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脊髓JNK信号通路在大鼠切口痛中的作用
目的：评价脊髓c?Jun氨基末端调节激酶（ JNK）信号通路在大鼠切口痛中的作用。方法成年雄性SD大鼠63只，体重200～250 g，采用随机数字表法分为3组（ n＝21）：切口痛组（ IP组）、二甲基亚砜组（ DMSO组）和JNK抑制剂SP6000125组（ SP组）。造模前30 min时DMSO组鞘内注射10％二甲基亚砜10μl，SP组鞘内注射SP60012525μg（溶于10μl 10％二甲基亚砜中）。每组取6只大鼠，分别于造模前24 h和造模后2、6、24、48、72 h时，测定机械缩足反应阈（ MWT）和热缩足潜伏期（ TWL）。分别于造模前24 h和造模后6、24、48、72 h时，取脊髓组织，采用免疫荧光法测定磷酸化JNK（ p?JNK）的表达。结果与造模前24 h时比较，IP组造模后各时点MWT降低，TWL缩短，脊髓p?JNK表达上调（ P＜0．05）；与IP组比较，SP组造模后各时点 MWT升高，TWL延长，脊髓p?JNK表达下调（P＜0．05），DMSO组上述各指标比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论脊髓JNK信号通路参与了大鼠切口痛的形成和维持。
关键词： 疼痛 手术后 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 脊髓 -
c-Jun氨基末端激酶在瑞芬太尼预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用
目的 评价c-Jun氨基末端激酶(JNK)在瑞芬太尼预处理(RPC)减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用.方法 成年雄性SD大鼠126只,体重300-350 g,随机分为5组:缺血再灌注组(I/R组)(n=38)、缺血预处理组(IPC组)(m=38)、RPC组(n=38)、SP+IPC组(n=6)和SP+RPC组(n=6).采用结扎左冠状动脉30 min再灌注120 min的方法制备心肌缺血再灌注模型.IPC组在缺血前30min行IPC:缺血5 min,再灌注5 min,重复3次;RPC组在缺血前30 min 行RPC:静脉输注瑞芬太尼6 ug·kg-1·min-1 5 min,停止5 min,重复3次;SP+RPC组和SP+IPC组分别于RPC或IPC前5 min腹腔注射JNK选择性阻滞剂SP600125 6 mg/kg.I/R组、IPC组和RPC组于缺血前即刻、缺血5.30 min和再灌注5、30、60 min时随机处死5只大鼠,测定左心室磷酸化JNK(p-JNK)的表达.于再灌注末处死其余大鼠,取心肌,计算左心室(LV)与右心室(RV)体积之和(LV+RV)、梗死区(IS)面积占缺血危险区(AAR)面积的百分比(IS/AAR).结果 与I/R组相比,IPC组和RPC组IS/AAR降低(P＜0.01),SP+PRC组和SP+IPC组IS/AAR差异无统计学意义(P＞0.05);缺血前即刻IPC组心肌p-JNK表达增加,缺血5min时RPC组和IPC组心肌p-JNK表达均降低,再灌注期间RPC组和IPC组心肌p-JNK表达均增加(P＜0.01).结论 JNK参与了瑞芬太尼预处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤.
关键词： JNK丝裂原活化蛋白激酶类 哌啶类 缺血预处理 心肌 心肌再灌注损伤 -
神经病理性痛大鼠背根神经节JNK的表达
目的 探讨神经病理性痛大鼠背根神经节C-Jun氨基末端蛋白激酶(JNK)的表达.方法 雄性SD大鼠88只,体重200～250 g.随机分为2组(n=44):假手术组(SH组)和慢性压迫性损伤组(CCI组).结扎大鼠右侧坐骨神经建立CCI模型.各组取8只大鼠,于CCI前、CCI后1、3、5、7、14 d时,测定热刺激缩足反射潜伏期(TWL).各组于CCI前、CCI后1、3、5、7、14 d时,各取6只大鼠测定背根神经节磷酸化JNK(p-JNK)的表达.结果 与CCI前比较,CCI组CCI后各时点TWL降低,p-JNK表达增加(P＜0.01);与SH组比较,CCI组CCI后3、5、7、14 d时TWL降低,p-JNK表达增加(P＜0.01).结论 背根神经节JNK表达升高可能参与了大鼠神经病理性痛的形成.
