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新疆维吾尔族Rh血型特征
本研究探讨新疆维吾尔族Rh血型特点.采用Rh血清学分型,改良抗球蛋白实验,氯仿/三氯乙烯吸收放散实验、RH上游盒、下游盒、杂合盒、D基因10个外显子,RH Dψ假基因等检测1 230份维吾尔族血样本.结果表明:RhD阴性频率为5.8%,未发现Del型.对72份RhD(-)样本进一步研究发现,ccee(57.02%)和Ccee(29.82%)表型,RHD-/RHD-基因型(94.44%)及D基因外显子全缺失型(91.12%)常见.未发现RHDψ假基因.结论:我国新疆维吾洋族Rh血型兼有黄种人与白种人Rh特点.
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RHD基因的克隆及其在K562细胞中的表达
本研究目的在于克隆人类红细胞RHD基因,构建RhD表达载体,观察其在K562细胞中的表达.从脐血网织红细胞中提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应扩增RHD/CE基因,扩增产物通过TA连接克隆到pGEM-T质粒,采用测序方法筛选多个克隆获得RHD基因.将获得的RHD基因进一步亚克隆构建p cDNA3.1(-)表达载体,重组表达载体通过superfect试剂盒转染K562细胞,后观察K562细胞中RHD基因的转录和表达.结果表明:成功分离克隆到RHD基因,构建的p cDNA3.1(-)重组表达载体经酶切和测序证实RHD cDNA序列及插入方向正确.转染后的K562细胞内有相应的mRNA转录,细胞表面有RhD抗原表达.结论:RHD cDNA转染的K562细胞能表达RhD抗原,该表达体系有助于进一步研究各种RhD变异型的分子基础.
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抗Rh(D)抗体制备的研究进展
RhD抗原是表达在人类红细胞表面的血型抗原,其在免疫原性和临床上的应用仅次于ABO血型系统,相应的抗Rh(D)抗体在血型鉴定和预防新生儿溶血等方面均具有重要意义.传统的抗Rh(D)多克隆抗体来自健康人的血清,由于来源受限和血浆制品的安全问题,人们开始了抗Rh(D)的单克隆抗体和基因工程抗体的研究.国外研制的抗Rh(D)的单克隆抗体已成功用于血型鉴定,但到目前为止,还没有一个单克隆或者基因工程抗Rh(D)抗体作为多克隆抗Rh(D)抗体的替代品,在临床上用于预防Rh(D)免疫和新生儿溶血.本文对抗Rh(D)抗体制备的研究进展进行了综述.
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大庆地区RH阴性血人群普查报告
Rh血型系统是仅次于ABO血型系统的第二大红细胞血型系统.对于一个地区血站来说,能有一个稳定的RH阴性献血队伍,及时提供临床所需的RH阴性血液尤为重要.自从2001年7月份开始,大庆市血站对所有公民义务献血者进行RhD抗原筛查,现将RhD抗原筛查情况总结分析如下.
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RhD阳性血影细胞抗原性及血浆抗-D抗体分离
目的 探讨用不同渗透浓度的磷酸盐缓冲液(PBS)制备的RhD阳性影细胞的抗抗原性及应用该细胞从低效价血浆中分离抗-D抗体的方法.方法 用不同渗透浓度的PBS作为裂解液,将遗传表现型为CCDee的RhD阳性O型红细胞制备成血影细胞,观察其抗原性;以血影细胞为固相抗原,经亲和层析法从抗-D抗体含量为0.814 μg/ml的健康人血浆中分离抗-D抗体,检测相关指标.结果 用pH 7.4、30 mmol/L PBS制备的血影细胞形态完整,保持较强的抗原性;用该细胞血胞成功获得抗-D抗体,回收率达到84.65%,其中IgG单体加二聚体含量为99.3%,不含抗A、抗B血型抗体以及IgA、IgM和血红蛋白(henoglobin,Hb).结论 用pH 7.4、30mmol/L PBS制备的血影细胞可作为固相抗原从低效价血浆中分离纯化抗-D抗体.
