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鞘内注射牛痘疫苗接种家兔炎症皮肤提取物对 腰椎间盘突出大鼠的抗炎镇痛作用
目的:观察牛痘疫苗接种家兔炎症皮肤提取物(神经妥乐平neurotropin,NTP)对腰椎间盘突出(lumbar disc herniation,LDH)大鼠的抗炎镇痛作用.方法:大鼠随机分为LDH+NTP组、Sham组及LDH+Saline组.测定不同时间点大鼠左后足底50％机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical thresh-old,PWT),用Western-blot法检测术侧L3-5背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)炎症细胞因子的表达.结果:①与术前1 d相比,Sham组术后各时间点PWT无明显降低,提示其对机械刺激未产生明显的痛觉过敏;LDH+NTP组与LDH+Saline组术后各时间点PWT均明显降低,与Sham组相比差异均有统计学意义(P<0.05),提示其对机械刺激产生了明显的痛觉过敏;LDH+NTP组鞘内给药后各时间点PWT高于LDH+Saline组,差异有统计学意义(P<0.05),提示鞘内注射NTP可缓解LDH大鼠的痛觉过敏;②用药7 d后,LDH+NTP组炎症细胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α的表达均较LDH+Saline组明显降低(P<0.05),但显著高于Sham组(P<0.05).结论:鞘内注射NTP可明显缓解LDH大鼠神经根性疼痛,下调DRG中炎症细胞因子的表达,抑制神经根的炎性反应,产生抗炎镇痛作用.
关键词： 牛痘疫苗接种家兔炎症皮肤提取物 神经病理性疼痛 炎症 腰椎间盘突出症 -
鞘内应用普瑞巴林对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及其电生理学机制研究
目的:研究鞘内应用普瑞巴林(pregabalin,PGB),一种新型抗癫痫药,对神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及其可能的机制.方法:(1)雄性SD大鼠鞘内置管,手术成功后进行坐骨神经分支选择性损伤(spared nerve injury,SNI)手术.术后10 d用von Frey纤维丝测定机械痛敏,将筛选出造模成功的SNI神经病理性疼痛大鼠,按体重随机分为两组(z=10),通过鞘内插管分别鞘内给予(i.t.)普瑞巴林100 μg/d或等体积的生理盐水(saline,NS)作阴性对照,连续3d给药.在每次给药后24 h测定大鼠后爪的50％缩足阈值(paw withdrawal threshold,PWT)及鞘内给药前后大鼠的运动功能.(2)通过在体细胞外记录的电生理学方法,观察脊髓背表面给予普瑞巴林100 μg对SNI大鼠脊髓背角广动力范围,(wide dynamic range,WDR)神经元C纤维诱发放电的影响.结果(1)与NS组相比,鞘内应用普瑞巴林100 μg/d,连用3d,能显著增加SNI大鼠术侧后爪的50％ PWT,起到显著的镇痛作用(P＜ 0.001,n=10),给药前后大鼠的运动功能没有明显改变(P＞0.05,n=10). (2)与NS组相比,脊髓背表面给予普瑞巴林100 μg可以显著抑制SNI大鼠WDR神经元的C纤维诱发放电(P＜ 0.001,n=9).结论:鞘内应用普瑞巴林100 μg/d可以对SNI大鼠产生显著的镇痛作用而不影响其运动功能,该机制可能与通过WDR神经元的C纤维诱发放电有关.