关键词： JNK丝裂原活化蛋白激酶类 神经痛 神经节 脊 -
沙利度胺对肺纤维化大鼠肺组织中c-jun氨基末端激酶及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响及意义
目的 观察沙利度胺在大鼠肺纤维化中的干预作用及对磷酸化c-jun氨基末端激酶(p-JNK)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,进一步分析沙利度胺在肺纤维化过程中可能的作用机制.方法 将54只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组、沙利度胺组,每组各18只,于气管内滴注博莱霉素注射液制备肺纤维化模型,对照组给予气管内滴注0.9％氯化钠注射液.沙利度胺组于造模当日起给予沙利度胺(100 mg/kg)灌胃,对照组和模型组给予等量0.9％氯化钠注射液,每日1次.各组分别于第7、14、28天随机处死6只大鼠,取肺组织行苏木素-伊红(HE)染色和Masson染色,碱水解法测大鼠肺组织羟脯氨酸(Hyp)含量,免疫组织化学法测肺组织中p-JNK蛋白及α-SMA的表达.结果 模型组第7天时肺泡炎症明显,第28天时可见明显纤维化改变；随着时间的推移,羟脯氨酸含量呈逐渐上升趋势,第28天时含量高；p-JNK蛋白及α-SMA的表达较对照组明显增加.沙利度胺组与模型组比较,肺泡炎症及纤维化程度均有所减轻；第14、28天时Hyp含量有所降低,p-JNK蛋白及α-SMA的表达有所减少(P＜0.05)；模型组α-SMA与p-JNK蛋白含量呈正相关.结论 沙利度胺可减轻博莱霉素所致大鼠肺纤维化的程度,其机制可能是通过抑制p-JNK蛋白的活化及α-SMA的表达实现的.
关键词： 沙利度胺 肺纤维化 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 平滑肌肌动蛋白 -
磷酸化c-jun氨基末端激酶蛋白和α-平滑肌肌动蛋白在肺纤维化大鼠中的表达及意义
目的 观察肺纤维化大鼠中磷酸化c-jun氨基末端激酶(p-JNK)蛋白和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达,进一步分析JNK信号通路在该病理生理过程中的作用.方法 将54只健康雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组和SP600125组.气管内注入博莱霉素制备肺纤维化模型,于造模当日起,各组给予相应药物,分别于第7、14、28 天处死大鼠,取肺组织行苏木素-伊红(HE)染色,光镜下观察大鼠肺组织病理学变化;碱水解法检测肺组织羟脯氨酸(Hyp)含量;应用免疫组织化学法检测肺组织中p-JNK和α-SMA的蛋白表达水平.结果 模型组第7天肺泡炎程度严重,于第28天形成显著肺纤维化,Hyp含量于第28天达高峰,其p-JNK、α-SMA的含量与对照组比较均明显升高;SP600125组各时间点肺泡炎和纤维化程度低于模型组,且Hyp、p-JNK、α-SMA的含量亦低于模型组;模型组α-SMA与p-JNK蛋白含量呈显著正相关.结论 肺纤维化病理过程可能与p-JNK表达增加并活化α-SMA的表达有关,应用SP600125对肺纤维化有抑制作用.
关键词： JNK丝裂原活化蛋白激酶类 肺纤维化 平滑肌肌动蛋白类 -
朝医麻黄定喘汤对哮喘模型小鼠肺组织中p38蛋白激酶表达的影响
[目的]探讨朝医麻黄定喘汤对支气管哮喘模型小鼠肺组织中p38蛋白激酶(p38 MAPK)表达的影响.[方法]应用卵清蛋白腹腔注射致敏和反复超声雾化吸入方法刺激复制小鼠哮喘模型,随机分成正常对照组、哮喘模型组和麻黄定喘汤小、大剂量组.分别采用酶联免疫吸附法和蛋白质印迹法检测支气管肺泡灌洗液中的嗜酸性粒细胞总数(EOS)、白细胞介素5(IL-5)含量和肺组织磷酸化p38 MAPK表达的变化.[结果]朝医麻黄定喘汤小、大剂量组小鼠肺组织磷酸化p38 MAPK表达水平、IL-5含量及EOS计数均较哮喘模型组显著降低(P＜0.05),而且p38 MAPK表达水平与IL-5含量和EOS计数呈正相关.[结论]朝医麻黄定喘汤可能通过p38 MAPK信号转导途径对哮喘起治疗作用.