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Rh弱D血型1例鉴定分析
1 临床资料患者,男性,75岁.因摔伤致右臂骨折于2010年10月入住大连医科大学附属第一医院.患有风湿性关节炎40余年,长期服用抗风湿性药物,无糖尿病,心脏病,无肝炎及结核,无输血史.
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中国人Rh血型D抗原数量的调查
目的 分析中国人不同血清型RhD抗原数量是否存在差异.方法 采用流式细胞仪检测RhD阴性、RhD阳性、弱D型和RhDdel型红细胞表面D抗原数量.结果 RhD阴性、RhD阳性、弱D型和RhDdel型红细胞表面D抗原荧光强度分别为5.43%±2.11%,99.28%±0.98%,32.98%士15.63%和29.46%士9.88%.结论 4种不同血清表现型的RhD抗原数量的差异有显著性,以RhD阳性的抗原数量多,RhDu次之,RhDdel少,但与RhD阴性相比仍有一定数量的抗原存在于红细胞膜上.
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RhD抗原的鉴定我们该做的多深入
RhD抗原是具有免疫原性的血型抗原.正常RhD阳性表型红细胞表面有10 000～30 000个D抗原位点[1],每个D抗原决定簇由三十多个D表位组成[2].D抗原数量表达下调,或部分D表位缺失的红细胞,被称为D变异型(D variants).目前,D变异型可分为两个亚类:部分D(partial D)和弱D(weak D).部分D由大量D表位缺失所造成[3];弱D是红细胞表面的D位点数下降到约70～4 000个[1].几乎所有国家的输血前检查项目中都有规定,需对供者和受者的血液进行RhD抗原鉴定.通常输血前RhD鉴定策略是对血样先采用血型血清学方法初步定型,若与抗-D试剂不反应,再进行弱D实验(或称为RhD阴性确认试验),以确认该样本的红细胞上是否携带RhD抗原.
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RhD变异型1例
Rh血型系统是复杂的血型系统, 其临床重要性仅次于ABO系统[1]. 目前发现的Rh抗原数达到了49个, 临床上含D抗原者为Rh阳性, 无D抗原者为Rh阴性, 特殊的Rhnull表型缺少全部Rh抗原. 正常D、D变异型、弱D、不完全D、超强D均视为D阳性, 血型血清学的方法 很难鉴别不同型别的弱D和不完全D,现统称为D变异型.近日笔者于Rh阴性无偿献血者中发现1例RhD变异型,现报告如下.
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山东地区汉族RhD阴性献血者RHD基因的纯合性分析
目的：Rhesus血型(简称Rh血型)因其抗原众多、变种各异和临床疾病相关性而备受重视。该血型系统中与临床疾病关联密切的抗原即RhD抗原具有较高的免疫原性。编码RhD抗原的RHD基因两侧各有一个序列高度相似的Rh盒子基因，RhD阴性即是由上、下游Rh盒子基因之间的基因重组引起。分析RhD阴性孕妇丈夫RHD基因的纯合性可预测胎儿患新生儿溶血病的几率。本研究的目的是分析山东地区汉族人RhD阴性表型形成的分子机制，并对Rh盒子基因的扩增产物进行分析以确定RHD基因的纯合性。方法：74例RhD阴性献血者的DNA样品首先进行多重聚合酶链反应-序列特异性引物（PCR-SSP）分析。然后对Rh盒子基因进行PCR基因扩增，其扩增产物采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）方法进行RHD基因的纯合性测定。结果：46例(62%)样品在多重PCR-SSP分析中显示缺失RHD基因，在PCR-RFLP分析中显示为纯合的RHD基因阴性。22例(30%)样品显示存在RHD基因，其中19例显示为杂合的RHD基因，3例显示为纯合的RHD基因。5例(7%)样品缺失RHD基因，但PCR-RFLP分析显示存在一个RHD基因，进一步的分析表明它们至少存在RHD基因第1和10外显子。1例(1%)样品显示存在RHD基因，但缺失第6外显子。结论：HD 基因缺失是引起中国汉族人RhD阴性表型形成的主要分子机制。RhD阴性个体主要表现为纯合的RHD基因阴性，少部分RhD阴性个体存在杂合的RHD基因和纯合的RHD基因。
关键词： Rhesus血型系统 RHD抗原 RHD基因 基因纯和性 免疫血液学 -
RhD阴性孕妇产生IgM+IgG型抗D及IgG型抗C抗体的研究
RhD抗原阴性人群在中国汉族人中的比例约为0.3-0.5%,远低于高加索人种的15%的比例,因此由于D抗原不合所引起的输血免疫和妊娠免疫经常发生.在有一次或多次生育史的Rh阴性孕产妇中检出抗D抗体的比例较高,属于Rh新生儿溶血病的高危人群.
