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糖尿病中性粒细胞粘附分子表达与血小板微小颗粒的研究
当中性粒细胞受到活化时，表达粘附分子CD11/CD18、CD62L、CD44等，并与血管内皮细胞粘附，向血管外游走。高切应力作用下血小板释放具有促凝活性的微小颗粒［1］。血小板微小颗粒(PMP)与活化的凝血因子Va、Xa形成促凝血活酶复合物，促进血液凝固［2］。PMP与糖尿病动脉硬化有密切关系［3］。凝血调节素(TM)是内皮细胞损伤标志［4］。微血管损伤疾病中，TM水平明显增加［5］。然而，糖尿病中性粒细胞粘附分子、PMP、TM之间关系尚不清楚。本研究主要探讨糖尿病的中性粒细胞粘附分子、PMP、TM之间的关系。 一、对象与方法 1.对象：糖尿病患者20例(男11例，女9例，平均年龄35岁，均有微血管并发症)，正常人20例。 2.方法：(1)采静脉血10 ml，用淋巴细胞分离液分离中性粒细胞，用1%甲醛固定。用免疫球蛋白阻滞Fc受体。用CD11a、CD11b、CD62L单克隆抗体孵育。用FITC荧光素标记，用流式细胞仪检测。(2)同上方法分离血小板之后，加入FITC标记的Ib/Ⅸ单克隆抗体，用流式细胞仪检测。计算104个血小板的微小颗粒。(3)用TM-MoAb20室温下包被微孔板，用含0.05% Tween 20的PBS洗涤，用含0.02% BSA和0.05% Tween 20的PBS室温孵育。加入检测标本，加入邻苯二胺，室温孵育。用1mol/L H2SO4终止呈色反应。用492nm测吸光度。
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内皮细胞Rho/Rho激酶介导纤维肉瘤细胞血管外游走的机制
目的 研究内皮细胞Rho/Rho激酶在纤维肉瘤细胞血管外游走过程中的调控机制.方法 采用血管外游走体外模型观察纤维肉瘤细胞血管外游走状况;测定游走过程中血管内皮单细胞层电阻变化;进行细胞内磷酸化实验,利用放射自显影技术评价纤维肉瘤细胞游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平.结果 纤维肉瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外.在游走过程中跨血管内皮细胞层电阻下降,内皮细胞肌球蛋白轻链磷酸化水平升高.内皮细胞Rho抑制剂(C3转移酶)、Rho激酶抑制剂(Y-27632)能够抑制上述变化.结论 内皮细胞Rho/Rho激酶可能是通过调节肌球蛋白轻链磷酸化水平诱导纤维肉瘤细胞向血管外游走.
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肝细胞生长因子对肺癌细胞血管外游走的影响
目的:评价肝细胞生长因子(HGF)对肺癌细胞血管外游走的影响.方法:利用体外癌细胞血管外游走模型,观察VMRC-LCD、LK-2、RERF-LC-KJ等3种肺癌细胞的血管外游走状况,并计算游走至血管外的肺癌细胞数.结果:LK-2和RERF-LC-KJ可以通过血管内皮细胞间缝隙游走至血管外、肝细胞生长因子能够刺激肺癌细胞更多地浸润至血管外基质.结论:肝细胞生长因子能增强肺癌细胞的运动能力,加速肺癌细胞的血管外游走.
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内皮细胞肌球蛋白轻链激酶调控纤维肉瘤细胞血管外游走的实验研究
目的:阐明内皮细胞肌球蛋白轻链激酶在纤维肉瘤细胞血管外游走过程中的调控机制.方法:利用血管外游走的体外模型,观察纤维肉瘤细胞(HT1080)的血管外游走状况,并测定游走过程中血管内皮单细胞层的电阻变化,进行细胞内磷酸化实验,利用放射自显影技术,评价纤维肉瘤细胞游走过程中内皮细胞肌球蛋白轻链的磷酸化水平.结果:纤维肉瘤细胞可以穿过血管内皮细胞游走至血管外,并且游走过程中跨血管内皮细胞层的电阻下降,内皮细胞肌球蛋白轻链的磷酸化水平升高.内皮细胞肌球蛋白轻链激酶抑制剂(ML-7)能够抑制上述变化,并具有浓度依赖性.结论:内皮细胞肌球蛋白轻链激酶可通过调控肌球蛋白轻链的磷酸化水平,引起骨架重组、细胞收缩,从而导致纤维肉瘤细胞穿过内皮细胞间缝隙向血管外游走.