关键词： 哮喘 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 麻黄定喘汤 小鼠 -
右美托咪定对机械通气相关性肺损伤大鼠肺组织细胞凋亡的影响
目的 探讨右美托咪定(DEX)对机械通气相关性肺损伤大鼠肺组织细胞凋亡的影响.方法 清洁级雄性SD大鼠100只,采用随机数字表法将大鼠分为五组(每组n =20):对照组(C组)、机械通气组(V组)和不同剂量右美托咪定组(DEX 1 ～3组).机械通气参数设置:潮气量40 mL/kg,呼吸频率50次/min,吸呼比1: 1,FiO2 21％.DEX 1 ～3组机械通气前20 min分别静脉输注DEX 0.5、2.5、5.0 μg/kg,机械通气期间DEX分别以0.5、2.5、5.0μg/(kg-h)的速率静脉输注4 h.于插管即刻及机械通气1、2和4 h时采集股动脉血样,进行动脉血气分析,并记录 Pa02,计算氧合指数(01).机械通气4 h时处死大鼠,回收肺泡支气管灌洗液(BALF),测定肺通透指数(LPI),取左肺下叶,测定肺湿/干质量(W/D)比值.采用Western blot法检测JNK、p- JNK、Bax、Bcl-2、Caspase-3和唯BH3结构域促凋亡因子(BID、BIM)的表达水平.采用RT- PCR法检测JNK mRNA的表达.光镜下,观察肺组织病理学结果,测定肺泡损伤率(IAR),采用 TUNEL法观察肺组织细胞凋亡情况并计算凋亡指数.结果 与C组比较,V组和DEX 1组01降低,W/D比值、LPI、IAR(％ )、AI(％ )升高,p-JNK和JNK mRNA表达上调,促凋亡因子BID、BIM的表达增加,同时伴有Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Caspase-3表达增加(P＜0.05),DEX 2、3组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05);与V组比较,DEX 2、3组01升高,W/D比值、LPI、IAR(％ )、AI(％ )降低,p-JNK和JNK mRNA表达下调,促凋亡因子BID、BIM表达减少,同时伴有 Bax表达减少,Bcl-2表达增加,Caspase-3表达减少(P＜0.05),DEX 1组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).与V组比较,DEX 2、3组肺组织病理损伤减轻,TUNEL法检测细胞凋亡减少.结论 DEX可减轻大鼠机械通气相关性肺损伤,与其抑制肺组织JNK磷酸化,下调唯BH3结构域促凋亡因子BID、BIM的表达,进而上调Bcl-2表达,下调Bax表达,抑制Caspase-3表达来减少肺组织细胞凋亡,减轻肺损伤有关.
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丹蛭降糖胶囊联合运动对糖尿病大鼠胰腺JNK信号通路的影响
目的:观察丹蛭降糖胶囊联合运动对糖尿病大鼠胰腺c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号通路的影响,探讨其治疗糖尿病的可能机制.方法:雄性Wistar大鼠78只,用小剂量链脲佐菌素联合高脂饲料的方法建立糖尿病大鼠模型,并将造模成功的60只大鼠分为模型组、运动组、丹蛭降糖胶囊组及运动联合丹蛭降糖胶囊组；另取12只大鼠作为正常对照.治疗8周后,用免疫组织化学法、蛋白质印迹法检测大鼠胰腺组织中磷酸化JNK(phospho-J NK,p JNK)、胰腺十二指肠同源异型盒基因1(pancreatic and duodenal homeobox-1,PDX-1)及胰岛素的表达水平.结果:模型组胰腺组织中的p-JNK表达水平明显高于正常对照组(P＜0.01),而PDX-1和胰岛素含量则明显低于正常对照组(P＜0.01)；给予中药、运动干预能明显抑制JNK的活性,提高PDX-1和胰岛素的表达水平(P＜0.05,P＜0.01).结论:运动及丹蛭降糖胶囊联用可能是通过抑制糖尿病大鼠JNK信号通路,对糖尿病胰岛β细胞起保护作用.