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腹腔联合注射氯胺酮及可乐定对CCI模型大鼠的镇痛效应
目的:研究氯胺酮及可乐定对慢性神经病理性疼痛模型大鼠的镇痛作用,并探讨其可能机制.方法:雄性SD大鼠60只,体重180～220g,随机分为假手术组(S组)、生理盐水组(NS组)、可乐定组(CL组)、氯胺酮组(K组)及氯胺酮+可乐定(KC组)组,每组12只.采用坐骨神经慢性压迫法(CCI)制备大鼠神经病理性痛模型,S组仅暴露坐骨神经,不结扎.K组、CL组和KC组于术后3～14d每天分别腹腔注射氯胺酮(10mg/kg)、可乐定(1m/kg)、氯胺酮(5mg/kg)+可乐定(0.5m/kg),S组和NS组腹腔注射等容量生理盐水.各组分别于术前、术后3、7、14d测定机械痛阈和热痛阈值,术后3、7、14d测定痛阈值后每组随机取4只大鼠断头处死,取腰段脊髓(L4～L6)背根神经节(DRG),采用逆转录PCR法(RT-PCR)检测GAP-43mRNA的表达水平.结果:与S组比较,NS组、K组、CL组和KC组术后机械痛阈和热痛阈降低,NS组、K组和CL组DRG中GAP-43mRNA表达上调,KC组仅在术后3d DRG中GAP-43mRNA表达上调(P＜0.05);与C组比较,K组、CL组和KC组术后机械痛阈和热痛阈升高,DRG中GAP-43mRNA表达下调(P＜0.05);与K组和CL组比较,KC组术后7、14d时机械痛阈和热痛阈升高,DRG中GAP-43mRNA表达下调(P＜0.05).结论:氯胺酮与一定剂量的可乐定联合应用能抑制神经病理性疼痛大鼠机械性触诱发痛和热痛觉过敏的形成,减少大鼠脊髓DRG中GAP-43mRNA的表达,具有显著的协同镇痛作用.
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肉毒毒素A对神经病理性疼痛小鼠施旺细胞髓鞘形成的影响
目的:观察不同给药途径的肉毒毒素A(Botulinum neurotoxin type A,BoNT/A)对慢性坐骨神经缩窄性损伤(Chronic constriction injury,CCI)疼痛模型小鼠的镇痛效果;研究BoNT/A对施旺细胞髓鞘标志蛋白以及调控髓鞘形成的转录因子表达的影响.方法:通过CCI建立神经病理性疼痛模型小鼠,并随机平均分成4组:生理盐水皮下注射(intraplantar injection,i.pl.)组、BoNT/A皮下注射组、生理盐水神经旁注射(peripheral nerve injection,i.pn.)组、BoNT/A神经旁注射组,此外设置未造模的空白对照组.在造模后第5天给药,测量不同时间点各组小鼠机械缩足阈值和热缩足潜伏期的变化.在术后14天和28天分别对BoNT/A皮下注射组、生理盐水皮下注射组及空白对照组小鼠进行坐骨神经采样,应用蛋白印迹检测坐骨神经髓鞘相关蛋白MBP、P0、Krox-20及C-jun表达量的变化,应用免疫荧光技术检测坐骨神经P0的表达情况.结果:皮下注射或神经旁注射BoNT/A均可增加神经病理性疼痛模型小鼠的机械缩足阈值和热缩足潜伏期(P<0.05).BoNT/A皮下注射组坐骨神经MBP、P0、Krox-20及C-jun表达量与生理盐水皮下注射组对比无显著性差异.结论:皮下注射和神经旁注射BoNT/A均可改善神经病理性疼痛小鼠的机械痛敏和热痛敏,但皮下注射BoNT/A不能促进神经病理性疼痛小鼠坐骨神经施旺细胞髓鞘的形成,提示BoNT/A并不是通过促进髓鞘形成这一机制来促进运动功能恢复以及缓解神经病理性疼痛.
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曲马多对CCI大鼠DRG细胞SP、CGRP表达及胃液PH值和胃粘膜的影响
目的:观察曲马多对坐骨神经结扎(CCI)大鼠机械痛敏、背根神经节(DRG)SP和CGRP表达、胃液pH和胃窦粘膜的影响.方法:22只雄性SD大鼠,建立右侧CCI模型,分为生理盐水组(NS组,n=6)、曲马多1 mg/kg组(T1组,n=8)和曲马多4 mg/kg组(T2组,n=8).自术后第8天分别给予生理盐水、曲马多1 mg/kg和4 mg/kg灌胃,每日两次共7天.观察大鼠后肢机械痛阈,L4～5 DRG SP和CGRP表达,胃液pH值和胃窦粘膜变化.结果:(1)灌胃第3天和第7天,T1组和T2组右后肢痛阈与NS组相比显著增加(P<0.05);(2)灌胃第7天,右侧DRG SP和CGRP表达与NS组相比显著降低(P<0.05);(3)灌胃后第3天和第7天,T1组和T2组胃液pH值显著升高(P<0.05),且胃窦粘膜未见异常.结论:曲马多降低CCI大鼠机械痛敏,减少DRG SP和CGRP表达,提高胃液pH值,对胃窦粘膜无影响.
