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基层适宜的沙眼衣原体检验技术
沙眼衣原体是一类在细胞内寄生的微生物,引起的泌尿生殖道感染已成为常见的性传播疾病.它可引起男性尿道炎、附睾炎,女性宫颈炎、盆腔炎、宫内感染等多种疾病,尤其是在与淋球菌等合并感染时可加重疾病的发展并引起其它并发症.孕妇生殖道感染沙眼衣原体可导致新生儿眼炎和肺炎,在孕前优生健康检查项目中进行淋球菌及沙眼衣原体检查,对预防新生儿疾病具有重要的现实意义.由于沙眼衣原体感染者中,有50%的男性和70%~80%的女性常表现为无临床症状,所以其实验室检查具有重要作用[1].沙眼衣原体实验室检查方法主要分3大类:①细胞培养法,检测过程类似病毒分离培养;②分子生物学方法,如PCR测DNA;③抗原检测方法,如免疫层析法测抗原.
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细胞培养法检测和分离狂犬病街毒的可行性研究
目的 研究MNA细胞培养法检测和分离狂犬病街毒的可行性.方法 用MNA细胞培养法、荧光抗体实验(FAT)和双抗体夹心ELISA方法分别检测33份狂犬病街毒样品、20份狂犬病毒阴性犬脑样品和4份正常鼠脑样品.结果 MNA细胞培养法检测57份待检样品,培养48 h的实验结果显示,33份狂犬病街毒样品均为阳性,狂犬病毒阴性犬脑样品和正常鼠脑样品均为阴性,与FAT、双抗体夹心ELISA方法的检测结果完全一致.结论 MNA细胞培养法对样品中狂犬病街毒的检测具有较高的灵敏度和特异性,可用于狂犬病街毒的检测和分离.
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实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒病毒的比较
目的比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法、RT-PCR法及细胞培养法检测甲3型流行性感冒(流感)病毒的灵敏度与特异性.方法采用建立的实时荧光定量RT-PCR、RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离等3种方法,同时对流感监测点送检的60份疑似流感标本检测甲3型流感病毒.结果细胞病毒分离的阳性数为10份,RT-PCR与实时荧光定量RT-PCR的阳性数分别为12份和15份.实时荧光定量RT-PCR的灵敏度达0.01TCID50且对甲1型流感病毒、乙型流感病毒、禽流感病毒H5、严重急性呼吸道综合征冠状病毒及其它呼吸道病毒均无交叉反应,从病毒核酸提取至完成检测仅需3h左右.结论实时荧光定量RT-PCR由于检测在密封环境中进行,避免了产物与环境间的交叉污染,且是3种方法中为快速敏感的方法,适用于公共卫生应急疫情的实验室快速诊断.
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沙眼衣原体细胞培养法在临床诊断中的应用
泌尿生殖道沙眼衣原体感染是近年来在我国发病率迅速上升的性传播疾病之一.它引起的疾病范围广泛,并能导致诸如盆腔炎及异位妊娠等严重并发症.因此,如何正确诊断该病就显得十分必要.实验室诊断方法能够发现有症状或无症状感染者的病原体,国内已开展的有聚合酶链反应(PCR)法、直接免疫荧光法(DFA)、酶免疫法(EIA)和细胞培养等.我们开展沙眼衣原体细胞培养已有十几年,本文结合工作评述这种方法在临床诊断中的应用价值.
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快速试纸法与细胞培养法在流感样患者中的临床应用
目的 评价流感病毒快速检测法与细胞培养法诊断流感样患者的临床价值.方法 对48例符合流感样病例条件的患者分别进行甲型流感病毒快速检测及细胞培养法病原学检测.治疗后3~4 d,对患者进行随访.结果 甲型流感快速病毒检测阳性率为16%,细胞培养流感病毒检出率为22%.甲型流感病毒快速检测法的阳性预测值、阴性预测值和诊断效率分别为0、72.5%和60.4%.结论 快速免疫病毒检测法和细胞培养法目前还不能满足临床需要.
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抗病毒口服液的抗病毒作用实验研究
抗病毒口服液对治疗流行性感冒、发热、咳嗽、咽痛、痄腮红肿等症收到良好效果.为进一步证实其治疗作用,我们于2007年6~7月对该制剂的抗病毒作用进行研究.现采用细胞培养法,在细胞水平上进行试验.根据流感病毒、副流感病毒、单纯疱疹病毒、腺病毒在细胞中生长的特点、分别采用血球吸附试验、细胞病变抑制试验.并分中和杀伤作用组、药物对病毒繁殖抑制作用组进行试验,报告如下.