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丹参酮ⅡA磺酸钠对急性坏死性胰腺炎大鼠肺损伤的抗炎作用及其机制研究
背景:急性肺损伤是重症急性胰腺炎(SAP)早期主要的死亡原因,减轻肺损伤可能降低SAP的死亡率.目的:研究丹参酮ⅡA磺酸钠(STS)对SAP相关肺损伤的抗炎作用及其可能机制.方法:36只Sprague-Dawley大鼠随机分为假手术组、急性坏死性胰腺炎(ANP)组和STS组,后两组予5％牛磺胆酸钠胰管注射建立ANP模型,STS组于造模前30 min予腹腔注射STS预处理.造模后12h和24 h分批处死动物,行胰腺、肺组织病理学检查和肺损伤评分,ELISA法检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)含量,蛋白质印迹法检测肺组织JNK、p-JNK蛋白表达.结果:ANP组肺组织实变明显,大量中性粒细胞浸润,肺损伤评分、肺组织TNF-α、IL-1β含量和JNK、p-JNK表达均显著高于同时间点假手术组(P＜0.05).STS组肺损伤评分、肺组织TNF-α、IL-1β含量和p-JNK表达较同时间点ANP组显著降低(P＜0.05),JNK表达则无明显变化.结论:STS干预能下调ANP大鼠的肺组织炎症因子表达,降低肺损伤程度,其机制可能与抑制JNK信号通路激活有关.
关键词： 胰腺炎 急性坏死性 急性肺损伤 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 丹参酮 -
c-jun氨基末端激酶抑制剂对小鼠急性肝功能衰竭的保护作用
目的 观察c-jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂SP600125对小鼠急性肝功能衰竭的保护作用.方法 55只雄性C57/BL6小鼠采用随机数字表法分为实验组25只和对照组30只.实验组在腹腔注射D-半乳糖胺(D-GalN)/脂多糖(LPS)行肝功能衰竭造模前12h、1h皮下注射溶解于10％二甲基亚砜(DMSD)的JNK抑制剂SP600125,对照组在相同时间点皮下注射10％ DMSO.两组分别干造模后0、2、4、6h各处死小鼠5只.免疫组织化学检测小鼠肝组织磷酸化JNK(p-JNK)、Caspase3的表达情况.原位末端标记(TUNEL)染色观察肝组织中细胞凋亡情况.比较两组小鼠ALT水平、肝组织损伤程度及24 h存活情况.组间比较采用t检验,生存率分析采用Kaplan-Meiey法.结果 D GalN/LPS造模后4h,实验组小鼠肝组织偶见p-JNK阳性细胞,对照组小鼠肝组织出现大量肝实质细胞表达p-JNK.D-GalN/LPS造模后6h,实验组小鼠肝组织Caspase-3阳性细胞少见,对照组见满视野阳性细胞,实验组肝组织凋亡细胞计数为43.0±24.5,显著低于对照组的194.7±73.8(t=9.743,P=0.000).实验组小鼠造模后6h,血清ALT水平为(214.0±54.7) U/L,显著低于对照组的(1234.4±478.4) U/L(t=4.734,P=0.0015),肝组织损伤程度较轻,且24h5只小鼠存活4只,显著高于对照组的10只小鼠存活1只(x2 =5.225,P=0.0223).结论 JNK抑制剂SP600125通过抑制JNK的激活,减少肝组织细胞凋亡,从而实现对D-GalN/LPS诱导的小鼠急性肝功能衰竭的保护作用.
