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异基因树突细胞体外诱导抗慢性粒细胞白血病作用研究
树突细胞(DC)是体内惟一可以直接激活初始T细胞的专职抗原提呈细胞,是激发免疫应答的关键.我们选用持续表达BCR-ABL肿瘤抗原的K562细胞冻融抗原负载健康供者DC,避免自体肿瘤抗原和自身DC存在的缺陷,探索BCRABL肿瘤抗原负载的异基因健康供者DC在体外能否诱导HLA部分相合的慢性粒细胞白血病(CML)患者T细胞产生抗BCR-ABL+白血病效应.
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视网膜母细胞瘤患者外周血树突状细胞的体外诱导扩增及鉴定
树突状细胞(dendritic cells,DC)是目前发现的人体内功能强的一类专职抗原提呈细胞(antigen presenting cells,APC)[1].近年来,国外学者应用肿瘤抗原将DC致敏,体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocyte, CTL)的产生,进行T淋巴细胞的过继免疫治疗,取得了令人鼓舞的结果[2-5].肿瘤抗原负载的树突状细胞疫苗既可提高肿瘤的免疫原性,又能有效激发抗肿瘤的细胞免疫反应有望成为肿瘤生物治疗的又一新兴手段.有研究表明视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,Rb)的发生、发展及转归与免疫有着密切的关系[6],但从DC入手探讨Rb的免疫治疗及预防的报道少见.
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B细胞的自身免疫与免疫调节
B细胞在免疫系统中可以发挥多种功能,主要是通过递呈抗原和产生抗体起到免疫调节作用.B细胞与其他淋巴细胞相似,既可以诱发疾病,也可以阻止疾病的发展、减轻疾病的严重性[1].如在自身免疫性疾病中,B细胞释放自身抗体损伤靶组织,因此,被认为是致病因素;但是,其所释放的自身抗体也可以通过清除凋亡细胞、减少自身抗原负载,从而对机体起到保护性作用.此外,B细胞还能够产生不同的促炎细胞因子,其中包括B1细胞产生的肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、干扰素γ (interferonγ,IFNγ)和白介素-12(IL-12);B2细胞产生的IL-4和IL-13[2].以上特性使B细胞在免疫调节中具有多效性,这些具有调节功能的B细胞被称之为调节性B细胞(regulatory B cell,Bregs),现将对Bregs的自身免疫与免疫调节机制做一综述.
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牛膝多糖与锌对小鼠树突状细胞增殖分化和抗原提呈能力的影响
目的 研究牛膝多糖与锌单用及合用在异源性抗原负载的条件下对小鼠树突状细胞(DC)增殖分化和抗原提呈能力的影响,并通过体内实验证实其对荷瘤小鼠的免疫效应,探讨其发生机制.方法 无菌处死正常小鼠获取其骨髓细胞,粒细胞一巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素-4(IL-A)体外诱导骨髓细胞生成DC,同时培养液中加入不同质量浓度的牛膝多糖(200,300,400 pg/μL)、锌((0.02 μg/mL).通过显微镜、流式细胞检测技术观察牛膝多糖、锌单用与合用在异源性抗原负载的条件下对DC的影响,并通过体内实验观察对H22荷瘤小鼠脾指数、胸腺指数及肿瘤质量的影响.结果 牛膝多糖和锌单用在异源性抗原负载的情况下能够促进小鼠骨髓源性DC的分化、成熟及表面标记CD86,CD11 a的表达,增强DC诱导的细胞毒性T淋巴细胞反应,能够使荷瘤小鼠免疫器官脾脏和胸腺的质量增加,明显抑制肿瘤的生长,并存在明显量效关系;中剂量为正性效应,高剂量为负性效应;但牛膝多糖和锌合用并不协同增强效应.结论 牛膝多糖和锌在异源性抗原负载的条件下能够通过刺激DC的分化成熟,提高其抗原提呈能力,进而起到提高机体细胞免疫的作用.
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抗原负载的树突细胞介导的特异性抗慢性粒细胞白血病作用
慢性粒细胞白血病(CGL)来源的树突细胞(DC)在体外能较强地激发特异性细胞毒T细胞产生,对自身白血病细胞具有较强的杀伤活性[1].我们探讨CGL细胞冻融抗原(CLA)负载的DC与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共同培养能否进一步提高特异性细胞毒T细胞的杀伤活性.
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体外培养的小鼠抗原负载树突状细胞的形态学特征
目的:研究体外培养的小鼠抗原负载树突状细胞(dentritic cells,DCs)的形态学特征,为肿瘤的生物学治疗提供形态学基础.方法:分离和培养DC,制备B16黑色素瘤细胞抗原,进行共培养,即为抗原负栽的DC.建立B16黑色素瘸小鼠模型,于瘤周围皮下注射抗原负载的DC.应用光镜、免疫组化方法和透射电镜观察抗原负载DC的形态学特征.结果:培养的抗原负载DC与DC比较,体积较大,表面突起较粗大且弯曲.免疫组化染色显示抗原负载树突状细胞主要分布于肿瘤周围皮肤的乳头层、网织层和肿瘤周围,于局域淋巴结的被膜下窦和副皮质区有散在分布.电镜下抗原负载DC细胞体积较大,核有切迹,细胞表面的突起,与肿瘤细胞和淋巴细胞接触密切.结论:抗原负载DC表现出比一般树突状细胞功能更加活跃的形态特征,冻融法全细胞来源的肿瘤抗原负载DC可以获得理想的DC疫苗.