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实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的比较
目的:比较实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法与细胞培养法检测流行性感冒病毒的差异。方法采用实时荧光定量RT-PCR及经典的狗肾传代细胞病毒分离2种方法,同时对流感监测点送检的80份疑似流感标本检测流感病毒。结果细胞培养病毒分离的阳性数为26份,实时荧光定量RT-PCR的阳性数为36份,χ2=8.1, P<0.005。结论通过该实验,验证了实时荧光定量RT-PCR的确快速敏感,适用于实验室快速诊断。
关键词: 实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应 细胞培养法 流感病毒 -
实时荧光RT-PCR与细胞培养法在流感病毒检测中的应用效果观察
目的:分析研究实时荧光逆转录聚合酶链式反应RT-P CR和细胞培养法两种检测方法在流感病毒检测中的应用、及适合的领域。方法采集2014年10月至2015年3月国家级流感检测哨点医院抚顺市中心医院内科和儿科门诊病例咽拭子样本500份,同时采用实时荧光RT-PCR检测流感病毒核酸,以及采用MDCK进行阳性标本培养,分离流感病毒,比较两种方法的灵敏度以及差异性。结果在500份样本中,通过荧光RT-PCR检测阳性84份;通过MDCK细胞培养法阳性35份。二者之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。结论实施荧光RT-P CR在检测流感病毒时快速有效,更适合应急疫情的快速诊断。细胞培养法更适合核实疫情的实验室诊断,通过病毒抗原性和基因特性进行分析,是流感病原学检测的基础。
关键词: 实时荧光RT-PCR 细胞培养法 病毒核酸 MDCK -
快速诊断方法在流感暴发疫情调查中的应用
在流感的暴发疫情中能快速地进行病原检测,对患者及时正确的治疗及流感疫情的早期发现具有重要意义,可为及时控制及快速扑灭疫情赢得宝贵的时间.2003~2004年初,本市部分学校相继出现了几起流感样疫情的暴发,为快速查清疫情,尽快采取合适措施,我们尝试一种快速诊断方法并在几起流行性感冒暴发疫情调查中应用,同时用细胞培养法进行流感病毒分离,进一步对疫情进行确诊及亚型的鉴定,并比较两者的敏感性.结果报告如下.
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应采用细胞培养法取代动物试验法检定狂犬病疫苗
在<中国生物制品规程>2000年版中,规定的狂犬病疫苗的多项检定均采用小鼠实验,如病毒滴定、病毒灭活确证试验以及疫苗效力测定等.
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三种检验方法在诊断女性生殖道沙眼衣原体感染的比较研究
目的:比较不同方法对宫颈拭子样本沙眼衣原体的检测效果.方法:采集300例20-50岁无感染症状女性宫颈分泌物,分别采用细胞培养、聚合酶链式反应及胶体金法进行沙眼衣原体检测,培养阳性或两个非细胞培养方法检测为阳性,定为真阳性,称为"扩大金标准".结果:300例受检查者.按"扩大金标准"CT感染者共36例,发病率为12%(36/300),细胞培养、聚合酶链式反应、胶体金法敏感性分别为72.22%、91.67%、52.78%.特异性分别为100%、98.11%、98.86%.阳性预测值分别为100%、86.84%、86.36%.阴性预测值分别为96.35%、98.85%、93.88%.结论:三种检测方法均可用于CT感染的诊断.
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儿童肺炎衣原体肺炎实验与临床的初步研究
为了解儿童肺炎衣原体(C.Pn)感染状况及临床特点,初步探讨协助临床诊断的方法,采用Hep-2细胞培养法对87例肺炎患儿的鼻咽分泌物进行C.Pn分离培养,同时用微量免疫荧光(MIF)试验检测血清中的IgG、IgM.结果从11例患儿的鼻咽分泌物中分离出C.Pn,阳性率12.64%,其中3岁及以下阳性率12.2%(5/41例),3岁以上阳性率13%(6/46例),两者差异无显著性.在这11例患儿中,8例检到相应的高效价抗体(有1例未采到血清).提示C.Pn是儿童呼吸道病原之一,在婴幼儿中也很常见.