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复合维生素B对坐骨神经结扎大鼠痛觉过敏和背根神经节神经元nNOS表达的影响
目的:观察复合维生素B对神经病理性疼痛大鼠机械痛敏、热痛敏以及L5背根神经节(DRG)神经元型一氧化氮合酶(nNOS)表达的影响.方法:采用坐骨神经结扎(CCI)模型,复合维生素B(含B1:B6:B12 1:1:0.01,5 mg/kg即B1 5 mg,B6 5 mg和B12 0.05 mg/kg)口服给药,连续14天.分别于术前(0天)及术后1,3,5,7,9,11,14天以yon Frey细丝法和热辐射法测定机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL);以免疫组织化学结合计算机图像分析的方法,观察复合维生素B对L5背根神经节神经元nNOS表达的影响.结果:口服不同剂量的复合维生素B(5 mg/kg/d、10 mg/kg/d、30 mg/kg/d),减轻了大鼠机械痛敏和热痛敏,并抑制了背根神经节nNOS的表达.结论:口服复合维生素B具有减轻坐骨神经结扎大鼠机械痛敏和热痛敏的作用,其作用机制可能是抑制初级感觉神经元nNOS的表达和神经元的敏化.
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神经病理性疼痛大鼠脊髓IL-33蛋白表达的变化
目的:观察外周神经慢性压榨性损伤(chronic constrictive injury,CCI)大鼠脊髓白介素-33(interleukin-33,IL-33)表达的变化规律.方法:雄性Wistar大鼠60只,分为手术组和假手术组,每组30只,于CCI前1天、CCI后第1、4、7、14、21天各时间点测定机械痛阈及热痛阈后立即处死大鼠,每个时间点5只,取L4-6脊髓,采用Western blot方法测定IL-33的蛋白表达变化.结果:手术组大鼠术侧机械痛阈及热痛阈明显降低,脊髓IL-33水平表达增加,明显高于对侧和假手术组术侧;IL-33蛋白水平于CCI后第1天开始增加,第7天达到高峰(P＜0.01),于CCI后第21天仍维持于较高水平(P＜0.05).结论:CCI致大鼠脊髓IL-33活化,参与神经病理性疼痛的调控过程.
关键词： 神经病理性疼痛 慢性坐骨神经缩窄损伤 白介素-33 大鼠 -
辛伐他汀对大鼠神经病理性疼痛行为学和RhoA通路表达的影响
目的:观察RhoA相关细胞骨架调控信号通路在慢性坐骨神经结扎(chronic sciatic nerve constriction injury,CCI)神经病理性疼痛大鼠背根神经节激活及辛伐他汀(simvastatin)鞘内给药对该通路影响.方法:42只质量180～200 g SD雄性大鼠随机分为5组:Na(i)ve组(n=6)、Sham组(n=6)、CCI组(n=18)、Simvastatin组(n=6)及Rho激酶(Rho kinase,ROCK)抑制剂Y-27632组(n=6).对大鼠行鞘内置管,于造模后7天结扎CCI组、Simvastatin组及Y-27632组大鼠单侧坐骨神经构建CCI模型,术后Simvastatin组每天鞘内注射10 μl辛伐他汀(10 μg/μl),Y-27632组每天鞘内注射12μl Y-27632(4 mg/ml),Na(i)ve组、Sham组、CCI组术后每天鞘内注射生理盐水10 μl,连续注射7天.于CCI建模后1、3、7、14天进行动物行为学评估,观察大鼠对机械和热刺激的反应.于建模后第14天处死大鼠,取手术侧L4-6背根神经节(dorsal root ganglion,DRG),并进行实时定量PCR观察RhoA、ROCK的mRNA表达变化,免疫荧光观察RhoA蛋白在DRG伤害性神经元中的分布及改变,以及免疫荧光强度随建模时间梯度增加,Western blot检测通路中主要因子RhoA、LIMK和cofilin蛋白水平表达的改变.结果:①Simvastatin组大鼠给予辛伐他汀后第3天起缩足反射热辐射潜伏期、缩足反射机械刺激闽值明显高于CCI组,差异具有统计学意义(P＜0.05);ROCK抑制剂Y-27632组大鼠缩足反射热辐射潜伏期、缩足反射机械刺激阈值给药后3天起较CCI组明显提高,差异具有统计学意义(P＜0.05).②CCI组大鼠DRG中RhoA、ROCK mRNA于术后第7天起表达显著增加(P＜0.05);RhoA蛋白在背根神经节神经元中表达,CCI术后14天RhoA免疫荧光强度与Na(i)ve组比显著增高(P＜0.05).③鞘内注射辛伐他汀能显著抑制通路主要因子RhoA、p-LIMK、p-cofilin的表达(P＜0.05).结论:大鼠CCI慢性神经病理性疼痛存在RhoA/LIMK/cofilin通路的激活,辛伐他汀鞘内注射可抑制该通路的活化,为治疗神经病理性疼痛提供新的靶点.
