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静脉移植骨髓间充质干细胞对大鼠脊髓损伤后少突胶质细胞再髓鞘化的影响
有研究结果表明,骨髓间充质干细胞(MSCs)移植治疗SCI能明显改善脊髓的神经功能[1-2].我们应用常规电镜技术和免疫组织化学荧光标记方法,观察Mscs移植治疗对损伤脊髓少突胶质细胞超微结构和髓磷脂碱性蛋白(MBP)、髓鞘蛋白前脂蛋白(PLP)含量的影响,并探讨其机制.
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一种异硫氰酸荧光素标记脂多糖的新方法
目的 介绍一种异硫氰酸荧光素(FITC)标记脂多糖(LPS)的新方法.方法 用三乙胺将4 mg LPS双链离解为单链结构后,再用FITC标记LPS,通过分光光度计测定其标记率,并与旧式FITC标记LPS的方法进行比较.同时测定标记后FITC-LPS的生物活性、刺激单核细胞分泌肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的能力及与单核细胞膜的结合能力.结果 新方法FITC标记LPS的标记率为1 mol LPS中FITC占0.980 mol,原方法FITC的标记率为1 mol LPS中FITC占0.025 mol,两者比较差异有显著性(P@0.05).而FITC-LPS与标准LPS的生物学活性、刺激单核细胞分泌TNF-α的能力及与单核细胞膜的结合能力差异无显著性(P#0.05).结论 新式FITC标记LPS的方法其标记率高,方法简单,且保存LPS的生物学特性,是实验外科中研究LPS有效的方法.
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放射治疗面罩固定两种不同标记法的效果比较
放射治疗要求,每次摆位能使患者体位得到重复.面罩固定虽然可防止患者因下意识运动而使治疗体位发生变化,但患者体表与面模之间可产生一定的相对位移,从而影响面罩固定的效果.为使面罩固定达到好的效果,我们采用两种不同标记法进行比较,现将结果报告如下.
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伞形科常用中药品种rDNA序列特征及其标记方法研究
目的:探讨伞形科27种常用中药指纹图谱鉴定的分子特征标记,探索筛选标记方法.方法:扩增伞形科27种植物的rDNA序列,限制性内切酶消化,聚丙烯电泳,其中6个品种测定rDNA序列.结果:PCR获得的rD-NA序列片段包括ITS1、ITS2、5.8S全长序列以及18S、26S部分序列.将PCR产物经限制性内切酶MSPⅠ消化后的电泳图,27个品种出现了16种特征性图谱,其中有11个品种的图谱与其他品种不相同;经限制性内切酶HaeⅢ消化后出现5种特征性图谱,其中有3个品种的图谱不与其他品种相同.6个品种经测序,获得了长度为652~656bp的基因序列.根据rDNA序列构建的相似系统树,限制性内切酶消化电泳图相同的三组品种,序列相似度高.结论:rDNA序列特征是伞形科中药鉴别的有效分子标记,序列测定法优于限制性内切酶切片长度多态性的分子标记方法.
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双重标记法定性检测AS斑块中的凋亡细胞
长期以来,人们一直认为动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是一种以平滑肌细胞(smooth muscle cell,SMC)增殖和变性为主要病变的疾病,但近年的研究表明,细胞凋亡作为一种生理性死亡形式不仅在正常的血管内存在,而且以高于正常情况下的凋亡率参与了AS的发病过程,并调节着动脉管壁中SMC的数量[1]。目前,细胞凋亡与AS关系的研究已成为探索AS发病机制的一条新途径。 尽管已有大量的形态学证据支持细胞凋亡参与AS发生发展的观点,但由于AS斑块组成的相对复杂性,要阐明AS血管壁中凋亡细胞的性质及各种发生凋亡的细胞之间的相对凋亡率等问题尚存在一些困难,本文为进一步开展这一领域的研究在技术上进行了初步探索,建立了利用DNA缺口末端标记(即末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记,TUNEL)技术和免疫组织化学技术相结合的双重标记方法对AS斑块中的凋亡细胞进行了定性检测。
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解毒通络方调控脑缺血损伤后海马神经元突触可塑性变化的研究
目的:中风病康复期,神经元功能联系再建是脑机能恢复的重要生物学基础.突触可塑性变化是其核心,突触素P38与突触可塑性关系密切.方法:应用电镜超微结构分析与免疫组织化学标记方法,观察了大鼠脑缺血再灌注损伤不同时期,海马神经毯的突触形态与突触素P38的表达特征,以及解毒通络方对相关变化的调控规律.
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任意分组标记法在cDNA微阵列图像分析中的应用
获取cDNA微阵列点的颜色数据,是实现cDNA微阵列图像分析的基本前提.cDNA微阵列的构成是多种多样的,主要表现在具有不同的点阵密度和不同的分布形状等方面.通用、方便和快捷的数据点颜色值获取方法,将有助于扩大计算机分析系统的数据处理速度和应用范围.本文介绍了任意分组标记法的基本原理及其在cDNA微阵列图像分析系统中的应用.
