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抗原冲击致敏的树突状细胞介导的特异性体外抗慢性粒细胞白血病细胞作用
为研究慢性粒细胞白血病(CML)细胞冻融抗原(CLA)致敏的树突状细胞(DC)对特异性抗白血病的作用,将CML患者外周血单个核细胞来源的DC在体外用CLA致敏,再与CML患者的经细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共同培养.应用乳酸脱氢酶释放法观察其对自身CML细胞,K562细胞和Raiji细胞的杀伤活性(CIK+CLA-DC组),与未致敏的DC+CIK(CIK+DC组),CIK组及CIK+CLA组进行比较.结果表明,效靶比为25:1时细胞杀伤活性强,在该效靶比下,4组细胞对自身CML细胞的杀伤活性分别为(68.8±14.2)%,(52.5±9.4)%,(20.7±7.5)%和(24.2±8.7)%.CIK+CLA-DC组杀伤活性强,与其余3组比较有显著性差异(P＜0.01);CIK+DC组比CIK组杀伤活性强(P＜0.01);CIK组与CIK+CLA组比较无显著性差异(P＞0.05).CIK+CLA-DC组在效靶比为25:1时对自身CML细胞,K562细胞和Raji细胞的杀伤活性分别为(68.8±14.2)%,(14.6±6.2)%和(12.7±10.2)%,与K562细胞和Raji细胞比较,具有显著性差异(P＜0.01).结论:CIK对CML患者自身细胞具有一定的杀伤活性;CIK与CML-DC共培养组对自身CML细胞杀伤活性比CIK组强;CIK与CLA抗原致敏CML-DC共培养组具有强的杀伤活性.CLA抗原致敏DC介导的细胞毒作用具有较强的特异性.
关键词： 树突状细胞 慢性粒细胞白血病 冻融抗原 细胞因子诱导的杀伤细胞 抗白血病作用 -
小鼠CD62L-/CD62L+T细胞体外对抗原刺激的增殖反应
本研究旨在观察CD62L-/CD62L+ T细胞应答抗原的能力,了解CD62L分子在移植物抗宿主病(GVHD)中的作用.用DC细胞呈递特异性抗原hCD4刺激T细胞,流式细胞术检测其表面CD62L分子表达;对分选获得的CD62L-/CD62L+两群T细胞再次给予新的抗原(EL4细胞冻融抗原)刺激,用流式细胞术检测CD62L-及CD62L+ T细胞在前后两次受到不同抗原刺激后的活化增殖能力.结果显示:T细胞表面C1362L+分子在受到抗原刺激后表达下调,CD62L+细胞由69.34%降至36.75%,相应的CD62L-T细胞由30.04%升至63.15%.比较第1天及第7天在高CFSE荧光值区(M1)的细胞数表明,在特异性抗原(hCD4)的刺激下,CD62L+T细胞平均百分比值分别为(87.88±1.08)%,(86.88±1.46)%(P＞0.05);CD62L-T的测得值分别为(84.52±2.73)%(84.71±2.33)%(P＞0.05).两群细胞数在第7天与第1天相比均未出现明显增殖;在非特异性抗原刺激下,CD62L+T细胞在第1天和第6天于M1区的细胞数平均百分比值分别为(76.49±2.41)%,(22.25±3.29)(P＜0.001);C1362L-T测得值分别为(77.35±3.82)%,(74.76±3.90)%(P＞0,05).此结果说明CD62L+T细胞发生了分裂增殖,而CD62L-T细胞群则没有出现类似的情况.结论:通过体外方法获得了CD62L-CD62L+T细胞,这两类细胞在特异性抗原刺激下未发生增殖反应,但在非特异性抗原刺激下CD62L+T细胞发生了分裂增殖,而CD62L-T细胞无此反应.此结果表明CD62L+T细胞在GVHD发生中有着重要作用,同时也为临床上通过体外方法获得CD62L-T细胞而选择性地去除移植物中CD62L+T细胞以减少GVHD的发生提供了思路.