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脂多糖联合冻融肿瘤细胞抗原与树突状细胞的成熟
目的:探讨脂多糖(LPS)联合冻融肿瘤细胞抗原对树突状细胞(DCs)的超微结构特征和表面共刺激分子的影响.方法:常规方法分离DCs,采用GM-CSF和IL-4诱导后,实验分实验组即DCs-(Ag+LPS)组用结肠癌细胞冻融物联合脂多糖,DCs-Ag组用结肠癌细胞冻融物,DCs-LPS组用脂多糖分别刺激未成熟DCs.电镜观察；流式细胞仪检测DCs表面的共刺激分子CD80、CD83.结果:透射电镜观察实验组较各对照组小鼠骨髓DCs表面突起明显增多,DCs-(Ag+ LPS)组DCs表面突起多,胞质内可见大量较其他各组电子密度更低的多泡体,有时可见多泡体贴近细胞膜.流式检测显示LPS联合冻融肿瘤细胞抗原组DCs表面共刺激分子CD80、CD83的表达也较对照组明显升高.结论:LPS联合冻融的肿瘤抗原较单一的LPS或冻融肿瘤抗原更能促进DCs从未成熟向成熟DCs的转化.
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树突状细胞疫苗治疗慢性乙型肝炎的临床观察
形成慢性乙型肝炎的重要原因之一是树突状细胞(DC)功能缺陷.已知DC是功能强的抗原递呈细胞,也是惟一能激活初始型T淋巴细胞的抗原递呈细胞,在T淋巴细胞介导的细胞免疫中起重要作用.当用特异性病毒抗原负载DC时,有可能通过诱导抗原特异细胞毒性T淋巴细胞(CTL)活性而特异性杀伤表达病毒抗原的靶细胞[1].利用DC进行主动免疫治疗很可能成为慢性乙型肝炎治疗的有效途径[2,3].据此利用乙型肝炎病毒(HBV)的S基因表达产物致敏DC,用于轻度慢性乙型肝炎的治疗,现报道如下.
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抗原负载的树突状细胞激发肝癌免疫反应的临床研究
树突状细胞(dendritic cell,DC)是功能强大的抗原递呈细胞(APC).体外制备负载肿瘤抗原的DC瘤苗并注射回体内以激发机体抗肿瘤免疫是具有良好前景的生物治疗方案[1].一、材料与方法
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肝癌细胞抗原负载树突状细胞激活CTL的抗肿瘤作用
肝癌是常见的恶性肿瘤之一,世界范围内每年约有100～125万人死于肝癌,我国是肝癌高发国家.
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抗白血病树突状细胞疫苗的制备
目的探索抗白血病异体树突状细胞疫苗的制备方法.方法从健康者外周血中诱生DC,用不同方法负载K562抗原(化学融合法,冻融抗原冲击法,肿瘤与DC共培养法),比较这些DC疫苗在递呈抗原激活T细胞增殖及杀伤功能方面的差异.结果从健康者外周血中可诱生出具有正常免疫表型和抗原递呈功能的DC.不同抗原负载方法致敏的DC均能激活T细胞特异性杀伤K562细胞.冻融抗原负载的DC能有效刺激T细胞增殖,其活化的CTL对K562的杀伤毒性强.结论异体DC可有效递呈肿瘤抗原,激活T细胞杀伤肿瘤,冻融抗原负载的DC激活T细胞对肿瘤的杀伤强,为今后临床DC疫苗的选择提供了实验依据.
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小鼠骨髓前体细胞来源的树突状细胞超微结构
无菌制备BALB/c小鼠骨髓细胞,按常规方法分离纯化出树突状细胞(DCs),采用GM-CSF和IL-4诱导后,以凋亡肿瘤细胞负载未成熟DCs,再分别加入mCD40L-CHO细胞和TNF-α继续培养48 h,按常规方法分别制备各发育阶段DCs的超薄切片.用透射电镜观察小鼠DCs在不同发育阶段的超微结构特征,并比较凋亡肿瘤细胞负载的小鼠DCs被CD40L和TNF-α刺激后超微结构的差别.实验结果证实DCs在分化发育成熟中存在异质性;DCs可通过吞噬凋亡的肿瘤细胞负载抗原;CD40配基化对DCs的分化成熟作用优于TNF-α.