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微量RhD抗原检测法
目的 为解决患儿、烧伤患者以及危重患者,因采集RhD抗原检测的血标本困难,而研究的一种微量RhD抗原检测方法.方法 取洁净玻片一张,用加样器加入RhD单克隆试剂血清和被检测患者5％红细胞悬液各10μl,再加入低离子介质溶液20μl于玻片上.将上述3种液体混匀,置室温5 min观察结果.对幼儿园206份儿童体检血标本与常规玻片法进行检测比较.结果 206份儿童血标本微量法与常规法平行对照,2种方法检测RhD抗原结果完全吻合.结论 该方法操作简便、价格低廉,且血标本和试剂用量少,适用于儿童、大面积烧伤患者以及危重患者,进行RhD抗原检测.
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RhD变异型分子生物学特征及其临床意义
目的 探讨RhD变异型的分子生物学特征,为临床安全输血和预防新生儿溶血病提供依据.方法 采用血清学方法检测无偿献血者个体RhD抗原,鉴定RhD变异型个体血清中抗体的性质;使用聚合酶链反应序列特异引物方法检测RhD变异者RHD基因,并观察其基因变化情况.结果 RhD变异型个体的基因分型结果为D3～ D6外显子缺失,表现为RHD-CE(3-6)-D,即DⅥc型.结论 RhD变异型应通过分子生物学方法准确定型,避免临床错误输血及其引发的输血反应.
关键词： RHD抗原 RHD基因 部分D D Ⅵc 聚合酶链反应序列特异引物 -
泰安市RhD抗原阴性无偿献血者表型结果分析
目的:建立泰安市RhD抗原阴性无偿献血者表型库,保证临床需求.方法:应用微板血型血清学方法对献血者进行RhD抗原筛选,采用试管法进行RhD抗原阴性确认,用分型血清进行RhD阴性表型分型.结果:89 860名献血者中检出RhD抗原阴性者352名,占0.39%,RhD抗原变异者10名,占0.01%.d基因频率为0.062 6,D基因频率为0.937 4,以ccdee所占比例多,为57.39%,cde基因频率为0.047 4,其次为Ccdee占33.80%,其他表型则少见或罕见,其分布特征为ccdee＞Ccdee＞CCdee＞ccdEe＞CcdEe＞CCdEe＞ccdEE.结论:进行RhD抗原阴性无偿献血者表型分型,对于安全输血具有重要意义.
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Rh血型D抗原检测方法讨论
人类Rh血型D抗原是临床输血引起红细胞同种免疫反应的重要抗原，仅次于ABO血型抗原。通常检测D抗原首先采用抗D血清或抗D单抗和多抗混合抗体盐水法，阴性结果再用抗人球蛋白试验确认。笔者针对抗人球蛋白试验是否存在漏检某些D抗原弱表现型，进行了如下试验。
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检测红细胞RHD抗原的临床意义
目的:探讨检测红细胞上RhD抗原的临床意义.方法:应用常规和确认试验检测受血者红细胞上RhD抗原.结果:对68650例受血者进行了检测,其中209例受血者未检测出红细胞RhD抗原,其阴性率为0.3%.结论:对受血者进行红细胞RhD抗原检测是非常重要的 ,它能确保输血安全,降低迟发性溶血性输血反应和预防新生儿溶血病的发生.