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抗原冲击致敏树突状细胞诱导特异性CTL杀伤Jurkat细胞实验研究
本研究以健康人外周血单核细胞为前体细胞,体外诱导其为树突状细胞(DC),分别负载Jurkat细胞冻融抗原及WT1多肽抗原,产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL),以探讨其对白血病Jurkat细胞的杀伤作用.联合应用rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α及rhsCD40L等细胞因子,密度梯度离心法、贴壁法从外周血获取单核细胞并进行诱导扩增,培养出DC,分别用冻融抗原及WT1多肽抗原冲击致敏DC.实验分4组:冻融抗原致敏DC组为实验组A, WT1多肽致敏DC组为实验组B,未致敏DC组为对照组A,单核细胞组为对照组B,观察CTL对Jurkat细胞的杀伤作用.结果表明:培养出了具有典型特征的DC,它高表达CD40、CD80、CD1a 及CD86等表面标志,能体外诱导强烈的同种异基因混合淋巴细胞增殖反应.实验组显示高水平杀伤率,与对照组比较均具有统计学意义(P＜0.01),实验组A、B间比较无统计学意义.结论:Jurkat细胞冻融抗原及WT1多肽抗原冲击致敏DC能有效诱导T细胞抗白血病作用,为临床研制DC疫苗提供了实验依据.
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卵巢癌细胞株冻融抗原负载的树突状细胞诱导CTL抗卵巢癌免疫应答的体外研究
目的研究卵巢癌冻融抗原负载的树突状细胞(dendritic cells, DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外杀伤卵巢癌细胞的细胞毒性效应. 方法利用免疫磁珠分离法(MACS)分离纯化脐血CD34+细胞并在体外诱导分化为DC,用反复冻融法从卵巢癌细胞系SKOV3中提取的可溶性相关抗原负载DC.流式细胞学检测负载抗原后DC表面各种分化相关抗原的表达,ELISA法检测DC上清中IL-12的表达,混合淋巴细胞反应(MLR)测定DC体外刺激T细胞增殖的能力,MTT法检测抗原负载DC激活的抗原特异性CTL对卵巢癌细胞的杀伤作用. 结果与未经抗原负载的DC相比,经卵巢癌抗原负载的DC不仅能更高地表达各种DC分化相关抗原CD1α(73.35%±2.94% vs 34.1%±2.35%)、CD83(73.9%±8.46% vs 54.68%±3.26%)、CD80(91.95%±2.48% vs 52.53%±3.18%)、HLA-DR(70.05%±2.35% vs 48.7%±2.07%)以及CD54(88.9%±5.52% vs 71.45%±2.29%),同时具有更强的刺激同种异体T淋巴细胞增殖和IL-12分泌的能力(P均<0.05).此外,卵巢癌细胞SKOV3冻融抗原负载DC激活的CTL在体外对SKOV3的杀伤率为77.35%,显著高于未经抗原负载的DC (P＝0.0001). 结论经卵巢癌细胞冻融抗原负载DC激活的CTL在体外具有更强的增殖能力和杀伤卵巢癌细胞的作用.
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WT1致敏树突状细胞激活CTLs对HL60细胞作用的研究
目的:研究分别负载WT1多肽抗原及HL60细胞冻融抗原的树突状细胞(DCs)产生的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTLs)对HL60细胞的杀伤效应.方法:联合应用rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α及rhsCD40L等细胞因子,诱导扩增自健康人外周血获取的单核细胞,培养出DCs,分别用WT1多肽抗原及冻融抗原冲击致敏,激活淋巴细胞.实验分4组:WT1多肽致敏DCs为实验组A,HL60细胞冻融抗原致敏DCs为实验组B,未致敏DCs组为对照组A,单核细胞组为对照组B,LDH释放法检测CTLs对HL60细胞的杀伤作用.结果:培养出具有典型特征的DCs,表达CD40达96%,CD80达77%,CD1α达69%,CD86达97%,体外能诱导强烈的同种异体混合淋巴结胞增殖反应.在效靶比为20:1时,WT1多肽致敏DCs组时HL60细胞杀伤率为89.1%,冻融抗原负载DCs组为90.6%,未致敏DCs组为32.8%,单核细胞组为26.1%.以下多肽或冻融抗原负载DCs与对照组相比显示更强的杀伤效应,P＜0.01.结论:WT1多肽抗原及HL60细胞冻融抗原冲击致敏DCs均能有效诱导T细胞抗白血病作用,为临床研制DCs疫苗提供实验依据.
