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甲基紫血影细胞染色法
血影细胞是变性的红血球,容易阻塞前房角小梁网,引起继发性血影细胞性青光眼[1,2].由于常规涂片或组织切片细胞膜易破裂,用HE染色常被误认为无结构的碎屑,故我们采用在湿片时用甲基紫方法可将其显示[3,4],此法简单,较HE染色方法快捷,容易观察.现介绍如下.
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血影细胞性青光眼2例
例1:男,16岁.主因左眼溅入铁屑,视物不见1 d入院.眼部检查:右眼视力0.3,矫正1.0(-3.0 D),未见异常.左眼视力指数/眼前,球结膜混合性充血,角膜3∶00处可见一横行闭合伤口,长约2 mm,角膜内皮后可见尘沙样角膜后沉着物(KP),前房深浅适中,血性房水,前房可见大量纤维素性渗出.瞳孔圆3 mm,晶体尚清.玻璃体及眼底窥不入.X线片示:左眼球内磁性异物.立即行左眼球内磁性异物取出术,然后予消炎、抗感染、止血治疗.术后第2天左眼视力0.08,球结膜混合充血,角膜上皮呈雾状水肿,内皮后可见少量血性KP,下方仍有少量积血,纤维素渗出有所减少.指测眼压Tn+1,降眼压治疗后眼压降低,但玻璃体内可见絮状混浊,眼底乳头下可见片状出血,继续予消炎、止血治疗.20 d后眼压再次升高,非接触眼压右眼23 mm Hg,左眼55 mm Hg,玻璃体积血重度,分析眼压增高可能与变性红细胞堵塞房角有关,遂行前房穿刺术,抽取房水作细胞学检查,可见血影细胞.穿刺后48 h眼压再次增高.于是行第2次前房角冲洗术.同时滴0.5%噻吗心安眼水,眼压维持在24.38 mm Hg,继续门诊观察.
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RhD阳性血影细胞抗原性及血浆抗-D抗体分离
目的 探讨用不同渗透浓度的磷酸盐缓冲液(PBS)制备的RhD阳性影细胞的抗抗原性及应用该细胞从低效价血浆中分离抗-D抗体的方法.方法 用不同渗透浓度的PBS作为裂解液,将遗传表现型为CCDee的RhD阳性O型红细胞制备成血影细胞,观察其抗原性;以血影细胞为固相抗原,经亲和层析法从抗-D抗体含量为0.814 μg/ml的健康人血浆中分离抗-D抗体,检测相关指标.结果 用pH 7.4、30 mmol/L PBS制备的血影细胞形态完整,保持较强的抗原性;用该细胞血胞成功获得抗-D抗体,回收率达到84.65%,其中IgG单体加二聚体含量为99.3%,不含抗A、抗B血型抗体以及IgA、IgM和血红蛋白(henoglobin,Hb).结论 用pH 7.4、30mmol/L PBS制备的血影细胞可作为固相抗原从低效价血浆中分离纯化抗-D抗体.
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血影细胞甲基紫及HE染色比较
在眼科临床上医生可以观察到患者房水中有大量棕色颗粒飘浮,无KP出现的高眼压,或合并高眼压的前房积血,或因眼球穿透伤或伤口修补术后前房积血等.不能观察房角和房水的改变,且往往缺乏典型的临床表现.易误诊和漏诊,故需抽取房水检查有无血影细胞以确定是否为继发性血影细胞性青光眼. 检查方法一、甲基紫法:①手术医生于患眼前房或玻璃体用注射器吸取小量液体,即送病理检查.②将注射器以针头向下垂直静置约5～10分钟.③滴一滴送检液于载玻片上,加入约此液滴的1/5量的1%甲基紫溶液于此液滴上,轻轻摇动玻片.使之相互混合,即盖玻片轻轻盖上.④用40X倍显微镜下观察.⑤结果血影细胞呈蓝色空圆球形状,比红血球稍大,胞膜增厚不均匀、完整.胞内及胞膜上附着有蓝染大小不一的颗粒.细胞之间也可见散在蓝色颗粒.在镜下可见此种球形细胞滚动.
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眼底出血致血影细胞性青光眼1例
1临床资料患者,女,52岁,主因右眼视物不清1个月,加重伴憋胀10 d被收住院.查:BP:150/100 mmHg(1kPa=7.5mmHg).全身一般情况良好,视力:右眼手动;左眼0.8.右眼结膜中度混合性充血,角膜水肿,周边前房ICT,房水可见大量棕色小颗粒浮游物.瞳孔直径4mm,直接对光反应消失.晶状体皮质无明显混浊,玻璃体内可见大量棕红色尘状混沌,眼底窥不清.左眼未见异常.眼压:右15/3=81.78mmHg;左5.5/4=20.55mmHg.