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细胞培养法在基因工程药物血药浓度测定中的应用进展
基因工程药物的血药浓度测定主要有:免疫测定法(immunoassay) [1]、核素标记示踪法(radioiodination ) [2]、色谱法(chromatography)及生物鉴定法(bioassay)等[3].近年来,由于许多基因工程药物已建立了国际通用的标定单位的特定依赖细胞株和标准方法,使生物鉴定法中的细胞培养法在基因工程药物血药浓度测定中的应用有了新的进展.1 细胞培养法的特定依赖细胞株细胞培养法主要是以药物对特定依赖细胞的增殖或抑制细胞数目的增减为量效指标.
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PCR检测老年呼吸道疾病患者肺炎衣原体感染临床研究
肺炎衣原体(chlamydia pneumonia CPn)又称TWAR组衣原体,1989年定名为衣原体属内的第3种,在世界上多个国家和地区均有流行.主要引起人的非典型肺炎、支气管炎等呼吸系统疾病.由于肺炎衣原体只能在活细胞内生长繁殖,因此,用细胞培养法分离检测肺炎衣原体时间长,方法复杂,分离率低.而血清学检测只能做回顾性诊断,使肺炎衣原体的临床诊断受到限制.本文用快速、敏感、特异的聚合酶链式反应(PCR)技术对广州地区部分老年呼吸疾病患者进行了肺炎衣原体特异性DNA检测,以了解老年呼吸疾病患者肺炎衣原体感染状况,现将结果报道如下.
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疑似生殖器疱疹患者标本中单纯疱疹病毒的检测
生殖器疱疹的典型症状为水疱和溃疡,但症状不典型的生殖器疱疹患者也不少,亦有女性宫颈感染单纯疱疹病毒(HSV)的报道.国内实验室诊断生殖器疱疹的方法有细胞培养法、血清抗体测定,而HSV抗原检测的报道甚少,为了解疱疹感染情况及特征,我们对疑似生殖器疱疹患者进行HSV抗原检测.
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多次传代培养提高沙眼衣原体泌尿生殖道感染的检出率
沙眼衣原体(Chlamydia trachomatis,Ct)所致的泌尿生殖系感染是目前世界范围内为流行的性传播疾病,在某些西方国家已超过淋病占各种性传播疾病的首位~([1]).在我国,近年日益增加的Ct泌尿生殖道感染已受到重视.在Ct感染的诊断上,实验室一般以传统的细胞培养法、分子生物学技术的LCR和PCR法以及免疫学类的EIA、DIF和VIDAS-CHL法进行诊断.由于细胞培养法结果稳定、可靠,是评价其他方法的"金标准",也是世界卫生组织推荐的主要方法之一~([2]).我们研究Ct的传代培养和影响因素,有助于提高Ct的检出率.
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细胞培养法真菌污染控制初探
应用细胞培养法分离样品中的病毒是病毒检验的常规方法,被检样品的种类有生物样本,亦有外环境水样本等.对外环境水而言,污染成分特别复杂,除了化学污染外,尚有难以预料种类的细菌、真菌污染.对于细菌污染, 我们通过药敏试验,选取广谱抗生素组合,能够达到抑制细菌生长的目的.而对真菌来说, 就难以选择广谱的抑菌药物.现将1年多来我们处理水样本中真菌污染的方法总结如下 .
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乳腺癌细胞株两种原代培养方法的比较
目的 探讨乳腺癌细胞株原代培养的方法.方法 取“人乳腺-人乳腺”小鼠模型的乳腺癌原位灶,用组织块培养法和细胞培养法分别对其进行原代培养,并对两种培养方法的结果进行比较.结果 两种方法均能得到乳腺癌原代细胞,组织块培养法的成功率为90.0%,细胞培养法的成功率为20.0%.结论 组织块培养法是较好的原代培养方法.
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人胚胎干细胞建系的研究进展
人胚胎干细胞(human embryonic stem cells,hES细胞)体外成功建系,对人类胚胎发生和发育生物学、新药物开发、细胞和组织的移植等研究领域具有重大意义和深远影响.近年干细胞的研究发展很快,已成为生物学领域研究的热点之一.现对人类胚胎干细胞建系的胚胎来源、内细胞团分离、ES细胞培养体系、伦理问题、研究中存在的问题以及应用前景等作一综述.
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NGU患者沙眼衣原体不同检测方法探讨
为探讨适用于基层实验室,方便快捷,特异性、敏感性均佳的沙眼衣原体检测方法,我们应用细胞培养法、快速免疫测定法(C-C快速法)、金标斑点法3种检测方法,对NGU患者进行了检测,并对结果进行了比较.