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糖尿病中性粒细胞粘附分子表达与血小板微小颗粒的研究
当中性粒细胞受到活化时,表达粘附分子CD11/CD18、CD62L、CD44等,并与血管内皮细胞粘附,向血管外游走。高切应力作用下血小板释放具有促凝活性的微小颗粒[1]。血小板微小颗粒(PMP)与活化的凝血因子Va、Xa形成促凝血活酶复合物,促进血液凝固[2]。PMP与糖尿病动脉硬化有密切关系[3]。凝血调节素(TM)是内皮细胞损伤标志[4]。微血管损伤疾病中,TM水平明显增加[5]。然而,糖尿病中性粒细胞粘附分子、PMP、TM之间关系尚不清楚。本研究主要探讨糖尿病的中性粒细胞粘附分子、PMP、TM之间的关系。 一、对象与方法 1.对象:糖尿病患者20例(男11例,女9例,平均年龄35岁,均有微血管并发症),正常人20例。 2.方法:(1)采静脉血10 ml,用淋巴细胞分离液分离中性粒细胞,用1%甲醛固定。用免疫球蛋白阻滞Fc受体。用CD11a、CD11b、CD62L单克隆抗体孵育。用FITC荧光素标记,用流式细胞仪检测。(2)同上方法分离血小板之后,加入FITC标记的Ib/Ⅸ单克隆抗体,用流式细胞仪检测。计算104个血小板的微小颗粒。(3)用TM-MoAb20室温下包被微孔板,用含0.05% Tween 20的PBS洗涤,用含0.02% BSA和0.05% Tween 20的PBS室温孵育。加入检测标本,加入邻苯二胺,室温孵育。用1mol/L H2SO4终止呈色反应。用492nm测吸光度。
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内皮细胞粘附分子与妊娠高血压综合征发病的关系
内皮细胞粘附分子可介导炎性细胞与血管内皮细胞粘附,引起内皮细胞功能失调,其异常表达可能在妊娠高血压综合征(妊高征)的发病机制中起作用[1].本研究通过对妊高征患者和正常晚期孕妇胎盘绒毛血管内皮细胞、脐血管内皮细胞中内皮细胞粘附分子的表达和血清中可溶性粘附分子的水平比较,探讨其在妊高征发病中的作用.
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细胞间粘附分子与缺血性卒中
目前许多脑缺血动物模型已经证实,急性脑缺血的病理过程中,小血管炎症是一个重要环节,炎症反应的关键步骤是白细胞与血管内皮细胞粘附、外渗,而这一过程的始动因素部分是由白细胞与血管内皮细胞表面表达的细胞间粘附分子和其配基介导,并受炎症因子调节的。 粘附分子(adhesion molecule)是指由细胞产生能介导细胞与细胞、细胞与胞外基质间相互接触和结合的一类分子,大部分为糖蛋白,分布于细胞表面或细胞外基质(extracellular matrix,ECM)中。按结构特点分为以下4类:①整合素家族。②免疫球蛋白超家族。③选择素家族。④钙离子依赖的细胞粘附素家族。⑤其它未归类的黏附分子。粘附分子参与机体许多重要的生理和病理过程,以配体和受体相对应的形式发挥作用。其中通过表达于白细胞表面粘附分子与表达于内皮细胞上的粘附分子互为配体,相互粘附,参与炎症发生。白细胞、血管内皮细胞或其它细胞表面的粘附分子可脱落下来,进入血液成为可溶性粘附分子(soluble adhesion molecules,SAM)。目前了解多的是免疫球蛋白超家族的sCAM。超来越多的研究表明在缺血卒中和动脉粥样硬化病人血清sCAM有含量变化。测定血清sCAM水平对探讨缺血卒中和指导临床治疗意义重大。
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清解宁对白细胞-血管内皮细胞粘附的影响
白细胞-血管内皮(HUVEC)细胞粘附在免疫应答与炎症中均有重要作用.黄连解毒汤及主要成分小檗碱、黄芩苷等能抑制白细胞与HUVEC的粘附及粘附分子的表达[1].我们将上述成分组成清解宁,研究其对白细胞-HUVEC粘附及粘附分子的影响.