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围术期口服普瑞巴林对非小细胞肺癌根治术后慢性疼痛的影响
目的:探讨围术期口服普瑞巴林能否缓解肺癌根治手术患者的手术后神经病理性疼痛.方法:20～65岁全麻下行限期肺癌根治术的非小细胞肺癌患者90例,随机分为三组.后纳入74人:PG1(n=23),手术当天术前两小时口服普瑞巴林300 mg,手术第二天开始口服普瑞巴林150 mg bid×5天.PG2组(n =21),术前两小时口服普瑞巴林300 mg,手术第二天开始口服普瑞巴林75 mg bid×5天;对照组(C组,n=30),术前两小时口服安慰剂(空胶囊)一粒,手术第二天开始口服安慰剂bid×5天;三个组术后均给予芬太尼静脉自控镇痛(PCIA).术后第2月、4、6月电话随访患者术后慢性疼痛的程度和疼痛性质.结果:(1)术后第2个月三组间比较:PG1组及PG2组比C组的静止性疼痛以及运动性疼痛评分低(P＜0.05). (2)术后第4个月和6个月三组间术后静止性疼痛评分无统计学差异(P＞0.05);但运动性疼痛PG1组比C组的评分低(P＜0.05). (3)疼痛性质比较:术后2个月:PG1组及PG2组比C组神经病理性疼痛发生率降低(P＜0.05),主要体现在烧灼痛以及电击样疼痛发生率降低(P＜0.05).结论:围术期口服普瑞巴林超前镇痛可以缓解非小细胞肺癌根治术患者术后两个月的静息痛和运动痛;并能缓解这类患者术后半年的运动痛;能降低这类患者术后两个月的神经病理性疼痛的发生率.
关键词： 普瑞巴林 肺癌根治术 胸科手术后疼痛综合征(PTPS) 神经病理性疼痛 -
miR-146a激动剂对大鼠神经病理性疼痛行为学和IRAK1、TRAF6表达的影响
目的:探讨miR-146a激动剂(agomiR-146a)经鞘内给药对大鼠神经病理性疼痛的影响.方法:雌性SD大鼠16只,体重200～250g,采用随机数字表法随机分为对照组(n=8)和agomiR-146a组(n=8),两组均行双侧坐骨神经结扎手术,于手术当天及术后第3、5、7、10天分别经鞘内注射体积为15 μl的agomiR-对照组或agomiR-146a(5nmol溶于生理盐水),于术前及术后第1、3、7、14天进行动物行为学评估,观察大鼠对机械和热刺激的反应.实时定量PCR法检测术后第14天大鼠L4～6背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)中miR-146a、白介素1受体相关激酶(interleukin-1receptor-associated kinase 1,IRAK1)、肿瘤坏死因子受体相关因子6(tumor necrosis factor-associated factor 6,TRAF6)的mRNA表达水平;Western-blot法检测IRAK1及TRAF6蛋白表达水平变化.结果:agomiR-146a组大鼠缩足反射热辐射潜伏期自建模后3天显著增加,而缩足反射机械刺激阈值在建模后7和14天比对照组明显升高(P＜0.05).与对照组相比,术后14天agomiR-146a组miR-146a表达显著上调(P＜0.05),IRAK1、TRAF6的mRNA表达水平下降(P＜0.05);agomiR-146a组IRAK1、TRAF6蛋白水平亦明显降低(P＜0.05).结论:miR-146a激动剂agomiR-146a经鞘内给药可以减轻大鼠神经病理性疼痛,可能为治疗神经病理性疼痛提供新的靶点.