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99mTc直接与间接标记膜联蛋白V静脉血栓模型显像质量的比较
目的 探讨利用99mTc直接与间接标记的膜连蛋白V(Annexin V)进行静脉血栓显像的可行性,以及对两者显像质量进行比较.方法 通过直接标记法与间接标记法分别得到99mTc-Annexin V与99mTc-HYNIC-Annexin V.将20只家兔随机等分为直接标记血栓组、直接标记对照组、间接标记血栓组及间接标记对照组.两血栓组经手术在下腔静脉放入螺旋铜丝,建立静脉血栓模型,两对照组进行与建模相同过程手术但在下腔静脉不放入铜丝.术后1 d直接标记两组注射99mTc-Annexin V,间接标记两组注射99mTc-HYNIC-Annexin V,注射后30、60、90及120 min显像,计算两血栓组血栓/本底、血栓/头侧下腔静脉部位放射性计数比值,计算对照组与血栓组血栓对应的下腔静脉部位分别与本底、头侧下腔静脉部位放射性计数比值.两血栓组血栓行HE染色.结果 两血栓组10只家兔血栓均呈放射性浓聚影,两对照组下腔静脉未见浓聚.直接标记血栓组血栓/本底、血栓/头侧下腔静脉为4.16±0.19、1.69±0.16,间接标记血栓组为3.92±0.38、1.81±0.08,两者差异无统计学意义(t=-1.388、1.248,P>0.05).直接标记对照组对应下腔静脉/本底、对应下腔静脉/头侧下腔静脉为1.60±0.14、0.97±0.05,间接标记对照组为1.60±0.13、0.94±0.10,与各自血栓组数据比较差异有统计学意义(t=24.1、9.4,12.8、14.9,P<0.05).两血栓组血栓病理显示为新鲜混合血栓.结论 99mTc-Annexin V及99mTc-HYNIC-Annexin V均有望成为一种新的静脉血栓显像剂,两者显像质量无明显差别.
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地高辛素标记DNA探针原位杂交的简便方法
原位杂交是将重组核酸分子杂交技术与组织细胞化学及免疫组织化学技术结合起来,在组织细胞原位显示某种特定基因、mRNA及其产物(特异蛋白质)的表达进行定位和定量检测的一项新技术。该方法用于组织和细胞学研究27年来[1],不论是对细胞内的DNA,还是mRNA已有大量成功的报告[2,3]。其中,DNA探针一般比RNA探针敏感,使用较方便,能选用各种标记方法,且杂交适宜温度的范围较宽。但操作程序较复杂,不易驾驭。
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一种高效FITC标记LPS方法的建立及应用
目的 探索一种高效的荧光素示踪内毒素(lipopolysaccharide,LPS)的方法.方法 将LPS解聚为单体后,加入表面活性剂,在37℃中性溶液中用FITC标记LPS 18 h,通过分子截留技术将小分子游离的FITC及其他杂质从FITC-LPS中除去,并用荧光分光光度计分别测定标记反应液和纯化后的FITC-LPS溶液的荧光值,将两者进行比较,测定荧光标记率.结果 本方法标记的FITC-LPS在激光共聚焦显微镜下能进行良好示踪.经荧光分光光度计检测其标记率为LPS:FITC=1:33.13(物质的量比值).结论 利用表面活性剂与超滤纯化相结合对LPS进行FITC标记的方法较传统方法效率高,操作简单可靠,为医药学实验中示踪LPS提供了一条有效的途径.
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HIV-1整合酶酶联免疫吸附试验的建立和应用
目的:建立一种检测人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)整合酶的酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,用于筛选HIV-1整合酶抑制剂.方法:将质粒F185K/C280SIN1-288转化到大肠杆菌中,经IPTG诱导表达,柱亲和层析纯化,获得HIV-1整合酶融合蛋白,建立酶联免疫吸附试验(ELISA)方法.与3H同位素标记方法比较,检测其生物学活性,并用ELISA方法测定了已知HIV-1整合酶抑制剂,验证方法的可靠性.结果:SDS-PAGE电泳分析显示相对分子量31000上方有HIV-1整合酶融合蛋白条带出现.
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大鼠神经干细胞的荧光标记及脑内移植
增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)是绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的人工改造型,在蓝色光(波长488 nm)激发下可以稳定地发出绿色荧光,以EGFP示踪是目前细胞生物学示踪剂研究中的一种重要手段[1].笔者分离培养了胚胎大鼠神经干细胞(neural stem cells,NSCs),以逆转录病毒介导EGFP进行标记,探索标记方法的可行性以及EGFP对NSCs正常功能有无影响.并做标记细胞脑内移植实验,探讨EGFP在NSCs脑内移植中的示踪作用.
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Rituximab的碘标记方法及其在正常小鼠体内的生物分布
采用N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)方法对Rituximab(美罗华)进行标记,并优化标记条件.系统考察了反应时间、NBS 用量、反应温度、反应体积、pH值及KI的加入等条件对125I-Rituximab标记率的影响,用ITLC-SG测定标记率和放化纯度.确定佳条件为:反应时间2~3 min、pH 7.0、室温、反应体积80 μL为反应优条件.在佳条件下,5次标记实验标记物的放化纯度为93.9%±1.6%.采用体外结合实验测定储存不同时间131I-Rituximab的免疫活性,结果表明随着131I-Rituximab储存时间的增加免疫活性下降.正常小鼠静脉注射131I-Rituximab后体内分布显示血液中放射性分布较高,并可持续6 d,表明131I-Rituximab体内稳定.异常毒性实验结果表明131I-Rituximab毒性低.