慢性栓塞性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌电压依赖性钾通道蛋白mRNA表达的变化

目的 建立慢性栓塞性肺动脉高压大鼠模型,研究肺动脉结扎对大鼠肺动脉平滑肌电压依赖性钾通道蛋白Kv1.5和Kv2.1 mRNA表达的影响,探讨疾病发生发展的机制.方法 将雄性SD大鼠运用左肺动脉结扎法建立慢性栓塞性肺动脉高压大鼠模型,随机分为正常对照2周组、左肺动脉结扎2周组、假手术2周组和正常对照5周组、左肺动脉结扎5周组、假手术5周组,每组5只.直接右心测压法测6组大鼠右心室收缩压及平均压;取心脏称质量测定右心室肥厚指数;HE染色观察肺组织和肺血管结构的变化,测肺动脉相对中膜厚度(PAMT)、管壁面积/管总面积(WA/rA);实时荧光定量PCR检测肺动脉平滑肌组织Kv1.5和Kv2.1 mRNA的表达.结果 左肺动脉结扎组2周及5周后大鼠右心室收缩压、平均压、右心室肥厚指数均较正常对照组和假手术组明显升高(均P＜0.05).2周和5周后结扎组PAMT和WA/TA值均较正常对照组和假手术组显著增高(均P＜0.05),即远端肺小动脉平滑肌层较其他两组明显增厚,管腔狭窄,肺血管重塑.肺动脉结扎可降低远端肺动脉平滑肌Kv1.5和Kv2.1 mRNA的相对表达量,结扎后2周及5周大鼠肺动脉平滑肌Kv1.5 mRNA相对表达量为(67.56±12.23)％和(55.98±6.84)％,Kv2.1 mRNA相对表达量为(59.71±6.25)％和(49.07±3.51)％,均低于同时间正常对照组和假手术组(均P＜0.05).结论 用左肺动脉结扎法成功建立慢性栓塞性肺动脉高压大鼠模型,左肺动脉结扎可能通过下调大鼠肺动脉平滑肌电压依赖性钾通道Kv1.5、Kv2.1 mRNA的表达参与慢性栓塞性肺动脉高压的发生发展.

分泌型簇蛋白在体-肺分流性肺动脉高压中的作用

背景：体-肺分流性肺动脉高压是由肺血流量的增加引起肺小动脉收缩、进行性重构的致死性疾病，其中肺动脉平滑肌细胞功能的紊乱，即过度的肥大、增殖、迁移和凋亡抵抗在肺血管重构过程中具有重要的作用。分泌型簇蛋白（sCLU）是一种细胞保护性因子，具有促进细胞生长的作用。基于肺动脉高压时肺血管壁细胞过度生长的特点，我们推测sCLU可能在肺动脉高压发生发展过程中的表达发生了变化并且对肺血管重构的过程具有一定的影响。

钙池操纵性钙内流及经典瞬时受体电位蛋白和瞬时受体电位香草酸蛋白在大鼠远端肺静脉平滑肌上的表达

本研究旨在通过观察远端肺静脉上经典瞬时受体电位(TRPC)通道蛋白和瞬时受体电位香草酸(TRPV)通道蛋白的表达以及钙池操纵性钙内流(SOCE)的水平,探讨慢性低氧对肺静脉平滑肌的影响,从而研究肺静脉平滑肌在低氧性肺动脉高压发病中的作用及其机制.慢性低氧可造成肺动脉和肺静脉的收缩和血管重塑,其中慢性低氧对肺动脉的影响已得到深入的研究,但针对肺静脉的研究目前尚未获得重视.我们的前期研究结果显示,SOCE是低氧性肺动脉高压时肺动脉平滑肌细胞内钙离子失衡的主要原因,并可引起肺动脉收缩和血管重塑.钙池操纵性钙离子通道(SOCC)是一种钙离子通道,主要由瞬时受体电位通道蛋白构成.

