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β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞MAPK信号通路激活中的作用
目的 探讨β-抑制蛋白-1在盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路激活中的作用.方法 将人肺微血管内皮细胞以1×105个/ml的密度接种于6孔板(2 ml/孔)或培养瓶(4 ml/瓶)中,采用随机数字表法,将其分为5组(n=20):空质粒转染组(C组)、LPS+空质粒转染组(LPS组)、盐酸戊乙奎醚+LPS+空质粒转染组(P+LPS组)、LPS+β-抑制蛋白-1短发夹RNA(shRNA)转染组(LPS+shRNA组)和盐酸戊乙奎醚+LPS+β-抑制蛋白-1 shR-NA转染组(P+LPS+shRNA组).以空质粒1.5 μg或含15 nmol/L β-抑制蛋白-1 shRNA的质粒转染细胞后,孵育24 h时,LPS组和LPS+ shRNA组加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS孵育1 h;P+LPS组和P+LPS+shRNA组于加入终浓度为2μg/ml的盐酸戊乙奎醚,孵育1h时加入终浓度为0.1 μg/ml的LPS孵育1h.采用流式细胞仪检测纤维状肌动蛋白(F-actin)表达水平,采用免疫荧光化学法检测肌球蛋白轻链激酶(MLCK)和血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)的表达水平,采用Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK1/2)和磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达水平.采用RT-PCR法检测β-抑制蛋白-1 mRNA表达水平.结果 与C组比较,LPS组细胞F-actin、VE-cadherin和β-抑制蛋白-1 mRNA的表达下调,MLCK、p-ERK1/2和p-JNK的表达上调,P+LPS组细胞p-ERK1/2和p-JNK表达上调(P＜0.05),其余指标表达差异无统计学意义(P＞0.05);与LPS组比较,P+LPS组细胞F-actin、VE-cadherin和β-抑制蛋白-1 mRNA的表达上调,MLCK、p-ERK1/2和p-JNK的表达下调,LPS+shRNA组细胞F-actin、VE-cadherin和β-抑制蛋白-1 mRNA的表达下调,MLCK和p-JNK的表达上调(P＜0.05);与P+LPS组比较,P+LPS+shRNA组细胞F-actin、VE-cadherin和β-抑制蛋白-1mRNA的表达下调,MLCK、p-ERK1/2和p-JNK的表达上调(P＜0.05).结论 盐酸戊乙奎醚抑制LPS致人肺微血管内皮细胞MAPK信号通路激活的机制部分与β-抑制蛋白-1表达上调有关.
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ATP敏感性钾通道在异氟醚预处理减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用:与JNK信号通路的关系
目的 评价线粒体ATP敏感性钾通道在异氟醚预处理减轻大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用及其与c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的关系.方法 清洁级健康成年雄性SD大鼠32只,体重280 ～ 320 g,采用随机数字表法分为4组(n=8):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(I/R组)、异氟醚预处理组(Ⅰ-pre组)和5-羟葵酸组(5-HD组).I/R组采用改良Pulsinelli四血管阻断法制备大鼠全脑缺血再灌注模型;Ⅰ-pre组在缺血前每天吸入1.5％异氟醚1h,连续5 d;5-HD组处理同Ⅰ-pre组,在缺血处理前30 min腹腔注射5-羟癸酸15 mg/kg.于再灌注24 h时行神经行为学评分,于再灌注72h时处死大鼠取海马组织,采用TUNEL法检测凋亡神经元,计算神经元凋亡率,免疫组化法检测caspase-3表达,Westem blot法检测磷酸化JNK (p-JNK)蛋白表达.结果 与S组比较,I/R组、Ⅰ-pre组和5-HD组格子爬行数减少,悬挂时间缩短,海马神经元凋亡率升高,caspase-3表达上调,I/R组和5-HD组p-JNK蛋白表达上调(P＜0.05),Ⅰ-pre组p-JNK蛋白表达差异无统计学意义(P＞0.05);与I/R组比较,Ⅰ-pre组格子爬行数增多,悬挂时间延长,海马神经元凋亡率降低,caspase-3和p-JNK蛋白表达下调(P＜0.05),5-HD组上述指标差异无统计学意义(P＞0,05);与Ⅰ-pre组比较,5-HD组格子爬行数减少,悬挂时间缩短,海马神经元凋亡率升高,caspase-3和p-JNK蛋白表达上调(P＜0.05).结论 线粒体ATP敏感性钾通道可通过阻断JNK信号通路参与异氟醚预处理减轻大鼠脑缺血再灌注损伤的过程.