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冻融抗原冲击致敏的树突状细胞抗肿瘤作用的研究
目的 研究MC-38肿瘤冻融抗原致敏的树突状细胞(DC)对荷瘤小鼠是否有抗肿瘤作用.方法 用MC-38肿瘤冻融抗原体外冲击致敏小鼠骨髓来源的DC,观察其诱导的CTL对MC-38肿瘤细胞的杀伤活性;体内以1×106DC/7只多次接种于已荷瘤小鼠同侧腹股沟皮下,观察抗原冲击的DC对肿瘤生长的抑制作用以及对荷瘤小鼠生存期的影响.结果 体外抗原冲击致敏的DC诱导的CTL对MC-38肿瘤细胞具有显著的杀伤作用,在效靶比为50:1,25:1,12.5:1,6.25:1时其杀伤率分别为68.84%,58.36%,41.56%,24.96%,;抗原冲击致敏的DC体内多次皮下免疫后对肿瘤的生长具有显著的抑制作用,能显著延长荷瘤小鼠的生存期.结论 肿瘤冻融抗原致敏DE多次皮下免疫对荷瘤小鼠具有显著的抗肿瘤作用.
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肿瘤抗原冲击DC诱导淋巴细胞对小鼠胃肠癌的杀伤作用
目的:用胃肠癌冻融抗原冲击树突状细胞(DC)诱导荷瘤小鼠脾细胞,观察DC及细胞毒T细胞(CTL)的生物学功能及对胃肠癌靶细胞体外杀伤作用.方法:小鼠骨髓细胞经GM-CSF、IL-4诱导和胃肠癌细胞系 KATO3、CT26细胞冻融抗原(Ag)的冲击,诱生致敏的DC与活化脾淋巴细胞共培养,获得的CTL对相应靶细胞及对照黑色素瘤细胞进行体外杀伤.结果:制备的DC与CTL具有良好的生物学活性,胃肠癌 Ag冲击的DC诱导的CTL对相应靶细胞的杀伤率分别平均75.98%和86.75%,且效靶比显示量效关系;对无关靶细胞A375为10.57%和11.53%.结论:胃肠癌Ag冲击致敏的DC能诱导CTL产生特异性杀伤作用.