miR-675调控低氧诱导肺动脉平滑肌细胞的增殖

目的 探讨miR-675对低氧诱导大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的调控作用及相关机制.方法 低氧(1％O2)处理PASMCs 48 h,利用Real time-PCR检测0、6、12、24和48 h时各个时相点miR-675的表达水平,应用Western blot检测低氧处理PASMCs 48 h后靶基因REPS2蛋白的表达情况.先合成miR-675抑制剂(inhibitor)再将其和阴性对照(NC)转染PASMCs细胞,24 h后再进行低氧处理从0h至48 h,应用MTT法检测0、12、24、48 h时细胞的活力,并检测REPS2蛋白的表达状况.构建野生型和突变型REPS2 3'UTR插入pMIR-REPORTTM luciferase vector载体,并将其与pRL-TK质粒共转染PASMCs细胞,之后将miR-675 inhibitor和NC分别转染PASMCs细胞,利用双荧光素酶报告基因检测活性.在常氧下先分别转染miR-675 inhibitor或模拟物(minic) 48 h,再检测PASMCs中REPS2的表达水平.结果 随着低氧处理时间的延长,miR-675在PASMCs细胞中的表达水平逐渐增高(P＜0.05).而与对照组比较,REPS2蛋白在低氧处理的PASMCs细胞中表达显著下调(P＜0.05).miR-675 inhibitor组在24h和48 h的细胞活力显著低于对照组和miR-NC组(P＜0.01).荧光素酶报告基因结果说明REPS2是miR-675的靶基因.在常氧环境上调miR-675可显著下调REPS2蛋白表达,而在常氧和低氧环境下抑制miR-675的水平可明显升高REPS2蛋白表达.结论 miR-675通过下游靶基因REPS2调控低氧诱导的PASMCs的异常增殖,可能是低氧肺动脉高压、肺源性心脏病等疾病治疗的潜在靶点.

肺动脉平滑肌的氯离子通道

正常肺动脉压力为15～30 mm Hg/5～10 mm Hg(1 mm Hg=0.133 kPa),平均压力为10～20 mm Hg.动脉收缩压>30 mm Hg者称为肺动脉高压.虽然对于肺动脉高压的研究已有100多年历史,但是其发病机制至今尚未完全明确 [1-2].

骨膜蛋白相关的上皮间充质转化对泌尿系统恶性肿瘤的影响

骨膜蛋白( periostin) ,又称为成骨细胞特异性因子-2(osteoblast specific factor-2,OSF-2),属于转化生长因子-β( transforming growth factor -β,TGF-β)诱导的蛋白超家族,主要促进整合素依赖的细胞黏附和运动. 骨膜蛋白可以在全身多种组织中表达,如牙周韧带、心脏瓣膜、肺、胃肠道、肾上腺、甲状腺、前列腺、乳腺等;同时,骨膜蛋白在应激环境下的组织中也有表达,如高负荷的心脏、损伤后的骨骼肌以及缺氧环境下的肺动脉平滑肌.

肉豆蔻挥发油对低氧诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用及其抗氧化活性

目的 对肉豆蔻挥发油(VOMF)的化学成分及其体外抗氧化活性进行分析,在细胞水平评价其对低氧诱导的肺动脉平滑肌细胞(PASMC)增殖的抑制作用及其抗氧化活性.方法 采用气相色谱-质谱联用技术分析VOMF化学成分,通过1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)自由基清除和铁离子还原/抗氧化能力法(FRAP)测定其体外抗氧化活性.将SD大鼠PASMC细胞分为2组:常氧组(5％CO2+95％O2)和低氧组(3％O2+5％CO2+92％N2),每组设置VOMF 1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5和4.0 g·L-1处理,37℃作用12 h,利用MTS染色法检测PASMC增殖,计算IC50的值.随后设VOMF 0.8,1.6和3.2 g·L-1组测定细胞中丙二醛(MDA)和谷胱甘肽(GSH)含量及超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 VOMF中含有大量的单萜类和芳香族类化合物,具有较好的体外抗氧化能力,能显著抑制低氧条件下PASMC增殖,作用于细胞12 h,其半数抑制浓度(IC50)为1.66 g·L-1;当浓度为3.2 g·L-1时,与常氧下PASMC相比,低氧刺激下细胞SOD活性增加(P<0.05),MDA含量减少(P<0.05),GSH含量升高(P<0.05).结论 VOMF含有多种化学成分,具有显著的抗氧化和清除自由基的能力,且对低氧诱导PASMC增殖具有明显的抑制作用,有可能用于低氧性肺动脉高压的治疗.

FTY720对低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞P38MAPK和NF-κB P65表达及细胞凋亡的影响

目的 观察FTY720对低氧性大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)炎症通路和细胞凋亡的影响.方法 取成年雄性SD大鼠15只,用Ⅰ型胶原酶消化法进行PASMCs原代培养,将第4～6代生长良好的细胞随机分组:①常氧组(N组);②低氧组(H组);③P38MAPK抑制剂(SB203580)组(H+SB组);④～⑤:FTY720干预组(2500ng/ml、5000ng/ml)组(H+FTY720组),孵育24h.采用Western blot法检测总P38MAPK和总NF-κB P65以及p-P38MAPK和p-NF-κBP65的相对表达量.TUNEL法观察PASMCs的细胞凋亡情况.结果 与N组比较,H组细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),总P38MAPK和总NF-κB P65无明显改变(P＞0.05),p-P38MAPK和p-NF-κB P65的表达显著升高(P＜0.01).与H组比较,H+FTY720组与H+SB组的细胞凋亡率显著升高(P ＜0.05,P＜0.01),总P38MAPK和总NF-κB P65无明显改变(P＞0.05),p-P38MAPK和p-NF-κBP65的表达显著降低(P ＜0.05,P＜0.01),且细胞凋亡率与FTY720浓度呈正相关(P＜0.01).结论 在低氧条件下,PASMCs可能通过P38MAPK/NF-κB P65通路促进细胞增殖.FTY720可降低p-P38MAPK和p-NF-κBP65的表达抑制低氧性PASMCs炎症反应,抑制细胞增殖并促进细胞凋亡,缓解肺动脉高压进展.