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亚低温对前脑缺血再灌注损伤沙土鼠海马p-ERK、p-JNK水平的影响
目的 研究亚低温对前脑缺血再灌注损伤沙土鼠海马磷酸化胞外信号调节激酶(p-ERK)及磷酸化c-Jun氨基末端蛋白激酶(p-JNK)水平的影响.方法 蒙古沙土鼠120只,随机分为4组(n=30):常温假手术组(SH组)、常温缺血再灌注组(IR组)、低温假手术组(HSH组)、常温缺血低温再灌注组(HIR组).腹腔注射1%戊巴比妥钠40mg/kg麻醉后,分离出双侧颈总动脉,IR组、HIR组分别夹闭双侧颈总动脉,5 min后恢复脑血流灌注,IR组再灌注时维持正常体温(36.5～37.5℃),HIR组再灌注即刻开始降温,10 min内降至32.5～33.5℃,并维持4 h;SH组、HSH组只分离双侧颈总动脉不夹闭,SH组维持正常体温,HSH组分离双侧颈总动脉后5 min开始降温,10 min内降至32.5～33.5℃,并维持4 h.每组于再灌注2 h、4 h、1 d、3 d、5 d分别随机取6只动物,采用开阔法观察沙土鼠的行为学,行为学观察完毕立即处死大鼠,取脑组织,采用TUNEL法检测海马CA1区、CA3区细胞凋亡情况,免疫组化法测定海马CA1区、CA3区、DG区p-ERK、P-JNK的水平.结果 HIR组再灌注1～5d沙土鼠行为学异常及海马凋亡细胞计数较IR组降低(P＜0.01);与SH组或HSH组比较,IR组及HIR组再灌注期间海马CA3区及DG区p-ERK水平增加(P＜0.05),但IR组与HIR组比较差异无统计学意义;4组海马CA1区均无p-ERK表达.与SH组比较,IR组再灌注2 h～5 d海马CA1区、CA3区p-JNK水平增加,且HIR组再灌注2 h～1 d海马CA1区、CA3区p-JNK水平低于IR组(P＜0.05).结论 亚低温(32.5～33.5℃)4 h可减轻沙土鼠脑缺血再灌注损伤,其机制与抑制再灌注早期p-JNK的激活有关,而与p-ERK水平无关.
关键词： 低温 人工 脑 再灌注损伤 海马 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 细胞外信号调节MAP激酶类 -
戊乙奎醚预处理对脓毒症小鼠肺损伤时MAPK信号转导通路的影响
目的 探讨戊乙奎醚(PHC)预处理对脓毒症小鼠肺损伤时丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号转导通路的影响.方法 健康雌性昆明小鼠105只,体重20～25 g,随机分为3组(n=35):假手术组(S组)、脓毒症(CLP)组和戊乙奎醚(PHC)组.采用盲肠结扎并穿孔法制备脓毒症模型.PHC组于造模前1 h腹腔注射戊乙奎醚0.45 mg/kg,s组和CLP组于造模前1 h注射等容量生理盐水.于造模后即刻测定肺微血管通透性;造模后12 h时进行动脉血气分析,观察肺组织病理结果,测定肺组织丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性和磷酸化的p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK1/ERK2)和c-jun氨基末端蛋白激酶(JNK)表达.结果 与S组比较,CLP组PaO2、PaO2/FiO2和pH值降低,肺微血管通透性和肺组织MDA含量升高,SOD活性降低,磷酸化的p38MAPK、ERK1/ERK2和JNK表达上调(P<0.05或0.01);与CLP组比较,PHC组PaO2、PaO2/FiO2和pH值升高,肺微血管通透性和肺组织MDA含量降低,SOD活性升高,磷酸化的p38MAPK和ERK1/ERK2表达下调(P<0.05或0.01).结论 戊乙奎醚预处理可通过抑制MAPK信号转导通路(p38MAPK和ERK1/ERK2)的激活,从而减轻脓毒症小鼠肺损伤.