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牛痘疫苗接种家兔炎症皮肤提取物治疗脊髓损伤后神经病理性疼痛的定量感觉检查研究
目的:分析脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后神经病理性疼痛患者损伤平面的皮肤感觉阈值变化与差异,推测牛痘疫苗接种家兔炎症皮肤提取物(神经妥乐平)治疗SCI后神经病理性疼痛的作用机制.方法:39例SCI患者根据神经病理性疼痛的视觉模拟量表评分及使用神经妥乐平的不同情况分为轻、中、重3组,应用定量感觉检查(Quantitative sensory testing,QST)的方法,测试损伤平面皮肤的单丝触觉、冷觉阈值、热觉阈值以及冷痛觉阈值、热痛觉阈值,并与20例正常健康者进行比较.结果:与正常健康者相比,SCI患者损伤平面的单丝触觉阈、热觉阈均明显提高,冷觉阈明显降低.与无明显疼痛者比较,中、重度神经病理性疼痛者的单丝触觉阈、冷痛阈和热痛阈值间的差异存在统计学意义;神经妥乐平治疗有效者与无效者比较,冷痛阈、热痛阈间差异均存在统计学意义.结论:神经妥乐平治疗SCI后的神经病理性疼痛具有其特定的解剖生理学基础.通过QST筛查,有利于对SCI后的神经病理性疼痛进行早期干预.
关键词： 牛痘疫苗接种家兔炎症皮肤提取物 神经病理性疼痛 脊髓损伤 定量感觉检查 -
脉冲射频对CCI大鼠坐骨神经组织学及脊髓GDNF表达的影响
目的:观察脉冲射频(pulsed radiofrequency,PRF)作用于慢性坐骨神经缩窄模型(chronic constriction injury,CCI)大鼠神经干结扎部位后大鼠疼痛行为学、坐骨神经组织学变化,检测脊髓L4～6节段胶质细胞源性神经营养因子(glial cell-derived neurotrophic factor,GDNF)表达变化.方法:36只SD大鼠随机等分为3组:Sham-Sham(SS)、CCI-Sham(CS)、CCI-PRF(CP).结扎CS、CP组大鼠右侧坐骨神经干,制作CCI模型;SS组仅分离坐骨神经不结扎.术后第14天,将PRF作用于CP组大鼠坐骨神经干结扎处;SS、CS组仅放置电极针不通电.不同时间点观察3组大鼠的疼痛行为学变化.治疗后14天酶联免疫吸附法检测大鼠脊髓L4～6节段GDNF表达水平,光镜下观察大鼠坐骨神经组织学变化.结果:造模后CS、CP组大鼠结扎侧机械、热痛阈均较SS组明显降低,PRF治疗后14天CP组大鼠痛阈较CS组明显升高;光镜下CP组较CS组神经轴索数量、轴索直径、髓鞘厚度明显增加;CP组大鼠与CS、SS组大鼠相比较L4～6节段脊髓中GDNF表达明显升高.结论:PRF可能通过上调脊髓中GDNF的表达促进受损神经的修复,缓解CCI大鼠的神经病理性疼痛.