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氯沙坦对自发性高血压大鼠主动脉内膜ICAM-1和PAI-1表达的影响
近年大量研究资料表明,高血压病人白细胞与血管内皮细胞粘附增加及纤溶活性的改变,可能参与高血压发生发展机制并增加血栓性并发症的发生率.因此,控制高血压患者细胞粘附功能增强和纤溶活性的紊乱,并合理选用能减轻细胞粘附和改善纤溶活性的抗高血压药物具有不容忽视的临床价值.本实验以早期雄性自发性高血压大鼠(SHR)为对象,在予以氯沙坦(Losartan)干预治疗前后,检测主动脉内膜细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)的表达,观察氯沙坦对其的影响,并探讨血管紧张素II受体-1拮抗剂(AT1R)在控制血压及减少并发症发生中的作用.
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019 液体切应力对内皮细胞粘附分子及单核细胞趋化蛋白-1表达的影响
目的: 观察流体切应力对内皮细胞粘附分子ICAM-1、 VCAM-1及单核细胞趋化蛋白质(MCP-1)表达的影响以及在动脉粥样硬化发病中的意义. 方法: 以人静脉内皮细胞(HUVEC), 作观测对象, 采用平行板流动腔产生一定大小的切应力, 采用免疫组化ABC法观测经0.72 Pa作用不同时间(30 min、 5 h)后, 粘附分子表达的变化, 采用ELISA方法测定灌流液中MCP-1蛋白浓度, 反映内皮细胞表达MCP-1的变化. 结果: 粘附分子测定的结果如下: 切应力作用30 min后, ICAM-1的阳性表达率(%)为56.3±10.2, 作用5 h后为58.6±6.8, 而对照组(静态)为44.7±11.6, 此结果表明切应力能引起HUVEC上ICAM-1表达显著增加. 未见其对VCAM-1表达的影响. MCP-1蛋白浓度测量的结果是: 切应力作用30 min后, 灌流液中MCP-1浓度为76.6±26.1 pg/ml, 作用5 h后为323.4±106.7 pg/ml, 作用12 h后为1 152.7±377.5 pg/ml, 对照组为186.0±74.8 pg/ml, 以上结果表明0.72 Pa切应力作用可引起MCP-1表达时间依赖性增加. 结论: ICAM-1是介导白细胞(包括单核细胞)血管内皮细胞粘附的粘附分子, 本研究结果显示: 切应力可引起HUVEC上ICAM-1表达增加, 有促进白细胞粘附的作用. MCP-1是特异性作用于单核细胞(MC)的强趋化蛋白, 对MC在内皮下聚集起启动和放大作用, 故在AS发生和发展中起重要作用. 本研究结果表明0.72 Pa切应力可引起HUVEC表达MCP-1呈时间依赖性增加.
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黄连解毒汤含药血清对中性粒细胞与血管内皮细胞粘附的影响
目的:探讨黄连解毒汤含药血清对中性粒细胞与血管内皮细胞粘附的影响.方法:以黄连解毒汤连续灌服大鼠3 d,每天2次,每次生药0.3 g/100 g大鼠,末次给药后分别于0.5、1、1.5、2、2.5 h取血制备含药血清.对照血清以生理盐水灌服后同法制备.以常规制备的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)单层细胞与中性粒细胞粘附为模型,各时段血清均以20%、10%、5%及2.5%浓度处理HUVEC 24 h,用MTT法观察其对HUVEC的毒性作用(以细胞死亡率表示);在此基础上,以对HUVEC无毒性作用浓度的含药血清处理HUVEC 24 h后,加入中性粒细胞(5×106/mL)粘附30 min,计算细胞粘附率.结果:各时段含药血清的细胞死亡率均随着浓度的降低而降低,但均高于对照组,其中仅5%和2.5%浓度的细胞死亡率与对照组相接近,无显著差异.故各时段均选用5%和2.5%浓度进行细胞粘附实验.实验发现0.5 h和2 h时段在5%浓度时,能明显降低细胞粘附率(P<0.01).结论:①大鼠黄连解毒汤含药血清对HUVEC有一定毒性;②在连续多次灌胃后不同时段所取的含药血清中仅0.5 h和2 h时段,并在5%浓度时既对HUVEC无明显毒性,又能对细胞粘附有明显抑制作用;③黄连解毒汤含药血清能抑制中性粒细胞与血管内皮细胞的粘附,这可能是黄连解毒汤抗炎免疫作用的机制之一.其有效作用成分及在抑制细胞粘附过程中的分子作用机制还有待于进一步研究.