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右美托咪定预先给药对大鼠单肺通气时内质网应激诱导的细胞凋亡及c-Jun氨基末端激酶通路的影响
目的 评价右美托咪定预先给药对大鼠单肺通气(OLV)时内质网应激(ERS)诱导的细胞凋亡及c-Jun氨基末端激酶(JNK)通路的影响.方法 雄性SD大鼠60只,采用随机数字表法分为6组(n=10):假手术组(Sham组)、OLV组、OLV+阿替美唑(α2受体拮抗药)处理组(AD组)、OLV+阿替美唑+右美托咪定处理组(DEX+ AD组)、OLV+右美托咪定低剂量组(DEX-L组)和OLV+右美托咪定高剂量组(DEX-H组).Sham组大鼠行双肺通气2.5h.OLV组行右肺OLV 2.0h、双肺通气0.5h.DEX-L组和DEX-H组分别于OLV前1h静脉输注右美托咪定2.5 μg* kg-1·h-1、5.0μg·kg-1·h-1,1 h完成.AD组于OLV前1h静脉注射阿替美唑250 μg/kg.DEX+AD组于静脉输注DEX 5.0 μg·kg-1 h-1即刻静脉注射阿替美唑250 μg/kg.于双肺通气0.5h时处死大鼠取左肺组织,测定肺组织湿/干重比(W/D),光镜下观察肺组织病理改变并测定肺泡损伤率(IAR),电镜下观察肺组织超微结构,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡,RT-PCR和Western blot法分别测定葡萄糖调节蛋白78 (GRP78) mRNA及蛋白、JNK mRNA、磷酸化JNK (p-JNK)蛋白表达水平.结果 与Sham组比较,OLV组、AD组和DEX+AD组W/D、AI和IAR升高(P＜0.01);与OLV组、AD组和DEX+AD组比较,DEX-L组和DEX-H组W/D、AI和IAR降低(P＜0.01).OLV组、AD组和DEX+AD组肺组织结构均发生明显损伤,而DEX-L组和DEX-H组肺组织结构损伤则明显减轻.OLV组、AD组和DEX+AD组有大量肺血管内皮细胞和肺泡上皮细胞发生凋亡,而经DEX干预后细胞凋亡则明显减少.与Sham组比较,OLV组、AD组和DEX+AD组GRP78 mRNA和蛋白、JNK mRNA和p-JNK蛋白表达水平升高(P＜0.01);与OLV组、AD组和DEX+AD组比较,DEX-L组和DEX-H组GRP78 mRNA和蛋白、JNK mRNA和p-JNK蛋白表达水平降低(P＜0.01).结论 右美托咪定预先给药对单肺通气时的肺脏具有保护作用,该作用的可能机制与其抑制JNK信号通路,减轻ERS诱导的细胞凋亡有关.
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异丙酚对大鼠窒息性心脏停搏复苏后海马c-JUN氨基末端激酶活化的影响
目的 探讨异丙酚对大鼠窒息性心脏停搏复苏后海马c-JUN氨基末端激酶(JNK)活化的影响.方法 雄性SD大鼠40只,6月龄,体重350 ～ 380 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=10),假手术组(S组)仅动静脉置管和气管插管而不制备窒息性心脏停搏；窒息性心脏停搏复苏组(CA-CPR组)采用窒息法建立CA-CPR模型；异丙酚组(P组)于窒息前30 min静脉注射异丙酚20mg/kg,继之以40 mg·kg-1 ·h-1的速率静脉输注至复苏开始；生理盐水组(NS组)以等容量生理盐水替代异丙酚,余处理同P组.成功复苏后12 h时,处死大鼠,取脑组织,测定湿/干重(W/D)比；采用免疫组化法和Western blot法测定海马磷酸化JNK(p-JNK)的表达水平,并观察海马病理学结果.结果 与S组比较,CA-CPR组、P组和NS组脑W/D比升高,海马p-JNK表达水平上调(P＜0.05或0.01)；与CA-CPR组比较,P组脑W/D比降低,海马p-JNK表达水平下调(P＜0.05或0.01),NS组上述指标差异无统计学意义(P＞0.05).P组海马病理学损伤较CA-CPR组减轻.结论 异丙酚可抑制大鼠窒息性心脏停搏复苏后脑组织JNK的活化,从而减轻脑损伤.
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c-Jun氨基末端激酶在全脑缺血再灌注大鼠海马神经元DNA修复中的作用
目的 探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)在全脑缺血再灌注大鼠海马神经元DNA修复中的作用.方法 健康清洁级雄性SD大鼠108只,4月龄,体重290-310 g,随机分为3组(n=36):假手术组(SH组)、缺血再灌注组(IR组)和JNK抑制剂SP600125组(SP组).采用四血管结扎法建立大鼠全脑缺血再灌注模型,在夹闭双侧颈总动脉前30 min,IR组侧脑室注射1%二甲基亚砜(DMSO)10 μl,SP组给予SP600125(溶于1%DMSO,30 g/L)10 μl.SH组仅游离、暴露双侧颈总动脉,于上述相应时点给予1%DMSO 10 μl.分别于再灌注2、6、12、24、48和72 h处死6只大鼠,测定海马CA1区中1/3段磷酸化JNK(p-JNK)和 DNA修复蛋白 X 线修复交叉互补蛋白1(XRCC1)表达水平,观察神经元病理学结果及神经元凋亡情况.结果 与sH组比较,IR组和SP组神经元凋亡指数升高,XRCCl表达下调,IR组p-JNK表达上调(P＜0.05或0.01),SP组差异无统计学意义(P＞0.05);与IR组比较,SP组神经元凋亡指数降低,p-JNK表达下调,XRCC1表达上调(P＜0.01).结论 JNK 可使全脑缺血再灌注大鼠海马神经元DNA修复功能受损,导致细胞凋亡,其机制可能与下调DNA修复蛋白XRCC1的表达有关.