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苦参碱抑制SNL大鼠背根神经节TNF-α的表达
目的:观察苦参碱对脊神经损伤所致大鼠神经病理性疼痛的作用,并初步探讨其作用机制.方法:第1组实验将大鼠随机分为25 mg/kg、50 mg/kg、100 mg/kg和200 mg/kg剂量组,每组又分别随机分为实验组和对照组,实验组给予不同剂量苦参碱,对照组给予相应体积溶剂,各组大鼠于术后第8d利用行为学测试的方法,检测苦参碱对大鼠50％机械刺激撤足阈值及热刺激撤足潜伏期的影响.第2组实验将大鼠随机分为假手术组、模型组、25 mg/kg给药剂量组、50 mg/kg给药剂量组、100 mg/kg给药剂量组、200 mg/kg给药剂量组,实验组给予不同剂量溶剂,余组给予相同体积的溶剂.各组大鼠于第8d给药后3h,利用免疫组化的方法检测大鼠背根神经节TNF-α的表达.结果:50 mg/kg以上剂量苦参碱可显著提高模型大鼠50％机械刺激撤足阈值及热刺激撤足潜伏期,低于此剂量无效.50 mg/kg、100 mg/kg和200 mg/kg苦参碱对模型鼠50％机械刺激撤足阈值及热刺激撤足潜伏期提高作用可达6h以上.通过免疫组化结果可以看出,50 mg/kg、100 mg/kg和200 mg/kg苦参碱能够抑制背根神经节神经元内TNF-α的表达.结论:苦参碱可缓解腰5脊神经切断引起的神经病理性疼痛,其作用可能与抑制背根神经节内TNF-α的表达有关.
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Fc γ RI参与大鼠神经病理性疼痛的发生
目的:研究脊髓中Fc γ RI介导的免疫反应在大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(chronic constriction injury of the sciatic nerve,CCI)模型中的作用.方法:成年雄性SD大鼠96只,随机分为:①空白对照组(C组):不进行任何处理;②假手术组(S组):只分离暴露坐骨神经不结扎;③神经病理性疼痛组(NP组):建立CCI模型;④NP+Fc γ RI中和抗体组(NF组):建立CCI模型并在坐骨神经周围置管给予Fc γ RI中和抗体;⑤IgG免疫复合物组(IIC组):坐骨神经周围置管给予IgG免疫复合物;⑥IC+Fc γRI中和抗体组(IF组):坐骨神经周围置管后给予IgG免疫复合物、Fc γ RI中和抗体.各组大鼠分别术前和术后l、3、7、14、21d测定后爪机械缩足阈值(paw withdrawal mechanical threshold,PWMT)和热缩足潜伏期(paw withdrawal thermal latency, PWTL),利用蛋白印记(westem blotting)与荧光PCR技术检测大鼠脊髓Fc γ RI蛋白和mRNA表达量的变化.结果:NP组和IIC组可引起大鼠术侧后爪机械刺激和热刺激痛觉过敏,Fc γ RI蛋白和mRNA表达量明显上调(P＜0.05).给予中和抗体后可明显减轻大鼠机械痛和热痛,Fc γ RI蛋白和mRNA表达量明显降低(P＜0.05).结论:Fc γ RI介导的免疫反应参与大鼠神经病理性疼痛的发生.
关键词： Fc γ RI 神经病理性疼痛 Fc γ RI中和抗体 免疫反应 -
神经病理性疼痛引起大鼠空间记忆障碍和内侧前额叶PSD95以及CaMKⅡ-Thr305的表达升高
目的:研究神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)对大鼠空间学习记忆功能和内侧前额叶(medical prefrontal cortex,mPFC)钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(alpha calciurn/calmodulindependent protein kinase Ⅱ,CaMK Ⅱ)磷酸化水平以及突触后密度蛋白95(postsynaptic density protein 95,PSD95)表达的影响.方法:选择经过八臂迷宫训练的雄性健康Wistar大鼠32只,将大鼠随机分为4组,神经病理性疼痛模型组(NP group,NP组,n=8),NP模型mPFC注射生理盐水组(NS组,n=8),NP模型mPFC注射CaMK Ⅱ抑制剂KN-93组(KN-93组,n=8)和假手术组(sham operated group,SO组,n=8).采用坐骨神经慢性压迫损伤制备大鼠NP模型.各组大鼠分别于术后第7、14、21、28和35天测机械缩足阈(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL),第29～35天再次进行八臂迷宫实验以检测大鼠的空间学习和记忆功能.术后第33天采用立体脑穿刺进行药物干预试验,建立NP模型mPFC注射生理盐水组(NS组)和NP模型mPFC注射CaMK Ⅱ抑制剂KN-93组(KN-93组)两组实验模型,第35天进行八臂迷宫检测大鼠的空间学习和记忆功能,检测后立即处死大鼠,通过Western Blotting、RT-PCR和免疫荧光方法测定mPFC部位CaMKⅡ磷酸化位点Thr305磷酸化水平和突触小体内PSD95表达水平.结果:与SO组相比,NP组、NS组和KN-93组的术后痛阈明显降低(P＜0.05).与SO组相比,NP组空间学习和记忆功能减退,PSD95表达升高,CaMK Ⅱ-Thr305水平升高(P＜0.05).与NS组比较,KN-93组空间学习和记忆功能改善,PSD95表达降低,CaMK Ⅱ-Thr305水平降低(P＜ 0.05).结论:NP能引起大鼠空间学习和记忆能力减退并使mPFC脑区的PSD95表达水平和CaMK Ⅱ磷酸化水平升高.