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青藤碱和柳氮磺吡啶对小鼠实验性结肠炎的作用和机制
目的 探讨青藤碱和柳氮磺吡啶(SASP)对小鼠实验性结肠炎的作用及其机制.方法 70只SPF级雄性昆明小鼠均分为7组,除对照组(不造模、不干预)外,使用恶唑酮将所有小鼠制备成实验性结肠炎模型.造模后,每日分别予模型组、低剂量青藤碱组、高剂量青藤碱组、低剂量联合用药组、高剂量联合用药组、SASP组0.9％氯化钠溶液1 mL、青藤碱(40 mg/kg)、青藤碱(120 mg/kg)、青藤碱(40 mg/kg) +SASP(400 mg/kg)、青藤碱(120 mg/kg) +SASP(400 mg/kg)、SASP(400 mg/kg)灌胃1次,连续7d.记录小鼠粪便性状、体质量变化和粪隐血情况并行疾病活动指数(DAD评分.干预结束后次日处死所有小鼠并留取结肠,行大体损伤评分.于结肠炎性反应或溃疡部位取标本用于组织学检查和损伤评分.用RT-PCR法检测结肠组织丝裂原活化蛋白激酶激酶(MKK)5、ERK5、MKK7、Jun氨基末端激酶(JNK)、NF-κB mRNA的表达水平.组间比较采用t检验.结果 低剂量青藤碱组、高剂量青藤碱组、低剂量联合用药组、高剂量联合用药组、SASP组的DAI分别为2.33±0.77、1.03±0.73、2.70±0.67、1.60±0.66、2.03±0.79,其组织学损伤评分分别为5.50±1.43、4.00±1.49、6.80±1.75、4.80±1.32、5.40±1.58,均低于模型组(3.40±0.66和11.40±1.71),差异均有统计学意义(tDA1=3.33、7.61、2.34、6.08、4.18,t织学损伤评分=8.35、10.31、5.94、9.66、8.15,P均＜0.05).高剂量青藤碱组、高剂量联合用药组、SASP组大体损伤评分(分别为1.40±1.26、1.70±1.06、1.80±1.32)均低于模型组(3.00±1.05),差异均有统计学意义(t=3.07、2.75、2.25,P均＜0.05).在MKK5、ERK5、MKK7、JNK、NF-κB的mRNA表达水平方面,SASP组(分别为24.29±3.40、34.74±3.05、21.34±3.74、18.71±4.12、21.68±2.96)均低于低剂量青藤碱组(分别为51.94±9.16、50.71±11.09、57.98±17.22、55.99±9.65、67.41±10.21),SASP组均低于低剂量联合用药组(分别为72.03±17.44、119.91±47.26、74.09±21.24、71.83±16.91、86.51±18.61),SASP组均高于高剂量青藤碱组(分别为6.53±0.85、17.87±2.74、13.52±2.56、10.41±2.62、13.79±1.43),SASP组均高于高剂量联合用药组(分别为16.80±7.15、21.09±3.92、15.81±1.35、14.11±3.10、16.62±3.15),低剂量青藤碱组均高于高剂量青藤碱组,低剂量联合用药组均高于高剂量联合用药组,低剂量联合用药组均高于低剂量青藤碱组,高剂量联合用药组均高于高剂量青藤碱组,差异均有统计学意义(tMKK5=8.95、8.49、16.01、2.99、15.61、9.26、3.22、4.51,tERK5 =4.41、5.69、13.02、12.81、7.82、6.78、4.50、2.13,tMKK7 =6.58、7.73、5.80、4.40、8.11、6.32、1.86、2.94,tJNK=10.59、7.57、5.37、2.82、13.21、7.57、2.57、2.88,tNF-κB=13.60、10.88、7.60、3.70、16.44、11.71、2.85、2.59;P均＜0.05).结论 青藤碱可有效减轻实验性结肠炎小鼠的炎性反应,其机制可能与ERK5、JNK、NF-κB信号通路有关,且高剂量时疗效可能更优;青藤碱与SASP联用可能存在拮抗作用.
关键词： 青藤碱 结肠炎 疾病模型 动物 丝裂原活化蛋白激酶7 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 NF-κB 柳氮磺吡啶 -
解偶联蛋白2在结肠肿瘤发生发展中的作用研究