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姜黄素对自发性高血压大鼠脑缺血再灌注时海马神经元凋亡及c-Jun氨基末端激酶3和突触后密度蛋白95表达的影响
目的 探讨姜黄素对自发性高血压(SH)大鼠脑缺血再灌注时海马神经元凋亡及c-Jun 氨基末端激酶3(JNK3)和突触后密度蛋白95(PSD95)表达的影响.方法 与雄性WKY同源的SH大鼠135只和雄性WKY大鼠90只,清洁级,体重275～325 g,采用随机数字表法,将WKY大鼠随机分为2组(n=45):假手术组(W-S组)及脑缺血再灌注组(W-I/R组),将SH大鼠随机分为3组(n=45):假手术组(S-S组)和脑缺血再灌注组(S-I/R组)及姜黄素组(S-C组).采用四血管阻断法制备全脑缺血再灌注模型.W-S组和S-S组仅分离双侧颈总动脉,W-I/R组和S-I/R组于再灌注30 min时腹腔注射玉米油10 ml/kg,S-C组于再灌注30 min时腹腔注射姜黄素100 mg/kg.于再灌注2 h,6 h、1 d、3 d和7d时进行海马凋亡神经元计数,并测定海马JNK3和PSD95蛋白的表达水平.结果 与W-S组比较,S-S组海马凋亡神经元计数增加(P<0.05),JNK3蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);与S-S组比较,S-I/R组海马凋亡神经元计数增加,JNK3蛋白表达上调(P<0.05);与S-I/R组比较,S-C组海马凋亡神经元计数减少,JNK3蛋白表达下调(P<0.05).各组海马PSD95蛋白表达比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 姜黄素可抑制SH大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡,其机制与下调海马JNK3蛋白表达有关,姜黄素下调海马JNK3蛋白表达可能与PSD95途径无关.
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右美托咪定对小鼠肺缺血再灌注时JNK表达的影响
目的 评价右美托咪定对小鼠肺缺血再灌注时c-Jun氨基末端激酶(JNK)表达的影响.方法 健康雄性C57BL/6J小鼠40只,8～10周龄,体重18～22 g,采用随机数字表法分为4组(n=10):假手术组(S组)、肺缺血再灌注组(I/R组)、生理盐水对照组(NS组)和右美托咪定组(D组).I/R组、NS组和D组采用夹闭左肺门30 min,再灌注3h的方法制备小鼠肺缺血再灌注损伤模型,S仅开胸不夹闭左肺门.D组和NS组于肺缺血前30 min时分别腹腔注射右美托咪定25 μg/kg(用生理盐水稀释至0.5 ml)和等容量生理盐水.于再灌注3h时处死小鼠,取左肺组织,电镜下观察超微结构,采用TUNEL法检测细胞凋亡情况,计算细胞凋亡指数,采用Western blot法检测磷酸化JNK(p-JNK)表达,采用RT-PCR法检测JNK mRNA表达.结果 与S组比较,I/R组和NS组肺组织细胞凋亡指数升高,p-JNK和JNK mRNA的表达上调(P＜0 05);与I/R组比较,D组肺组织细胞凋亡指数降低,p-JNK和JNK mRNA的表达下调(P＜0.05),病理学损伤减轻,NS组上述各指标差异无统计学意义(P＞0.05).结论 右美托咪定抑制小鼠肺缺血再灌注时细胞凋亡的机制可能与下调JNK的表达有关.
关键词： 右美托咪啶 再灌注损伤 肺 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 -
c-Jun氨基末端激酶信号通路在高氧诱导A549细胞凋亡中的作用
目的 探讨c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在高氧诱导肺泡Ⅱ型上皮细胞A549细胞凋亡中的作用.方法 培养A549细胞,以1×105/ml密度接种于6孔板(1 ml/孔)或10 cm培养皿(5ml/皿),采用随机数字表法,将其随机分为4组(n=12):空气对照组(C组)和空气+JNK抑制剂组(C+S组)、高氧组(O2组)和高氧+JNK抑制剂组(O2+S组).C+S组和O2+S组均加入终浓度为5μmol/L的JNK抑制剂SP600125.将细胞分别放入空气或95％O2中进行培养,培养24h时测定细胞存活率、细胞裂解液中Fas-L和裂解caspase-3表达水平.结果 与C组比较,C+S组细胞存活率、Fas-L和裂解caspase-3表达差异无统计学意义(P＞0.05),O2组细胞存活率降低,Fas-L和裂解caspase-3表达上调(P＜0.05)；与O2组比较,O2+S组细胞存活率升高,Fas-L及裂解caspase-3表达下调(P＜0.05).结论 JNK信号通路参与了高氧诱导A549细胞凋亡.