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亚硒酸钠对树突状细胞体外增强CTL杀伤K562细胞作用的研究
目的 探讨经亚硒酸钠(Na2SeO3,Se)处理、K562细胞裂解物(又称为抗原细胞裂解物:ACL)冲击致敏的外周血单个核细胞(PBMNC)衍生的树突状细胞(DCs)体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤白血病细胞的能力.方法 1)DCs培养:用含3种细胞因子重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(rhGM CSF)、重组人白细胞介素 4(rhIL 4)和肿瘤坏死因子(TNF α)的RPMI 1640(10% FBS)培养体系,培养健康人的PBMNC 4 d,收获贴壁细胞;2)DCs分4组:Ⅰ组:单独DC培养组;Ⅱ组:加入0.5 μmol/L Se的DC组;Ⅲ组:加入ACL的DC组;Ⅳ组:同时加入0.5 μmol/L Se和ACL的DC组;3)效应细胞 CTL的诱导培养:用含细胞因子IL 2 的1640(10% FBS)培养体系,将非贴壁细胞(淋巴细胞)作为效应细胞,单独或与各组DC共同孵育5 d;4)CTL活性测定:用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验,靶细胞为K562细胞.结果 效应细胞与K562细胞按不同效靶比混合培养时,DC Ⅳ组、Ⅲ组及Ⅱ组刺激后的T细胞比DC Ⅰ组刺激后的T细胞及单纯T细胞对K562细胞的杀伤作用更显著,杀伤率随效靶比的增加而增加.其中E∶ T=25∶ 1时,T细胞组及T DC Ⅰ、T DC Ⅱ、T DC Ⅲ、T DC Ⅳ组对K562细胞的杀伤率分别为:5.9%±2.4%、15.3%±2.3%、26.3%±3.7%、28.2%±4.5%、36.2%±3.7%.T DC Ⅳ组杀伤活性高于其他各组(P值均<0.01).结论 用含GM CSF、IL 4和TNF α的体外培养体系可从健康人PBMNC获得成熟的DCs,小剂量亚硒酸钠和K562细胞裂解液负载均可诱导出特异性杀伤靶细胞的CTL,且两者具有协同作用.
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抗原负载的树突细胞介导的特异性抗慢性粒细胞白血病作用
慢性粒细胞白血病(CGL)来源的树突细胞(DC)在体外能较强地激发特异性细胞毒T细胞产生,对自身白血病细胞具有较强的杀伤活性[1].我们探讨CGL细胞冻融抗原(CLA)负载的DC与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共同培养能否进一步提高特异性细胞毒T细胞的杀伤活性.
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自体树突状细胞诱导TDLN细胞对胃癌细胞系KATO3的体外杀伤作用
目的:研究用冻融的自体胃癌抗原冲击树突状细胞(DC)来诱导肿瘤引流区淋巴结(TDLN)细胞对胃癌细胞系的体外杀伤作用.方法:采用胃癌患者外周血粘附细胞(PBAC),经GM-CSF、IL-4、TNF-α诱导和自体肿瘤冻融抗原(Ag)刺激诱生所获得的DC与TDLN细胞1∶50比例共培养3天,获得DC激活的TDLN,即DC-TDLN作效应细胞;分别以Ag和培液代替DC同样培养TDLN,即Ag-TDLN和TDLN作对照,对胃癌细胞系KATO3和黑色素瘤细胞系A375进行杀伤.结果:DC-TDLN、Ag-TDLN、TDLN各组细胞对KATO3,均有显著杀伤活性,其中DC-TDLN组的杀伤作用明显优于后两组,且效靶比20∶1的杀伤率优于10∶1,显示可能有量效关系;而TDLN各组不同效靶比对A375杀伤率则无显著差异.结论:自PBAC获得的DC,经自身肿瘤Ag冲击并与自身TDLN共培养,可使后者对胃癌细胞系细胞的杀伤作用明显增强.
关键词： 树突状细胞 肿瘤引流区淋巴结细胞 胃癌 冻融抗原 免疫治疗 -
负载冻融抗原的DC诱导特异性CTL杀伤U937细胞的实验研究
目的探讨树突状细胞(DC)负载白血病细胞株U937冻融抗原,体外诱导细胞毒性T细胞(CTL),使其对U937细胞产生特异性杀伤作用.方法应用基因重组人白介素-4(rhIL-4)、基因重组人粒/单细胞集落刺激因(rhGM-CSF)联合培养体系自正常人骨髓单个核细胞诱导产生DC,使其负载U937冻融抗原,致敏T淋巴细胞,产生CTL.观察负载U937冻融抗原的DC对所激发的T淋巴细胞表型及功能的影响及CTL对U937细胞的特异性杀伤活性.结果负载U937冻融抗原后DC的CD1a表达率较培养前明显增高(P＜0.01),CD86、CD11c、HLA-DR表达也较培养前明显增高(P＜0.01),而CD83、CD14与培养前相比无明显变化(P＞0.05).且负载U937冻融抗原DC诱导的CTL中,CD3+CD8+T细胞比例较诱导前明显增高(P＜0.01).U937冻融抗原负载DC诱导CTL对U937细胞及K562细胞的杀伤率分别为(66.96±6.21)%和(9.81±4.45)%,两者有极显著性差异(P＜0.001).结论经rhGM-CSF、rhIL-4培养产生的DC为CD14-CD1a+的DC,能诱导CTL产生明显的特异性杀伤作用;负载U937冻融抗原DC诱导的CTL中的CD3+CD8+T细胞比例明显增高,提示CD8+T细胞在抗肿瘤免疫中具有极其重要的作用.