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热休克凋亡食管癌细胞抗原负载的树突状细胞联合放疗对食管癌的疗效
目的 研究热休克凋亡自体食管癌肿瘤细胞抗原负载的树突状细胞(dendritic cell,DC)对激发食管癌患者特异性免疫应答的影响及治疗的临床疗效.方法 选择2010年11月至2013年6月就诊的手术治疗后食管鳞癌患者40例,随机分为研究组(28例)与对照组(12例).对照组行常规放疗,研究组采用放疗联合DC免疫治疗:(1)留取自体食管癌组织,经热休克处理(42℃,3h)后获得热休克凋亡食管癌抗原;(2)分离、培养外周血单个核细胞,其中贴壁细胞经过重组人粒细胞-单核细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、白细胞介素(IL)-4联合诱导为DC;(3)负载热休克抗原,培养1周后经患者腹股沟皮内注射,1周注射1次,共注射4次.在治疗后1周进行迟发型超敏反应(DTH)检测;在患者治疗前后进行血清中细胞因子和抗原特异性IFN-γ+ CD8+T细胞检测,并进行免疫学疗效评价.治疗后跟踪随访2年,对远期疗效进行评价.结果28例研究组食管癌患者对DC治疗耐受良好,治疗后患者血清中Th1型细胞因子(IL-2、IL-12、INF-γ)水平较治疗前和对照组治疗后均有显著提高(P均＜0.01).治疗后研究组IFN-γ+ CD8+T细胞比例较对照组有显著提高(P＜0.01),其中10例患者IFN-γ+CD8+T细胞比例升高2倍以上.12例食管癌患者DTH试验呈阳性反应,其中9例IFN-γ+ CD8+T细胞比例升高2倍以上.定期随访2年,两组均无脱落病例.研究组1年内死亡5例,存活82.14％;2年内共死亡9例,存活67.86％.对照组1年内死亡6例,存活50.00％;2年内共死亡8例,存活33.33％.研究组随访2年时生存比例大于对照组(P＜0.05).结论 负载食管癌肿瘤细胞热休克凋亡抗原的DC能激发患者的特异性免疫应答、诱导Th1型细胞因子的分泌,联合放疗远期疗效良好,是一种安全的治疗方法.
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树突状细胞抗原负载方法探讨
目的 探讨树突状细胞(DC)抗原负载方法.方法 体外诱导培养外周血单核细胞来源的DC,分别用脂质体和Nucleofector转染试剂盒体外负载抗原,比较2种负载方法转染效率以及对DC表型的影响.结果 Nucleofector转染方法能够显著的提高转染效率,2种转染方法对DC细胞的表型无显著影响.结论 Nucleofector转染是一种有效的DC抗原体外负载方法,为抗原修饰的DC细胞疫苗的改进提供了新的途径.
关键词： 树突状细胞 抗原负载 脂质体 Nucleofector -
用负载供体抗原的致耐受性树突状细胞延长大鼠移植肾存活
目的研究负载供体抗原的致耐受性受体树突状细胞(Dendritic cells, DC)对移植肾存活的影响.方法以BN、Lewis大鼠为肾移植供、受体;受体骨髓源性DC负载供体淋巴细胞抗原并与共刺激阻断剂CTLA4Ig共孵育;将上述DC于肾移植前24 h经股静脉注入受体(治疗组),未注射DC的受体为对照组;观察各组移植肾存活时间,术后第20天,MTT法检测受体脾细胞对供体及无关抗原刺激的反应.结果移植肾存活时间:与对照组相比,治疗组移植肾存活时间显著延长[(54.6±9.5) d vs (8.3±0.8) d , P<0.01].术后第20天,治疗组脾细胞对供体抗原刺激的反应明显低于正常对照[(0.17±0.04) vs (0.74±0.06),P<0.01],而受体对无关抗原刺激的反应与正常对照无显著差异[(0.72±0.04) vs (0.69±0.07), P>0.05].结论负载供体抗原的致耐受性受体DC可以特异性抑制受体对供体抗原的免疫反应、明显延长大鼠移植肾存活时间.
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建立D抗原免疫刺激T细胞活化模型的研究
目的 了解RhD抗原免疫刺激途径,建立D抗原免疫刺激活化的模型.方法 选取RhD血型不同的供者,采用红细胞与单个核细胞直接混合培养,以及DC细胞负载RhD抗原后与单个核细胞混合培养2种实验方案,流式细胞仪检测CD4+和CD8+T细胞的活化量.结果 RhD(-)个体的DC细胞负载D抗原后,可以有效活化RhD-个体的CD4+和CD8+T细胞,而直接混合培养方式则不能.结论 本研究采用DC细胞负载RhD抗原的方法,成功诱导了RhD(-)个体的T细胞活化和增殖,验证了RhD抗原的胸腺依赖性抗原特性,建立了D抗原免疫刺激T细胞活化的模型,可以用于输血免疫的研究.
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抗原负载的树突状细胞疫苗与肿瘤免疫治疗
免疫识别与免疫逃避是恶性肿瘤发病机理及防治中的关键矛盾,它决定着免疫反应的有无和强弱.在重建免疫识别的方法中,树突状细胞(Dendritic clells,DC)负载肿瘤相关抗原已经成为肿瘤治疗研究的热点.