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乳化异氟醚对人神经母细胞瘤细胞凋亡的影响:JNK在其中的作用
目的 探讨乳化异氟醚对入神经母细胞瘤细胞(SHSY-5Y细胞)凋亡的影响及c-Jun氨基末端激酶(JNK)在其中的作用.方法 将培养的SHSY-5Y细胞按种子96孔板或培养皿,采用随机数字表法分为8组:空白对照组(C组,n=24)、不同浓度脂肪乳剂组[LE1组(n=24)、LE2组(n=24)和LE3组(n=72)]、不同浓度乳化异氟醚组[EI1组(n=24)、EI2组(n=24)和EI3(n=72)]和乳化异氟醚+JNK抑制剂SP600125组(EI-SP组,n=24).细胞铺板24 h时,LE1-3组加入30％脂肪乳剂,浓度分别为0.395 6、0.791 2和1.582 4 μl/ml;EI1-3组加入8％乳异氟醚,终浓度分别为0.56、1.12和2.24 mmol/L;EI-SP组加入乳化异氟醚,终浓度为1.12 mmol/L,并于加入乳化异氟醚前1h加入SP 600125,终浓度为10 μmol/L;C组不行任何处理.El3组及LE3组于孵育6、12和24 h时,其余组孵育或培养24 h时观察细胞形态学、采用MTT法测定细胞活力、采用Western blot法测定细胞JNK、磷酸化JNK (p-JNK)和细胞色素c(Cyt c)的表达水平.结果 与C组比较,EI2组孵育24h时、EI3组孵育12和24 h时细胞活力降低,p-JNK以及Cyt c表达上调,EI-SP组细胞活力降低(P＜0.05),p-JNK以及Cyt c表达差异无统计学意义,LE1-3组和EI1组细胞活力、p-JNK以及Cyt c表达差异无统计学意义(P＞0.05);与EI1组比较,EI2,3组孵育24 h时细胞活力降低,p-JNK以及Cyt c表达上调(P＜0.05);与EI2组比较,EI3组孵育24 h时细胞活力下降,p-JNK以及Cyt c表达上调,EI-SP组细胞活力升高,p-JNK以及Cyt c表达下调(P＜0.05);各组细胞JNK表达比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 高浓度乳化异氟醚长时间作用才可诱发人神经细胞凋亡,低浓度短时间作用无此效应;乳化异氟醚诱发神经细胞凋亡的机制与激活JNK途径有关.
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七氟醚麻醉对幼鼠海马c-Jun氨基末端激酶表达和神经细胞凋亡的影响
目的 评价七氟醚麻醉对幼鼠海马c-Jun氨基末端激酶(JNK)表达和神经细胞凋亡的影响.方法 健康雄性SD大鼠40只,日龄30～35 d,体重100～110 g,采用随机数字表法,将其随机分为2组(n=20):对照组(C组):吸入含有30%氧气的空氧混合气体5 h;七氟醚组(s组):吸入3%七氟醚5 h,并维持麻醉箱氧浓度为30%.苏醒后1 h时,每组随机处死10只大鼠,取两侧海马组织,分别采用免疫组化法和Western blot法测定磷酸化JNK(p-JNK)的表达水平,采用TUNEL法检测神经细胞凋亡情况.苏醒后24 h时,每组随机取10只大鼠,采用Morris水迷宫测试认知功能.结果 与C组比较,S组海马组织p-JNK表达上调,凋亡细胞计数升高,潜伏期延长和平台象限停留时间缩短(P＜0.05或0.01).结论 吸入3.0%七氟醚可能通过激活JNK信号通路,诱发海马神经细胞凋亡,从而导致幼鼠认知功能降低.
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JNK信号转导通路在利多卡因诱发大鼠脊髓神经毒性中的作用
目的 评价c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号转导通路在利多卡因诱发大鼠脊髓神经毒性中的作用.方法 成年雄性SD大鼠72只,体重220 ～ 260 g,采用随机数字表法分为6组(n=12):对照组(Ⅰ组)不做任何处理；假手术组(Ⅱ组)仅行鞘内置管术；JNK抑制剂组(Ⅲ组)和二甲基亚砜(DMSO)组(Ⅳ组)分别鞘内注射JNK抑制剂SP600125 25μg和DMS0 20 μl;10％利多卡因组(Ⅴ组)鞘内注射10％利多卡因20 μl; JNK抑制剂+10％利多卡因组(Ⅵ组)先鞘内注射SP600125 25 μg,30 min后鞘内注射10％利多卡因20μl.于鞘内置管前(T0)、鞘内给药前(T1)、鞘内给药后4、8、12 h、1、2、3、4、5和6 d(T2-10)时测定大鼠后肢机械痛阈和热痛阈.于给药后24h时每组随机取4只大鼠,取脊髓腰膨大标本,采用Western blot法检测磷酸化JNK(p-JNK)的表达,TUNEL法检测脊髓凋亡神经细胞,计算细胞凋亡指数.结果 与Ⅰ组比较,Ⅱ组、Ⅲ组和Ⅳ组机械痛阈和热痛阈、Ⅱ组和Ⅳ组脊髓p-JNK表达差异无统计学意义(P＞0.05),Ⅴ组T2-4,6-8时机械痛阈、T2-4,7时热痛阈、Ⅵ组T2-6时机械痛阈、T2-5时热痛阈升高,Ⅲ组脊髓p-JNK表达下调,细胞凋亡指数降低,Ⅴ组和Ⅵ组脊髓p-JNK表达上调,细胞凋亡指数升高(P＜0.05)；与Ⅴ组比较,Ⅵ组T2-8时机械痛阈和热痛阈降低,给药后24h时脊髓p-JNK表达下调,细胞凋亡指数降低(P＜0.05).结论 JNK信号转导通路激活可能通过促进脊髓神经细胞凋亡参与利多卡因诱发大鼠脊髓神经毒性的过程.