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宫颈癌细胞冻融抗原负载树突状细胞激发细胞毒性T淋巴细胞杀伤宫颈癌细胞的体外研究
目的研究HeLa、SiHa两种宫颈癌细胞株冻融抗原负载的树突状细胞(dendritic cells,DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)体外抗原特异性杀伤官颈癌细胞的能力.方法利用免疫磁珠分离法(MACS)分离纯化脐血CD34+细胞并在体外诱导分化为DC,用反复冻融法分别从两种宫颈癌细胞株(HeLa利SiHa)中提取可溶性冻融抗原并负载DC.流式细胞学检测负载两种抗原后DC表面分子的表达,ELISA法检测DC上清中IL-12的表达,MLR测定DC刺激T细胞增殖的能力,MTT法检测DC经抗原负载后激活的CTL分别对HeLa和SiHa细胞的杀伤作用.结果与未经抗原负载的DC相比,经HeLa和SiHa冻融抗原负载的DC能更好的表达各种DC分化相关抗原(CD1a、CD83、CD80、HLA-DR以及CD54),刺激T淋巴细胞增殖和IL-12分泌的能力也显著加强(P＜0.05).与未经抗原负载相比,两种宫颈癌细胞冻融抗原负载DC后激发的CTL在体外对官颈癌细胞的杀伤能力也明显加强.此外,HeLa细胞抗原负载DC诱导的CTL在体外对HeLa细胞的杀伤率为72.2%,显著高于它对SiHa细胞的杀伤率(22.3%);而SiHa细胞抗原负载DC诱导的CTL对SiHa细胞的杀伤率为69.5%,也明显高于它对HeLa细胞的杀伤率(28.1%),具有显著的抗原特异性.结论经宫颈癌细胞冻融抗原负载DC激活的CTL在体外具有更强的增殖能力,并具有抗原特异性杀伤宫颈癌细胞的作用.
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负载卵巢癌冻融抗原对树突状细胞分泌细胞因子的影响
目的 探讨负载卵巢癌冻融抗原对树突状细胞分泌细胞因子的影响.方法 采用反复冻融法获得卵巢癌细胞株SKOV3细胞抗原,联合应用重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子、重组人白细胞介素-4和重组人肿瘤坏死因子-α,体外诱导人外周血CD14+单核细胞为成熟DCs并负载卵巢癌肿瘤抗原;采用ELISA法检测培养细胞上清液中分泌IL-12p70、IFN-γ和IL-10含量,评价非成熟DCs和成熟DCs以及肿瘤抗原负载DCs和未负载肿瘤抗原DCs激活的CTL分泌细胞因子的能力.结果 联合应用重组人的GM-CSF、IL-4和TNF-α可在体外诱导出成熟DCs;经ELISA方法检测,不同状态下的DCs分泌IL-12p70、IFN-γ的量不同,成熟DCs较非成熟DCs有更强的分泌IL-12p70、IFN-γ的能力(P＜0.05),负载抗原DCs激活的CTL较未负载抗原DCs激活的CTL有更强的分泌IL-12p70 [(182.89±4.57) pg/ml和(99.76±5.42) pg/ml,P＜0.01]和IFN-γ的能力[(102.11±5.95) pg/ml和(68.29±5.04) pg/ml,P＜0.01] .而成熟DCs分泌IL-10的能力与非成熟DCs相比,差异无统计学意义(P＞0.05).负载抗原后DCs激活的CTL与未负载抗原DCs激活CTL上清液中IL-10的浓度相比,两者之间的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 细胞因子的分泌量受DCs的成熟状态及某些刺激信号的影响,卵巢癌冻融抗原是其刺激信号之一.