肺动脉平滑肌细胞上的钙离子通道研究进展

钙离子(Ca2+)为肺动脉平滑肌细胞(PASMC)内至关重要的第二信史,其细胞内浓度的精细变化直接受到多种Ca2+通道的调控.按照细胞内Ca2+的来源,位于细胞膜上,调控细胞外Ca2+进入细胞的通道称为钙内流通道,位于肌质网上调控内质网/肌质网内钙库的Ca2+释放的通道称为钙释放通道.根据Ca2+通道激活方式的不同,Ca2+内流的通道主要分为电压依赖性Ca2+通道(VDCC)和非电压操纵性Ca2+通道(non VDCC).目前发现PASMC上表达的VDCC为CaV 1.2 L型通道,non-VDCC包括受体操纵性通道和钙库操纵性通道.PASMC 上的钙释放通道主要包括三磷酸肌醇受体系统和雷诺定受体系统.这些Ca2+通道通过对细胞内Ca2+的精细调节,使PASMC对各种信号刺激发生反应.

Ca/CaM与缺氧肺动脉平滑肌细胞增殖的关系研究

目的:探讨缺氧时钙内流、钙调素、NF□K B与肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)增殖的关系.方法:组织块贴壁法培养成年大鼠PASMCs,细胞分组处理后,分别应用四甲基偶氮唑(MTT)检测细胞数量、流式细胞术检测细胞周期分布和增殖指数、免疫荧光检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)表达.结果:2%O2条件下培养12 h显著刺激PASMCs增殖,与常氧组相比,细胞活力增加40%,增殖指数(proliferation index,PI)是常氧组的1.46倍,PCNA表达增强.L-型钙通道阻滞剂硝苯吡啶(nifdipine,NFD,10μ M)、钙调素拮抗剂三氟拉嗪(trifluoperazine,TFP,10μ M)、核转录因子NF□K B抑制剂PDTC(20μ M)均抑制了缺氧诱导的PASMCs的增殖,其抑制作用的强度依次为NFD＜PDTC＜TFP.结论:钙信号转导参与缺氧诱导的PASMCs增殖,涉及通过L-型钙通道的钙内流、钙调素以及转录因子NF-K B激活等环节.

附子水煎剂对家兔离体肺动脉血管的舒张作用

目的:研究附子Monkshood Root(DMR)水煎剂对肺动脉环的舒张作用及机制.方法:采用家兔离体肺动脉平滑肌标本,以去甲肾上腺素(NA)预收缩肺动脉后,给予不同剂量的附子观察其张力变化,并探讨去除血管内皮、给予NO合酶抑制剂左旋硝基精氨酸(L-NNA)、甲烯蓝(MB)、环氧酶抑制剂吲哚美辛和β肾上腺素能受体阻断剂普萘洛尔对血管张力变化的影响.结果:附子对血管环静息张力无明显影响,但不同剂量的附子可使10-6mol·L-1NA预收缩血管产生明显舒张(r=0.71,P＜0.001).去除血管内皮、10-4mol·L-1L-NNA或10-5mol·L-1MB可减弱附子的舒张作用.另外,1 mg·mL-1DMR对无内皮血管环NA和KCl的量效曲线无明显影响,DMB温育前后NA的PD2值为7.56±0.95和7.30±0.83,P＞0.05;KCl的PD2值为1.74±0.48和1.71±0.51,P＞0.05.结论:附子水煎剂对肺动脉的舒张作用是内皮依赖性,与内皮细胞释放的NO有关,而与平滑肌细胞膜上的受体依赖性Ca2+通道和电压依赖性Ca2+无关.

低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞骨架微丝影响的激光共聚焦显微观察

目的:观察低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞(pulmonary arterial smooth muscle cells,PASMCs)骨架微丝的影响.方法:采用胶原酶Ⅰ消化法原代培养PASMCs,免疫荧光法进行平滑肌α肌动蛋白( α-SM actin)鉴定.然后分别低氧(5% O2,5% CO2)培养2、6、12、24 h后,用鬼笔环肽标记细胞骨架F-actin,用激光共聚焦显微镜观察F -actin的变化.结果:免疫荧光鉴定结果表明培养细胞为PASMCs,低氧状态和常氧条件下培养的PASMCs形态上有明显区别,低氧组细胞骨架蛋白F -actin发生重排,微丝排列混乱,存在时间依赖性.结论:低氧能造成PASMCs形态的改变和细胞骨架微丝的重排.

