法建立急性心肌梗死模型,心电图监测示相关至少2个导联ST段抬高大于0.2 mV、术后血肌钙蛋白和肌酸磷酸激酶同工酶升高超过正常的两倍为建模成功标准.细胞移植组于造模成功后经OTW球囊于第一对角支远端1 cm处再次阻断血流,注入经胶体金标记的10×107个骨髓间充质干细胞.③实验评估:于细胞移植后2 h及4周行电生理程序刺激,观察室性心动过速的发生情况.末次电生理检查后,采用免疫组化染色法检测心肌缝隙连接蛋白43的表达,计算其积分吸光度值.结果:①模型建立指标检测:与术前比较,造模后所有小型猪血肌钙蛋白含量和肌酸磷酸激酶同工酶活性均增高,峰值浓度分别为(21.3±3.6) μg/L和(178.3±41.4)IU/L,术中心电图ST段平均抬高(10.67±1.43)mm,证明急性心肌梗死模型成功建立.②骨髓间充质干细胞移植后室性心动过速的发生情况:与模型对照组诱发出室性心动过速的动物数量比较,术后2 h细胞移植组无明显变化(χ2=0.201,P=0.650),术后4周细胞移植组明显降低(χ2=4.455,P=0.035).③骨髓间充质干细胞移植后梗死心肌缝隙连接蛋白43的表达:术后4周移植到梗死心肌的骨髓间充质干细胞与宿主心肌生长为一体,移植部位颜色变黑,苏木精-伊红染色示移植细胞的胞浆呈紫红色.细胞移植组心肌梗死区缝隙连接蛋白43积分吸光度值明显高于模型对照组(t=16.82,P=0.00),细胞移植组中未发生室性心动过速小型猪的梗死心肌缝隙连接蛋白43的表达明显高于发生室性心动过速小型猪(t=5.06,P=0.00).结论:自体骨髓间充质干细胞移植可促进急性心肌梗死猪心肌缝隙连接蛋白43的表达,其表达程度可能与急性心肌梗死室性心动过速的发生有关.
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兔骨髓间充质干细胞体外向心肌样细胞诱导分化:缝隙连接蛋白43的表达变化
背景:骨髓间充质干细胞经过诱导因素刺激后,能够分化为心肌细胞,同时表达缝隙连接蛋白43,移植后可改善心功能或修复受损的心脏起搏传导系统.而缝隙国连接蛋白43在维持心脏正常功能中发挥着重要作用.目的:观察兔骨髓间充质干细胞体外诱导分化为心肌样细胞过程中缝隙连接蛋白43的表达变化,及诱导后骨髓间充质干细胞间隙连接通讯功能的改变.方法:采用Percoll非密度梯度离心法与贴瞳法分离培养兔骨髓问充质干细胞,正常组不进行任何干预,诱导组加入5-氮胞苷向心肌样细胞诱导,免疫荧光及流式细胞仪检验细胞诱导前后缝隙连接蛋白43的表达.将原代培养1 d的乳鼠心肌细胞分别接种于上述两组细胞爬片上,免疫荧光观察兔骨髓间充质干细胞与心肌细胞形成间隙连接的情况.划痕试验设立正常组、诱导组以及添加甘草次酸的阻滞剂组,观察兔骨髓间充质干二细胞诱导前后细胞间隙连接的功能变化.结果与结论:正常组骨髓间充质干细胞缝隙连接蛋白43呈弱表达,5-氮胞营诱导2,4周后缝隙连接蛋白43的表达均显著增加(P<0.01),细胞间隙连接通讯功能明显增强(P<0.001),且随诱导时间的延长呈依赖性增强(P<0.05).骨髓间充质干细胞与心肌细胞共培养后,诱导组缝隙连接蛋白43明显呈线状表达在两个相邻细胞的接触面.与诱导4周时比较,阻滞剂组细胞问隙连接通讯功能明显受到抑制(P<0.001).提示骨髓间充质干细胞能够自发衷达缝隙连接蛋白43,在移植后早期能与心肌细胞形成间隙连接,从而有利于移植后心肌电传导,并发挥骨髓间充质干细胞的旁分泌效应.