目的 探讨解偶联蛋白2(UCP2)在结肠肿瘤发生、发展中的作用.方法 免疫组织化学检测UCP2在正常结肠组织、增生性息肉、绒毛管状腺瘤、结肠癌中的表达阳性率.雄性UCP2-/-鼠及UCP2+/+鼠各12只(模型组)均腹腔注射氧化偶氮甲烷(AOM)造模,UCP2-/-鼠及UCP2+/+鼠各6只均腹腔注射0.9％ NaCl溶液作为对照.Western印迹法检测鼠肠肿瘤组织中增殖核抗原Ki67、细胞增殖相关基因[细胞外信号调节激酶(ERK) 1/2、磷酸化ERK1/2( pERK1/2)、Jun氨基末端激酶(JNK) 1/2、磷酸化JNK1/2( pJNK1/2)]及鼠脾组织中诱导型一氧化氮合酶(iNOS)表达水平.使用脂质氧化丙二醛(MDA)试剂盒检测鼠近端结肠肿瘤组织中MDA的含量.结果 UCP2在人正常结肠黏膜组织中几乎无表达,在结肠腺瘤和结肠增生性息肉组织中的阳性率分别为11/20和2/10,在结肠癌组织中则为85.9％(67/78).UCP2-/-鼠成瘤数量[(1.4±0.5)个]少于UCP2+/+鼠[(2.5±0.8)个,t=3.351,P=0.005].UCP2-/-鼠近端结肠肿瘤大径[(1.5±0.7)cm]大于UCP2+/+鼠[(0.9±0.4) cm,t=2.650,P=0.021].UCP2-/-鼠近端结肠Ki-67蛋白表达水平(1.30±0.01)高于UCP2+/+鼠(0.80±0.09,t=2.895,P=0.015).UCP2-/-鼠近端结肠肿瘤组织中pERK1/2、pJNK1/2表达水平(分别为1.16±0.12和1.67±0.06)高于UCP2+/+鼠(分别为0.37±0.08和1.07±0.17,t值分别=2.821和2.201,P值分别=0.016和0.043).UCP2-/-鼠近端结肠肿瘤组织中MDA含量[(26.91±2.02) nmol/mg]高于UCP2+/+鼠[(15.58±1.42)nmol/mg,t=3.735,P=0.002].UCP2-/-鼠脾脏组织中iNOS表达水平(0.78±0.07)高于UCP2+/+鼠(0.48±0.06,t=2.212,P=0.043).结论 UCP2通过调控活性氧自由基(ROS)产生而参与结肠肿瘤的发生、发展,该过程可能与ROS激活ERK1/2及JNK1/2从而导致肠上皮细胞过度增殖有关.
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增强c-Jun氨基末端激酶活性可逆转卵巢癌的顺铂耐药性
目的: 探讨卵巢癌的顺铂(cisplatin,CDDP)耐药以及如何促使其逆转的机制.方法:将携带c-Jun氨基末端激酶1(c-Jun NH2-terminal kinase 1,JNK1)显性突变体的质粒pcDNA3(FLAG)-JNK1-dn及表达野生型JNK1的质粒pcDNA3(FLAG)-JNK1-wt分别转染卵巢癌A278细胞和A2780/DDP耐药细胞株.20 μmol/L CDDP作用后,检测细胞中p-JNK及下游p-c-Jun的表达,观察2株细胞的凋亡率及CDDP作用后2株细胞中Fas/FasL的表达.结果:CDDP作用后A2780细胞中p-JNK及下游p-c-Jun持续表达,而A2780/DDP细胞中仅有短暂表达.pcDNA3(FLAG)-JNK1-dn转染A2780细胞可抑制CDDP诱导的JNK1活性,并使细胞的凋亡率明显低于未转染组[(18.3±0.4)% vs (47.3±4.7)%, P <0.01].pcDNA3(FLAG)-JNK1-wt转染可使JNK1持续活化,FasL表达上调,A2780/DDP细胞凋亡率明显高于未转染组[(36.9±1.6)% vs (10.9±1.7)%, P <0.01]. 结论:JNK信号转导通路在CDDP诱导的卵巢癌细胞凋亡中起重要作用.野生型JNK1基因转染使A2780/DDP细胞对CDDP的耐药性得到逆转.
关键词： 卵巢肿瘤 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 抗药性 肿瘤 顺铂 -
亚硒酸钠对肾缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡的影响
目的 研究亚硒酸钠对肾缺血再灌注损伤诱导细胞凋亡的影响.方法 18只SD大鼠随机分成3组,假手术组、缺血再灌注组和亚硒酸钠组.采用双侧夹闭大鼠肾蒂的方法制备动物模型,亚硒酸钠组大鼠术前连续3 d腹腔注射亚硒酸钠(0.5 mg·kg-1).观察大鼠肾功能、肾脏病理改变,TUNEL及流式细胞术检测肾脏细胞凋亡情况,Western blot分析c-Jun N端蛋白激酶(JNK)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38)、原癌基因c-Jun(c-Jun)的激活和表达.结果 缺血再灌注组大鼠血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)水平,细胞凋亡率及凋亡细胞数量,以及JNK、p38、c-Jun活性明显高于假手术组(P<0.01).亚硒酸钠组大鼠血清Scr和BUN,细胞凋亡率,凋亡细胞数量,以及JNK、p38、c-Jun活性低于缺血再灌注组,差异有显著意义(P<0.05,P<0.01).结论 亚硒酸钠可能通过下调JNK、p38通路的激活,拮抗肾缺血再灌注损伤诱导的细胞凋亡,从而改善缺血再灌注损伤.