关键词： 神经病理性疼痛 钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ 突触后密度蛋白95 记忆 KN-93 -
鞘内注射米诺环素对神经病理性疼痛大鼠脊髓NMDAR1表达的影响
目的:观察鞘内注射特异性小胶质细胞抑制剂米诺环素对神经病理性疼痛大鼠机械痛阈和脊髓NMDAR1受体表达的影响.方法:结扎腰5神经根(SNL)建立大鼠神经病理性疼痛模型.雄性SD大鼠,体重220～260 g.48只大鼠随机分4组(12只/组),sham组:假手术+生理盐水;SNL组:SNL+生理盐水;M+sham组:假手术+米诺环素50 μg;M+SNL组:SNL+米诺环素50 μg;分别于术前及术后不同时点用von Frey纤维丝测定四组大鼠的机械撤爪阈值,并在机械痛阈低点取脊髓腰膨大部进行Western blot实验半定量检测四组中NMDAR1的表达.结果:SNL组与sham组比较大鼠术后各时点机械缩爪阈值明显下降,并在术后第8天降至低点(P<0.01).M+SNL组与SNL组比较,术后各时点大鼠机械撤爪阈值增高,脊髓NMDAR1的表达下降(P<0.01).结论:鞘内给予米诺环素可减轻SNL大鼠的机械痛敏,并抑制脊髓NMDAR1的表达.活化的小胶质细胞可能通过上调脊髓NMDAR1表达而参与了神经病理性疼痛的发生.
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电针“阳陵泉”、“环跳”对神经病理性疼痛大鼠脊髓SOCS3的影响
目的:观察电针对神经病理性疼痛大鼠痛行为学及脊髓细胞因子信号转导抑制蛋白3 (SOCS3)表达的影响.方法:SD大鼠随机分为正常组、假手术组、模型组、电针组、非电针组,每组10只.采用坐骨神经结扎压迫建立慢性限制性损伤(CCI)神经痛模型,电针组选取双侧“阳陵泉”、“环跳”穴进行电针治疗,观察大鼠痛行为学和脊髓SOCS3、IL-6基因表达的变化,检测脊髓SOCS3神经细胞定位情况.结果:与模型组相比,电针可显著提高CCI大鼠机械痛及热痛阈值(P＜0.01);与正常组相比,模型组大鼠脊髓SOCS3、IL-6 mRNA表达显著上调(P＜0.01),而电针可显著降低IL-6mRNA表达,并进一步上调脊髓SOCS3表达水平(P＜0.01).在CCI大鼠中,SOCS3主要表达于脊髓星形胶质细胞和小胶质细胞中.结论:电针可能通过下调IL-6基因表达,并上调SOCS3表达,减轻神经痛大鼠痛敏反应.
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星形胶质细胞在降钙素中枢镇痛机制中的作用
目的:观察降钙素(sCT)对神经病理性疼痛大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)星形胶质细胞D-丝氨酸(D-Ser)释放的影响,明确星形胶质细胞在sCT镇痛中作用机制.方法:72只雄性SD大鼠建立坐骨神经结扎神经病理性疼痛大鼠模型后,随机分为6组(n=12):正常组、CCI组、sCT组、射氟代柠檬酸(FCA)组、苯甲酸钠(SB)组和7-氯犬尿酸(CK)组.除正常组及CCI组外大鼠均腹腔内sCT.von Frey纤维检测其机械痛阈值(MWT),ELISA法检测其PAG中D-Ser水平.结果:建模后大鼠MWT下降,给予腹腔注射sCT后,D-Ser水平和MWT显著上升(P均＜0.001);PAG注射FCA或SB,分别引起sCT治疗大鼠D-Ser水平和MWT下降或上升(P均＜0.001);PAG注射CK引起sCT治疗大鼠MWT下降(P＜0.001),D-Ser水平无变化.结论:sCT引起神经病理性疼痛大鼠PAG星形胶质细胞活化,D-Ser释放增加,增强NMDA受体功能产生镇痛作用.