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负载抗原的树突状细胞诱导特异性抗膀胱癌细胞的效应
树突状细胞(DCs)是体内"专职的"抗原提呈细胞,与机体抗瘤免疫关系密切[1].本研究旨在用DCs负载膀胱癌细胞冻融抗原,探讨其在体外对膀胱癌细胞的杀伤效应.
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肿瘤抗原致敏树突状细胞治疗胶质瘤的实验研究
目的研究肿瘤冻融抗原致敏树突状细胞(DC)治疗胶质瘤的疗效.方法从大鼠骨髓中分离出单核细胞后,加入添加rGM-CSF和rIL-4的IMDM培养基中培养后鉴定.制备大鼠C6胶质瘤冻融抗原以及DC疫苗,同时肿瘤冻融抗原致敏DC体外细胞毒试验;建立动物模型,体内应用DC疫苗并观察疗效.结果单核细胞培养8天后可获得大量的树突状细胞;体外细胞毒试验发现对相应的C6肿瘤细胞有明显的杀伤作用;动物实验发现治疗组肿瘤生长明显抑制,而对照组肿瘤明显生长,两组肿瘤体积有显著性差异P<0.01.结论建立了体外扩增大鼠骨髓DC以及制备DC疫苗的方法,采用冻融抗原致敏DC疫苗治疗荷瘤动物生存时间明显延长,肿瘤生长明显抑制,为研究其在脑胶质瘤临床免疫治疗打下基础.
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对负载人胶质瘤冻融抗原的树突状细胞功能的实验研究
目的建立从人外周血诱导扩增树突状细胞(DC)的方法,并探讨冻融抗原制备的DC疫苗在CTL对胶质瘤细胞杀伤效应中的作用与效率.方法将从人外周血分离出单核细胞(PBMC)进行培养,用GM-CSF和IL-4培养7～14 d后,进行鉴定;在DC培养的第7 d,加入自体胶质瘤细胞的冻融抗原以致敏DC,用MTT、乳酸脱氢酶法检测DC刺激T细胞的增殖作用和负载冻融抗原后的DC疫苗对自体CTL杀伤活性的诱导作用.结果PBMC在培养7～14 d后可获得大量的DC,该DC能够强烈的激发自体T淋巴细胞增殖,负载冻融抗原后的DC疫苗能有效地诱导自体CTL的杀伤活性.结论用该方法可以获得大量较纯的DC而满足临床应用的需要;用冻融抗原制备的DC疫苗有很强的免疫活性,具有较高的临床应用价值.
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肝癌细胞冻融抗原制备树突状细胞瘤苗的研究
目的探讨获得高效肝癌树突状细胞瘤苗(Dendritic Cells,DCs瘤苗)的优化方法.方法取健康人新鲜血,Ficoll密度梯度离心分离外周血单个核细胞(PBMC),诱导DCs.A组:用重组人粒巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)诱导DCs,B组:用GM-CSF和IL-4诱导,肝癌细胞冻融抗原冲击,C组:用GM-CSF、IL-4和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导,D组:用GM-CSF、IL-4和TNF-α诱导,肝癌细胞冻融抗原冲击.结果荧光抗体CD11c和CD54均高表达,各组间无显著性差异(P＞0.05),TNF-α可明显上调CD86和CD80表达(P＜0.01),肝癌细胞冻融抗原可进一步激活不同条件下诱导的DCs,促进CD86、CD80和人类白细胞抗原-DR(HLA-DR)表达.结论经GM-CSF、IL-4加TNF-α诱导的DCs可有效的摄取肝癌细胞冻融抗原,促进DCs的成熟,可制备高效的肝癌DCs瘤苗,用于肝癌过继性免疫治疗.