关键词： JNK丝裂原活化蛋白激酶类 利多卡因 脊髓 急性毒性试验 -
JNK和p38 MAP K信号通路在吗啡后处理减轻大鼠心肌再灌注损伤中的作用：离体实验
目的：评价c?Jun氨基末端激酶（ JNK）和p38丝裂原活化蛋白激酶（ p38MAPK）信号通路在吗啡后处理减轻心肌再灌注损伤中的作用。方法健康成年雄性SD大鼠，体重180～240 g，采用Langendorff灌注装置建立大鼠离体心脏灌注模型。平衡灌注15 min后，取离体心脏52个，采用随机数字表法分为4组（ n＝13）：对照组（ C组） K?R液持续灌注105 min；缺血再灌注组（ I∕R组）停止K?R液灌注造成全心缺血45 min，恢复K?R液灌注60 min；吗啡后处理组（ MP组）缺血45 min，再灌注即刻灌注含3．0μmol∕L吗啡的 K?R液10 min，然后灌注K?R液50 min；吗啡后处理＋茴香霉素组（ MP＋A组）缺血45 min，再灌注即刻灌注含3．0μmol∕L 吗啡和1．0μmol∕L 茴香霉素（ JNK 和p38MAPK的激动剂）的K?R液10 min，然后灌注K?R液50 min。再灌注60 min时每组取8个心脏，测定心肌CK?MB释放量，观察心肌梗死情况，计算心肌梗死体积。再灌注20 min每组取5个心脏，采用Western blot法测定心肌组织磷酸化JNK（ p?JNK）、磷酸化p38MAPK（ p?p38MAPK）和细胞色素c （ Cyt c）的表达水平，分光光度法检测烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（ NAD＋）含量。结果与C组比较，I∕R组、MP组和MP＋A组心肌梗死体积和心肌CK?MB释放量增加，心肌组织p?JNK、p?p38MAPK和Cyt c的表达上调，NAD＋含量降低（ P＜0．05）；与I∕R组比较，MP组和MP＋A组心肌梗死体积和心肌CK?MB释放量减少，MP组心肌组织p?JNK、p?p38MAPK和Cyt c表达下调，NAD＋含量升高（ P＜0．05）；与MP组比较，MP＋A组心肌梗死体积和心肌CK?MB释放量增加，心肌组织p?JNK、p?p38MAPK和Cyt c的表达上调，NAD＋含量降低（ P＜0．05）。结论吗啡后处理减轻大鼠心肌缺血再灌注损伤的机制与抑制JNK和p38MAPK信号通路的激活有关。
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右美托咪定对大鼠脑缺血再灌注时c-Jun氨基末端激酶活性的影响
目的 评价右美托咪定对大鼠脑缺血再灌注时c-Jun氨基末端激酶(JNK)活性的影响.方法 清洁级健康雄性SD大鼠81只,8周龄,体重180 ～ 220 g,采用随机数字法分为3组(n=27):假手术组(S组)、脑缺血再灌注组(CI/R组)和右美托咪定组(Dex组).CI/R组和Dex组采用线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型,缺血2h,再灌注24 h,S组仅分离动脉不置入线栓;Dex组于缺血前即刻尾静脉注射右美托咪定3 μg/kg,随后以3μg·kg-1·h-1速率输注至再灌注24 h,S组和CI/R组给予等容量生理盐水.于再灌注24 h时处死大鼠取脑组织,采用TTC法测定脑梗死体积,计算脑梗死体积百分比;采用干湿法测定脑含水量;采用TUNEL法染色,计数凋亡细胞,计算细胞凋亡指数,采用Western blot法检测磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达水平.结果 与S组比较,CI/R组和Dex组脑含水量、细胞凋亡指数和脑梗死体积百分比升高,p-JNK表达上调(P＜0.05);与CI/R组比较,Dex组脑含水量、细胞凋亡指数和脑梗死体积百分比降低,p-JNK表达F调(P＜0.05).结论 右美托咪定通过降低JNK活性抑制细胞凋亡减轻大鼠脑缺血再灌注损伤.