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单采血小板输注Rh D抗原引起的同种免疫作用及其临床应用
目的 研究单采血小板(APC)输注中由RhD抗原引起的同种免疫频率及其临床应用效果.方法 在没有预防性应用Rh免疫球蛋白的情况下,给予KhD阴性的血小板减少症出血患者RhD阳性血小板,测定输注前及输注后1h的外周血血小板计数(BPC),计算校正血小板增加值(CCI)来评估临床疗效;在接下来的随访中,以低离子强度间接抗球蛋白试验检测每份标本的抗-D水平,计算同种免疫频率.结果 输注后27例患者出血症状均得到明显缓解,输注后1h的COI为(12.7±1.2)X 10~9/L;输注KhD不合血小板引起的同种免疫频率为3.7%.结论 榆注KhD不合APC临床疗效明显,引起同种免疫反应几率很低,在紧急情况下可给予RhD阴性患者KhD阳性的APC.
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抗－D抗原决定簇互补区多肽遮蔽RhD抗原的效果
目的：建立抗－D抗原决定簇互补区（ CDRs）多肽遮蔽RhD抗原的方法，并对遮蔽效果进行评价。方法根据抗－D CDRs氨基酸残基顺序合成多肽，使用流式细胞术检测红细胞表面RhD抗原在多肽遮蔽前后的荧光强度；荧光显微镜下观察多肽与RhD抗原的结合情况；使用在线分析工具对有效多肽进行理化性质及二级结构分析。结果不同多肽对RhD抗原的遮蔽效果有较大差异，其中3号多肽遮蔽效果较理想，荧光强度显著降低。结论抗－D CDRs多肽可有效遮蔽RhD抗原。
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隐蔽红细胞RhD抗原遮盖效果研究
[目的]研究马来酰亚胺苯甲胺酯聚乙二醇(MDPEG)对红细胞RhD抗原的遮盖程度.[方法]MDPEG修饰红细胞为RhD抗原隐蔽红细胞,隐蔽红细胞与FITC标记IgG类抗D抗体进行抗人球蛋白试验,用流式细胞仪测定红细胞上抗D抗体的结合.[结果]隐蔽红细胞与抗D抗体的血清学凝集试验阴性,流式细胞仪测定隐蔽红细胞上抗D抗体的荧光强度比阴性对照高,统计学检验差异有统计学意义(t=37.250 9,P＜0.000 1).[结论]实验证明MDPEG-RBC上仍有少量RhD+抗原裸露,可能导致宿主产生RhD免疫.
关键词： 隐蔽红细胞 RHD抗原 马来酰亚胺苯甲胺酯聚乙二醇 -
马来酰亚胺苯甲胺酯聚乙二醇遮盖红细胞RhD抗原研究
[目的]马来酰亚胺苯甲胺酯聚乙二醇(MDPEG)修饰红细胞,遮蔽RhD抗原,使Rh+红细胞转变为Rh红细胞. [方法]甲基苯甲酸和聚乙二醇单甲醚(分子量5 000)为原料台成MDPEG(分子量5 910).红细胞修饰:3%～5%RBC+MDPEG+2-亚氨基硫烷(1T)、pH7.4、室温2 h.盐水法进行红细胞与ABO血型、RhD血型血清学实验.血流变仪测定红细胞黏度等指数.盐水梯度法测定红细胞渗透脆性. [结果]30 mg/ml马来酰亚胺苯甲胺酯聚乙二醇能有效遮蔽3%～5%红细胞RhD抗原,红细胞与抗RhD抗体无凝集反应,光学显微镜观察红细胞无聚集,细咆形态正常.红细胞膜渗透性、红细胞聚集指数轻微升高,刚性指数轻微下降. [结论]马来酰亚胺苯甲胺酯聚乙二醇(MDPEG)能完全遮盖RhD抗原,获得RhD阴性红细胞,细胞形态,结构正常.
关键词： 马来酰亚胺苯甲胺酯聚乙二醇 红细胞 RHD抗原