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鞘内注射GDNF对神经病理性疼痛大鼠脊髓水平GAD65表达的影响
目的:研究神经病理性疼痛大鼠脊髓背角谷氨酸脱羧酶65(Glutamate decarboxylase65,GAD65)的表达变化及蛛网膜下腔注射胶质细胞源性神经营养因子(glial cell line-derived neurotrophic factor,GDNF)对其表达的影响.方法:实验1:雄性SD大鼠随机分为假手术组(sham组)和坐骨神经结扎组(CCI组).CCI组又分为术后1d (D1)、3d (D3)、7d (D7)和14d (D14)组.实验2:雄性SD大鼠随机分为:sham组、D14组、D14+GDNF组和D14+PBS组.两实验分别于实验前及CCI术后第1、3、7、14d测定热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)及机械缩足阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT),处死后取其L4～L5脊髓背角,采用Westem blot方法测定GAD65蛋白表达情况.结果:与sham组相比,CCI组大鼠TWL及MWT均降低,GAD65表达水平于术后3d开始降低,一直持续到术后14 d;与D14组和D14+PBS组相比,D14+GDNF组大鼠TWL及MWT均升高,GAD65表达水平升高.结论:神经病理性疼痛的发生机制可能和大鼠脊髓背角内GAD 65表达降低相关,而GDNF对其镇痛作用可能部分是通过增加脊髓GAD65的表达实现的.
关键词： 胶质细胞源性神经营养因子 神经病理性疼痛 谷氨酸脱羧酶65 -
鞘内注射转运蛋白配体对神经病理性疼痛的调节作用及其机制
目的:探讨鞘内注射18 kDa转运蛋白(18 kDa translocator protein,TSPO)配体对神经病理性疼痛(neuropathic pain,NP)的调节作用及其可能的机制.方法:雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Vehicle+Sham组)、对照组(Vehicle+SNI组)、TSPO激动剂Ro5-4864组(Ro+SNI组)、TSPO拮抗剂PK11195组(PK+SNI组).各组分别于术前、术后第三天(D 3)、第七天(D 7)、第14天(D 14)和第21天(D21)测定大鼠50％的机械刺激缩足阈值(Paw withdrawl threshold,PWT),第三天行为学测试后,Vehicle+Sham组和Vehicle+SNI组鞘内注射溶剂20％ DMSO 4μl,Ro+SNI组和PK+SNI组分别注射2 μg激动剂Ro5-4864和2μg拮抗剂PK-11195.应用westernblot检测术后D5、D7、D14、D21天的大鼠L4～6节段同侧脊髓,分别测定胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达水平.结果:(1)各组术前PWT无明显统计学差异(P＞0.05);术后其余3组较Vehicle+Sham组相比,PWT值从D3直至D21明显降低,与Vehicle+Sham组同时间点相比差异具有统计学意义(P＜0.01);与Ro+SNI组比较,Ro+SNI组在鞘内给药后PWT有明显升高,差异有统计学意义(P＜0.01);而PK+SNI组在给药后的PWT较Vehicle+SNI组比较,差异无统计学意义. (2)神经损伤后,Vehicle+SNI组的GFAP和TNF-α的表达明显增高,与Vehicle+Sham组同时间点相比差异具有统计学意义(P＜0.01);与Vehicle+SNI组比较,Ro+SNI组在给药后D5的脊髓GFAP表达稍有增高,但在D7、D 14、D21表达明显降低(P＜0.01),TNF-α的表达在给药后D5直至D 14明显下降,差异有统计学意义(P＜0.0l).结论:鞘内单次注射TSPO激动剂Ro5-4864可缓解NP大鼠的痛觉超敏,调节星形胶质细胞的活性以及神经免疫反应是其可能的机制之一.