关键词： 右美托咪啶 再灌注损伤 脑 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 -
姜黄素预先给药对单肺通气诱发小鼠急性肺损伤时JNK信号通路的影响
目的 评价姜黄素预先给药对单肺通气诱发小鼠急性肺损伤时c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响.方法 SPF级雄性C57BL/6J小鼠90只,6～9周龄,体重18～24 g,采用随机数字表法,将其分为6组(n=15):双肺通气组(TLV组)、单肺通气组(OLV组)、姜黄素100、150、200及250 mg/kg组(C100组、C150组、C200组和C250组),C100组、C150组、C200组和C250组于单肺通气前2h时腹腔注射相应剂量姜黄素.气管插管后行容量控制通气,调整通气参数,维持PETCO2 35～ 45 mmHg,OLV组、C100组、C150组、C200组和C250组行右侧单肺通气1.5 h时再行双肺通气0.5 h,TLV组行双肺通气2.0 h.机械通气结束后取左肺,分别在光镜和电镜下观察肺组织病理学结果,记录肺泡损伤的定量评价指标(IQA),确定肺组织湿重/干重比(W/D)比值,采用TUNEL法检测肺组织细胞凋亡情况,计算细胞凋亡指数(AI),采用RT-PCR法和Westem blot法分别检测JNK mRNA、JNK和磷酸化JNK表达,计算JNK磷酸化水平.结果 与TLV组比较,OLV组肺组织IQA、W/D比值、AI、JNK mRNA表达及JNK磷酸化水平升高(P＜0.05);与OLV组比较,C150组、C200组和C250组肺组织IQA、W/D比值、AI、JNK mRNA表达及JNK磷酸化水平降低,C100组、C150组、C200组和C2s0组上述指标依次降低(P＜0.05),C100组上述指标比较差异均无统计学意义(P＞0.05).与OLV组比较,C150组、C200组和C250组肺组织病理学损伤减轻,且依次减轻.结论 姜黄素预先给药减轻单肺通气诱发小鼠急性肺损伤时细胞凋亡的机制与抑制JNK信号通路激活有关.
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JNK信号通路在右美托咪定减轻利多卡因致大鼠脊髓神经毒性中的作用
目的 评价c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路在右美托咪定减轻利多卡因致大鼠脊髓神经毒性中的作用.方法 取鞘内置管成功的成年雄性SD大鼠72只,体重280～ 320 g,采用随机数字表法分为6组(n=12):对照组(C组)、JNK信号通路阻断剂组(SP组)、右美托咪定组(D组)、利多卡因组(L组)、右美托咪定+利多卡因组(DL组)和JNK信号通路阻断剂+利多卡因组(SPL组).C组鞘内注射二甲基亚砜20μl,SP组和L组分别鞘内注射JNK信号通路阻断剂SP600125 30μg和10％利多卡因20μl,DL组和SPL组鞘内注射10％利多卡因前20 min时分别腹腔注射右美托咪定75 μg/kg和鞘内注射JNK信号通路阻断剂SP600125 30 μg;D组腹腔注射右美托咪定75 μg/kg.于鞘内置管前(T0)、鞘内给药前(T1)、鞘内给药后4、8、12 h、1、2、3、4、5和6d(T2-10)时测定大鼠后肢机械缩足反应阈(MWT)和热缩足潜伏期(TWL);于给药24 h后每组随机取6只大鼠,取L4.5脊髓组织,采用TUNEL法检测凋亡细胞并计算细胞凋亡指数;采用Western blot法检测磷酸化JNK (p-JNK)表达.结果 与C组比较,SP组和D组MWT、TWL、细胞凋亡指数及p-JNK表达差异无统计学意义(P＞0.05),L组T2.8时、DL组T2.6时及SPL组T2-5时MWT升高,L组T2-8时、DL组T2-5时及SPL组T2-4时TWL延长,DL组、SPL组及L组细胞凋亡指数及p-JNK表达水平升高(P＜0.05);与L组比较,DL组和SPL组T2-8时MWT下降、TWL缩短,细胞凋亡指数及p-JNK表达水平下降(P＜0.05).结论 右美托咪定减轻利多卡因致大鼠脊髓神经毒性的机制可能与抑制JNK信号通路活化有关.