埃他卡林对长期低氧大鼠肺动脉平滑肌KATP mRNA的影响

目的:研究慢性低氧对大鼠肺动脉平滑肌ATP敏感钾通道(KATP)mRNA表达的影响及新型KATP开放剂盐酸埃他卡林的作用.方法:SD雄性大鼠16只随机分成对照组、低氧组、低剂量治疗组(盐酸埃他卡林0.75 mg·kg-1·d-1,ig)、高剂量治疗组(盐酸埃他卡林1.5 mg·kg-1·d-1,ig).将低氧组和治疗组夫鼠放入常压低氧舱制备动物模型;采用RT-PCR技术,分析各组肺动脉主干平滑肌KATPmRNA表达.结果:低氧组刚SUR2 mRNA水平显著低子正常组,高剂量治疗组SUR2显著高于低氧组,各组Kir 6.1没有显著差异.结论:慢性低氧抑制KATP通道表达,而盐酸埃他卡林能提高表达,可从肺动脉高压发病机制上理解该药物治疗价值.

新型KATP开放剂埃他卡林对慢性低氧诱导大鼠体内肺动脉平滑肌KATP通道mRNA表达变化的影响

目的 研究慢性低氧对大鼠肺动脉平滑肌KATP通道mRNA表达的影响及新型KATP开放剂埃他卡林(Iptakalim,IPT)的作用.方法 将清洁级SD大鼠30只随机分成对照组、低氧组、IPT组,每组10只.将低氧组与IPT组放入常压低氧舱制备动物模型;采用右心导管测量大鼠肺动脉压;用实时荧光定量PCR检测(Real time PCR)技术分析各组肺动脉平滑肌KATP通道Kir 6.1与SUR2B mRNA表达.结果 低氧组大鼠肺动脉平均压高于对照组和IPT组(P<0.05),低氧组SUR2B亚基mRNA水平低于对照组(P<0.05),IPT可逆转慢性低氧对SUR2B的作用,各组Kir 6.1亚基mRNA表达水平无差异(P>0.05).结论 慢性缺氧导致大鼠肺动脉平滑肌KATP通道SUR2B mRNA表达减少,IPT能拮抗慢性缺氧对KATP通道SUR2B mRNA基因表达的抑制作用.

炎性介质对大鼠肺动脉平滑肌细胞肿胀激活氯电流的影响

目的:肿胀激活氯通道不仅在细胞的容积调节过程中有重要作用,而且可能与细胞的增殖分化、存活以及炎性反应密切相关.本文目的在于观察致炎物质对大鼠肺动脉平滑肌细胞肿胀激活氯电流的影响,以探讨该电流在细胞的炎症反应中的可能作用.

低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌RT-PCR检测中内参基因的选择

目的 评价实时荧光定量PCR分析低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌基因表达时12个候选内参基因表达的稳定性,获得适合的内参基因.方法 以低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌为研究对象,选择文献报道的常用12种内参基因为候选内参基因,利用geNorm和NormFinder程序分析实时荧光定量PCR数据,筛选出适内参基因.结果 12个候选内参基因在低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌表达稳定性由强到弱顺序为:TBP＞ B2M＞ HPRT1＞ HMBS＞ RPL13a＞ 18sRNA＞ PPIA＞ ACTB＞ GUSB＞ TFRC＞ GAPDH＞ PGK1,平均表达稳定度(M值)均＜0.5,geNorm和NormFinder评估后推荐使用TBP和B2M一起作为该研究时的内参基因.结论 同时使用TBP和B2M是实时荧光定量PCR分析低氧性肺动脉高压大鼠肺动脉平滑肌基因表达的适合内参基因,为低氧性肺动脉高压相关基因研究提供优内参基因.

口服消炎痛治疗新生儿动脉导管未闭的疗效观察及护理

动脉导管未闭(PDA)是新生儿期常见的先天性心脏畸形之一,早产儿由于肺动脉平滑肌发育不全,出生后动脉导管不能很快收缩闭合.早产儿PDA发生率高达7%-37%,小儿成熟程度越低PDA的危险性越大.早期发现,及时治疗,可改善新生儿缺血、心衰、降低死亡率 [1-2].消炎痛常用于关闭早产儿PDA.近年,我们应用消炎痛治疗早产儿动脉导管未闭,效果满意.现报告如下.

低氧对大鼠肺动脉平滑肌细胞表达信号转导及转录激活因子基因表达的影响