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JNK通路及HSP70在热化疗抑制人小细胞肺癌细胞生长中的作用
目的:研究热化疗对小细胞肺癌生长的影响及其可能的机制.方法:参考临床常用剂量,采用43℃加热联合120μg/L紫杉醇(热化联合组)、43℃加热联合120 μg/L紫杉醇及20μmol/L JNK特异抑制剂SP600125(热化联合+SP600125组)、单纯43℃加热(单纯热疗组)、单纯使用120μg/L紫杉醇(单纯化疗组)处理H446细胞,以未处理的H446细胞作对照.应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测各处理方式下细胞增殖率的变化,通过Western印迹法检测JNK、磷酸化JNK(pJNK)和HSP70的表达并对数据进行统计学分析.结果:热化联合组细胞增殖率低于对照组、单纯化疗、单纯热疗及热化联合+SP600125组(P＜0.05);p-JNK表达水平在热化联合组中表达明显增高(P＜0.05),但SP600125可抑制其表达,使热化联合+SP600125组细胞的增殖率相应增高(P ＜0.05);HSP70在热化联合组的表达低于单纯热疗组(P<0.05),细胞增殖率也发生了相应变化.结论:热疗可以明显增加紫杉醇对H446细胞生长的抑制作用,且这种作用可能是通过激活JNK信号转导通路或抑制HSP70的表达完成的.
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JNK3重组腺病毒促进表柔比星诱导的人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡
目的:构建人JNK3基因重组腺病毒,检测其对人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞增殖的影响;以表柔比星作为凋亡诱导剂,检测其对细胞凋亡的影响.方法:以pDBLeu-JNK3质粒为模板PCR扩增人JNK3基因全长,构建重组穿梭载体pAdTrack-CMV-JNK3,线性化后与骨架载体pAdEasy-1在细菌BJ5183内同源重组,在HEK293细胞中进行病毒包装和扩增,经PCR方法鉴定后,用包装后的病毒上清感染人成神经细胞瘤SH-SY5Y细胞,Western印迹方法检测JNK3蛋白的表达;MTT实验检测其对细胞增殖的影响;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳检测表柔比星诱导的细胞凋亡情况.结果:核酸测序和PCR鉴定表明成功构建Ad-JNK3,终点稀释试验测定扩增的腺病毒滴度为6.5×1010 pfu/ml;Ad-JNK3在SH-SY5Y细胞中表达JNK3蛋白;MTT检测结果表明Ad-JNK3可抑制SH-SY5Y细胞生长,抑制率为28.08%;流式细胞术结果表明Ad-JNK3可明显促进表柔比星诱导的细胞凋亡,琼脂糖凝胶电泳可观察到DNA梯形条带.结论:重组腺病毒Ad-JNK3能显著抑制SH-SY5Y细胞增殖,促进表柔比星诱导的SH-SY5Y细胞凋亡,为研究JNK3的作用机制及将其用于人成神经细胞瘤的基因治疗提供了条件.
关键词： JNK丝裂原活化蛋白激酶类 重组腺病毒 表柔比星 人成神经细胞瘤 细胞凋亡 -
JNK信号通路在丙泊酚减轻人脐静脉内皮细胞氧化应激损伤中的作用
目的 探讨不同浓度丙泊酚预处理对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)氧化应激损伤的作用,探讨其与c-Jun氨基端激酶(JNK)信号通路的关系.方法 体外培养的HUVECs分为八组:对照组(C1组)细胞行常规培养;DMSO对照组(C2组)细胞的培养基中加入DMSO(终浓度0.05％);丙泊酚组(P组)细胞的培养基中加入丙泊酚(终浓度50 μmol/L)处理4 h;H2O2处理组(H组)细胞的培养基中加入H2 O2(终浓度400 μmol/L)处理4h;超低浓度丙泊酚组(HP1组)的细胞以1μmol/L丙泊酚预处理HUVECs 30 min后加入H2O2 400μmol/L处理4h;余在HP1组基础上增加预处理丙泊酚浓度分别为5μmol/L(HP5组)、25μmol/L(HP25组)和50μmol/L(HP50组).各组细胞培养后,用CCK-8法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot法检测HUVECs磷酸化JNK(p-JNK)、Bcl-2及Bax蛋白表达水平.结果 与C1组比较,H组和HP1、HP5、HP25、HP50组细胞活力明显降低,细胞凋亡率明显升高,p-JNK蛋白表达以及Bax蛋白表达明显升高,而Bcl-2/Bax比值明显降低(P＜0.05); HP1组和HP5组p-JNK/JNK比值明显升高,Bcl-2蛋白表达明显下降(P＜0.05).与H组比较,HP25组和HP50组的细胞活力明显升高,HP5组、HP25组和HP50组细胞凋亡率明显降低,p-JNK/JNK和Bax表达明显下调,Bcl-2和Bcl-2/Bax比值明显升高(P＜0.05).结论 25 μmol/L和50μmol/L浓度的丙泊酚预处理可减轻氧化应激对HUVECs的损伤,其机制与抑制JNK信号通路有关.