关键词： JNK丝裂原活化蛋白激酶类 利多卡因 右美托咪啶 脊髓 药物毒性 -
青藤碱对肾缺血再灌注大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响:与JNK信号通路的关系
目的 评价青藤碱对肾缺血再灌注大鼠肾小管上皮细胞凋亡的影响及其与c-Jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的关系.方法 健康成年雄性Wistar大鼠54只,6～8周龄,体重180 ～220 g,采用随机数字表法分为3组(n=18):假手术组(S组)、肾缺血再灌注组(I/R组)和青藤碱组(SIN组).I/R组和SIN组采用夹闭左侧肾蒂45 min,并于再灌注即刻切除右肾制备肾缺血再灌注损伤模型.SIN组于再灌注前30 min腹腔注射青藤碱60 mg/kg,S组和I/R组在同一时间腹腔注射等容量生理盐水.于再灌注0.5、6、24 h时心脏穿刺采集血标本,测定血清Cr和BUN浓度,取血后,即刻行左肾切除术,光镜下观察肾组织病理学结果.采用免疫组化法检测肾小管上皮细胞磷酸化JNK(p-JNK)和caspase-3的表达.采用TUNEL法检测肾小管上皮细胞凋亡率.结果 与S组比较,I/R组和SIN组血清Cr和BUN浓度升高,肾小管上皮细胞p-JNK和caspase-3表达上调,细胞凋亡率升高(P＜0.05);与I/R组比较,SIN组血清Cr和BUN浓度降低,肾小管上皮细胞p-JNK和caspase-3表达下调,细胞凋亡率降低(P＜0.05).SIN组肾组织病理学损伤较I/R组减轻.结论 青藤碱减轻大鼠肾缺血再灌注损伤的机制与抑制JNK信号通路的激活,从而减少肾小管上皮细胞凋亡有关.
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右美托咪定对神经病理性痛大鼠脊髓背根神经节c-Jun氨基末端激酶活化的影响
目的 评价右美托咪定对神经病理性痛大鼠脊髓背根神经节c-Jun氨基末端激酶(JNK)活化的影响.方法 健康成年雄性SD大鼠54只,体重180 ～ 220 g,采用随机数字表法,将其分为3组(n=18):假手术组(S组)、神经病理性痛组(NP组)和右美托咪定组(D组).采用坐骨神经慢性压迫性损伤法建立大鼠神经病理性痛模型.D组于术后即刻腹腔注射右美托咪定50 μg/kg,1次/d,连续14 d.S组和NP组以等容量生理盐水替代.于术前ld、术后3、7和14 d时测定机械缩足反应阈(MWT)和热缩足反应潜伏期(TWL);于术后3、7和14 d测定痛阈后处死,取损伤侧L4-6脊髓背根神经节,采用免疫组化法测定JNK磷酸化(p-JNK)水平.结果 与S组比较,NP组和D组术后各时点MWT降低,TWL缩短,脊髓背根神经节p-JNK表达上调(P＜0.05);与NP组比较,D组术后各时点MWT升高,TWL延长,脊髓背根神经节p-JNK表达下调(P＜0.05).结论 右美托咪定减轻大鼠神经病理性痛的机制与抑制脊髓背根神经节JNK活化有关.
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JNK在神经病理性痛大鼠中脑导水管周围灰质星形胶质细胞活化中的作用
目的 评价c-Jun氨基末端激酶(JNK)在神经病理性痛大鼠中脑导水管周围灰质(PAG)星形胶质细胞活化中的作用.方法 清洁级雄性SD大鼠72只,9周龄,体重160～ 200 g,采用随机数字表法分为4组:正常对照组(C组,n=8)、神经病理性痛组(NP组,n=40)、二甲基亚砜溶剂对照组(DS组,n=12)和JNK抑制剂SP600125组(SP组,n=12).采用慢性坐骨神经缩窄性损伤(CC1)法制备大鼠神经病理性痛模型.于CCI后14d时,SP组PAG内注射10 nmol JNK抑制剂SP600125 0.5μl,DS组注射10％二甲基亚砜0.5 μl.C组取8只大鼠,NP组于CCI前、CCI后3、7、14、21 d时取8只大鼠,DS组和SP组取8只大鼠分别于CCI前、CCI后14 d给药前、给药后30、45、60、75和90 min时测定机械痛阈.C组机械痛阈测定结束后处死,取PAG组织,采用Western blot法测定PAG区磷酸化JNK(p-JNK)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达;NP组于各时点痛阈测定结束后处死,测定PAG区p-JNK表达;DS组和SP组取4只大鼠于给药后45 min时机械痛阈测定结束后处死,测定PAG区GFAP的表达.结果 与C组比较,NP组CCI后各时点机械痛阈降低,CCI后7～21d时p-JNK表达上调(P＜0.01);与DS组比较,SP组给药后30 min时机械痛阈升高,给药后45 min时GFAP表达下调(P＜0.01);与给药前比较,SP组给药后30～75 min时机械痛阈升高(P＜0.01).结论 神经病理性痛大鼠PAG星形胶质细胞活化机制与JNK激活有关.
关键词： 星形细胞 JNK丝裂原活化蛋白激酶类 脑导水管 水管周灰质 神经痛