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抗原冲击致敏树突状细胞诱导特异性CTL杀伤Lovo细胞实验研究
目的:本研究以健康人外周血单核细胞为前体细胞,体外诱导其为树突状细胞(DC),负载直肠癌细胞株Lovo细胞冻融抗原,产生特异性细胞毒性T淋巴细胞(cytotoxic T lymphocytes, CTLs),探讨其对Lovo细胞的杀伤作用.方法:联合应用rhGM-CSF、rhIL-4、rhTNF-α及rhsCD40L等细胞因子,密度梯度离心法、贴壁法从外周血获取单核细胞并进行诱导扩增,培养出DC,用冻融抗原冲击致敏DC.实验分3组:冻融抗原致敏DC组(Ⅲ组),未致敏DC组(Ⅱ组),T细胞组(Ⅰ组),观察CTL对Lovo细胞的杀伤作用.结果:冻融抗原致敏DC激活CTL的能力显著高于未致敏的DCs组,两组CTLs对Lovo细胞的杀伤率差异有统计学意义(50.9% vs 24.7%, P<0.05).结论:冻融细胞抗原致敏树突状细胞后活化CTLs,有抗肿瘤活性.
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冻融抗原负载树突状细胞诱导细胞毒性T淋巴细胞特异性杀伤急性白血病细胞的实验研究
我们应用基因重组人白介素4(rhIL-4),基因重组人粒/单细胞集落刺激因子(rhGM-CSF) 联合培养体系自健康志愿者骨髓单个核细胞诱导产生DC,使其负载急性髓系白血病(AML)细胞冻融抗原,体外诱导细胞毒性T细胞(CTL),观察负载AML细胞冻融抗原后DC的状态对所激发的T淋巴细胞表型及功能的影响及CTL对AML细胞特异性杀伤活性.我们发现负载AML冻融抗原后DC的CD1a、CD83、CD86、CD11C、HLA-DR表达率为较培养前明显增高(P＜0.01),且负载AML冻融抗原的DC诱导的CTL中CD3+CD8+T细胞比例,较诱导前明显增高(P＜0.01),而负载AML细胞冻融抗原的DC诱导CTL对AML细胞有较强的杀伤作用,明显强于加或不加IL-2培养的T细胞对照组(P＜0.01),而对K562细胞无明显的杀伤活性.通过以上实验我们认为经rhGM-CSF,rhIL-4培养产生的DC为CD14CD1a+ DC,能诱导CTL对AML细胞产生明显的特异性杀伤作用,另外,负载AML细胞冻融抗原DC诱导的CTL中CD3+CD8+T细胞比例明显增高,提示CD8+T细胞在抗肿瘤免疫中具有极其重要的作用.
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人脐血来源树突状细胞体外扩增及诱导特异性抗宫颈癌免疫应答
目的:研究脐血来源树突状细胞(DC)体外扩增及诱导特异性抗宫颈癌细胞的免疫效应.方法:自人脐血分离单核细胞诱导DC,制备宫颈癌细胞系CaSki冻融物作为抗原负载DC.ELISA法检测成熟DC上清中IL-12的含量,混合淋巴细胞反应(MLR)测定DC体外刺激T细胞增殖的能力,MTT法检测抗原负载DC激活的CTL对宫颈癌细胞CaSki和HeLa的杀伤作用.结果:与未经抗原负载的DC相比,抗原负载的DC刺激同种异体T细胞增殖和IL-12分泌的能力均有提高(P＜0.05),激活的CTL对CaSki细胞有特异性杀伤,而此CTL对HeLa细胞无特异性杀伤.结论:宫颈癌细胞CaSki冻融抗原负载DC激活的CTL可诱导出特异性杀伤宫颈癌细胞的免疫效应.