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13例血影细胞性青光眼前房穿刺术的疗效观察
血影细胞性青光眼多发生于玻璃体出血或同时伴有大量前房出血以后,由于血影细胞(即变性红细胞)机械性阻塞小梁而引起的急性开角型青光眼,常规降眼压药治疗,通常效果不理想,而我院行前房穿刺术结合降眼压药治疗,疗效确切,现报道分析如下.
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用血影细胞从低效价血浆中分离抗-D抗体
目的 研究从低效价血浆中分离抗-D抗体的方法.方法 用遗传表现型CCDee的RhD阳性O型红细胞制备血影细胞,经亲和层析法从抗-D含量为0.814μg/mL的健康人血浆中分离抗-D抗体,检测相关指标.结果 经此法成功获得抗-D抗体,抗-D抗体回收率达到84.65%,所得制剂经检测激肽释放酶原激活剂含量、IgG单体加二聚体含量、抗补体活性及y-球蛋白纯度等指标符合中国生物制品规程的要求.结论 血影细胞亲和层析法简化了抗-D抗体提取和纯化步骤,提高了从低效价血浆中提纯抗-D抗体的回收率.
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冻干红细胞残余水的测定及其分布研究
目的 建立并比较冻干红细胞残余水含量测定方法,探讨冻干红细胞残余水的分布情况.方法 一次性冻干等量(500 μL)的含保护剂(主要成分12％甘油)的红细胞、无保护剂的红细胞,含保护剂(同前)的血影细胞、无保护剂的血影细胞及保护剂,用热重分析法及Karl-Fisher滴定法结合卡武炉法测定其残余水含量,同时用含水量固定的标准品(水分含量4.9％-5.2％)做检验,每组样品重复测量6次;分析各组之间的差异,比较冻干血影细胞及冻干红细胞残余水含量.结果 热重分析法测定残余水含量(％):冻干红细胞、无保护剂冻干红细胞、冻干血影细胞、无保护剂冻干血影细胞、单纯冻干保护剂、标准品分别为19.01±2.18、4.60±0.78、18.95±1.89、4.87± 1.01、16.12±1.04、5.28±0.16;冻干保护剂及含保护剂冻干红细胞的热重(TG)曲线走势接近,无保护剂冻干红细胞与前二者曲线走势差异明显;Karl-Fisher法测定残余水含量(％):冻干红细胞、无保护剂冻干红细胞、冻干血影细胞、无保护剂冻干血影细胞、单纯冻干保护剂、标准品分别为3.21±0.23、1.22±0.09、3.16±0.26、1.25±0.07、2.63±0.41、5.14±0.13.结论 热重分析法测定含保护剂的冻干品残余水含量时的结果偏高,Karl-Fisher滴定法结合卡式炉法能够准确反映冻干红细胞的残余水含量;初步判断冻干红细胞残余水主要分布于细胞膜.
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不同血影细胞制备方法质量评价体系的建立
目的 探讨不同渗透浓度磷酸盐液(PB)制备血影细胞的质量评价标准.方法 用不同渗透浓度PB处理健康人新鲜全血(室温保存时间＜4h),制备血影细胞.并对其形态、抗原性、血红蛋白清除率和血影细胞回收率等指标进行检测,建立血影细胞质量评价体系.结果 pH7.4、20 mmol/L PB制备的血影细胞形态较好,ABO血型系统及RhD抗原性不受影响,血红蛋白清除率为(86.33％±3.29％,n=30),血影细胞回收率为(24.89％±1.40％,n=30).结论 通过对细胞形态、抗原性、血红蛋白清除率和血影细胞回收率的分析,有利于全面评价血影细胞的质量.用pH7.4、20mmol/L PB制备的血影细胞质量较好.
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RhD阳性血影细胞的制备及应用
目的:探讨用不同渗透浓度磷酸盐液(PB)制备的RhD阳性血影细胞的抗原性及其在抗-D抗体分离中的作用.方法:用不同渗透浓度PB作为裂解液,将遗传表现型为CCDee的RhD阳性O型红细胞制备成血影细胞,观察其抗原性;以血影细胞为固相抗原,用亲和层析法从抗D含量为0.814 mg/L的健康人血浆中分离抗-D抗体,检测相关指标.结果:pH7.4、30 mmol/LPB制备的血影细胞形态完整,保持较强的抗原性;成功获得抗-D抗体,回收率达到84.65%,IgG单体加二聚体含量为99.3%,不含抗A、抗B血型抗体以及IgA、IgM和血红蛋白.结论:用pH7.4、30 mmol/L PB制备的血影细胞可作为固相抗原,并能从低效价血浆中分离纯化抗-D抗体.