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小檗碱对中性粒细胞与血管内皮细胞粘附的影响及机制探讨
目的:探讨小檗碱对中性粒细胞及血管内皮细胞粘附作用及粘附分子的影响.方法:以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)为模型,用蛋白染料染色法观察小檗碱对中性粒细胞(PMN)与HUVEC粘附作用的影响;用细胞ELISA法、APAAP细胞免疫化学染色法观察小檗碱对PMN-HUVEC粘附过程中粘附分子ICAM-1 及CD18表达的影响.结果:小檗碱(0.32~8 μg/mL)作用于HUVEC,可抑制PMN与HUVEC间的粘附,对IL-1、TNF(1 000 μg/mL)诱导的PMN-HUVEC粘附增强亦有抑制作用;而小檗碱(200 μg/mL)作用于PMN,仅可抑制TNF(1 000 μg/mL)诱导的PMN-HUVEC粘附增强.小檗碱(8 μg/mL)可抑制HUVEC表面ICAM-1的表达,对IL-1、TNF(1 000 μg/mL)诱导的ICAM-1表达增多亦有下调作用;小檗碱(200 μg/mL)对TNF(1000 μg/mL)诱导的表面CD18表达增多有下调作用.结论:小檗碱的抗炎作用与其抑制PMN-HUVEC的粘附作用及抑制HUVEC和PMN上粘附分子的表达有关.
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黄芪多糖对嗜中性粒细胞与内皮细胞粘附及粘附分子的影响
目的:通过研究黄芪多糖对嗜中性粒细胞与血管内皮细胞粘附及粘附分子的影响,探讨黄芪多糖对炎症反应的作用及其机制.方法:以黄芪多糖或黄芪多糖加IL-1/TNF处理人嗜中性粒细胞或人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后,用蛋白染料染色法研究药物对嗜中性粒细胞与内皮细胞粘附的作用,用细胞ELISA法、APAAP免疫细胞化学染色法研究药物对HUVEC表面ICAM-1及嗜中性粒细胞表面CD18表达的影响.结果:黄芪多糖(40 μg/mL-1 mg/mL)作用于HUVEC,能促进HUVEC与嗜中性粒细胞粘附,并与IL-1、TNF(1 000 μg/mL)有协同增强作用(P>0.01,P>0.05),黄芪多糖(1 mg/mL)促进HUVEC表面粘附分子ICAM-1的表达(P>0.01);黄芪多糖(40 μg/mL-1 mg/mL)作用于嗜中性粒细胞,不增强嗜中性粒细胞与HUVEC粘附,同时也不提高嗜中性粒细胞表面粘附分子CD18的表达.结论:黄芪多糖通过促进内皮细胞表面粘附分子的表达而促进嗜中性粒细胞与内皮细胞的粘附,从而促进炎症反应.黄芪多糖具有鼓舞正气、托毒生肌的作用,可能与它的促炎症反应作用有关.
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蛛网膜下腔出血后脑脊液中粘附分子的产生与颅内血管痉挛的关系
粘附分子属于大分子,它们通过相互作用与血管内皮细胞粘附,穿过内皮屏障,迁移进入组织间隙,介导白细胞参与损伤反应[1].在脑和肾发生缺血再灌注损伤,以及失血性休克时,与粘附分子有关的糖蛋白出现或上调[2,3].