关键词： 丙泊酚 氧化应激 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 细胞凋亡 -
皮肤病中c-Jun氨基末端蛋白激酶通路的研究现况
c-Jun氨基末端蛋白激酶是丝裂原活化蛋白激酶家族的成员,调节细胞的生长、发育、增殖和分化.c-Jun氨基末端蛋白激酶的异常表达与人皮肤疾病的发生、发展密切相关.研究证实,c-Jun氨基末端蛋白激酶在多种皮肤疾病患者的真/表皮中表达过度增高及异常活化,进而导致细胞的生长、发育、增殖、分化异常以及炎症反应和细胞凋亡的发生.选择阻断c-Jun氨基末端蛋白激酶通路的异常活化可以使病情得到改善.针对c-Jun氨基末端蛋白激酶信号通路的靶向治疗已经成为目前多种皮肤病的研究热点.
关键词： 皮肤疾病 MAP激酶信号系统 信号传导 黑色素瘤 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 -
JNK信号通路介导ghrelin对乳腺癌MDA-MB-231细胞耐药蛋白表达的影响
目的 探讨ghrelin调控c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号转导通路对乳腺癌细胞P-糖蛋白表达的影响.方法 培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,分别加入生长激素释放肽(ghrelin,100 nmol/L,干预72小时)、多柔比星(0.8 mg/L,干预72小时)、ghrelin联合多柔比星(ghrelin 100 nmol/L,多柔比星0.8 mg/L,干预72小时).采用MTT方法检测细胞增殖,Western blot法检测细胞JNK、P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达及p-JNK水平.结果 MTT检测显示,人乳腺癌MDA-MB-231细胞在ghrelin的干预下增殖(P＜0.01),存活率在多柔比星的干预下降低(P＜0.01),ghrelin联合多柔比星能够抑制多柔比星对MDA-MB-231细胞的杀伤作用(P＜0.01).ghrelin组JNK表达及p-JNK水平上升(均P＜0.01),且P-gp蛋白表达上升(P＜0.05);多柔比星组JNK表达及p-JNK水平下降(均P＜0.01);ghrelin联合多柔比星较多柔比星组JNK表达及p-JNK水平增加,且P-gp表达明显上升(均P＜0.05).结论 ghrelin激活JNK信号通路干预乳腺癌细胞P-gp表达增加从而抑制多柔比星诱导乳腺癌细胞凋亡.
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外源性白介素24促进C6细胞凋亡的体外研究
目的 探讨外源性白细胞介素24(interleukin 24,IL-24)体外抑制胶质瘤细胞增殖及促凋亡的相关机制.方法 应用MTT体外观察转染IL-24对胶质瘤C6细胞增殖的抑制作用.应用Hoechst 33258荧光染色体外观察IL-24对C6细胞的促凋亡作用.Western blot法检测c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和caspase-3蛋白的表达变化情况.结果 IL-24能使C6细胞的体外增殖能力降低,转入IL-24的C6细胞(C6/IL-24)增殖能力下降.经Hochest 33258染色,转入IL-24的C6细胞凋亡后出现核固缩、染色质凝集呈块或碎裂状改变.与转入空载体的C6细胞(C6/pLXSN)及C6细胞比较,C6/IL-24细胞的JNK和caspase-3蛋白表达均增高(均P＜0.05).C6/pLXSN与C6细胞比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 外源性IL-24基因可抑制C6胶质瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,该诱导凋亡的作用可能与其上调并激活JNK及caspase-3表达有关.
